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胎盘滋养层细胞的感染和凋亡与HBV的宫内传播机制 被引量:5
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作者 白菡 张琳 +4 位作者 何丽霞 冯国和 石理兰 窦晓光 赵桂珍 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第15期1695-1700,共6页
目的:通过HBV感染体外培养的人绒毛膜滋养层细胞,探讨HBV宫内感染发生的机制.方法:对人早孕绒毛膜滋养层细胞进行原代培养和对人滋养层细胞系JEG-3进行传代培养,将HBV感染血清与原代及传代培养细胞共同孵育8-48h,倒置显微镜观察细胞形... 目的:通过HBV感染体外培养的人绒毛膜滋养层细胞,探讨HBV宫内感染发生的机制.方法:对人早孕绒毛膜滋养层细胞进行原代培养和对人滋养层细胞系JEG-3进行传代培养,将HBV感染血清与原代及传代培养细胞共同孵育8-48h,倒置显微镜观察细胞形态及细胞间连接,细胞免疫荧光和免疫组织化学染色方法检测滋养层细胞中HBsAg和HBcAg的表达,荧光定量PCR方法检测被感染的滋养层细胞中的HBV DNA,TUNEL方法检测滋养层细胞的凋亡.结果:与HBV阳性血清共同孵育对滋养层细胞的形态和细胞间连接无明显影响;细胞免疫荧光和免疫组织化学染色结果显示,滋养层细胞与HBV感染血清共同孵育(8,24,48h)后,滋养层细胞可以出现HBsAg和HBcAg的阳性表达,24 h时HBsAg阳性细胞数量最多(8h:18.0%±3.67%;24h:30.6%±2.88%;48 h:24.8%±4.21%);荧光定量PCR方法检测到被感染的滋养层细胞中HBV DNA的存在;TUNEL结果显示,与HBV感染血清共同孵育可导致滋养层凋亡细胞数量逐渐增加(24h:18.6%±3.05%;48h:26.8%±2.86%:P<0.01).结论:滋养层细胞的感染可能是HBV通过胎盘屏障的途径之一;HBV感染可以诱导滋养层细胞产生凋亡,这可能是胎盘屏障阻止HBV宫内感染的一种保护性机制. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 人绒毛膜滋养层细胞系JEG-3 细胞免疫荧光 免疫组化 荧光定量聚合酶链式反应 原位缺口末端标记技术 官内传播
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Myostatin基因真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达 被引量:2
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作者 唐量 胡柏平 +1 位作者 熊正英 张英起 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2008年第12期45-49,94,共6页
目的:构建人Myostatin基因的真核表达载体pVAC-Ms,并在真核细胞中进行表达,为后续研究Myostatin蛋白的检测方法、强力药物的筛选及废用性肌肉萎缩的治疗提供实验依据。方法:化学耦联方法合成Myostatin C-末端区(330bp)基因序列,利用PCR... 目的:构建人Myostatin基因的真核表达载体pVAC-Ms,并在真核细胞中进行表达,为后续研究Myostatin蛋白的检测方法、强力药物的筛选及废用性肌肉萎缩的治疗提供实验依据。方法:化学耦联方法合成Myostatin C-末端区(330bp)基因序列,利用PCR技术扩增5′端和3′端酶切位点为BamH I和EcoR I,然后克隆至真核表达载体pVAC1-cms,得到重组质粒pVAC-Ms。质粒纯化后采用脂质体介导转染CHO细胞,瞬时转染后收集CHO细胞,利用RT-PCR技术和细胞荧光免疫技术检测Myostatin在CHO细胞中的转录和蛋白表达。结果:酶切和测序结果表明,Myostatin真核表达载体pVAC-Ms构建成功,RT-PCR和细胞荧光免疫检测结果表明,瞬时转染的CHO细胞中Myostatin基因明显转录,蛋白明显表达。结论:实验成功构建了在真核细胞中能有效表达人Myostatin重组蛋白的真核表达载体,为运动员Myostatin蛋白表达的检测、强力药物筛选、训练监控及废用性肌肉萎缩治疗等方面的后续研究提供实验基础。 展开更多
关键词 MYOSTATIN pVAC1-cms CHO细胞 RT-PCR 细胞免疫荧光
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夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒的作用 被引量:3
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作者 张磊 姚江雄 +7 位作者 纪洵敏 余婷婷 蒲俏虹 唐芮 许瑛 赖文辉 彭拓华 张吉凯 《广东医学》 CAS 2019年第9期1250-1254,共5页
目的研究夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒(DENV-1)的作用效果。方法 MTT法测定夏桑菊颗粒和利巴韦林对C6/36细胞的最大无毒剂量以及DENV-1感染细胞病变效应;细胞免疫荧光法,以NS1蛋白为目标蛋白,测定DENV-1经不同稀释度的夏桑菊颗粒预... 目的研究夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒(DENV-1)的作用效果。方法 MTT法测定夏桑菊颗粒和利巴韦林对C6/36细胞的最大无毒剂量以及DENV-1感染细胞病变效应;细胞免疫荧光法,以NS1蛋白为目标蛋白,测定DENV-1经不同稀释度的夏桑菊颗粒预处理后感染能力;荧光定量PCR法检测夏桑菊颗粒和利巴韦林对DENV-1拷贝数的影响,采用方差分析比较不同稀释度药物对病毒的影响。结果MTT结果显示夏桑菊颗粒和利巴韦林的最大无毒剂量分别为7. 81 mg/m L和3. 13 mg/m L;经过夏桑菊颗粒溶液处理后,感染病毒的细胞存活率增加(21. 9±4. 3)%和(15. 7±4. 1)%,同时,经过利巴韦林处理后,细胞存活率分别增加(39. 2±1. 9)%和(24. 2±3. 1)%,两者均能明显减弱病毒引起细胞病变的效应(P <0. 05);荧光实验结果显示夏桑菊颗粒可使病毒相对感染率下降(42. 1±7. 4)%和(24. 2±2. 5)%,利巴韦林可使病毒相对感染率下降(51. 1±2. 3)%和(49. 3±2. 9)%,两者对病毒的感染具有明显的抑制作用(P <0. 05); q PCR实验结果表明夏桑菊颗粒对病毒拷贝数的抑制率达到(42. 1±7. 4)%和(24. 2±2. 5)%,利巴韦林对病毒拷贝数抑制率达到(51. 1±2. 3)%和(39. 3±2. 9)%,两者对病毒的RNA复制产生了明显的抑制作用(P <0. 05)。结论夏桑菊颗粒通过体外预给药的方式会产生明显的抗DENV-1的作用,其作用效果与利巴韦林相近。 展开更多
关键词 夏桑菊颗粒 登革热病毒 细胞免疫荧光 实时荧光定量PCR 最大无毒剂量
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穿透性Sox2蛋白的质粒构建及功能鉴定 被引量:1
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作者 丁道芳 王瑧 +3 位作者 李晓锋 徐乐勤 梁倩倩 王拥军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1671-1674,共4页
目的构建具有细胞性穿透性的9R-Sox2蛋白的重组质粒,使其在293T细胞中表达,并对所表达的9R-Sox2蛋白的功能进行鉴定。方法从小鼠胚胎干细胞中扩增Sox2基因,并且在其N端加上9个精氨酸短肽,此融合基因连接到pPYCAG载体上,pPYCAG-9R-Sox2和... 目的构建具有细胞性穿透性的9R-Sox2蛋白的重组质粒,使其在293T细胞中表达,并对所表达的9R-Sox2蛋白的功能进行鉴定。方法从小鼠胚胎干细胞中扩增Sox2基因,并且在其N端加上9个精氨酸短肽,此融合基因连接到pPYCAG载体上,pPYCAG-9R-Sox2和pPYCAG分别转染到293T细胞中。3 d后,对转染细胞用嘌呤霉素筛选,1周后筛选得到阳性克隆细胞株,对其进行细胞免疫荧光鉴定。表达9R-Sox2蛋白的细胞株进行裂解,取细胞裂解液加入至小鼠胚胎成纤维细胞的培养基中进行通透。48 h后,小鼠胚胎成纤维细胞进行细胞免疫荧光检测,并提取蛋白Western blot检测PCNA表达。结果用Sox2抗体进行细胞免疫荧光鉴定,结果均显示所有细胞表达9R-Sox2。在细胞裂解液处理的成纤维细胞,细胞免疫荧光结果显示9R-Sox2蛋白定位在细胞核,表明9R-Sox2构建和翻译正确。同时经含9R-Sox2的细胞裂解液处理的成纤维细胞,PCNA表达明显上调。结论成功构建表达9R-Sox2融合蛋白的pPYCAG-9R-Sox2重组质粒,并证明具有细胞通透及促细胞增殖功能。 展开更多
关键词 穿透性 9R-Sox2 细胞免疫荧光 WESTERN BLOT 增殖细胞核抗原 小鼠胚胎成纤维细胞
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传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立 被引量:2
5
作者 贺文斌 徐黎明 +4 位作者 赵景壮 刘淼 任广明 卢彤岩 尹家胜 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期662-667,共6页
为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP 2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PC... 为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP 2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PCR扩增,然后将扩增产物连接到酵母表面展示载体pYD1上构建了重组质粒pYD1-VP 2,将重组质粒转化至酵母EBY100感受态细胞中,得到含有重组质粒的酵母菌EBY100/pYD1-VP2,再向EBY100/pYD1-VP2中加入半乳糖进行VP2蛋白的诱导表达,并采用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光技术对VP2蛋白的酵母表面展示情况进行了分析。结果表明:经半乳糖诱导后VP2蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;细胞免疫荧光分析显示,重组酵母诱导表达后出现特异性绿色荧光,并且在一定时间内荧光强度与诱导时间成正相关,诱导24、36、48 h组及对照组(48 h)各组之间荧光酵母比例有显著性差异(P<0.05)。研究表明,IPNV VP2蛋白已经被酵母细胞高效表达并且成功展示于酵母细胞表面,本研究结果可为IPNV口服活载体疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 传染性胰脏坏死病毒 VP2 酵母表面展示 细胞免疫荧光
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性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响 被引量:2
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作者 屈延延 齐雪峰 +5 位作者 南志春 苏运芳 李义 赵献军 王爱华 靳亚平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期135-139,共5页
为探讨性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响。本研究构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)体外培养研究模型,通过细胞免疫荧光技术检测性腺激素E2或/和P4对单独培养EEC中PR与ER表达水平的调节作用以及ESC... 为探讨性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响。本研究构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)体外培养研究模型,通过细胞免疫荧光技术检测性腺激素E2或/和P4对单独培养EEC中PR与ER表达水平的调节作用以及ESC对该作用的影响。结果显示:与未加激素对照组相比,单独添加P4或与E2同时加入均可显著抑制单独培养EEC中PR与ER的表达(P<0.05);而单独添加E2可轻微促进2种激素受体表达水平。在添加有ESC条件培养液的EEC培养模式中,E2单独作用对EEC中PR与ER表达水平无显著影响;P4单独或与E2共同作用下,EEC中PR与ER表达水平均较未加激素对照组显著降低(P<0.05)。性腺激素对单独培养及与ESC共培养模式下的EEC中PR与ER表达水平的调节作用相似,P4对山羊EEC中PR与ER表达水平具有显著抑制作用。 展开更多
关键词 性腺激素 子宫内膜上皮细胞 免疫荧光技术 激素受体
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血管内皮生长因子受体-3在血管内皮细胞和平滑肌细胞中的表达
7
作者 程厚文 龙跃州 杨明锋 《中国现代医药杂志》 2007年第7期15-16,共2页
目的探讨血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3)在血管内皮细胞和平滑肌细胞中的表达。方法分离人脐带中的脐静脉和脐动脉,冰冻切片后以免疫荧光法检测VEGFR-3的表达。结果VEGFR-3荧光信号表达于脐静脉内皮细胞和平滑肌细胞,以及脐动脉... 目的探讨血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3)在血管内皮细胞和平滑肌细胞中的表达。方法分离人脐带中的脐静脉和脐动脉,冰冻切片后以免疫荧光法检测VEGFR-3的表达。结果VEGFR-3荧光信号表达于脐静脉内皮细胞和平滑肌细胞,以及脐动脉内皮细胞、平滑肌细胞和外周细胞。结论血管内皮细胞和平滑肌细胞均表达VEGFR-3。 展开更多
关键词 血管内皮生长 因子受体-3 内皮细胞 平滑肌细胞 免疫荧光
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高尔基体蛋白73单克隆抗体的制备和鉴定
8
作者 刘芳 张爱英 +4 位作者 张向颖 张超 谢立 刘凯 陈德喜 《北京医学》 CAS 2013年第6期440-442,I0003,共4页
目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)鼠源单克隆抗体的制备方法并进行鉴定。方法用GP73重组抗原蛋白免疫5只小鼠获得血清抗体,免疫小鼠脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合,经过筛选后选择GP73抗体阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养,通过腹水制备获得高... 目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)鼠源单克隆抗体的制备方法并进行鉴定。方法用GP73重组抗原蛋白免疫5只小鼠获得血清抗体,免疫小鼠脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合,经过筛选后选择GP73抗体阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养,通过腹水制备获得高特异性和高效价的GP73单克隆抗体(单抗)。结果成功筛选出11株能稳定分泌特异性GP73单抗的杂交瘤细胞株,经多次复苏传代仍能稳定分泌特异性强、效价高的抗体。11株单抗均能结合天然状态下的GP73蛋白,与无关蛋白均无交叉反应,提示有较强的特异性。应用筛选出的配对GP73单抗可检测出浓度为1ng/ml的GP73基因工程表达抗原。结论制备的GP73杂交瘤细胞株分泌的抗体对GP73蛋白具有特异亲和性,并且有较高效价,为GP73蛋白诊断试剂的研制提供了关键技术基础。 展开更多
关键词 高尔基体蛋白73 杂交瘤 单克隆抗体 酶联免疫吸附测定 细胞免疫荧光
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5种抗菌中药体外抗衣原体活性研究 被引量:11
9
作者 侯庆昌 张繁 董兆文 《中国计划生育学杂志》 1998年第5期200-201,共2页
采用McCoy细胞培养衣原体的方法筛选有抗衣原体活性的中药。结果表明穿心莲、车前子、栀子、地肤子和牡丹皮浓度为50~200mg/ml时能显著减少包涵体数目(P<0.01)。其最大抑制率分别为93%,87%,85%,80%和70%。说明这5种抗菌中药具... 采用McCoy细胞培养衣原体的方法筛选有抗衣原体活性的中药。结果表明穿心莲、车前子、栀子、地肤子和牡丹皮浓度为50~200mg/ml时能显著减少包涵体数目(P<0.01)。其最大抑制率分别为93%,87%,85%,80%和70%。说明这5种抗菌中药具有体外抗生殖道衣原体作用。 展开更多
关键词 中药 衣原体 MCCOY 细胞培养 免疫荧光 药理
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水通道蛋白4抗体测定对视神经脊髓炎谱系疾病的意义 被引量:9
10
作者 张大启 杨丽 +4 位作者 杨春生 李婷 王钰 翟辉 施福东 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期914-918,共5页
目的 检测血清水通道蛋白4 (AQP4)抗体并评价其对视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSDs)的意义. 方法 选择自2007年5月至2012年5月天津医科大学总医院神经内科收治的中枢神经系统脱髓鞘疾病患者153例,其中NMOSDs患者利用细胞荧光免疫染色法... 目的 检测血清水通道蛋白4 (AQP4)抗体并评价其对视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSDs)的意义. 方法 选择自2007年5月至2012年5月天津医科大学总医院神经内科收治的中枢神经系统脱髓鞘疾病患者153例,其中NMOSDs患者利用细胞荧光免疫染色法(CBA)检测血清AQP4抗体,并对AQP4抗体阳性和AQP4抗体阴性的NMOSDs患者特点进行对比分析.结果 CBA检测AQP4抗体的敏感性为83.3%,特异性为100%.在AQP4抗体阳性的NMOSDs患者中,女性占78.8%,而在AQP4抗体阴性的患者中,女性仅占47.1%,两者相比差别有统计学意义(P=0.007); AQP4抗体阳性同时合并其他自身免疫抗体的NMOSDs患者首次发病EDSS为(5.9±2.0)分,单纯AQP4抗体阳性的NMOSDs患者扩展残疾状况评分量表(EDSS)为(4.2±1.9)分,比较差异有统计学意义(t=3.806,P=0.033);血清AQP4抗体在急性期呈阳性,缓解期呈阴性,且经各种免疫抑制剂治疗可由阳性逐渐转为阴性. 结论 血清AQP4抗体可作为鉴别NMOSDs与多发性硬化的辅助诊断指标,并对判断NMOSDs疾病复发及治疗效果有一定的指导价值. 展开更多
关键词 视神经脊髓炎 水通道蛋白4抗体 细胞荧光免疫染色法
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胚胎大鼠神经干细胞的分离培养及鉴定研究 被引量:8
11
作者 孔令胜 张军臣 +3 位作者 张冉 赵万巨 邵彤 杨全祥 《济宁医学院学报》 2009年第2期96-99,共4页
目的建立胎鼠神经干细胞体外培养方法并鉴定神经干细胞,观察神经干细胞生长特点。方法采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的无血清培养基对大鼠胚胎间脑组织细胞悬液进行培养。通过检测神经干细胞的特异性抗原、神经干细胞的... 目的建立胎鼠神经干细胞体外培养方法并鉴定神经干细胞,观察神经干细胞生长特点。方法采用含碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的无血清培养基对大鼠胚胎间脑组织细胞悬液进行培养。通过检测神经干细胞的特异性抗原、神经干细胞的自我增殖能力和分化能力来鉴定神经干细胞。结果分离培养出了大量具有不断增殖的能力、表达神经巢蛋白的神经干细胞,并能经过诱导分化为神经元和神经胶质细胞,并能稳定传代20代以上。结论无血清培养基分离培养的胎鼠脑组织神经干细胞具有自我更新和增殖能力,巢蛋白细胞免疫荧光鉴定为神经干细胞,成功建立了大鼠神经干细胞的分离培养方法。 展开更多
关键词 神经干细胞 细胞培养 免疫荧光 胎鼠
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植物花粉管中类整联蛋白的免疫荧光定位研究 被引量:4
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作者 孙颖 穆睿聆 +2 位作者 郝美璞 孙大业 张灼华 《实验生物学报》 CSCD 1999年第2期163-168,共6页
利用免疫荧光技术,分别用整联蛋白β_3、α_y亚基胞质域抗血清及整联蛋白VnR(Vitronectin的受体)的抗血清在百合花粉管中检测出荧光标记,且在花粉管尖端逐渐增强,而用FnR(纤粘连蛋白的受体)、LnR(层粘连蛋白的受体)的抗血清及非免疫血... 利用免疫荧光技术,分别用整联蛋白β_3、α_y亚基胞质域抗血清及整联蛋白VnR(Vitronectin的受体)的抗血清在百合花粉管中检测出荧光标记,且在花粉管尖端逐渐增强,而用FnR(纤粘连蛋白的受体)、LnR(层粘连蛋白的受体)的抗血清及非免疫血清对照实验在百合花粉管中则没有或仅有很弱的荧光。在萌发的碧桃花粉管中,用β_1、β_3亚基胞质域抗血清也能检测出荧光标记,初步结果显示花粉管在生长过程中,质膜上有可能存在类整联蛋白,并且在百合花粉管中这种类整联蛋白可能是由α_v和β_3两种亚基组成的Vn样蛋白的受体。 展开更多
关键词 整联蛋白 花粉管 细胞外基质 免疫荧光 定位
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突触内吞关键蛋白Dynamin在小鼠耳蜗内毛细胞中的表达研究 被引量:4
13
作者 蔡婷 袁伟 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第4期643-646,共4页
目的研究生理情况下Dynamin各亚型在小鼠耳蜗内毛细胞(IHC)的表达分布特点,为探讨其在毛细胞内可能发挥的生理功能以及与听信号传导的关系做铺垫。方法取成年小鼠耳蜗基底膜行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察Dynamin各亚型表达及定... 目的研究生理情况下Dynamin各亚型在小鼠耳蜗内毛细胞(IHC)的表达分布特点,为探讨其在毛细胞内可能发挥的生理功能以及与听信号传导的关系做铺垫。方法取成年小鼠耳蜗基底膜行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察Dynamin各亚型表达及定位分布情况。结果 Dynamin各亚型在小鼠耳蜗内毛细胞中均有表达。其中,Dyna-min-1表达于整个内毛细胞内,Dynamin-2点状分布在内毛细胞胞质,Dynamin-3高表达于内毛细胞核下近螺旋神经节区域。结论网格蛋白介导内吞过程是毛细胞内吞作用的重要机制,作为该过程中的关键蛋白,Dynamin各亚型在耳蜗内毛细胞中均有表达,提示Dynamin在内毛细胞中可能发挥着重要的生理功能。 展开更多
关键词 耳蜗内毛细胞 内吞 免疫荧光 DYNAMIN
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Seropositivity rates of water channel protein 4 antibodies compared between a cell-based immunofluorescence assay and an enzyme-linked immunosorbent assay in neuromyelitis optica patients 被引量:2
14
作者 Xiaoli Wu Zhangyuan Liao +3 位作者 Jing Ye Huiqing Dong ChaodongWang Piu Chan 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2011年第32期2490-2494,共5页
A total of 66 samples (from 27 cases with neuromyelitis optica, 26 cases with multiple sclerosis, aa 13 cases with optic neuritis) were tested for aquaporin-4 antibody by a cell-based immunofluorescence assay and an... A total of 66 samples (from 27 cases with neuromyelitis optica, 26 cases with multiple sclerosis, aa 13 cases with optic neuritis) were tested for aquaporin-4 antibody by a cell-based immunofluorescence assay and an enzyme-linked immunosorbent assay. The sensitivities and specificities of the two assays were similar. We further analyzed an additional 68 patients and 93 healthy controls using the enzyme-linked immunosorbent assay. A Kappa test showed good consistency between the two methods in terms of detection of anti-aquaporin-4 antibody in the se of neuromyelitis optica patients. No significant correlations were identified with onset age or disea duration, suggesting that aquaporin-4 antibody is a good marker for neuromyelitis optica. The enzyme-linked immunosorbent assay can be used for quantifying aquaporin-4 antibody concentrations and may be useful to dynamically monitor changes in the levels of aquaporin-4 antibody during disease duration. 展开更多
关键词 neuromyelitis optica cell-based immunofluorescence assay anti-aquaporin 4 antibody enzyme-linked immunosorbent assay long and extended spinal cord lesions neural regeneration
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EPO工程细胞株支原体检测 被引量:2
15
作者 陈琳 徐秀英 《细胞生物学杂志》 CSCD 1998年第2期95-96,F001,共3页
支原体污染是细胞培养过程中最常见的问题之一,对细胞支原体的检测是细胞特性鉴定的重要方面。我们采用抗支原体单抗免疫荧光法和培养法(包括液体培养法和固体培养法)检测工程细胞支原体。单抗免疫荧光法检测结果表明:支原体阳性的细胞... 支原体污染是细胞培养过程中最常见的问题之一,对细胞支原体的检测是细胞特性鉴定的重要方面。我们采用抗支原体单抗免疫荧光法和培养法(包括液体培养法和固体培养法)检测工程细胞支原体。单抗免疫荧光法检测结果表明:支原体阳性的细胞膜表面有明亮荧光,工程细胞EPO C_2细胞膜表面无荧光。支原体液体培养法结果显示:作为阳性对照的支原体由于在生长过程中产酸使培养液变黄,而加入EPOC_2株细胞悬液的样品管与阴性对照管相同,无颜色变化。固体培养法结果显示:在显微镜下观察,支原体阳性对照在固体培养基上呈荷包蛋样集落,而阴性对照及EPO C_2株细胞样品均无菌落生长。以上结果表明:受检的EPO C_2株细胞未被支原体污染。 展开更多
关键词 EPO工程细胞株 支原体 检测方法
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不同方法检测NMO-IgG/抗AQP4抗体滴度的比较 被引量:1
16
作者 赖蓉 刘俊秀 +2 位作者 孙巧松 黄帆 丰岩清 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期407-411,276,共5页
【目的】旨在比较鼠脑法和细胞法检测中国人视神经脊髓炎(NMO)疾病谱(NMOSD)的滴度是否具有一致性。【方法】每个样本分别采用鼠脑法和细胞法检测,阳性血清采取倍比稀释以确定最终稀释倍数。应用盲法检测血清NMO-IgG/抗水通道蛋白4(AQP4... 【目的】旨在比较鼠脑法和细胞法检测中国人视神经脊髓炎(NMO)疾病谱(NMOSD)的滴度是否具有一致性。【方法】每个样本分别采用鼠脑法和细胞法检测,阳性血清采取倍比稀释以确定最终稀释倍数。应用盲法检测血清NMO-IgG/抗水通道蛋白4(AQP4)110例,其中视神经脊髓炎19例,复发性视神经炎(RON)17例,纵形扩展性脊髓炎(LETM)13例,多发性硬化(MS)31例,健康对照(HC)30例;对其检测的阳性率和滴度进行分析,并比较滴度与脊髓病变长度的相关性。【结果】大部分样本用两种方法检测的滴度之间都缺乏一致性。NMO组患者NMO-IgG/抗AQP4抗体鼠脑法(63.2%,12/19),细胞法(89.5%,17/19),RON组鼠脑法(47.1%,8/17),细胞法(70.6%,12/17),LETM组鼠脑法(46.2%,6/13),细胞法(69.2%,9/13),MS组鼠脑法(6.5%,2/31),细胞法(9.7%,3/31)。鼠脑法和细胞法检测所得到的NMOSD患者NMO-IgG/AQP4抗体滴度均和脊髓病变的长度无线性相关性,两种检测方法之间也缺乏滴度线性相关性。【结论】鼠脑法和细胞法检测抗体滴度的不一致性提示有必要进行多因素相关性研究以探讨影响两种检测方法抗体滴度的因素。 展开更多
关键词 视神经脊髓炎 NMO—IgG 抗水通道蛋白4抗体 鼠脑法 细胞法 滴度
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人胚嗅球嗅鞘细胞原代培养的实验研究 被引量:1
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作者 任玉水 闫军浩 +5 位作者 王洪美 陈琳 黄红云 周长满 姜晓荣 田国忠 《解剖科学进展》 CAS 2010年第2期97-100,共4页
目的拟建立人胚胎嗅球嗅鞘细胞的培养方法并探讨这些细胞在活性、纯度方面是否具备临床应用水平。方法用含有促进细胞生长的谷氨酰胺、转铁蛋白、生物素、硒酸纳的无血清纯化液纯化嗅鞘细胞,胰蛋白酶消化收集细胞,制成单细胞悬液。采用... 目的拟建立人胚胎嗅球嗅鞘细胞的培养方法并探讨这些细胞在活性、纯度方面是否具备临床应用水平。方法用含有促进细胞生长的谷氨酰胺、转铁蛋白、生物素、硒酸纳的无血清纯化液纯化嗅鞘细胞,胰蛋白酶消化收集细胞,制成单细胞悬液。采用台盼蓝染色法进行活性测定,P75NGFR和S-100双标免疫荧光染色鉴定,以Hoechst复染鉴定OECs的纯度。结果可见比较典型的嗅鞘细胞:双极或梭形、多突起形和扁圆形,主要以梭形和多突起形细胞为主。细胞活性大于95%,纯度大于90%。结论实验建立的人胚胎嗅球嗅鞘细胞原代培养的方法可行,细胞活性大于95%,纯度和均一性已达到临床应用水平。 展开更多
关键词 嗅鞘细胞 细胞培养 纯化 免疫荧光 人胚
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子宫内膜细胞的原代培养及COX-2的表达
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作者 樊杨 陈必良 +4 位作者 辛晓燕 蔡国青 马向东 王德堂 郭慧玲 《中华临床医学杂志》 2006年第9期5-7,共3页
目的对异位子宫内膜细胞进行培养检测环氧化酶-2(COX-2)的表达,探讨其在子宫内膜异位症(EM)发病机制中的作用。方法培养12例异位子宫内膜细胞和15例正常子宫内膜细胞并通过鉴定,用免疫荧光检测COX-2在异位子宫内膜细胞和正常子宫... 目的对异位子宫内膜细胞进行培养检测环氧化酶-2(COX-2)的表达,探讨其在子宫内膜异位症(EM)发病机制中的作用。方法培养12例异位子宫内膜细胞和15例正常子宫内膜细胞并通过鉴定,用免疫荧光检测COX-2在异位子宫内膜细胞和正常子宫内膜细胞的表达。结果体外培养的异位子宫内膜细胞和正常子宫内膜细胞在形态上无明显的区别,相比正常子宫内膜细胞,COX-2在异位子宫内膜细胞中的表达是明显增高的。结论对COX-2的深入研究以期为EM的诊治提供实验基础和新的方法。 展开更多
关键词 环氧化酶-2 子宫内膜异位症 细胞培养 免疫荧光
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巴泰病毒云南株生物学性状研究 被引量:6
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作者 章域震 张海林 +1 位作者 杨卫红 冯云 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期527-532,共6页
目的掌握巴泰(Batai)病毒生物学特性,为巴泰病毒的监测和调查研究提供科学依据。方法用分离自云南省菲律宾按蚊(Anopheles philippinensis)的巴泰病毒LC92-4株,采用细胞培养、小白鼠感染、血凝抑制、间接免疫荧光、空斑试验以及病理检... 目的掌握巴泰(Batai)病毒生物学特性,为巴泰病毒的监测和调查研究提供科学依据。方法用分离自云南省菲律宾按蚊(Anopheles philippinensis)的巴泰病毒LC92-4株,采用细胞培养、小白鼠感染、血凝抑制、间接免疫荧光、空斑试验以及病理检测和电镜观察等方法进行生物学特性试验。结果巴泰病毒可引起<4周龄小白鼠发病死亡。感染鼠脑病毒颅内、皮下和腹腔接种2周龄小白鼠的LD50分别为5.67logLD50/0.025mL、5.3logLD50/0.03mL和4.5logLD50/0.03mL。感染病毒鼠的心、肝、脾、肺、肾病毒悬液颅内接种2周龄小白鼠,LD50分别为3.75、4.25、2.25、3.0、2.25logLD50/0.025mL。感染发病小白鼠脑、心、肝、脾、肺、肾均发现病理改变。感染鼠的脑组织经电镜检测发现圆形有包膜病毒颗粒,大小约82nm。巴泰病毒能在BHK21和Vero细胞产生明显病变,并可产生空斑;在BHK21细胞上,空斑滴度为6.04logPFU/mL;在C6/36细胞上不产生病变。感染病毒鼠脑接种BHK21和Vero细胞,TCID50分别为5.50logTCID50/0.025mL和5.00logTCID50/0.025mL。在pH5.75~7.0条件下,巴泰病毒不具有与鸽、鹅、鸡、鸭、人O型和绵羊红血球发生凝集的特性;空斑减少中和试验检测云南省357份人血清,阳性2份,中和抗体滴度均为1∶10。结论乳小白鼠和幼年小白鼠对巴泰病毒高度易感。BHK21和Vero细胞对巴泰病毒敏感,可用于病毒分离培养和空斑测定。建立的免疫荧光和空斑减少中和试验具有特异性,可用于巴泰病毒抗体检测。应进一步开展该病毒的分布及其与疾病关系的研究。 展开更多
关键词 巴泰病毒 动物易感性 细胞敏感性 间接免疫荧光试验 空斑试验 空斑减少中和试验
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