[目的]采用慢病毒系统构建AMP依赖的蛋白激酶α1(AMP activated protein kinase α1,AMPKα1)基因过表达的3T3-L1细胞系,探讨其对炎症因子表达水平的影响。[方法]在美国国家生物技术信息中心(NCBI)上查找到AMPKα1的基因序列,利用SnapG...[目的]采用慢病毒系统构建AMP依赖的蛋白激酶α1(AMP activated protein kinase α1,AMPKα1)基因过表达的3T3-L1细胞系,探讨其对炎症因子表达水平的影响。[方法]在美国国家生物技术信息中心(NCBI)上查找到AMPKα1的基因序列,利用SnapGene软件设计引物,进行目的基因扩增、纯化。将纯化后的AMPKα1片段克隆到PLJM1-EGFP载体质粒上,构建好的质粒与辅助质粒共同转染到HEK293T细胞中,收集病毒液。用含有病毒液的培养基培养3T3-L1细胞,待抗性蛋白表达后用嘌呤霉素筛选,杀死未成功转染的3T3-L1细胞,更换新鲜的完全培养基继续培养。[结果]成功构建稳定过表达AMPKα1的3T3-L1细胞系(P<0.05);AMPKα1过表达的3T3-L1细胞系的炎症因子MCP-1蛋白表达水平降低(P<0.05),炎症减轻。[结论]过表达3T3-L1细胞中的AMPKα1,减轻炎症因子MCP-1的表达水平(P<0.05)。展开更多
文摘[目的]采用慢病毒系统构建AMP依赖的蛋白激酶α1(AMP activated protein kinase α1,AMPKα1)基因过表达的3T3-L1细胞系,探讨其对炎症因子表达水平的影响。[方法]在美国国家生物技术信息中心(NCBI)上查找到AMPKα1的基因序列,利用SnapGene软件设计引物,进行目的基因扩增、纯化。将纯化后的AMPKα1片段克隆到PLJM1-EGFP载体质粒上,构建好的质粒与辅助质粒共同转染到HEK293T细胞中,收集病毒液。用含有病毒液的培养基培养3T3-L1细胞,待抗性蛋白表达后用嘌呤霉素筛选,杀死未成功转染的3T3-L1细胞,更换新鲜的完全培养基继续培养。[结果]成功构建稳定过表达AMPKα1的3T3-L1细胞系(P<0.05);AMPKα1过表达的3T3-L1细胞系的炎症因子MCP-1蛋白表达水平降低(P<0.05),炎症减轻。[结论]过表达3T3-L1细胞中的AMPKα1,减轻炎症因子MCP-1的表达水平(P<0.05)。
