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冰草组织培养再生体系建立及耐旱转基因研究 被引量:5
1
作者 霍秀文 云锦凤 +1 位作者 米福贵 魏建华 《草地学报》 CAS CSCD 2005年第2期172-173,共2页
本研究以冰草属植物中的4个品种——蒙古冰草新品系(A.mongolicumKeng)、航道冰草(A.cristatumcv.Fairway)、诺丹冰草(A.desertorumcv.Nordan)和一个种间杂种冰草——蒙农杂种冰草(A.cristatum×A.desertorumcv.Hycrest-Mengnong)... 本研究以冰草属植物中的4个品种——蒙古冰草新品系(A.mongolicumKeng)、航道冰草(A.cristatumcv.Fairway)、诺丹冰草(A.desertorumcv.Nordan)和一个种间杂种冰草——蒙农杂种冰草(A.cristatum×A.desertorumcv.Hycrest-Mengnong)为材料,分别以幼穗为外植体建立了冰草组织培养再生体系。在此基础上,以调控脯氨酸生物合成最后一步的关键酶的突变体基因P5CS为目标基因,bar基因为筛选标记基因,用基因枪法轰击幼穗诱导的愈伤组织,获得转基因植株。利用PCR方法从拟南芥(Arabidopsisthaliana)基因组DNA中分离得到了CBF4及其启动子,并对CBF4启动子进行了序列分析和初步的功能分析。结果表明:1.冰草幼穗的取样时期为孕穗期,长度介于1.0~3.0cm的幼穗为最适宜的外植体;诱导愈伤组织的最适培养基为改良MS+2,4-D2.0mg/L,诱导率83.5%;分化培养基为MS+KT0.2mg/L,分化率74.5%;生根培养基为1/2MS,生根率100%。2.以幼穗诱导的愈伤组织为受体,采用基因枪轰击法转化冰草获得转基因植株;PCR和Southern检测表明外源基因P5CS已整合到冰草属植物基因组DNA中;RT-PCR检测表明目的基因已在冰草转基因植株的转录水平表达;P5CS基因的遗传转化率为0.09%~0.11%。3.采用PCR方法从拟南芥中分离了CBF4基因及其启动子序列。 展开更多
关键词 组织培养 转基因研究 体系建立 耐旱 冰草属植物 外植体建立 蒙古冰草 航道冰草 诺丹冰草 种间杂种 再生体系 新品系 cv 幼穗
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大白菜CBF4基因的克隆和遗传进化分析 被引量:5
2
作者 李利斌 刘立锋 +2 位作者 王殿峰 刘国明 高建伟 《山东农业科学》 2009年第4期1-4,共4页
采用RT-PCR法,从大白菜(Brassica rapasubsp.pekinensis)河头早中克隆了拟南芥CBF4的同源基因BrCBF4,并对它的序列特征、蛋白结构和遗传进化进行了分析。结果表明,BrCBF4全长663 bp,编码一个包含220个氨基酸残基和具有典型AP2结构域的蛋... 采用RT-PCR法,从大白菜(Brassica rapasubsp.pekinensis)河头早中克隆了拟南芥CBF4的同源基因BrCBF4,并对它的序列特征、蛋白结构和遗传进化进行了分析。结果表明,BrCBF4全长663 bp,编码一个包含220个氨基酸残基和具有典型AP2结构域的蛋白,并且含有两个潜在的豆蔻酰化位点。遗传进化分析表明,BrCBF4与BjDREB1-2的关系最近,与拟南芥AtCBF4同属一个类群,而AtCBF1,2,3与大白菜的BrCBF1,2,3及其它芸薹属植物相关基因分属另一个类群。推测BrCBF4与BjDREB1-2、AtCBF4为直系同源基因,在功能上相似,而与BrCBF1,2,3存在功能上的分化。本研究为进一步研究BrCBF4在大白菜非生物逆境响应中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 大白菜 cbf4 克隆 蛋白结构分析 遗传进化
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含有拟南芥转录因子CBF4基因植物表达载体的构建 被引量:4
3
作者 徐春波 王勇 +1 位作者 李兴酉 赵海霞 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期88-92,共5页
用SalI和EcoRI酶将CBF4基因切下,连接到Bluescript M13(SK)上,构建成中间载体SK-CBF4,再用BamHI和KpnI双酶切SK-CBF4和HpBPC26-CBF4,用T4DNA连接酶将这2个片段连到一起,构建成植物表达载体HpBPC-CBF4。PCR和酶切鉴定结果表明植物表达载... 用SalI和EcoRI酶将CBF4基因切下,连接到Bluescript M13(SK)上,构建成中间载体SK-CBF4,再用BamHI和KpnI双酶切SK-CBF4和HpBPC26-CBF4,用T4DNA连接酶将这2个片段连到一起,构建成植物表达载体HpBPC-CBF4。PCR和酶切鉴定结果表明植物表达载体HpBPC26-CBF4构建正确,可用于今后单子叶植物遗传转化。 展开更多
关键词 cbf4 表达载体 构建
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拟南芥转录因子CBF1和CBF4基因的克隆与序列分析
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作者 徐春波 王勇 +2 位作者 杨志如 赵海霞 李兴酉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期85-89,共5页
利用聚合酶链式反应技术(PCR)从拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株中扩增出CBF1和CBF4基因,并将其连接到pGEM-Tvector载体上。PCR和酶切鉴定后进行基因测序,结果表明所克隆的CBF1和CBF4基因序列与GenBank中基因序列同源性分别可达99.84%... 利用聚合酶链式反应技术(PCR)从拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株中扩增出CBF1和CBF4基因,并将其连接到pGEM-Tvector载体上。PCR和酶切鉴定后进行基因测序,结果表明所克隆的CBF1和CBF4基因序列与GenBank中基因序列同源性分别可达99.84%和99.41%,说明这两个片段确为拟南芥CBF1和CBF4基因。 展开更多
关键词 cbf1 cbf4 拟南芥 PCR 克隆
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Isolation and expression analysis of CBF4 from <i>Vitis amurensis</i>associated with stress 被引量:2
5
作者 Chang Dong Meng Zhang +6 位作者 Zhiying Yu Junpeng Ren Yang Qin Bailin Wang Lizhen Xiao Zhen Zhang Jianmin Tao 《Agricultural Sciences》 2013年第5期224-229,共6页
The C-repeat Binding Factor/Dehydration Responsive Element Binding factor (CBF/DREB) responsive pathway is involved in plant response to abiotic stress. In this study, we report the isolation of VaCBF4 (a complete cDN... The C-repeat Binding Factor/Dehydration Responsive Element Binding factor (CBF/DREB) responsive pathway is involved in plant response to abiotic stress. In this study, we report the isolation of VaCBF4 (a complete cDNA) and its promoter from Vitis amurensis through rapid amplification of cDNA ends and genome walking techniques, respectively. The CBF4 transcript accumulation of V. amurensis increased under cold, salinity, and abscisic acid (ABA) and salicylic acid (SA) treatments, whereas that of Vitis vinifera showed a different change. The transcript levels of VaCBF4 inthe roots, stems, leaves, and petioles under cold, salinity, and ABA and SA treatments were up-regulated in a timedependent manner. The presence of the cis-elements MBC, ABRE, and as-2-box in the VaCBF4 promoter further confirmed that this promoter is a component of the CBF transduction pathway, which is involved in plant response to multistress. 展开更多
关键词 VITIS amurensis cbf4 STRESS TRANSCRIPT Accumulation
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转录因子CBF4基因的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:2
6
作者 徐春波 王勇 +1 位作者 赵海霞 李兴酉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第4期53-56,共4页
为应用转录因子CBF4基因对苜蓿进行抗逆性改良,试验利用聚合酶链式反应技术(PCR)从拟南芥(Arabi-dopsis thaliana)植株中克隆了CBF4基因,与GenBank中基因序列同源性可达99.41%,并将该基因连接到植物表达载体PBI121中,成功构建了适于苜... 为应用转录因子CBF4基因对苜蓿进行抗逆性改良,试验利用聚合酶链式反应技术(PCR)从拟南芥(Arabi-dopsis thaliana)植株中克隆了CBF4基因,与GenBank中基因序列同源性可达99.41%,并将该基因连接到植物表达载体PBI121中,成功构建了适于苜蓿农杆菌遗传转化的植物表达载体,为下一步利用CBF4基因快速培育耐逆性强的苜蓿新品种奠定了基础。 展开更多
关键词 cbf4 拟南芥 克隆 表达载体构建
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转录因子CBF4诱导型启动子的克隆及功能分析 被引量:11
7
作者 霍秀文 米福贵 +1 位作者 云锦凤 魏建华 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第3期363-368,共6页
根据已有文献及公开的拟南芥基因组序列,利用PCR方法从拟南芥(Arabidopsisthaliana)基因组DNA中扩增得到了转录因子CBF4上游的DNA片断,对其进行序列分析表明与GenBank序列高度同源,同时对其进行初步的功能分析。采用生物信息学方法对这... 根据已有文献及公开的拟南芥基因组序列,利用PCR方法从拟南芥(Arabidopsisthaliana)基因组DNA中扩增得到了转录因子CBF4上游的DNA片断,对其进行序列分析表明与GenBank序列高度同源,同时对其进行初步的功能分析。采用生物信息学方法对这一序列分析的结果显示这一片段具有启动子的特殊结构域;与GUS基因融合构建双元表达载体,转化烟草的组织特异性表达检测可见明显的GUS活性,初步表明所获片断为CBF4基因的诱导型启动子。 展开更多
关键词 诱导型启动子 功能分析 转录因子 GenBank 组织特异性表达 克隆 基因组DNA 双元表达载体 基因组序列 PCR方法 DNA片断 生物信息学 GUS活性 序列分析 基因融合 拟南芥 分析表 结构域
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外源脱水应答转录因子CBF4基因转化玉米的获得 被引量:13
8
作者 杨东歌 杨凤萍 +2 位作者 陈绪清 张立全 张晓东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1759-1763,共5页
用PCR方法克隆了拟南芥脱水应答转录因子CBF4基因,以逆境诱导表达基因rd29A的启动子为驱动,构建了逆境诱导表达载体pBAC146。用基因枪转化法转化玉米优良自交系的幼胚和胚性愈伤组织,轰击后的愈伤组织经过筛选、分化和植株再生过程,共获... 用PCR方法克隆了拟南芥脱水应答转录因子CBF4基因,以逆境诱导表达基因rd29A的启动子为驱动,构建了逆境诱导表达载体pBAC146。用基因枪转化法转化玉米优良自交系的幼胚和胚性愈伤组织,轰击后的愈伤组织经过筛选、分化和植株再生过程,共获得36棵转基因植株。经PCR、PCR-Southern和Southern检测表明,外源目的基因已成功整合到部分转基因玉米株系的基因组中。人工干旱处理下,抗旱生理指标测定显示,一个转基因株系的脯氨酸含量和叶绿素含量比野生型对照提高一倍,间接表明转基因株系的抗旱能力在某种程度上有所提高。 展开更多
关键词 玉米 转基因 cbf4基因 抗旱
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拟南芥抗旱转录因子CBF4基因区域的核苷酸多样性及其分子进化分析 被引量:7
9
作者 郝岗平 吴忠义 +4 位作者 曹鸣庆 Georges Pelletier Dominique Brunel 黄丛林 杨清 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1415-1425,共11页
以生长于不同气候条件下的 17个拟南芥核心生态型为材料 ,分析了它们的抗旱转录因子CBF4基因区域的序列多态性。结果表明 :拟南芥CBF4基因区域具有高密度的单核苷酸多态性 (SNP)和插入缺失 (Indel) ,多态性频率为每 35 8bp一个SNP ,每 ... 以生长于不同气候条件下的 17个拟南芥核心生态型为材料 ,分析了它们的抗旱转录因子CBF4基因区域的序列多态性。结果表明 :拟南芥CBF4基因区域具有高密度的单核苷酸多态性 (SNP)和插入缺失 (Indel) ,多态性频率为每 35 8bp一个SNP ,每 14 3bp一个Indel,基因非编码区的多态性是编码区的 4倍 ;在编码区 ,SNP的频率为每 96 4bp一个SNP ,其中发现 2 5av、2 0 3av和 2 4 4av 3个生态型CBF4基因区域 10 34位 (以GenBank登录号AB0 15 4 78序列第 196 96位的核苷酸为 1)碱基变化 :G T ,引起第 2 0 5位氨基酸变化 :gly val。核苷酸多样性统计分析显示 ,该基因内部大范围内存在连锁不平衡 (linkagedisequilibrium ,LD) ,5′端非编码区有一个重组。与拟南芥等的研究结果类似 ,选择压力对不同的区域作用不同。 3′端非编码区核苷酸多样性程度最高 ,是平衡性选择的结果 ,编码区核苷酸变化符合中性突变假说 ,而 展开更多
关键词 拟南芥 cbf4基因 核苷酸多样性
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两种启动子调控下的CBF4基因植物表达载体的构建 被引量:2
10
作者 徐春波 王勇 +1 位作者 李兴酉 赵海霞 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期1-5,共5页
目的:构建由组成型启动子CaMV35s和诱导型启动子CBF4P调控的转录因子CBF4基因的两个植物表达载体。方法:用EcoRⅠ酶将CBF4和CBF4P两个基因切下,连接到BluescriptM13(SK)上,分别构建成两个中间载体SK-CBF4和SK-CBF4P,再利用SK上的多克隆... 目的:构建由组成型启动子CaMV35s和诱导型启动子CBF4P调控的转录因子CBF4基因的两个植物表达载体。方法:用EcoRⅠ酶将CBF4和CBF4P两个基因切下,连接到BluescriptM13(SK)上,分别构建成两个中间载体SK-CBF4和SK-CBF4P,再利用SK上的多克隆位点与植物表达载体p3301上相同的酶切位点,将CBF4和CBF4P连接到植物表达载体p3301上,分别构建了由组成型启动子CaMV35s和诱导型启动子CBF4P调控的转录因子CBF4基因的两个植物表达载体p3301-CBF4和p3301-CBF4P。结果:用PCR扩增重组质粒p3301-CBF4和p3301-CBF4P,分别得到了670bp和1200bp的特异性片段。酶切检测也分别得到了与预期结果一致的DNA片段。结论:所构建的两个表达载体均正确,可用于植物遗传改良和两种启动子的启动效率的研究。 展开更多
关键词 CaMV35s启动子 cbf4P启动子 cbf4基因 表达载体
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共转化CBF4和bar基因蒙农杂种冰草植株的分子检测 被引量:3
11
作者 王桂花 米福贵 +3 位作者 刘娟 霍秀文 杨宏雁 董淑君 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期61-65,共5页
在获得转CBF4和bar基因蒙农杂种冰草植株的基础上,应用PCR和Sou thern杂交技术检测外源基因在转基因蒙农杂种冰草植株中的整合及拷贝数.确定外源基因CBF4和bar基因已经整合到冰草基因组中,并且是以多拷贝的整合方式插入受体细胞的染色体... 在获得转CBF4和bar基因蒙农杂种冰草植株的基础上,应用PCR和Sou thern杂交技术检测外源基因在转基因蒙农杂种冰草植株中的整合及拷贝数.确定外源基因CBF4和bar基因已经整合到冰草基因组中,并且是以多拷贝的整合方式插入受体细胞的染色体上.说明外源基因对蒙农杂种冰草成功地进行了转化,可以作为后期转基因冰草植株研究及培育转基因冰草新品种的材料. 展开更多
关键词 cbf4基因 BAR基因 转基因蒙农杂种冰草植株 PCR SOUTHERN杂交
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CBF4基因植物表达双元载体的构建 被引量:3
12
作者 沙丽娜 郭兆奎 +3 位作者 万秀清 颜培强 刘丹 刘磊 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期6-9,共4页
目的:对拟南芥CBF4基因序列进行克隆。方法:用限制性内切酶将CBF4基因从pMD18-T CBF4载体上切下,定向连接到含超强启动子的pC2301-35S-OCS表达载体上,成功构建了CBF4基因植物表达载体pC2301-35S-OCS-CBF4。利用冻融法将此表达载体导入... 目的:对拟南芥CBF4基因序列进行克隆。方法:用限制性内切酶将CBF4基因从pMD18-T CBF4载体上切下,定向连接到含超强启动子的pC2301-35S-OCS表达载体上,成功构建了CBF4基因植物表达载体pC2301-35S-OCS-CBF4。利用冻融法将此表达载体导入只含辅助质粒的根癌农杆菌中,提取转化质粒,经PCR扩增和酶切验证鉴定表明。结果:CBF4基因植物表达双元载体构建成功。结论:转CBF4基因烟草的抗寒性比野生型烟草要高。 展开更多
关键词 cbf4基因 植物表达载体 抗寒性
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基因枪法获得转CBF4基因蒙农杂种冰草的研究 被引量:3
13
作者 徐春波 王勇 +2 位作者 赵来喜 赵海霞 米福贵 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期24-28,共5页
为快速培育出优良的冰草品种,以蒙农杂种冰草(Agropyron cristatum×A.desertorumcv.Mengnong)幼穗为材料,以拟南芥外源脱水应答转录因子CBF4基因为目的基因,利用基因枪轰击蒙农杂种冰草幼穗诱导愈伤组织,经筛选后获得了抗性转化植... 为快速培育出优良的冰草品种,以蒙农杂种冰草(Agropyron cristatum×A.desertorumcv.Mengnong)幼穗为材料,以拟南芥外源脱水应答转录因子CBF4基因为目的基因,利用基因枪轰击蒙农杂种冰草幼穗诱导愈伤组织,经筛选后获得了抗性转化植株,进一步经PCR和RT-PCR检测得到了670bp左右的电泳条带,表明CBF4基因已在蒙农杂种冰草中得到表达。 展开更多
关键词 蒙农杂种冰草 cbf4基因 遗传转化 抗旱性
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葡萄CBF4基因生物信息学及其对低温和硅酸钾响应分析 被引量:1
14
作者 张红梅 王旺田 +3 位作者 张芮 杨科 王宝强 王翠玲 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1433-1440,共8页
为探究葡萄CBF4基因的结构和表达特征,该研究以葡萄为材料,对葡萄CBF4基因进行生物信息学及低温和硅酸钾响应分析。结果表明:(1)CBF4蛋白定位在细胞核,有5个磷酸化位点和14个糖基化位点,无信号肽,是一个亲水的、脂溶性较差的膜外蛋白。... 为探究葡萄CBF4基因的结构和表达特征,该研究以葡萄为材料,对葡萄CBF4基因进行生物信息学及低温和硅酸钾响应分析。结果表明:(1)CBF4蛋白定位在细胞核,有5个磷酸化位点和14个糖基化位点,无信号肽,是一个亲水的、脂溶性较差的膜外蛋白。二级结构以无规则卷曲为主,比例为56.88%。该蛋白包含一个AP2/EREBP结构域。(2)CBF4蛋白的多序列和系统进化分析表明酿酒葡萄与美洲葡萄的同源性最高、亲缘关系最近。(3)荧光定量PCR分析显示,低温胁迫后CBF4基因在葡萄叶片中表达水平上调,说明CBF4基因可能参与了葡萄叶片低温胁迫的响应。低温条件下,施加硅酸钾CBF4基因表达具有差异性,说明该基因在不同的葡萄组织中对硅酸钾的响应机制可能不同。以上结果为进一步研究葡萄CBF4基因的功能和机理奠定了基础。 展开更多
关键词 葡萄 cbf4基因 低温胁迫 生物信息学 QRT-PCR
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拟南芥CBF4基因启动子缺失载体的构建及转化 被引量:1
15
作者 孙靖然 王丕武 马建 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期552-557,共6页
利用PCR方法,从拟南芥基因组中克隆脱水响应因子CBF4基因启动子全序列4A(1 260 bp)及两段不同长度5′缺失片段4B(565 bp)和4C(470 bp),通过亚克隆构建含有该系列启动子的可溶性绿色荧光蛋白基因(smGFP)的植物表达载体p1301-4A-GFP、p130... 利用PCR方法,从拟南芥基因组中克隆脱水响应因子CBF4基因启动子全序列4A(1 260 bp)及两段不同长度5′缺失片段4B(565 bp)和4C(470 bp),通过亚克隆构建含有该系列启动子的可溶性绿色荧光蛋白基因(smGFP)的植物表达载体p1301-4A-GFP、p1301-4B-GFP、p1301-4C-GFP,用农杆菌介导烟草叶盘法分别导入烟草。20%PEG6000模拟干旱诱导转基因植株,检测转基因烟草转入不同启动子片段烟草植株诱导前后叶片GFP的表达强度。在倒置荧光显微镜和384 nm紫外灯照射下检测到的全片段4A与5′缺失片段4B和4C转化植株均显荧光,且随启动子长度的变短,荧光强度逐渐增强。基本确定了启动子的核心区域为4C(470 bp)。 展开更多
关键词 拟南芥 干旱诱导启动子 cbf4基因 5’缺失 绿色荧光蛋白
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过表达AtCBF4、BoWS大豆对干旱胁迫的响应 被引量:2
16
作者 魏崃 王兴宇 +4 位作者 唐晓飞 王伟威 薛永国 于志远 刘丽君 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期424-430,共7页
本研究利用农杆菌介导法获得的过表达At CBF4基因、过表达Bo WS基因大豆株系的后代,研究其在干旱胁迫下转基因大豆生理特性、光合性状以及产量性状的表现,以揭示其转基因大豆耐旱性特点。研究结果表明:过表达CBF4基因株系在丙二醛、气... 本研究利用农杆菌介导法获得的过表达At CBF4基因、过表达Bo WS基因大豆株系的后代,研究其在干旱胁迫下转基因大豆生理特性、光合性状以及产量性状的表现,以揭示其转基因大豆耐旱性特点。研究结果表明:过表达CBF4基因株系在丙二醛、气孔导度、细胞CO2浓度、蒸腾速率,单株荚数、单株粒数上表现优于过表达Bo WS基因大豆株系;过表达Bo WS基因大豆株系在脯氨酸、可溶性糖、净光合速率、瞬时水分利用率、株高、节数、百粒重、单株产量以及结荚期单株荚数和单株粒数上耐旱性更强。研究结果表明通过灰色关联分析以及聚类分析表明过表达Bo WS基因大豆株系比过表达At CBF4基因株系具有更强的耐旱性。 展开更多
关键词 大豆 Atcbf4基因 BoWS基因 过表达 抗旱性
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