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应用电镜技术和血凝试验检测犬细小病毒和犬腺病毒 被引量:4
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作者 李六金 押宗保 +6 位作者 李成 姜焕宏 陈慧茹 刘建荣 马伟辉 王新建 李宏 《中国兽药杂志》 2002年第7期33-35,共3页
电镜技术和血凝试验是检测犬细小病毒和犬腺病毒快速而简便的方法。本试验结果表明,两种方法检验结果大部分相符,但各具特色。电镜技术的优势在于能够直观地显示目标病毒的生长发育、粒子的完整性以及有无非目标病毒、细菌、支原体等污... 电镜技术和血凝试验是检测犬细小病毒和犬腺病毒快速而简便的方法。本试验结果表明,两种方法检验结果大部分相符,但各具特色。电镜技术的优势在于能够直观地显示目标病毒的生长发育、粒子的完整性以及有无非目标病毒、细菌、支原体等污染情况,这对于动物病毒疫苗种毒质量的检测是十分重要的。 展开更多
关键词 电镜技术 血凝试验 检测 犬细小病毒 犬腺病毒
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抗CDV、CAV卵黄抗体的制备 被引量:8
2
作者 王玉燕 朱瑞良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期215-218,共4页
本研究用CDV、CAV分别免疫产蛋鸡 ,收集鸡蛋 ,用海藻酸钠_硫酸铵法提取卵黄抗体 (IgY) ,并对提取的IgY采用了SDS_PAGE和低压层析检测纯度 ,结果表明用该法提取的IgY纯度较高。用间接ELISA测定提取的IgY的活性 ,结果证明提取的抗CAVIgY... 本研究用CDV、CAV分别免疫产蛋鸡 ,收集鸡蛋 ,用海藻酸钠_硫酸铵法提取卵黄抗体 (IgY) ,并对提取的IgY采用了SDS_PAGE和低压层析检测纯度 ,结果表明用该法提取的IgY纯度较高。用间接ELISA测定提取的IgY的活性 ,结果证明提取的抗CAVIgY的活性较高 ,而抗CDVIgY的活性损失较大。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 犬腺病毒 海藻酸钠 卵黄抗体 制备 检测
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犬腺病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:10
3
作者 由欣月 郝雲峰 +1 位作者 崔尚金 秦彤 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第6期29-34,共6页
为建立良好的犬腺病毒检测方法,参考GenBank中犬腺病毒毒株(GenBank登录号:U77082.1)的E3基因,设计并合成了一对特异性引物。扩增的目的片段与pMD19-T载体相连接构建重组质粒,以该重组质粒为模板建立特异性好、灵敏度高且可快速检测犬... 为建立良好的犬腺病毒检测方法,参考GenBank中犬腺病毒毒株(GenBank登录号:U77082.1)的E3基因,设计并合成了一对特异性引物。扩增的目的片段与pMD19-T载体相连接构建重组质粒,以该重组质粒为模板建立特异性好、灵敏度高且可快速检测犬腺病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。经特异性方法验证,在常见的五种犬病毒病中,本方法只能检测出犬腺病毒存在。敏感性试验结果表明,本方法的灵敏性较普通PCR方法高出100倍。重复性试验结果的变异系数均不高于0.95%。本方法的建立可为犬腺病毒的检测提供技术支持。 展开更多
关键词 犬腺病毒 荧光定量PCR E3基因 检测方法
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同时检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、Ⅰ型和Ⅱ型犬腺病毒多重PCR方法的建立 被引量:7
4
作者 刘大飞 姜一曈 +9 位作者 戚亭 程景 刘立奎 林文君 柴洪亮 杨天阔 王翀 华育平 曲连东 张洪英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期911-914,共4页
为建立检测多种犬病的多重PCR方法,本研究根据GenBank登录犬瘟热病毒(CDV)的N基因序列、犬细小病毒(CPV)的NS基因序列和犬腺病毒(CAV)的E3基因序列,设计合成3对特异性引物。通过优化反应条件,建立同时扩增CDV(507 bp)、CPV(287 bp)、CAV... 为建立检测多种犬病的多重PCR方法,本研究根据GenBank登录犬瘟热病毒(CDV)的N基因序列、犬细小病毒(CPV)的NS基因序列和犬腺病毒(CAV)的E3基因序列,设计合成3对特异性引物。通过优化反应条件,建立同时扩增CDV(507 bp)、CPV(287 bp)、CAV-Ⅰ(590 bp)和CAV-Ⅱ(1 027 bp)的多重PCR方法。实验结果表明:在同一PCR反应体系中可以同时检测以上4种病毒,而狂犬病病毒检测为阴性;CDV、CPV、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的最低检出限分别为101.9TCID50、101.7TCID50、101.7TCID50和102.2TCID50。利用该方法对由黑龙江省不同地区所采集的30份犬病料样品进行检测,CDV阳性率为23.33%(7/30)、CPV阳性率为20%(6/30)、CAV-Ⅰ和CAV-Ⅱ的阳性率均为3.33%(1/30),证明建立的PCR方法可以用于临床诊断。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 犬细小病毒 犬腺病毒
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冀、京、吉犬群犬腺病毒中和抗体调查 被引量:7
5
作者 钱方 张守峰 +6 位作者 王述超 刘晔 赵敬慧 米立娟 张菲 王颖 扈荣良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期155-157,共3页
目的为表达狂犬病病毒糖蛋白的犬2型腺病毒(CAV-2)重组狂犬病口服疫苗的投放工作提供流行病学依据。方法通过病毒中和试验对随机采自河北省,北京市,吉林省等地的387份犬血清进行犬腺病毒中和抗体检测,以确定犬群腺病毒感染率。结果河北... 目的为表达狂犬病病毒糖蛋白的犬2型腺病毒(CAV-2)重组狂犬病口服疫苗的投放工作提供流行病学依据。方法通过病毒中和试验对随机采自河北省,北京市,吉林省等地的387份犬血清进行犬腺病毒中和抗体检测,以确定犬群腺病毒感染率。结果河北、吉林农村流浪犬或家养犬腺病毒中和抗体阳性率较低,阳性率为16%(30/192),而北京市犬腺病毒中和抗体阳性率高达69%(135/195),说明城乡犬只犬腺病毒中和抗体存在明显差异。结论农村流浪犬或家养犬腺病毒中和抗体阳性率较低,适用于CAV-2及其重组疫苗首次免疫、尤其是口服免疫。 展开更多
关键词 狂犬病 犬腺病毒 中和抗体 口服免疫
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一株I型犬腺病毒的分离与鉴定 被引量:6
6
作者 易程 邓莉 +6 位作者 唐青海 阳坤 滕威 谢璇 杨海 王芳宇 何丽芳 《中国动物检疫》 CAS 2019年第2期82-87,共6页
为给I型犬腺病毒(CAV-I)后续研究提供基础材料,采集疑似犬传染性肝炎患犬粪便,用PCR方法进行CAV-I核酸检测,并运用犬肾传代细胞(MDCK)进行病毒分离培养,采用PCR和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒在细胞内的繁殖状态。结果显... 为给I型犬腺病毒(CAV-I)后续研究提供基础材料,采集疑似犬传染性肝炎患犬粪便,用PCR方法进行CAV-I核酸检测,并运用犬肾传代细胞(MDCK)进行病毒分离培养,采用PCR和免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒在细胞内的繁殖状态。结果显示:患犬粪便样品PCR检测为CAV-I核酸阳性,病料接种MDCK细胞培养24 h后出现明显的"葡萄串样"细胞病变效应(CPE);培养物血清学鉴定为CAV抗原阳性,不同代次病毒培养物均为CAV-I核酸强阳性;第9代病毒核酸序列与Gen Bank中CAV-I毒株核苷酸相似性在99.0%以上,与CAV-Ⅱ相似性仅为65.3%;该病毒与CAV-I毒株处于同一遗传分支;病毒接种MDCK后8 h内均无抗原检出,12 h后细胞核中分布大量的CAV抗原,24 h后细胞出现典型的"葡萄串样"病变,抗原在细胞中呈弥散分布。上述结果表明,分离到的毒株为CAV-I,命名为CAV-ZY180711。 展开更多
关键词 犬腺病毒 分离鉴定 PCR 免疫过氧化物酶单层细胞染色法
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犬腺病毒间接免疫荧光检测方法的建立 被引量:5
7
作者 罗国良 柴秀丽 +5 位作者 闫喜军 吴威 王凤雪 易立 张海玲 邵西群 《特产研究》 2008年第1期10-11,18,共3页
用犬腺病毒制作的抗原玻片,通过确定最佳一抗和荧光抗体浓度,特异性试验和敏感性试验,建立了犬腺病毒间接免疫荧光方法,可用于狐狸脑炎的诊断。
关键词 犬1型腺病毒 间接免疫荧光法 检测方法 抗原 抗体 狐狸 脑炎
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虎血清犬腺病毒抗体调查 被引量:4
8
作者 贺文琦 夏咸柱 +5 位作者 高玉伟 孙贺廷 王立刚 刘丹 薛琳 黄耕 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期310-312,296,共4页
关键词 犬腺病毒 血凝抑制抗体
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犬腺病毒(Ⅱ型)阳性血清的研制及应用 被引量:5
9
作者 赵炜 孙淼 +3 位作者 薛青红 陈延飞 韩爽 印春生 《中国兽药杂志》 2019年第3期54-60,共7页
为研制犬腺病毒相关制品的检验用阳性血清,以健康易感山羊为免疫靶动物,深入优化免疫原和免疫程序,无菌采血后分离血清,并分装冻干。通过常规检验方法进行纯净性检测、特异性检测、抗体效价测定和中和指数测定,并将其应用于代表性的含... 为研制犬腺病毒相关制品的检验用阳性血清,以健康易感山羊为免疫靶动物,深入优化免疫原和免疫程序,无菌采血后分离血清,并分装冻干。通过常规检验方法进行纯净性检测、特异性检测、抗体效价测定和中和指数测定,并将其应用于代表性的含犬腺病毒组分的活疫苗制品的外源病毒检验和鉴别检验等。结果显示,该批血清的纯净性检验和特异性满足要求,中和抗体效价为1∶9364,中和指数>10^(6.0)。结果表明,该血清对犬腺病毒具有良好的中和作用,能够应用于犬腺病毒相关制品的外源病毒检验和特异性检验等,是兽用生物制品国家标准物质的重要候选标准品。 展开更多
关键词 犬腺病毒 阳性血清 标准物质
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狐狸传染性脑炎病原学研究进展 被引量:5
10
作者 罗国良 闫喜军 钟伟 《动物医学进展》 CSCD 2008年第8期63-66,共4页
论文概述了狐狸传染性脑炎病原犬腺病毒的生物学特性、基因组结构、编码蛋白、病原流行特性、病原检测及疫苗研制等方面的研究进展,为该病毒的深入研究和狐狸传染性脑炎的防控提供资料。
关键词 狐狸传染性脑炎 犬腺病毒 病原
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混合感染病例中犬冠状病毒变异株的分离鉴定 被引量:3
11
作者 温海 王玉燕 +4 位作者 陆承平 张汇东 缪勤 朱骞 徐汉坤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期710-715,共6页
某犬群发生具有呼吸道和消化道症状的传染病,86只幼犬发病,治愈65只,死亡21只。为确诊病原,用MD-CK细胞,从死亡犬肠道病料中分离到2株病毒,经理化学鉴定、动物复归试验、电镜检查、PCR检测证明为犬冠状病毒和犬腺病毒2型,定名为CCV-KM和... 某犬群发生具有呼吸道和消化道症状的传染病,86只幼犬发病,治愈65只,死亡21只。为确诊病原,用MD-CK细胞,从死亡犬肠道病料中分离到2株病毒,经理化学鉴定、动物复归试验、电镜检查、PCR检测证明为犬冠状病毒和犬腺病毒2型,定名为CCV-KM和CAV2-KM,确认此次犬群发病由CCV和CAV2混合感染所致。其中对CCV的分离采用含CCV和CAV2的混合感染病料攻击耐过CAV2的幼犬,导致幼犬单纯感染CCV发病后采集的病料。动物试验表明,CCV-KM株可以导致幼犬发病,具有较强的毒力;CCV-KM能被较高浓度的抗CCV1-71参考毒株的血清中和,而抗CCV-KM的血清却不能中和CCV1-71毒株,说明两者在抗原性和致病性上存在差异;基因测序结果表明,CCV-KM的M基因212 bp序列同其他已知CCV的基因序列差异较大,在进化树的位置上介于CCVⅠ型和CCVⅡ型之间,较偏向CCVⅠ型。提示CCV-KM株可能是一个新的变异株。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 犬腺病毒2型 混合感染 病毒的分离鉴定
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犬腺病毒CAV-BJ02株的分离与鉴定 被引量:4
12
作者 由欣月 刘畅 +3 位作者 郝雲峰 梁琳 秦彤 崔尚金 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期2016-2021,共6页
本研究旨在分离犬腺病毒(CAV)的北京地区流行株,采集北京地区某宠物医院2~4月龄发生咳嗽等呼吸道症状犬的鼻咽拭子,经胶体金和PCR检测,初筛为犬腺病毒阳性。经过处理后,将其处理液接种于MDCK细胞,进行连续传代培养,出现变圆、脱落、葡... 本研究旨在分离犬腺病毒(CAV)的北京地区流行株,采集北京地区某宠物医院2~4月龄发生咳嗽等呼吸道症状犬的鼻咽拭子,经胶体金和PCR检测,初筛为犬腺病毒阳性。经过处理后,将其处理液接种于MDCK细胞,进行连续传代培养,出现变圆、脱落、葡萄串样等特征性细胞病变。通过形态学观察、PCR鉴定及动物回归试验等方法对其进行鉴定。PCR扩增片段测序结果表明,该分离株为犬腺病毒Ⅱ型,遂将其命名为CAV-BJ02(GenBank:MN744708)株。用Reed-Muench法测得CAV-BJ02株的TCID 50为106.7·(100μL)-1。电镜下可清晰地观察到呈正六边形的二十面体、直径在86 nm左右的犬腺病毒颗粒。遗传进化分析结果表明,本株病毒为CAV-Ⅱ型。动物回归试验结果表明,CAV-BJ02株可引起犬发热等轻微临床症状,以口鼻分泌物为主要排毒方式,排毒期为5~6 d,不导致犬死亡。上述研究结果为深入了解北京地区CAV的流行情况,为犬腺病毒病的诊断、防治及后续相关研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 犬腺病毒 分离鉴定 进化分析 动物试验
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I型犬腺病毒黑龙江株(CAV-H)的分离、鉴定及致弱的研究 被引量:4
13
作者 刘大飞 王牟平 +7 位作者 曲连东 高艳 刘立奎 柴洪亮 刘春国 杨天阔 华育平 张洪英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期956-959,共4页
为研究犬腺病毒(CAV)致弱疫苗的免疫原性,本研究将病犬的组织样品接种于MDCK细胞内,进行病毒分离及鉴定。鉴定结果显示,分离的病毒在MDCK细胞内产生明显的细胞病变(CPE),电镜下可见典型的腺病毒粒子;回归动物试验显示,该分离株可导致犬... 为研究犬腺病毒(CAV)致弱疫苗的免疫原性,本研究将病犬的组织样品接种于MDCK细胞内,进行病毒分离及鉴定。鉴定结果显示,分离的病毒在MDCK细胞内产生明显的细胞病变(CPE),电镜下可见典型的腺病毒粒子;回归动物试验显示,该分离株可导致犬出现明显的CAV感染症状;PCR鉴定结果表明分离的病毒为CAV,命名为CAV-H株;将CAV-H株接种MDCK细胞连续传代至110代,在传代过程中,病毒滴度由初始105.0 TCID50/0.1 mL上升至107.0 TCID50/0.1 mL,而CAV对犬的致病力逐渐降低;免疫效力试验结果表明,CAV-H可对同源强毒攻击的犬提供完全的免疫保护作用,可作为理想的疫苗候选毒株。 展开更多
关键词 犬细小病毒 分离与鉴定 致弱
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犬腺病毒作为载体在疾病治疗和预防中的作用研究进展 被引量:3
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作者 李秀博 崔尚金 +1 位作者 王春仁 梁琳 《现代畜牧兽医》 2017年第9期54-58,共5页
犬腺病毒是目前已知哺乳动物腺病毒属中致病性最强的一种,且世界分布范围较为广泛。犬腺病毒分为Ⅰ型和Ⅱ型,Ⅱ型可插入外源基因,诱导免疫反应、进行有效基因转移,其取代h Ad V-5载体,作为高效、安全载体被广泛用于基因治疗与疫苗。本... 犬腺病毒是目前已知哺乳动物腺病毒属中致病性最强的一种,且世界分布范围较为广泛。犬腺病毒分为Ⅰ型和Ⅱ型,Ⅱ型可插入外源基因,诱导免疫反应、进行有效基因转移,其取代h Ad V-5载体,作为高效、安全载体被广泛用于基因治疗与疫苗。本文就犬腺病毒Ⅱ型的生物学特性、作为载体在基因治疗及疫苗的作用进行综述。 展开更多
关键词 犬腺病毒 Ⅱ型 载体 基因治疗 疫苗
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犬腺病毒纤突蛋白基因功能区的比较分析 被引量:2
15
作者 范泉水 夏咸柱 +6 位作者 邱薇 黄耕 何洪彬 余春 乔军 武银莲 殷震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期93-96,共4页
根据GenBank中已发表的CAV纤突基因序列 ,设计合成 4对 8条引物 ,用已建立的PCR方法 ,对犬 2型腺病毒沈阳分离株第 5代强毒经蚀斑克隆驯化的第 6 0代毒弱毒 (SY_V6 0 )和犬 1型腺病毒长春犬株 (CCC_V6 )的纤突基因进行了扩增 ,PCR产物... 根据GenBank中已发表的CAV纤突基因序列 ,设计合成 4对 8条引物 ,用已建立的PCR方法 ,对犬 2型腺病毒沈阳分离株第 5代强毒经蚀斑克隆驯化的第 6 0代毒弱毒 (SY_V6 0 )和犬 1型腺病毒长春犬株 (CCC_V6 )的纤突基因进行了扩增 ,PCR产物经纯化后进行基因序列测定 ,测定结果经拼接后得到一个由 16 32和 16 2 9个核苷酸组成的纤突蛋白全基因序列 ,分别编码 5 43和 5 42个氨基酸。犬 2型腺病毒 (SY_V6 0 )与犬 1型腺病毒 (CCC_V6 )的纤突基因的同源性达到 80 .48%。犬 2型腺病毒(SY_V6 0 )与犬 1型腺病毒 (CCC_V6 )纤突基因的同源性达到 80 .48% ;根据犬的腺病毒与人 2型腺病毒纤突蛋白的序列同源性比较结果 ,推测了犬腺病毒纤突蛋白的尾 (tail)、轴 (shaft,)、结 (knob)三个功能区的氨基酸序列 ,2个型之间的尾区同源性为 76 .9% ;轴区同源性为 78.5 9% ;其结区同源性为 83.2 4% ,而同型毒株之间结和尾区同源性较高 。 展开更多
关键词 轴区同源性 基因序列 犬腺病毒 纤突蛋白 基因功能区 比较分析
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不同型犬腺病毒纤突蛋白基因序列的比较分析 被引量:2
16
作者 范泉水 夏咸柱 +6 位作者 邱薇 黄耕 何洪彬 余春 乔军 武银莲 殷震 《中国病毒学》 CSCD 2002年第1期82-86,共5页
根据已发表的CAV纤突基因序列,用PCR方法,对4个CAV-2毒 株和4个CAV-1毒株的纤突基因进行了扩增和测序,测定的核苷酸序列经推导得到分别编 码543和542个氨基酸的CAV纤突蛋白全序列。测定的CAV-2比... 根据已发表的CAV纤突基因序列,用PCR方法,对4个CAV-2毒 株和4个CAV-1毒株的纤突基因进行了扩增和测序,测定的核苷酸序列经推导得到分别编 码543和542个氨基酸的CAV纤突蛋白全序列。测定的CAV-2比较表明:我国流行的CAV-2 SY 强毒株与国外标准强毒株Toronto A26/61株相同,其驯化致弱的毒株与驯化前相比在1134位 发生碱基颠换。测定的CAV-1比较表明:我国流行的CAV-1株与标准强毒RI261株差异相对 较大,而国内CAV-1毒株互相之间相对差别较小。CAV-2与CAV-1纤突基因的同源性为80.48%。 展开更多
关键词 犬腺病毒 纤突基因 纤突蛋白 基因序列
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CDV、CAV疫苗三免后鸭蛋卵黄抗体制备及效价消长规律探究
17
作者 张岩彬 《现代畜牧兽医》 2016年第12期39-43,共5页
利用犬瘟热商品疫苗和狐狸脑炎商品疫苗分别免疫开产蛋鸭,三免后收集高免鸭蛋,用水稀释法和硫酸铵两步沉淀法提纯卵黄抗体。采用SDS-PAGE检测鸭源Ig Y浓度,中和试验和HA-HI试验测定相应效价。结果表明,水溶法制备的卵黄抗体浓度为6.33 m... 利用犬瘟热商品疫苗和狐狸脑炎商品疫苗分别免疫开产蛋鸭,三免后收集高免鸭蛋,用水稀释法和硫酸铵两步沉淀法提纯卵黄抗体。采用SDS-PAGE检测鸭源Ig Y浓度,中和试验和HA-HI试验测定相应效价。结果表明,水溶法制备的卵黄抗体浓度为6.33 mg/m L,得率为60%-70%。免疫CDV疫苗组和CAV疫苗组可以很快产生特异性抗体。在30-60 d内,卵黄抗体效价极高;在60-120 d内,卵黄抗体效价维持较高水平;在120-180 d内,效价趋近于零。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 狐狸脑炎病毒 卵黄抗体 消长规律
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狐传染性脑炎及防制
18
作者 程世鹏 吴威 闫喜军 《特产研究》 2003年第2期50-53,共4页
综述了狐传染性脑炎的流行病学、临床症状、诊断及免疫研究进展,提出了综合防制措施。
关键词 传染性脑炎 流行病学 症状 诊断 综合防制 免疫 犬腺病毒
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犬2型腺病毒对犬的口服免疫研究
19
作者 范泉水 夏咸柱 +4 位作者 王度林 齐桂凤 邱薇 何洪彬 黄耕 《中国兽药杂志》 北大核心 2000年第4期17-19,共3页
对未经犬腺病毒免疫的两月龄左右杂交狼犬 ,随机分为 6组每组 5只 ,另设 5只对照 ,用作者分离鉴定和致弱驯化的犬喉气管炎病毒 (犬 2型腺病毒 )的第 60代 DK细胞培养物 ( SYCAV- 2 DK60 )对犬进行口服免疫试验 ,在免疫第 4周采血分离血... 对未经犬腺病毒免疫的两月龄左右杂交狼犬 ,随机分为 6组每组 5只 ,另设 5只对照 ,用作者分离鉴定和致弱驯化的犬喉气管炎病毒 (犬 2型腺病毒 )的第 60代 DK细胞培养物 ( SYCAV- 2 DK60 )对犬进行口服免疫试验 ,在免疫第 4周采血分离血清 ,测定犬腺病毒的血凝抑制抗体 ( HI)效价 ,结果 30只试验犬全部产生了 HI抗体 ,表明 SY CAV- 2可通过口服或饵料的途径对犬实施免疫 ,为犬口服联合疫苗以及犬 2型腺病毒为载体的口服狂犬 展开更多
关键词 犬腺病毒 口服免疫 血凝抑制抗体效价 载体
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感染性犬2型腺病毒全基因组克隆及鉴定 被引量:12
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作者 张守峰 扈荣良 +1 位作者 牛建强 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期533-535,共3页
以犬 2型腺病毒 (canine adenovirus type- 2 ,CAV- 2 )自然弱毒株 YCA18基因组 DNA为模板 ,经 PCR扩增分别获得其双链两末端 10 13bp(U)和 972 bp(D)的 DNA序列 ,以首尾相接方式克隆入载体 p Poly2 ,获得重组质粒p Poly2 - UD。以 Hin... 以犬 2型腺病毒 (canine adenovirus type- 2 ,CAV- 2 )自然弱毒株 YCA18基因组 DNA为模板 ,经 PCR扩增分别获得其双链两末端 10 13bp(U)和 972 bp(D)的 DNA序列 ,以首尾相接方式克隆入载体 p Poly2 ,获得重组质粒p Poly2 - UD。以 Hind 和 Bst B 双酶切 p Poly2 - UD,回收含载体和部分 U、D的大片段并与 CAV- 2 DNA共转化感受态 E.coli Sure TM,经菌体内同源重组 ,获得含有 CAV- 2全基因组序列的重组质粒 p Poly2 - CAV- 2。后者以 Cla 和 Asc 双酶切 ,释放 CAV- 2全基因组 ,通过脂质体介导转染 MDCK细胞 ,盲传 3代后重复转染 1次 ,4d后 ,出现腺病毒典型病变。细胞上清血凝效价为 1∶ 6 40 ,并可被 CAV- 2抗血清有效抑制。以上结果表明 ,本研究获得了具有感染性的CAV- 2全基因组重组质粒 ,为以 CAV- 2作为重组疫苗载体的系列研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 鉴定 犬2型腺病毒 同源重组 感染性全基因组 基因克隆 重组疫苗载体
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