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附属蛋白:冠状病毒不容忽视的一类蛋白 被引量:2
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作者 司伏生 姜黎 +4 位作者 于瑞嵩 董世娟 谢春芳 陈冰清 李震 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期3895-3909,共15页
冠状病毒(Coronaviruses,CoVs)是基因组最大的一类单股正链RNA病毒,多数可以跨物种传播并感染人类,是当前引起重大公共卫生事件、严重威胁人类健康的病原之一。病毒基因组全长约25-31 kb,编码多个非结构蛋白、结构蛋白(S、E、M、N)及附... 冠状病毒(Coronaviruses,CoVs)是基因组最大的一类单股正链RNA病毒,多数可以跨物种传播并感染人类,是当前引起重大公共卫生事件、严重威胁人类健康的病原之一。病毒基因组全长约25-31 kb,编码多个非结构蛋白、结构蛋白(S、E、M、N)及附属蛋白。对于大多数冠状病毒来说,附属蛋白虽然是病毒复制的非必需蛋白,但往往在病毒的致病过程中发挥重要作用,是冠状病毒重要的功能蛋白。该类蛋白位于病毒基因组的3′端,由位于基因起始位置的转录调控序列(Transcription Regulating Sequence,TRS)调控其m RNA的转录,而且蛋白编码序列的密码子使用偏爱性对蛋白翻译也产生重要影响。附属蛋白具有跨膜蛋白的属性和独特的蛋白转运基序,后者对该类蛋白跨膜区的形成、拓扑学结构及蛋白的细胞内运输过程起决定性的作用,从而直接影响附属蛋白的功能。本文首先总结了冠状病毒最新的分类及基因组结构;然后从附属蛋白的种类、功能、蛋白转运基序、拓扑学结构及密码子使用偏爱性等方面系统概述了相关研究进展,并对下一步的研究方向进行了展望,为更加全面地认识冠状病毒附属蛋白的生物学特性提供重要参考。 展开更多
关键词 冠状病毒 附属蛋白 细胞内转运 拓扑学 密码子使用偏爱性
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Interactions among SARS-CoV accessory proteins revealed by bimolecular fluorescence complementation assay
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作者 Jianqiang Kong Yanwei Shi +1 位作者 Zhifang Wang Yiting Pan 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS CSCD 2015年第5期487-492,共6页
The accessory proteins(3a, 3b, 6, 7a, 7b, 8a, 8b, 9b and ORF14), predicted unknown proteins(PUPs) encoded by the genes, are considered to be unique to the severe acute respiratory syndrome coronavirus(SARS-Co V) genom... The accessory proteins(3a, 3b, 6, 7a, 7b, 8a, 8b, 9b and ORF14), predicted unknown proteins(PUPs) encoded by the genes, are considered to be unique to the severe acute respiratory syndrome coronavirus(SARS-Co V) genome. These proteins play important roles in various biological processes mediated by interactions with their partners. However, very little is known about the interactions among these accessory proteins. Here, a EYFP(enhanced yellow fluorescent protein) bimolecular fluorescence complementation(BiFC) assay was used to detect the interactions among accessory proteins. 33 out of 81 interactions were identified by BiFC, much more than that identified by the yeast two-hybrid(Y2H)system. This is the first report describing direct visualization of interactions among accessory proteins of SARS-CoV. These findings attest to the general applicability of the BiFC system for the verification of protein-protein interactions. 展开更多
关键词 SARS-COV accessory proteins Y2H Bimolecular fluorescence complementation assay
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猪丁型冠状病毒ns7、ns7a蛋白原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 杨宛书 李娟 +3 位作者 杜柳阳 陈文镜 周继勇 顾金燕 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期29-38,共10页
为获得免疫原性好的猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)辅助蛋白ns7和ns7a,并制备特异性的多克隆抗体,以用于ns7和ns7a蛋白功能的初步研究,本试验构建原核表达载体pGEX-PDCoV-ns7和pGEX-PDCoV-ns7a,测序正确后转入E.coli B... 为获得免疫原性好的猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)辅助蛋白ns7和ns7a,并制备特异性的多克隆抗体,以用于ns7和ns7a蛋白功能的初步研究,本试验构建原核表达载体pGEX-PDCoV-ns7和pGEX-PDCoV-ns7a,测序正确后转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达。利用GST-Resin进行蛋白纯化,将获得的重组蛋白以皮下注射方式免疫BALB/c小鼠,成功制备4份PDCoV ns7和2份ns7a小鼠多克隆抗体,并用ELISA、Western blot和IFA对抗体效价、反应性及特异性进行鉴定。结果显示,本试验成功应用大肠杆菌表达了可溶性ns7和ns7a蛋白,制备的PDCoV ns7和ns7a多克隆抗体效价分别为1∶409600和1∶12800,并在Western blot和IFA试验中具有良好的反应性及特异性。结果表明,制备的PDCoV辅助蛋白ns7和ns7a多克隆抗体为深入研究ns7及ns7a蛋白的生物学功能提供了重要工具。 展开更多
关键词 猪丁型冠状病毒 辅助蛋白ns7和ns7a 原核表达 多克隆抗体
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受体附件蛋白参与糖皮质激素受体激活研究进展
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作者 汪福洲 景亮 《国际麻醉学与复苏杂志》 CAS 2007年第3期263-266,共4页
受体附件蛋白(RAPs)在糖皮质激素受体(GR)功能发挥中起着重要作用。GR与其配体糖皮质激素(GC)的结合和受体异源复合物的转移需要多种伴侣分子的参与和调节。对GR与RAPs作用模型的进一步认识可能会对与之相关性疾病发病机制和治疗... 受体附件蛋白(RAPs)在糖皮质激素受体(GR)功能发挥中起着重要作用。GR与其配体糖皮质激素(GC)的结合和受体异源复合物的转移需要多种伴侣分子的参与和调节。对GR与RAPs作用模型的进一步认识可能会对与之相关性疾病发病机制和治疗的认识和研究提供更有力的基础。 展开更多
关键词 受体附件蛋白 糖皮质激素受体
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细胞骨架纤维间的相互联系 被引量:6
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作者 赵霞 刘全宏 +1 位作者 王筱冰 米娜 《细胞生物学杂志》 CSCD 2008年第2期191-195,共5页
细胞骨架是由微丝、微管及中间纤维组成的蛋白质纤维网络体系。三种骨架纤维具有不同的形态、结构和功能特征,它们在细胞中彼此联系、互相依赖,共同构成完整的细胞骨架系统,在细胞的各项生命活动中起着重要的作用。认识与研究细胞骨架... 细胞骨架是由微丝、微管及中间纤维组成的蛋白质纤维网络体系。三种骨架纤维具有不同的形态、结构和功能特征,它们在细胞中彼此联系、互相依赖,共同构成完整的细胞骨架系统,在细胞的各项生命活动中起着重要的作用。认识与研究细胞骨架的这三种纤维之间存在的相互联系,揭示它们作用的分子机制,对全面、科学的认识细胞骨架系统在细胞中起所的作用以及对于科学研究都有着重要的意义。 展开更多
关键词 细胞骨架 微丝 微管 中间纤维 辅助蛋白
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泡沫逆转录病毒Bet蛋白的研究进展
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作者 高原 孙燕 +3 位作者 李治 刘清梅 刘万红 何小华 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期285-290,共6页
泡沫逆转录病毒能长期感染哺乳动物宿主而不引发疾病,这一特点引起研究者们极大兴趣。有研究发现,泡沫逆转录病毒的辅助蛋白Bet不仅能调控病毒的基因表达和感染周期,对病毒慢性感染的建立有重要作用;还能阻止宿主细胞防御因子APOBEC3对... 泡沫逆转录病毒能长期感染哺乳动物宿主而不引发疾病,这一特点引起研究者们极大兴趣。有研究发现,泡沫逆转录病毒的辅助蛋白Bet不仅能调控病毒的基因表达和感染周期,对病毒慢性感染的建立有重要作用;还能阻止宿主细胞防御因子APOBEC3对病毒复制产生干扰,与病毒持续性感染的维持有关。为了阐明Bet在病毒复制和感染时所发挥的作用,本文对近年来有关Bet蛋白功能的研究进行了分析和总结。 展开更多
关键词 泡沫逆转录病毒 辅助蛋白 基因表达 感染周期 细胞防御因子
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IL-33/ST2信号通路与骨代谢的研究进展 被引量:5
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作者 朱燕霞 格根塔娜 《口腔疾病防治》 2019年第3期202-204,共3页
白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)是白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)细胞因子超家族的一个新成员,它可以激活肥大细胞、淋巴细胞、巨噬细胞,产生Th2细胞因子,并且在炎症、感染、自身免疫性疾病中发挥其重要作用。IL-33的经典信号... 白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)是白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)细胞因子超家族的一个新成员,它可以激活肥大细胞、淋巴细胞、巨噬细胞,产生Th2细胞因子,并且在炎症、感染、自身免疫性疾病中发挥其重要作用。IL-33的经典信号途径是通过ST2和IL-1受体辅助蛋白(interleukin-1 receptor accessory protein,IL-1 RAcP)组成的异三聚体,将信号转导至细胞内。IL-33/ST2信号通路通过激活T、B淋巴细胞等方面影响骨代谢。本文就IL-33/ST2信号通路在骨代谢中的作用研究作一综述,复习文献结果表明,IL-33在骨代谢方面的作用仍存在争议,一些学者研究认为IL-33可抑制破骨细胞的生成,并且在生理性骨重建中起作用;但也有学者认为IL-33可促进破骨细胞的形成及分化,从而导致骨吸收。IL-33及其信号通路参与牙周炎及根尖周炎牙槽骨骨代谢,具体机制尚不清楚,还需进一步研究。 展开更多
关键词 白细胞介素-33 ST2 破骨细胞 成骨细胞 骨代谢 IL-1受体辅助蛋白 牙周炎 根尖周炎
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HIV-1辅助蛋白Vpr多肽抗体的制备与鉴定 被引量:3
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作者 孙俊 孟哲峰 +2 位作者 徐建青 张晓燕 吕建新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期151-157,共7页
预测Vpr蛋白的B细胞抗原表位,并利用合成的B细胞表位肽制备Vpr特异性抗体。应用生物信息学技术获得Vpr蛋白共享氨基酸序列并预测其潜在B细胞抗原表位,与载体蛋白血蓝蛋白(KLH)偶联合成多肽并免疫家兔,鉴定及纯化获得的多肽特异性抗体。... 预测Vpr蛋白的B细胞抗原表位,并利用合成的B细胞表位肽制备Vpr特异性抗体。应用生物信息学技术获得Vpr蛋白共享氨基酸序列并预测其潜在B细胞抗原表位,与载体蛋白血蓝蛋白(KLH)偶联合成多肽并免疫家兔,鉴定及纯化获得的多肽特异性抗体。软件预测显示,Vpr蛋白N端的第3~19位(N)和C端的第82~95位(C)氨基酸序列为潜在B细胞抗原表位;ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价都达到1:105以上;Western-Blotting结果显示,无论对HIV-1B亚型还是CRF07_BC重组型的Vpr蛋白,其多肽N抗体和C抗体均能特异性识别;免疫沉淀结果显示,Vpr多肽N和C抗体也能特异性结合未变性的野生型Vpr或GFP-Vpr融合蛋白。利用生物信息学技术能成功预测Vpr蛋白B细胞抗原表位,免疫所获得的抗体具有较好的特异性和应用性。 展开更多
关键词 HIV-1辅助蛋白Vpr B细胞表位 表位预测 多肽抗体
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苏云金杆菌辅助蛋白P19对杀虫晶体蛋白Cry11Aa表达的影响 被引量:1
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作者 师永霞 曾少灵 +2 位作者 袁美妗 孙钒 庞义 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期353-357,共5页
苏云金杆菌以色列亚种的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操纵子上,据推测辅助蛋白P19可能与Cry11Aa蛋白的晶体化相关。本研究利用穿梭载体pHT3101构建了两个重组质粒pHcy1和pHcy3,两质粒均携带cry11Aa基因,但后者完全缺失了cry1... 苏云金杆菌以色列亚种的p19基因、cry11Aa基因和p20基因位于同一操纵子上,据推测辅助蛋白P19可能与Cry11Aa蛋白的晶体化相关。本研究利用穿梭载体pHT3101构建了两个重组质粒pHcy1和pHcy3,两质粒均携带cry11Aa基因,但后者完全缺失了cry11Aa基因上游的p19基因。将重组质粒电激转化至苏云金杆菌无晶体突变株4Q7中进行蛋白表达,SDS-PAGE结果表明在4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)中均能检测到正常表达的Cry11Aa蛋白,但单位体积培养液的Cry11Aa蛋白在辅助蛋白P19存在时的表达量明显高于其单独表达的表达量;透射电镜观察显示两菌株中的Cry11Aa蛋白形成了大小相近、形状相似的双梯形晶体;另外,生物测定结果表明重组菌株4Q7(pHcy1)和4Q7(pHcy3)对三龄致倦库蚊的杀虫活性没有显著性差异。该现象说明辅助蛋白P19的缺失对Cry11Aa蛋白的晶体形成和杀蚊活性没有影响,但P19作为分子伴侣在一定程度上帮助提高了Cry11Aa蛋白的表达水平。 展开更多
关键词 苏云金杆菌 辅助蛋白P19 晶体蛋白Cry11Aa 生物测定
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白介素1受体辅助蛋白在儿童和成人低级别胶质瘤中的作用 被引量:3
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作者 邢树山 胡万宁 +2 位作者 赵喜庆 刘文庆 宫剑 《首都医科大学学报》 CAS 2013年第2期258-263,共6页
目的探讨白介素1受体辅助蛋白(interleukin 1 receptor accessory protein,IL-1RAP)在成人与儿童低级别胶质瘤中的表达,分析其与预后的相关性。方法应用高通量全基因分析、免疫组织化学法、qRT-PCR和Western blotting方法对20例低级别... 目的探讨白介素1受体辅助蛋白(interleukin 1 receptor accessory protein,IL-1RAP)在成人与儿童低级别胶质瘤中的表达,分析其与预后的相关性。方法应用高通量全基因分析、免疫组织化学法、qRT-PCR和Western blotting方法对20例低级别胶质瘤(成人10例,儿童10例)标本中IL-1RAP的表达进行检测。结果经高通量全基因分析、免疫组织化学、qRT-PCR和Western blotting分析证明IL-1RAP与成人比较,儿童低级别胶质瘤总阳性表达率较低,有统计学意义(100%>30%,Chi-Square=12.439,P<0.05)。结论 IL-1RAP可能在胶质瘤的发生、发展过程之中扮演重要的角色。IL-1RAP可能成为评价低级别胶质瘤预后差异的重要参考指标及潜在的药物靶点。 展开更多
关键词 白介素1受体辅助蛋白 低级别胶质瘤 成人 儿童
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IL-1RⅡ和IL-1RAcP重组质粒对大鼠自身免疫性心肌炎的作用及机制 被引量:2
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作者 常贺 宋颖 刘春晓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1729-1738,共10页
目的:研究白细胞介素1 Ⅱ型受体(IL-1RⅡ)和白细胞介素1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)重组质粒对大鼠实验性自身免疫性心肌炎(EAM)的作用及其机制。方法:构建体内导入用重组质粒pCAGGS-IL-1RⅡ和pCAGGSIL-1RAcP,并以pCAGGS-SP(signal peptide... 目的:研究白细胞介素1 Ⅱ型受体(IL-1RⅡ)和白细胞介素1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)重组质粒对大鼠实验性自身免疫性心肌炎(EAM)的作用及其机制。方法:构建体内导入用重组质粒pCAGGS-IL-1RⅡ和pCAGGSIL-1RAcP,并以pCAGGS-SP(signal peptide)作为对照质粒。将雄性Lewis大鼠分成4组:对照(control)组(未免疫未注射质粒的大鼠,n=5)、EAM+SP组(免疫的大鼠尾静脉注射对照质粒,n=9)、EAM+IL-1RⅡ组(免疫的大鼠尾静脉注射IL-1RⅡ质粒,n=8)和EAM+IL-1RⅡ+IL-1RAcP组(免疫的大鼠尾静脉注射IL-1RⅡ和IL-1RAcP质粒,n=7)。第0天免疫大鼠造模;第6天应用流体动力学方法尾静脉注射重组质粒;第17天处死大鼠进行疗效评估,评估指标包括组织病理学、心脏彩超检测、心脏重量/体重比值、心肌中心衰标志物心房钠尿肽(ANP)和脑钠尿肽(BNP)及炎症因子的表达。构建体外细胞转染用重组质粒pUC19-IL-1RⅡ-actin和pUC19-IL-1RAcP-tub,转染入Cos7细胞获得培养上清液,将含有IL-1RⅡ和IL-1RAcP的培养上清液加至脂多糖(LPS)诱导的H9c2细胞中,RT-qPCR检测炎症因子的表达变化。将构建的重组质粒pEGFP-IL-1RⅡ-actin和pEGFP-IL-1RAcP-tub转染入Cos7细胞,免疫共沉淀(Co-IP)检测目的蛋白的形成。结果:与EAM+SP组相比,EAM+IL-1RⅡ组和EAM+IL-1RⅡ+IL-1RAcP组大鼠心肌炎症程度均有显著减轻,左心室收缩期内径显著缩小(P<0.05),心肌中ANP、BNP、TNF-α、IL-2、IFN-γ和TGF-β的表达水平显著降低(P<0.01),IL-4的表达水平显著升高(P<0.01)。在H9c2细胞中,与LPS组比较,LPS+IL-1RⅡ组和LPS+IL-1RⅡ+IL-1RAcP组TGF-β和IL-6的表达水平显著降低(P<0.01),IL-10的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS+IL-1RⅡ组比较,LPS+IL-1RⅡ+IL-1RAcP组TNF-α和IL-2的表达水平显著降低(P<0.05),IL-13的水平显著升高(P<0.01)。Co-IP检测到IL-1RⅡ与IL-1RAcP相互结合并形成了一个新的蛋白,为异源二聚体。结论:IL-1RⅡ和IL-1RAcP重组质粒导入可有效缓� 展开更多
关键词 白细胞介素1Ⅱ型受体 白细胞介素1受体辅助蛋白 异源二聚体 自身免疫性心肌炎
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胶质瘤细胞中IL-1RAP的作用及其与STAT3的关系 被引量:2
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作者 郭智珍 宫剑 +3 位作者 王建功 刘卫东 胡万宁 邢树山 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期23-27,共5页
目的研究白介素1受体辅助蛋白(IL-1RAP)在胶质瘤中的作用及其与转录活化因子3(STAT3)的关系。方法构建IL-1RAP表达载体,转染胶质瘤细胞系U251,利用流式±细胞仪检测转染IL-1RAP对U251细胞周期及凋亡影响。利用免疫共沉淀钓取STAT3,... 目的研究白介素1受体辅助蛋白(IL-1RAP)在胶质瘤中的作用及其与转录活化因子3(STAT3)的关系。方法构建IL-1RAP表达载体,转染胶质瘤细胞系U251,利用流式±细胞仪检测转染IL-1RAP对U251细胞周期及凋亡影响。利用免疫共沉淀钓取STAT3,检测转染IL-1RAP后STAT3的表达情况,并利用免疫荧光方法检测IL-1RAP与STAT3的共定位情况。结果 IL-1RAP蛋白定位于胶质瘤细胞核。与转染空质粒对照组相比,IL-1RAP有明显的促进肿瘤细胞凋亡[(52.10±5.51)%vs.(7.57±0.54)%,P<0.05]和周期阻滞作用[(68.22±1.96)%vs.(38.31±7.22)%,P<0.05]。通过免疫共沉淀和共定位证实IL-1RAP和STAT3可以相互作用。结论 IL-1RAP有抑制胶质瘤细胞增殖、促进细胞凋亡的作用。IL-1RAP可能通过与STAT3相互作用进入细胞核发挥促进细胞凋亡和抑制细胞周期的作用。 展开更多
关键词 白介素1受体辅助蛋白 转录活化因子3 胶质瘤 细胞周期 凋亡
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人巨细胞病毒_(gp)52蛋白与_(pp)65蛋白融合表达及初步应用 被引量:1
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作者 李长贵 周铁群 +2 位作者 邱平 王剑锋 汪兴太 《临床输血与检验》 CAS 1999年第2期7-9,共3页
为提高HCMVIgM抗体检测试剂盒的敏感性及特异性,本研究重组表达了HCMV糖蛋白gp52与磷蛋白pp65的嵌合抗原。从病毒及质粒中分别扩增gp52(氨基酸181~333,f_1)及pp65(氨基酸261~373,f_2)两个片段,以不同酶切位点插入到pTrcHis B载体上,... 为提高HCMVIgM抗体检测试剂盒的敏感性及特异性,本研究重组表达了HCMV糖蛋白gp52与磷蛋白pp65的嵌合抗原。从病毒及质粒中分别扩增gp52(氨基酸181~333,f_1)及pp65(氨基酸261~373,f_2)两个片段,以不同酶切位点插入到pTrcHis B载体上,筛选正确的重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白rp52~65。SDS-PAGE结果显示表达蛋白占菌体总蛋白的30%,以包涵体的形式存在,分子量为35000。以金属鳌合亲和层析(IMAC)及分子筛方法纯化表达蛋白,纯度达到96%,回收率为25.2%。以间接法检测HCMV IgM阳性血清,敏感性达到90.4%(19/21),证明此融合蛋白具有良好的抗原性,可作为HCMV IgM抗体检测试剂盒的包被抗原。 展开更多
关键词 PP65 HCMV 人巨细胞病毒 融合蛋白 抗原 融合表达 IGM阳性 酶切位点 包被 诱导表达
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髓细胞白血病干细胞表面标志蛋白白细胞介素-1辅助蛋白及其在血液系统疾病中的研究进展 被引量:1
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作者 尹玲玲 赵恺 徐开林 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2015年第3期232-235,共4页
白细胞介素(IL)-1受体辅助蛋白(IL-1RAP)已被证实作为IL-1受体Ⅰ型(IL-1R Ⅰ)的共同受体,参与IL-1的效应发挥.最新研究表明,IL-1RAP是新鉴定的髓细胞白血病干细胞(LSC)表面标志蛋白,且IL-1RAP抗体,可通过抗体依赖性细胞介导的... 白细胞介素(IL)-1受体辅助蛋白(IL-1RAP)已被证实作为IL-1受体Ⅰ型(IL-1R Ⅰ)的共同受体,参与IL-1的效应发挥.最新研究表明,IL-1RAP是新鉴定的髓细胞白血病干细胞(LSC)表面标志蛋白,且IL-1RAP抗体,可通过抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用(ADCC),杀灭慢性髓细胞白血病(CML)患者体内的LSC,而不损伤正常造血干细胞(HSC).另有研究发现,IL-1RAP表达水平与急性髓细胞白血病(AML)临床预后密切相关,IL-1RAP表达水平亦是预测骨髓增生异常综合征(MDS)危险度的潜在指标.笔者拟就髓细胞白血病LSC表面标志蛋白IL-1RAP及其在血液系统疾病中的研究进展进行综述如下. 展开更多
关键词 白细胞介素-1受体辅助蛋白 白血病干细胞 白血病 骨髓增生异常综合征
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家族性糖皮质激素缺乏症MRAP突变新生儿一例病例报告 被引量:1
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作者 余颖芳 陈安 +2 位作者 郑季彦 陈理华 杜立中 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期294-298,共5页
对1例罕见的新生儿期确诊的家族性糖皮质激素缺乏患儿的临床表现、实验室检测及影像学检查进行总结。患儿生后即出现呼吸急促,伴发绀,无抽搐,无低血糖,全身皮肤色素沉着发黑,实验室检测主要为血皮质醇低和ACTH水平高。黑皮素受体2辅助蛋... 对1例罕见的新生儿期确诊的家族性糖皮质激素缺乏患儿的临床表现、实验室检测及影像学检查进行总结。患儿生后即出现呼吸急促,伴发绀,无抽搐,无低血糖,全身皮肤色素沉着发黑,实验室检测主要为血皮质醇低和ACTH水平高。黑皮素受体2辅助蛋白(MRAP)基因测序结果显示,患儿为c.106+1(IVS3)delG纯合突变,临床表现正常的父亲、母亲均为MRAP基因c.106+1(IVS3)delG杂合突变。 展开更多
关键词 家族性糖皮质激素缺乏 ACTH无反应 黑皮素受体2辅助蛋白 治疗
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作用于mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G的HIV-1逆转录抑制剂研究进展
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作者 李俊洁 罗荣华 +3 位作者 杨柳萌 王婷 马文婕 黄宁 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期1855-1860,共6页
mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(A3G)属于固有免疫家族成员,具有胞嘧啶脱氨酶活性,能通过与核衣壳蛋白基因(Gag)或病毒RNA的核衣壳(NC)域的相互作用包装入子代病毒。在人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)逆转录过程中,A3G使胞嘧啶脱氨基,在DNA负... mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(A3G)属于固有免疫家族成员,具有胞嘧啶脱氨酶活性,能通过与核衣壳蛋白基因(Gag)或病毒RNA的核衣壳(NC)域的相互作用包装入子代病毒。在人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)逆转录过程中,A3G使胞嘧啶脱氨基,在DNA负链中引入尿嘧啶,导致病毒的过度突变,发挥抗病毒作用。除此之外,A3G通过包装成病毒粒子发挥抗HIV-1的作用。HIV-1的辅助调节蛋白病毒感染因子(Vif)可以通过泛素-蛋白酶体系统来拮抗A3G的抑制HIV-1的作用。因此,上调A3G的表达或是抑制Vif对A3G的拮抗作用可能成为HIV-1感染治疗的新有效方法。 展开更多
关键词 病毒HIV-1颗粒 mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G 逆转录 抗HIV-1药物 辅助蛋白病毒感染因子
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ATP6AP2基因的克隆与其表达载体的构建 被引量:1
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作者 孙宜琳 刘淑芹 +3 位作者 蒋扬帆 曾玲玲 杨细凤 刘杰 《湖北理工学院学报》 2021年第4期60-64,共5页
为了研究ATP6AP2的生物学功能,利用NCBI数据库确定了人源ATP6AP2基因的CDS序列,设计上游及下游引物。采用TRIZOl法提取293T细胞RNA并反转录合成cDNA,PCR扩增ATP6AP2基因全长序列并将得到的PCR产物经双酶切后与载体连接,转化大肠杆菌。通... 为了研究ATP6AP2的生物学功能,利用NCBI数据库确定了人源ATP6AP2基因的CDS序列,设计上游及下游引物。采用TRIZOl法提取293T细胞RNA并反转录合成cDNA,PCR扩增ATP6AP2基因全长序列并将得到的PCR产物经双酶切后与载体连接,转化大肠杆菌。通过PCR菌液鉴定和酶切验证,获得融合ATP6AP2基因序列的真核表达载体。用脂质体包裹该重组质粒转染293T细胞后,Western blot检测ATP6AP2的表达。结果表明,通过基因克隆成功构建了人源ATP6AP2重组真核表达载体,转染后的293T细胞高效表达EGFP-ATP6AP2融合蛋白,为进一步探究ATP6AP2基因的生物学功能提供了研究基础。 展开更多
关键词 ATP酶转运辅助蛋白 真核表达载体 基因克隆
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不同基因融合方式对HIV-1 AE2f Tat、Rev和Nef蛋白免疫原性的影响
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作者 吕国才 郑临 杨益大 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期225-228,共4页
目的 构建表达HIV-1 AE2f gp145-tat-rev-nef融合基因的DNA疫苗,并比较gp145-tat-rev-nef(AE-Gp145TRN)和tat-rev-integrase(c-half)(AE-TRIVN)两种不同基因融合方式对Tat、Rev和Nef蛋白免疫原性的影响.方法 按人源密码子使用频率... 目的 构建表达HIV-1 AE2f gp145-tat-rev-nef融合基因的DNA疫苗,并比较gp145-tat-rev-nef(AE-Gp145TRN)和tat-rev-integrase(c-half)(AE-TRIVN)两种不同基因融合方式对Tat、Rev和Nef蛋白免疫原性的影响.方法 按人源密码子使用频率对HIV-1 AE2f的gp145、tat、rev和nef基因序列进行优化并构建DNA疫苗.经Western blot进行体外表达检测后,利用小鼠模型比较AE-Gp145TRN与AE-TRIVN的免疫原性.结果 限制性酶切及DNA测序结果表明AE-Gp145TRN融合基因表达重组质粒构建正确;Western blot结果显示其能够在体外表达相应的融合蛋白.小鼠免疫后IFN-γ ELISPOT检测结果显示:AE-TRIVN所活化的针对Tat、Rev和Nef蛋白的总T细胞反应强度[(148±91)SFCs/106脾细胞]显著高于Gp145TRN[(55±28)SFCs/106脾细胞,P=0.017].T细胞反应分布情况显示:AE-TRIVN所活化的T细胞反应主要集中在Rev蛋白上;而Gp145TRN则可以显著提高对Nef蛋白的免疫识别.结论 AE-TRIVN与Gp145TRN在小鼠体内所活化的T细胞反应特征有明显区别,提示不同的抗原融合方式可能影响融合基因DNA疫苗的免疫结果. 展开更多
关键词 艾滋病病毒 疫苗 T细胞 调节/辅助蛋白 融合抗原
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辅助蛋白基因的剪接对磷脂酶A1酶活的影响
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作者 杨蒙 薛正莲 +3 位作者 甘玉飞 周杰 王洲 刘艳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第6期104-110,共7页
为探究磷脂酶A1辅助蛋白(phospholipase A1 accessory protein,PlaS)对磷脂酶A1(phospholipase A1,PlaA1)酶活关键调控区域,根据PlaS的结构特点,设计出截短突变体,利用聚合酶链式反应技术将PlaA1与PlaS共表达基因plaB中编码辅助蛋白的基... 为探究磷脂酶A1辅助蛋白(phospholipase A1 accessory protein,PlaS)对磷脂酶A1(phospholipase A1,PlaA1)酶活关键调控区域,根据PlaS的结构特点,设计出截短突变体,利用聚合酶链式反应技术将PlaA1与PlaS共表达基因plaB中编码辅助蛋白的基因plaS进行了剪接,并对各截短菌株进行酶活检测和酶学性质分析。结果表明:PlaS属于锚蛋白(ankyrin,ANK)家族,主要由N端域、ANK结构域、C端域三部分组成,其中ANK结构域包含4个典型的ANK重复序列(ANK repeat)。从构建的5株截短菌株中筛选出了2株胞外酶活相对较高的菌株AN-3与AN-4,与未截短菌株BP28相比,比酶活分别提高了73%和78%,催化效率(K_(cat)/K_(m))分别提高了216%和211%,而最适温度(45℃)和最适pH值(6.0)没有发生变化。K_(cat)/K_(m)的结果显示,在所有的截短菌株中AN菌株的催化效率最低。plaS剪接结果表明,PlaS的ANK结构域至少需要3个ANK repeat才会对PlaA1酶活表现为胞外促进作用,PlaS的C端域对维持PlaA1的结构稳定性起到重要的作用,研究为揭示PlaS对PlaA1的调控机制提供了理论基础。 展开更多
关键词 磷脂酶A1 磷脂酶A1辅助蛋白 锚蛋白重复序列 基因剪接 酶学性质 分子截短
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黏质沙雷菌磷脂酶A1辅助蛋白S对表达宿主菌大肠杆菌抑制作用机制
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作者 甘玉飞 薛正莲 +3 位作者 周杰 王芳 王洲 刘艳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第7期45-51,共7页
黏质沙雷菌plaS基因编码的磷脂酶A1辅助蛋白S(phospholipase A1 accessory protein S,PlaS)能够显著提高磷脂酶A1在大肠杆菌中的表达活性,但对宿主菌的生长具有抑制作用,且抑制机制尚无相关研究报道。本实验通过对PlaS进行生物信息学分... 黏质沙雷菌plaS基因编码的磷脂酶A1辅助蛋白S(phospholipase A1 accessory protein S,PlaS)能够显著提高磷脂酶A1在大肠杆菌中的表达活性,但对宿主菌的生长具有抑制作用,且抑制机制尚无相关研究报道。本实验通过对PlaS进行生物信息学分析并对其N端截短系列表达菌株的生长特性进行研究以确定其抑制作用关键区域,并通过扫描电子显微镜观察和流式细胞仪检测来初步探究PlaS对表达宿主菌的抑制机理。结果表明,在PlaS N端分别截短前23、24、25、26、27个氨基酸构建的表达菌株中,dS_(23)P_(28)、dS_(24)P_(28)、dS_(25)P_(28)、dS_(26)P_(28)菌株仍表现出不同程度的生长抑制现象,而dS_(27)P_(28)菌株没有出现生长抑制现象,初步表明PlaS N端的前27个氨基酸为抑制关键区域。扫描电子显微镜和流式细胞仪结果显示,PlaS的表达对大肠杆菌的细胞膜有严重的破坏作用,而N端截短前27个氨基酸的PlaS表达后对大肠杆菌细胞膜的损伤作用消失,这一结果也与生长特性结果一致。本实验结果可为深入研究黏质沙雷菌PlaS功能提供理论参考。 展开更多
关键词 黏质沙雷菌 磷脂酶A1辅助蛋白 大肠杆菌 生长抑制 N端截短
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