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根癌农杆菌介导的水稻高效转化系统的建立 被引量：179
1
作者 刘巧泉 张景六 +2 位作者 王宗阳 洪孟民 顾铭洪 《植物生理学报（0257-4829)》 CSCD 1998年第3期259-271,共13页
比较了影响根癌农杆菌转化水稻的各种因素后，建立了农杆菌介导的水稻高效转基因实验体系。按该体系，水稻品种中花11号预培养4d的幼胚经农杆菌EHA105／pCAMBIA1301感染后，具有GUS基因瞬间表达的幼胚比例在50％以上，最高可达90％；按... 比较了影响根癌农杆菌转化水稻的各种因素后，建立了农杆菌介导的水稻高效转基因实验体系。按该体系，水稻品种中花11号预培养4d的幼胚经农杆菌EHA105／pCAMBIA1301感染后，具有GUS基因瞬间表达的幼胚比例在50％以上，最高可达90％；按产生潮霉素抗性愈伤和转基因植株的比例计算，转化率分别达到87．6％和64．6％。转基因植株总DNA的Southern杂交分析表明T－DNA上的外源基因已整合进了水稻基因组，且在大多数转基因植株中表现为单拷贝插入；遗传分析证明T1代的表型分离符合孟德尔法则。此转化系统的建立为高效地将有用的外源DNA导入水稻植株奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻 根癌农杆菌 基因转化 转基因植株 幼胚
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根癌农杆菌对甘蓝型油菜的转化及转基因植株的再生 被引量：94
2
作者 程振东 卫志明 许智宏 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1994年第9期657-663,共7页
用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ）共培养法把外源基因导入甘蓝型油菜（Ｂｒａｓｓｉ－ｃａ ｎａｐｕｓＬ．）主要栽培品种“云北２ 号”，获得转基因植株。所用外植体为带有１—２ ｍ ｍ 子叶柄的... 用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ）共培养法把外源基因导入甘蓝型油菜（Ｂｒａｓｓｉ－ｃａ ｎａｐｕｓＬ．）主要栽培品种“云北２ 号”，获得转基因植株。所用外植体为带有１—２ ｍ ｍ 子叶柄的完整子叶，根癌农杆菌为Ａ２０８ＳＥ（ｐＴｉＴ３７－ＳＥ， ｐＲＯＡ９３）。Ｔｉ质粒ｐＲＯＡ９３ 带有ＮＰＴⅡ及ＧＵＳ嵌合基因。共培养２ 天后转到附加２５ ｍ ｇ／Ｌ卡那霉素的分化培养基（ＭＳ＋ ４．５ ｍ ｇ／ＬＢＡＰ）上。ＡｇＮＯ３ 和羧苄青霉素促进芽的分化，头孢霉素则有抑制作用。最高转化频率为２７％ 。把分化出的茎芽切下，插入含有２５ ｍ ｇ／Ｌ卡那霉素的生根培养基中。羧苄青霉素不利于根的形成。把完整抗性植株移入盛土壤的盆中，生长状况良好。测定β－葡糖苷酸酶活性，８４％ 明显高于对照。以ＮＰＴⅡ基因作探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。 展开更多
关键词 油菜 根癌农杆菌 转基因植株
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根癌土壤杆菌介导的水稻高效转化和转基因植株的高频再生 被引量：47
3
作者 黄健秋 卫志明 +2 位作者 安海龙 徐淑平 章冰 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第11期1172-1178,共7页
利用根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)介导的转化方法对 4个粳稻 (OryzasativaL .ssp .japonica)品种和 2个籼稻 (O .sativassp .indica)品种进行了转化。在对影响根癌土壤杆菌转化水稻效率的多种因素进... 利用根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)介导的转化方法对 4个粳稻 (OryzasativaL .ssp .japonica)品种和 2个籼稻 (O .sativassp .indica)品种进行了转化。在对影响根癌土壤杆菌转化水稻效率的多种因素进行比较研究后 ,建立了根癌土壤杆菌介导的水稻高效转化和再生系统。将水稻成熟胚和未成熟胚来源的愈伤组织用根癌土壤杆菌EHA10 1/pGIH感染后 ,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株。其中抗性愈伤组织产生频率最高达 5 5 .1% (籼稻 )和 85 .2 % (粳稻 ) ,转化植株产生频率最高达 37.8% (籼稻 )和 6 9.0 % (粳稻 )。GUS染色、转基因植株总DNA的PCR和Southern杂交检测等结果表明 ,T_DNA上的外源基因已整合进了转基因植物基因组中。对转基因T1代水稻植株的遗传分析结果证明外源基因能稳定遗传给后代 ,且大多数株系的分离比符合 3∶1。该转化系统的建立为将外源有用基因导入水稻并高效稳定地表达奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻 根癌土壤杆菌 遗传转化 转基因植株
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毛白杨遗传转化系统优化的研究 被引量：45
4
作者 郝贵霞 朱祯 朱之悌 《Acta Botanica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1999年第9期936-940,共5页
研究了影响根癌土壤杆菌（ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ （Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ） Ｃｏｎｎ） 介导的毛白杨（ ＰｏｐｕｌｕｓｔｏｍｅｎｔｏｓａＣａｒｒ．） 遗传转化的若干因素，建立了毛白杨... 研究了影响根癌土壤杆菌（ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ （Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ） Ｃｏｎｎ） 介导的毛白杨（ ＰｏｐｕｌｕｓｔｏｍｅｎｔｏｓａＣａｒｒ．） 遗传转化的若干因素，建立了毛白杨简单、高效的遗传转化系统，获得了大量正常转基因植株。在共培养培养基中附加２００ μｍｏｌ／Ｌ的乙酰丁香酮的同时，降低ｐＨ 值可以显著提高毛白杨转化频率；加入乙酰丁香酮可以使３个菌株的转化频率分别由２ ％ 、１ ．４ ％ 和０ 提高到５ ％ 、１１ ．４ ％ 和１ ．１ ％ 。同时发现共培养培养基中去除ＭＳ微量成分中的ＣｏＣｌ２·６Ｈ２Ｏ，转化频率也有明显提高。 展开更多
关键词 毛白杨 根癌土壤杆菌 遗传转化
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农杆菌介导的小麦遗传转化几个影响因素的研究 被引量：58
5
作者 王永勤 肖兴国 张爱民 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期260-265,T001,共7页
采用携带gus和 (或 )bar基因双元表达载体 (p330 1,pBTAaB)的 3个根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)菌株(AGL 1,EHA10 5和LBA4 4 0 4 )对普通小麦 (TriticumaestivumL .)冬性栽培品种农大 170和农大 14 6的幼胚及幼胚愈伤组织进行... 采用携带gus和 (或 )bar基因双元表达载体 (p330 1,pBTAaB)的 3个根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)菌株(AGL 1,EHA10 5和LBA4 4 0 4 )对普通小麦 (TriticumaestivumL .)冬性栽培品种农大 170和农大 14 6的幼胚及幼胚愈伤组织进行了遗传转化。结果表明 ,菌液浓度OD60 0 1.0和侵染时间 1h对外植体的生存和转化最为有利 ;侵染前对外植体进行高渗处理较明显地提高了抗性愈伤获得率 ;乙酰丁香酮 (AB)对小麦转化的作用随菌株和外植体的不同而异 ;菌株 /质粒组合、受体基因型及外植体的类型、年龄和生理状态对转化效率有很大的影响。条件优化后 ,得到大量具有PPT抗性的愈伤和一些抗性植株。抗性愈伤的GUS染色阳性率在 5 0 %～ 6 0 %之间 ,所检测的抗性苗呈GUS阳性。对 6株抗性苗的PCR和Southern检测初步证明 ,外源基因已经整合到其中 3株的基因组中。 展开更多
关键词 小麦 遗传转化 根癌农杆菌 转基因植株 影响因素 介导
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转几丁质酶和葡聚糖酶基因棉花的获得及其对黄萎病的抗性 被引量：52
6
作者 吴家和 张献龙 +3 位作者 罗晓丽 聂以春 田颖川 陈正华 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期183-188,共6页
通过根癌杆菌介导法 ,将维管束特异启动子 (竹节花黄斑病毒启动子CoYMV)启动的几丁质酶和CaMV3 5S启动的 β 1,3 葡聚糖酶嵌合双价基因 ,导入陆地棉品种冀合 3 2 1和中棉所 3 5。利用卡那霉素涂抹法对转基因株的卡那霉素抗性进行初步鉴... 通过根癌杆菌介导法 ,将维管束特异启动子 (竹节花黄斑病毒启动子CoYMV)启动的几丁质酶和CaMV3 5S启动的 β 1,3 葡聚糖酶嵌合双价基因 ,导入陆地棉品种冀合 3 2 1和中棉所 3 5。利用卡那霉素涂抹法对转基因株的卡那霉素抗性进行初步鉴定 ,再经PCR和Southern杂交确证 ,结果显示双价抗病基因分别以 1～ 2个拷贝整合到棉花基因组内。对转基因株系T3 幼苗进行无底塑钵菌液浇根法鉴定和大田病圃鉴定 ,结果显示 :7个转化株系均表现不同程度的抗或耐黄萎病性 ,苗期鉴定结果和大田病圃调查结果基本一致 ;其中D9910、D9915和D9919等 3个转基因纯合系的大田病情指数分别为 6 5、9 4和 9 5,均达到高抗水平。对以上 3个高抗黄萎病的纯合系进行遗传分析 ,结果显示这 3个抗病纯合系的卡那霉素抗性符合一对显性基因分离规律 ,结合分子杂交验证结果 ,可以认为这3个转基因株均含有一个拷贝的双抗病基因。 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 维管束特异启动子 丁质酶 Β-1 3-葡聚糖酶 根癌杆菌
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根癌农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转入苹果主栽品种 被引量：42
7
作者 师校欣 王斌 +2 位作者 杜国强 翁曼丽 高仪 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期282-284,共3页
研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动子启动的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (CpTI)转入富士、乔纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中 ,经卡那霉素抗性、PCR、点杂交、Southern杂交检测证... 研究建立起一套简单、高效的苹果遗传转化系统。利用根癌农杆菌介导的叶圆片转化法将高效启动子启动的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 (CpTI)转入富士、乔纳金、王林、嘎拉等苹果主栽品种中 ,经卡那霉素抗性、PCR、点杂交、Southern杂交检测证明了 4个品种均获得转化再生植株 。 展开更多
关键词 苹果 抗中性 遗传转化 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因
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农杆菌介导单子叶植物基因转化研究进展 被引量：18
8
作者 贺晨霞 夏光敏 《植物学通报》 CSCD 1999年第5期567-573,共7页
农杆菌介导基因转化系统是双子叶植物基因转化的普通而有效的手段， 其优点倍受重视，近年来又广泛用于曾被认为不在农杆菌宿主范围之内的单子叶植物的基因转化研究，并在很多重要粮食作物上获得成功，例如水稻、玉米、大麦、小麦等。... 农杆菌介导基因转化系统是双子叶植物基因转化的普通而有效的手段， 其优点倍受重视，近年来又广泛用于曾被认为不在农杆菌宿主范围之内的单子叶植物的基因转化研究，并在很多重要粮食作物上获得成功，例如水稻、玉米、大麦、小麦等。本文就农杆菌转化的优点。 展开更多
关键词 农杆菌 单子叶植物 基因转化 转基因植物
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双价抗虫基因陆地棉转化植株的获得 被引量：38
9
作者 王伟 朱祯 +4 位作者 高越峰 石春林 陈宛新 郭仲琛 李向辉 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第4期384-388,共5页
利用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（ＳｍｉｔｈｅｔＴｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）介导法将含有豌豆外源凝集素（ｐｅａｌｅｃｔｉｎ，ＰＬｅｃ）基因和大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂（ｓｏｙｂ... 利用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（ＳｍｉｔｈｅｔＴｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）介导法将含有豌豆外源凝集素（ｐｅａｌｅｃｔｉｎ，ＰＬｅｃ）基因和大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂（ｓｏｙｂｅａｎＫｕｎｉｔｚｔｒｙｐｓｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＳＫＴＩ）基因的双价抗虫基因植物表达载体ｐＢｉｎＬＫ用于陆地棉（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）栽培品种“新陆早１号”、“新陆中２号”、“冀合３２１”和“辽９”的转化。棉花无菌苗下胚轴经过与根癌农杆菌共培养、卡那霉素抗性愈伤组织的筛选、体细胞胚状体的诱导和植株再生等阶段成功地获得了双价抗虫基因陆地棉转化植株。ＮＰＴⅡ的ＥＬＩＳＡ检测、ＰＣＲ鉴定和ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ检测证实，两个外源抗虫基因同时存在于再生植株基因组内。抗虫测试结果表明。 展开更多
关键词 陆地棉 转化 根癌农杆菌 抗虫基因
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农杆菌介导将Bt杀虫蛋白基因导入优良玉米自交系的研究 被引量：43
10
作者 张艳贞 王罡 +4 位作者 胡汉桥 魏松红 季静 王军军 李昌 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期35-39,共5页
以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系 34 0、4112为材料 ,用带有质粒pGBIL0 4(Pactin -Bt-Tnos)的根癌农杆菌LBA44 0 4转化其幼胚及其初始愈伤组织 ,共培养 3天后 ,在含PPT的培养基上连续筛选培养 3代 ,然后分化获得再生植株。PCR检... 以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系 34 0、4112为材料 ,用带有质粒pGBIL0 4(Pactin -Bt-Tnos)的根癌农杆菌LBA44 0 4转化其幼胚及其初始愈伤组织 ,共培养 3天后 ,在含PPT的培养基上连续筛选培养 3代 ,然后分化获得再生植株。PCR检测证明目的基因已整合到再生植株的基因组中。实验结果表明幼胚预培养后形成的新鲜的初始愈伤组织是比较适宜的转化受体 ,结果还发现将共培养温度降到 2 2℃可以提高农杆菌介导的玉米遗传转化的筛选频率。 展开更多
关键词 玉米 自交系 转基因 农杆菌 预培养 共培养温度 PCR Bt杀虫蛋白基因
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大豆遗传转化研究进展 被引量：57
11
作者 刘海坤 卫志明 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期126-134,共9页
近年来大豆的遗传转化取得了较大的进展。文章结合作者实验室的工作介绍了几种主要的大豆遗传转化系统及其操作方法,并探讨了影响农杆菌介导大豆遗传转化的因素。
关键词 大豆 根癌农杆菌 遗传转化
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苹果主栽品种高效遗传转化系统的建立及其影响因子的研究 被引量：27
12
作者 张志宏 方宏筠 +3 位作者 景士西 王关林 吴禄平 朱祯 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1998年第2期160-165,共6页
研究影响农杆菌介导的苹果主栽品种遗传转化的若干因子效应，建立起新乔纳金苹果简单、高效的遗传转化系统。外源基因向新乔纳金苹果细胞转移的效率明显高于皇家嗄拉和富士苹果。菌株ＥＨＡ１０５介导基因转移的能力比菌株ＬＢＡ４４０... 研究影响农杆菌介导的苹果主栽品种遗传转化的若干因子效应，建立起新乔纳金苹果简单、高效的遗传转化系统。外源基因向新乔纳金苹果细胞转移的效率明显高于皇家嗄拉和富士苹果。菌株ＥＨＡ１０５介导基因转移的能力比菌株ＬＢＡ４４０４明显高。用乙酰丁香酮、磷酸饥饿、低ｐＨ值等ｖｉｒ基因诱导因子处理菌株ＥＨＡ１０５的细胞，未能提高转化效率。叶片在菌液中的浸泡时间不仅影响基因转移效率，而且影响头孢霉素对外植体上农杆菌生长的抑制效果。共培养时，叶片远轴面与培养基接触比近轴面与培养基接触的转化效率高。 展开更多
关键词 苹果 根癌农杆菌 基因表达 高效遗传转化
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ACC合成酶基因及其反义基因对西瓜的遗传转化 被引量：39
13
作者 王春霞 简志英 +3 位作者 刘愚 邹琦 白永延 毛慧珠 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1997年第5期445-450,共6页
以2日龄西瓜(Citrullus lanatus(Thunb.)Mansfeld)无菌苗子叶为外植体,通过与根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)进行叶盘共培养建立了西瓜的遗传转化系统。所用根癌农杆菌中含有改建后分别携带嵌合NPTⅡ基因和番茄的ACC合成酶基因... 以2日龄西瓜(Citrullus lanatus(Thunb.)Mansfeld)无菌苗子叶为外植体,通过与根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)进行叶盘共培养建立了西瓜的遗传转化系统。所用根癌农杆菌中含有改建后分别携带嵌合NPTⅡ基因和番茄的ACC合成酶基因及其反义基因的质粒。外植体在MSA培养基(MS盐类、B_5维生素、1.0mg/L BA、0.2mg/L IAA)上预培养3～4d后,与根癌农杆菌共培养4d,随后转移外植体至附加100mg/L卡那霉素、300mg/L头孢菌素的MSA培养基上筛选转化芽。将带芽外植体移入含有100mg/L卡那霉素、300mg/L头孢菌素的伸长培养基(MS+0.2mg/L KT)上进行芽伸长,切取2～3cm高的伸长芽移入生根培养基(1/2MS+0.1mg/L NAA)生根。Southern blot结果证明获得转基因植株,乙烯释放指标表明转入的正义和反义ACC合成酶基因得到不同程度的表达。 展开更多
关键词 西瓜 转基因西瓜 ACC合成酶基因 反义基因
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Transgeni根癌农杆菌介导的小麦转基因植株再生(英文) 被引量：29
14
作者 夏光敏 李忠谊 +2 位作者 贺晨霞 陈惠民 RichardBrettell 《植物生理学报（0257-4829)》 CSCD 1999年第1期22-28,共7页
根癌农杆菌菌株Ａｇｌ Ⅰ的Ｔｉ 质粒ｐＵＮＮ－２ 带有Ｕｂｉ１ 启动子驱动的ｎｐｔ Ⅱ基因。７ 种基因型小麦幼胚或胚性愈伤组织用于农杆菌介导的转化实验。经过不同浓度巴龙霉素的筛选，３ 种基因型小麦产生抗性愈伤组织并再生植株... 根癌农杆菌菌株Ａｇｌ Ⅰ的Ｔｉ 质粒ｐＵＮＮ－２ 带有Ｕｂｉ１ 启动子驱动的ｎｐｔ Ⅱ基因。７ 种基因型小麦幼胚或胚性愈伤组织用于农杆菌介导的转化实验。经过不同浓度巴龙霉素的筛选，３ 种基因型小麦产生抗性愈伤组织并再生植株。再生植株经ＰＣＲ 和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交鉴定为转基因植株，转化频率（ 再生转基因植株的小麦愈伤组织数／ 用于转化实验的愈伤组织数） 为３．７％ ～５ ．９％ 。小麦基因型及转化材料的起始生理状态是影响ＴＤＮＡ转移的重要因素。 展开更多
关键词 小麦 根癌农杆菌 介导法 nptⅡ基因 转基因植株
全文增补中
根癌农杆菌介导半夏凝集素基因pBIXPTA对百合的转化 被引量：43
15
作者 唐东芹 钱虹妹 +1 位作者 唐克轩 黄丹枫 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2004年第2期135-137,167,共4页
以百合花丝诱导的胚性愈伤组织为基因转化的受体材料,利用根癌农杆菌介导法将pBIXPTA基因导入百合。组织化学法检测转化后共培养3d的组织块,GUS瞬时表达率可达60%,选择培养20d的组织中约有1%检测到GUS基因的稳定表达。菌液浓度OD600值为... 以百合花丝诱导的胚性愈伤组织为基因转化的受体材料,利用根癌农杆菌介导法将pBIXPTA基因导入百合。组织化学法检测转化后共培养3d的组织块,GUS瞬时表达率可达60%,选择培养20d的组织中约有1%检测到GUS基因的稳定表达。菌液浓度OD600值为0.8左右时侵染效果较好,同时于附加100μmol/L的AS可提高转化效率。PCR分子检测转基因植株部分呈现阳性,初步证明外源基因已整合到百合基因组中。 展开更多
关键词 根癌农杆菌介导 半夏凝集素基因 pBIXPTA 百合 基因转化 抗虫性
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甘蔗根癌农杆菌介导转化海藻糖合酶基因获得抗渗透胁迫能力增强植株 被引量：42
16
作者 王自章 张树珍 +1 位作者 杨本鹏 李杨瑞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-146,共7页
由双拷贝CaMV35S启动子驱动担子菌灰树花 (Grifolafrondosa)的海藻糖合酶基因 (TSase)构建植物表达载体 pBBBT ,通过三亲交配法将 pBBBT导入根癌农杆菌EHA10 5菌株 ,经根癌农杆菌介导转化甘蔗 (Saccha rumhybrid)栽培品种 ,以增强甘蔗... 由双拷贝CaMV35S启动子驱动担子菌灰树花 (Grifolafrondosa)的海藻糖合酶基因 (TSase)构建植物表达载体 pBBBT ,通过三亲交配法将 pBBBT导入根癌农杆菌EHA10 5菌株 ,经根癌农杆菌介导转化甘蔗 (Saccha rumhybrid)栽培品种 ,以增强甘蔗的抗旱能力。结果表明 ,甘蔗胚性愈伤组织对EHA10 5菌株敏感 ,甘蔗外植体开始大量形成胚性愈伤组织时是感染的适宜时期 ,用膦丝菌素 (PPT)筛选 ,抗性植株发生频率平均为 4 .5 %。经PCR及dot Southern检测证明 ,TSase已经整合到甘蔗基因组中。部分转化植株根叶畸形、株型异常、生长缓慢。移栽到含PEG80 0 0 17.4 % (w/v)的MS培养基后 。 展开更多
关键词 甘蔗 根癌 农杆菌介导转化 海藻糖合酶基因 抗渗透胁迫能力 增强植株
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农杆菌介导的马铃薯试管薯遗传转化体系的优化及反义class Ⅰ patatin基因的导入(英文) 被引量：49
17
作者 司怀军 谢从华 柳俊 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期801-805,共5页
用两个马铃薯栽培品种“鄂马铃薯 3号”和“甘农薯 2号”的试管薯为供体材料 ,建立了一种农杆菌介导的简单、快速和高效的遗传转化系统。在含有 75mg L卡那霉素的选择培养基上 ,2～ 3周可产生抗性芽 ,4～ 5周获得完整的转基因植株。筛... 用两个马铃薯栽培品种“鄂马铃薯 3号”和“甘农薯 2号”的试管薯为供体材料 ,建立了一种农杆菌介导的简单、快速和高效的遗传转化系统。在含有 75mg L卡那霉素的选择培养基上 ,2～ 3周可产生抗性芽 ,4～ 5周获得完整的转基因植株。筛选出了试管薯遗传转化的优化条件 ,特别是在再生培养基中加入 2mg L玉米素 ,两个品种的转化频率分别高达 4 5 .5 %和 4 3.9%。周期短 (4～ 5周 )、一步培养和转化频率高 ,使该转化体系能够广泛用于马铃薯转基因的研究。用含有反义classⅠpatatin基因的表达载体pBSAP转化两个品种 ,共获得 12 0株卡那霉素抗性植株。PCR、PCR Southern和Northern杂交分析证明 ,此反义基因已整合到马铃薯基因组中并在转基因植株中正常转录。反义基因的表达导致部分转基因植株的试管结薯株率和单株结薯数降低。结果表明 ,该classⅠpatatin基因可能参与了块茎形成的调控。 展开更多
关键词 农杆菌介导 马铃薯 试管薯 遗传转化体系
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反义磷脂酶Dγ基因转化毛白杨的研究 被引量：38
18
作者 刘斌 李红双 +1 位作者 王其会 崔德才 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期40-44,共5页
利用根癌农杆菌介导法将反义磷脂酶Dγ基因 (PLDγ)转入BT - 18号三倍体毛白杨。本研究建立了三倍体毛白杨的高频再生系统 ,对传统农杆菌侵染方法进行了改良 ,通过抗生素筛选获得大量抗性植株。对抗性植株进行了PCR和PCR -Southern杂交... 利用根癌农杆菌介导法将反义磷脂酶Dγ基因 (PLDγ)转入BT - 18号三倍体毛白杨。本研究建立了三倍体毛白杨的高频再生系统 ,对传统农杆菌侵染方法进行了改良 ,通过抗生素筛选获得大量抗性植株。对抗性植株进行了PCR和PCR -Southern杂交鉴定 ,证实反义基因 ,已整合入杨树核基因组中。通过对转基因植株的耐盐性鉴定 ,获得一批可耐 0 .7%NaCl的植株。 展开更多
关键词 三倍体毛白杨 根癌农杆菌 转化 反义膦脂酶Dγ基因 转基因植株
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抗芜菁花叶病毒转基因大白菜的培育 被引量：38
19
作者 朱常香 宋云枝 +2 位作者 张松 郭兴启 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期257-264,共8页
以大白菜栽培品种“福山大包头”的子叶柄为供试材料 ,对影响大白菜植株再生和基因转化频率的因素进行了研究。在此基础上 ,建立了大白菜高效再生体系和有效的基因转化体系 ,并将芜菁花叶病毒的 CP基因 (Tu MV- CP)导入大白菜中 ,获得... 以大白菜栽培品种“福山大包头”的子叶柄为供试材料 ,对影响大白菜植株再生和基因转化频率的因素进行了研究。在此基础上 ,建立了大白菜高效再生体系和有效的基因转化体系 ,并将芜菁花叶病毒的 CP基因 (Tu MV- CP)导入大白菜中 ,获得转化植株。 PCR检测和 Southern杂交分析证明Tu MV- CP基因已整合于大白菜的基因组中 ;Northern杂交分析及 EL ISA检测表明 Tu MV- CP基因在转录和翻译水平上进行了有效表达。转基因植株 T1代的遗传分析表明 ,外源基因在转基因植株后代中遵循 3∶ 1的分离规律。抗病性测定结果显示 ,转基因植株具有明显的抗病毒侵染能力。 展开更多
关键词 大白菜 TuMV-CP基因 根癌 农杆菌 基因转化
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农杆菌介导法获得小麦转基因植株的研究 被引量：37
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作者 黄益洪 周淼平 +3 位作者 叶兴国 唐克轩 程红梅 陆维忠 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期510-515,共6页
从 gus基因的瞬时表达入手 ,利用不同种类的农杆菌菌株感染小麦不同基因型和同一基因型的不同外植体 ,研究了农杆菌菌系、小麦基因型和外植体对转化效率的影响。从中优选出了对小麦愈伤组织感染力比较强的农杆菌菌系 AGL 0和 MOG10 1,... 从 gus基因的瞬时表达入手 ,利用不同种类的农杆菌菌株感染小麦不同基因型和同一基因型的不同外植体 ,研究了农杆菌菌系、小麦基因型和外植体对转化效率的影响。从中优选出了对小麦愈伤组织感染力比较强的农杆菌菌系 AGL 0和 MOG10 1,以及高敏感受体基因型 Alondra和扬麦 15 8等。实验结果还表明 ,预培养 10～ 15天的幼胚愈伤组织具有较高的瞬时表达率和再生能力 ,是较好的转化受体。对愈伤组织与农杆菌共培养后的筛选程序进行了摸索 ,获得了 70多个 PPT(Phosphinothricin)抗性植株 ,经 PCR等分子检测分析 ,证明部分植株实现了外源基因的成功转化 ,为进一步的研究工作打下了基础。 展开更多
关键词 农杆菌介导法 小麦 转基因植株 基因转化 GUS 瞬时表达 PPT
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