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nm23-H1与muc1基因在乳腺癌中的表达及其临床意义 被引量：7
1
作者 崔大祥 王岭 +2 位作者 闫小君 苏成芝 王剑波 《第四军医大学学报》 1999年第9期823-826,共4页
目的：检测ｎｍ ２３ Ｈ１ 与ｍ ｕｃ１ 基因在乳腺癌中的表达水平，探讨ｎｍ ２３ Ｈ１ 与ｍ ｕｃ１ 在乳腺癌原发灶与转移灶中表达水平改变的临床意义． 方法：采用定量 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 与图像扫描定量分析技术检测２２ 例家族... 目的：检测ｎｍ ２３ Ｈ１ 与ｍ ｕｃ１ 基因在乳腺癌中的表达水平，探讨ｎｍ ２３ Ｈ１ 与ｍ ｕｃ１ 在乳腺癌原发灶与转移灶中表达水平改变的临床意义． 方法：采用定量 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 与图像扫描定量分析技术检测２２ 例家族性乳腺癌及６０ 例散发性乳腺癌原发灶与转移灶中ｎｍ ２３ Ｈ１ 与 ｍ ｕｃ１ 基因的表达水平．结果：①在２２ 例有家族史的原发灶中， ｎｍ ２３ Ｈ１ 基因在１０ 例无转移的标本中检出率为８／１０，１２ 例转移淋巴结中检出率４／１２，癌旁组织中检出率为１４／２２；６０ 例散发性乳腺癌中，ｎｍ ２３ Ｈ１ 基因在４０ 例无转移的原发灶中检出率为 ３４／４０，２０ 例转移淋巴结中检出率为７／２０，癌旁组织中检出率为３９／６０；无转移的原发灶与转移灶中的检出率存在显著性差异（ Ｐ＜ ００１）；②ｎｍ ２３ Ｈ１ 基因在乳腺癌原发灶呈高表达，在转移灶中呈低表达，表达量在两者之间存在显著性差别（ Ｐ＜ ０．００１）；ｎｍ ２３ Ｈ１ 基因表达水平的高低与乳癌的分级、病理类型、家族史无关；③ ｍ ｕｃ１ 在２２ 例有家族史的无转移原发灶中检出率为２／１０，转移淋巴结中检出率为１０／１２，癌旁组织中检出率为 １５／２２；６０ 展开更多
关键词 乳腺癌 NM23-H1 MUC1 基因表达 定量rt-pcr
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竞争性定量RT-PCR技术在t(8;21)AML微小残留病变检测中的应用 被引量：4
2
作者 王阳 沈美凤 +3 位作者 过宇 陆定伟 陈子兴 薛永权 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期435-438,共4页
目的　建立针对 AML- ETO融合基因转录本的竞争性定量反向 -聚合酶链反应 (RT- PCR)体系 ,并探讨其在 t(8;2 1)急性髓细胞性白血病 (acute myeloid leukemia,AML)微小残留病变跟踪中的应用价值。方法　采用重叠延伸剪接术 (splicing by ... 目的　建立针对 AML- ETO融合基因转录本的竞争性定量反向 -聚合酶链反应 (RT- PCR)体系 ,并探讨其在 t(8;2 1)急性髓细胞性白血病 (acute myeloid leukemia,AML)微小残留病变跟踪中的应用价值。方法　采用重叠延伸剪接术 (splicing by overlapping extention,SOE)获得竞争性 DNA片段 ,建立竞争性定量 PCR方法 ,并应用于 t(8;2 1) AML 患者的检测。结果　成功建立了竞争性定量 PCR方法 ,并获得不同 t(8;2 1) AML 患者的 AML1- ETO融合基因转录本的竞争性定量 PCR结果。结论　以 SOE方法为基础的竞争性定量 PCR方法简单、适用 ;不同生存状态下的 t(8;2 1) AML 患者的 AML1- 展开更多
关键词 t(8 21)易位 微小残留病变 pcr 急性髓细胞性白血病
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荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测白血病bcr/abl mRNA 被引量：3
3
作者 高劲松 仝明 +2 位作者 何蕴韶 聂常富 周远帆 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期363-366,共4页
目的　建立荧光定量RT PCR法检测白血病融合基因bcr ablmRNA的方法 ,为白血病临床诊断及微量残留病监测提供有用工具。方法　RT PCR扩增培养的K5 6 2细胞bcr abl融合基因 ,A T载体克隆法构建定量标准模板 ,用PE770 0型检测仪 ,建立荧光... 目的　建立荧光定量RT PCR法检测白血病融合基因bcr ablmRNA的方法 ,为白血病临床诊断及微量残留病监测提供有用工具。方法　RT PCR扩增培养的K5 6 2细胞bcr abl融合基因 ,A T载体克隆法构建定量标准模板 ,用PE770 0型检测仪 ,建立荧光定量RT PCR方法 ,对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行测定 ;定量检测 14例慢性髓细胞白血病 (CML)患者和 4例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者外周血样本。结果　建立的荧光定量RT PCR方法 ,可检测出约 10 - 5μgK5 6 2总RNA中的bcr abl融合基因和 10个bcr abl重组质粒拷贝 ,重复性的CT值 (Cyclethreshold)管间、批间变异系数 (CV)分别为 :2 0 % ,3.7%。 14例CML患者bcr abl融合基因表达量中位数为 5 .15× 10 4 拷贝 μgRNA ,产物经电泳分析 ,其中 11例为b2a2 ,3例为b3a2 ,1例 12× 10 4 拷贝 μgRNA的CML患者 ,骨髓移植后 1个月变为 0 .2 3× 10 4 拷贝 μgRNA。 4例ALL患者中 1例有bcr abl融合基因的表达 ,为b2a2 ,表达量为 8.2×10 5拷贝 μgRNA。 结论　建立的荧光定量RT PCR方法灵敏、特异、重复性好 ,结果用拷贝数表示 ,准确可靠 ,利于统一标准。该方法能检测出b2a2、b3a2两种类型的融合基因 。 展开更多
关键词 荧光定量逆转录-聚合酶链反应 聚合酶链反应定量 白血病 融合基因 CML
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定量RTPCR中人干细胞因子的RNACRS的构建 被引量：2
4
作者 谭文斌 聂怡玲 +5 位作者 罗赛群 郭小珊 成光杰 陈汉春 朱定尔 public.cs.hn.cn 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期315-318,共4页
一种适用于定量RT PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术 ,构建人干细胞因子 (hSCF)基因的RNA竞争性参考标准 (RNA CRS)的新方法 :用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCFcDNA ,并克隆入质粒pGEM T获重组的pGEMSCF载体 ,经Exonuc... 一种适用于定量RT PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术 ,构建人干细胞因子 (hSCF)基因的RNA竞争性参考标准 (RNA CRS)的新方法 :用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCFcDNA ,并克隆入质粒pGEM T获重组的pGEMSCF载体 ,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理 ,以导致hSCFcDNA中一小片段缺失 ,由此获得重组 pGEMSCF模拟体 (mimic) ,经体外转录得到hSCFRNA CRS .测序表明 :该RNA CRS与hSCFmRNA比较 ,缺失了从第 4 99位至 60 8位共 110个核苷酸 ,但二者RT PCR反应可用同一对扩增引物 ,反应动力学极为相似 .这种hSCFRNA CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准 ,适用于定量RT PCR中 ,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析 .此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及 展开更多
关键词 基因表达 定量rt-pcr RNA-CRS hSCF 构建
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定量RT-PCR检测穿孔素mRNA方法的建立与临床初步应用 被引量：1
5
作者 秦卫松 李芳秋 武建国 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期137-139,共3页
目的　建立检测穿孔素mRNA的定量RT PCR方法。方法　用限制性内切酶制备竞争性模板 ,建立定量RT PCR方法 ,检测正常人及部分肿瘤病人外周血的穿孔素mRNA水平。结果　 6例正常人的外周血穿孔素mRNA含量为 0 5 1± 0 40pmol/ml,消... 目的　建立检测穿孔素mRNA的定量RT PCR方法。方法　用限制性内切酶制备竞争性模板 ,建立定量RT PCR方法 ,检测正常人及部分肿瘤病人外周血的穿孔素mRNA水平。结果　 6例正常人的外周血穿孔素mRNA含量为 0 5 1± 0 40pmol/ml,消化道肿瘤患者的穿孔素mRNA水平与正常相比 ,有显著差异 (P <0 .0 1) ,乳腺肿瘤及白血病患者的穿孔素mRNA水平与正常人相比 ,没有差异。结论　穿孔素mRNA水平的降低可能是肿瘤发生的一个重要原因 ;除穿孔素途径以外 ,还存在别的抗肿瘤的效应机制。 展开更多
关键词 穿孔素 定量rt-pcr 肿瘤 MRNA
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皮肤创伤后增生性瘢痕组织中TGF-β基因亚型mRNA的表达
6
作者 黄庆 黄君富 +2 位作者 陈斌 张雪 府伟灵 《重庆医学》 CAS CSCD 2004年第8期1148-1150,共3页
目的　研究在增生性瘢痕组织中TGF β基因亚型mRNA的表达。方法　采用RT PCR技术 ,以 β actin基因为内参照基因 ,分别确定TGF β基因亚型 ,包括TGF β1、TGF β2、TGF β3在HTS组织中的表达 ,及其表达与病程的关系。结果　在增生性瘢... 目的　研究在增生性瘢痕组织中TGF β基因亚型mRNA的表达。方法　采用RT PCR技术 ,以 β actin基因为内参照基因 ,分别确定TGF β基因亚型 ,包括TGF β1、TGF β2、TGF β3在HTS组织中的表达 ,及其表达与病程的关系。结果　在增生性瘢痕组织中均检测到TGF β1、TGF β2、TGF β3各基因亚型的表达 ,且TGF β1、TGF β2随着病程延长而降低 ,TGF β3随着病程的延长而增高。结论　增生性瘢痕组织与TGF β1、TGF β2、TGF β3三种基因亚型的共同参与调节有关 ,从基因水平上证实TGF β3与增生性瘢痕组织的增生缓解有关 ,提示抑制TGF β1、TGF β2或促进TGF β3的表达有益于防治增生性瘢痕组织的形成与增生。 展开更多
关键词 增生性瘢痕 转化生长因子Β 定量rt—pcr 基因表达
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聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用 被引量：12
7
作者 边杉 王颖 +4 位作者 于涛 丁选胜 吴梧桐 叶波平 奚涛 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期178-182,共5页
目的 :探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT PCR中的应用。方法 :提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA ,逆转录得到cDNA第一链 ,以此为模板进行PCR扩增 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数... 目的 :探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT PCR中的应用。方法 :提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA ,逆转录得到cDNA第一链 ,以此为模板进行PCR扩增 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数及模板量与PCR产物量间的关系。结果 :PCR扩增反应在第 2 0～ 2 5个循环 ,起始模板量为 0 8～ 2 4 μg时 ,PCR产物量与起始模板量呈现较好的线性关系。 结论 :通过控制起始模板量 ,减少PCR循环数使目的基因的扩增处于PCR扩增指数期 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术 。 展开更多
关键词 聚丙烯酰胺凝胶电泳 DNA银染 半定量rt-pcr
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FcγRⅡB介导的PRRSV感染的抗体依赖性增强作用 被引量：12
8
作者 段二珍 周永辉 +6 位作者 张宜娜 张继希 张志远 卢晓艳 刘肖萍 夏平安 崔保安 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1105-1109,共5页
将PRRSV Hn-1/06株阳性血清(中和效价为1∶2)做2～8倍倍比稀释后,分别与等体积含100TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备感染性免疫复合物。取纯化的猪IgG和兔抗猪IgG制备非感染性免疫复合物。用鼠抗FcγRⅡB阳性血清封闭猪... 将PRRSV Hn-1/06株阳性血清(中和效价为1∶2)做2～8倍倍比稀释后,分别与等体积含100TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备感染性免疫复合物。取纯化的猪IgG和兔抗猪IgG制备非感染性免疫复合物。用鼠抗FcγRⅡB阳性血清封闭猪肺泡巨噬细胞(PAM细胞)表面的FcγRⅡB,然后分别将感染性免疫复合物和非感染性免疫复合物与PRRSV的混合物感染封闭后的PAM细胞,培养48h后收获样品,采用荧光定量RT-PCR检测收获样品中PRRSV的含量。结果表明,选择性封闭PAM细胞的FcγRⅡB能增强PRRSV的抗体依赖性增强作用。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 抗体依赖性增强作用 FC受体 荧光定量rt-pcr
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阿拉瑞林对GnRH受体阳性肝癌细胞Fas/FasL基因表达的影响 被引量：6
9
作者 袁彪 张金山 +4 位作者 张远强 李韧 黄鲁豫 孙岚 朴永安 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1065-1068,共4页
目的　探讨Fas Fasl系统在LHRH类似物抑制肝癌细胞增殖过程中的作用。方法　用免疫组织化学方法检测SMMC772 1肝癌细胞中GnRH受体的表达 ;用半定量RT PCR方法 (QRT PCR)观察LHRH类似物对SMMC772 1肝癌细胞中Fas FasL系统mRNA表达的变化... 目的　探讨Fas Fasl系统在LHRH类似物抑制肝癌细胞增殖过程中的作用。方法　用免疫组织化学方法检测SMMC772 1肝癌细胞中GnRH受体的表达 ;用半定量RT PCR方法 (QRT PCR)观察LHRH类似物对SMMC772 1肝癌细胞中Fas FasL系统mRNA表达的变化。结果　SMMC772 1肝癌细胞呈GnRH及其受体免疫反应阳性。PCR反应产物均与预期长度相符合。Fas FasL mRNA水平随LHRH类似物浓度增加而增大 ,经方差分析各组间有显著性差异 (Fas ,F =16.5 18FasL ,F =111.5 83 ,P <0 .0 1)。结论　SMMC772 1肝癌细胞具有自分泌GnRH的功能 ;Fas 展开更多
关键词 FAS/FASL 半定量rt-pcr 免疫组织化学 GnRH/类似物
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肺癌耐药相关基因在肺癌组织和肺癌细胞株中的表达 被引量：7
10
作者 刘凌志 钱桂生 周向东 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期171-174,共4页
背景与目的:我们已经通过抑制消减杂交技术发现了一条新的长494bp的肺癌耐药相关基因片段,并克隆了它的全长cDNA序列。本研究旨在研究该肺癌耐药相关基因(lungcancerdrugresistance-relatedgene,LCDRG)在肺癌组织、癌旁组织及5种肺癌细... 背景与目的:我们已经通过抑制消减杂交技术发现了一条新的长494bp的肺癌耐药相关基因片段,并克隆了它的全长cDNA序列。本研究旨在研究该肺癌耐药相关基因(lungcancerdrugresistance-relatedgene,LCDRG)在肺癌组织、癌旁组织及5种肺癌细胞株中的表达。方法:应用半定量RT-PCR检测38例肺癌组织、12例癌旁组织和5种肺癌细胞株中该基因的表达。结果:肺癌组织中LCDRGmRNA的表达明显高于癌旁组织(P<0.001),但在肺腺癌和鳞癌之间差异无统计学意义。该基因在肺腺癌细胞株SPC-A-1和A549、大细胞肺癌细胞株H460、小细胞肺癌细胞株H446和SH77中的表达依次递减。结论:LCDRG是一条肺癌相关基因,该基因可能与肺癌的发生、发展密切相关。 展开更多
关键词 肺癌 耐药相关基因 半定量rt-pcr 基因表达
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木瓜提取物的抗炎活性研究 被引量：9
11
作者 田慧群 崔倩倩 +1 位作者 任东明 刘朝奇 《华西药学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期287-288,共2页
目的研究不同部位木瓜提取物在细胞水平上的抗炎作用及机制。方法依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取已用65%乙醇抽提的木瓜粉末,得到乙酸乙酯、正丁醇及水溶性部位提取物;建立THP-1及L929细胞炎症模型,用MTT法检测3个部位提取物的抗炎活性。... 目的研究不同部位木瓜提取物在细胞水平上的抗炎作用及机制。方法依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取已用65%乙醇抽提的木瓜粉末,得到乙酸乙酯、正丁醇及水溶性部位提取物;建立THP-1及L929细胞炎症模型,用MTT法检测3个部位提取物的抗炎活性。利用核转录因子(NF-κB)报告基因系统检测NF-κB的活性,并用半定量PCR检测药物处理后细胞内炎症反应相关基因的表达。结果与对照组比较,用乙酸乙酯部位处理后的THP-1细胞内Toll样受体及其下游炎症因子的表达水平明显下降,且用该组上清液处理后的L929细胞的活细胞数明显高于其他组。结论木瓜的乙酸乙酯部位提取物具较好的抗炎效果。 展开更多
关键词 木瓜 提取物 抗炎 THP-1细胞 L929细胞 核转录因子 半定量pcr
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在水稻纹枯病菌菌核形成中5个基因的表达差异分析 被引量：7
12
作者 王伟 杨惠 +1 位作者 王政逸 陈卫良 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期18-25,共8页
以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1IA)菌株GD118不同生长时期的总RNA为材料,以18SrRNA作为内参基因,根据实验室抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)已获得的立枯丝核菌基因片段的表达序列标签(expressed seq... 以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1IA)菌株GD118不同生长时期的总RNA为材料,以18SrRNA作为内参基因,根据实验室抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)已获得的立枯丝核菌基因片段的表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)设计引物,采用实时定量RT-PCR检测A、B、C、E、F基因(分别为双组分反应调节子、激活巨噬细胞糖蛋白、胞外金属弹力蛋白酶、亲环蛋白、内质网囊泡蛋白ERV29)的表达,以期找到水稻纹枯病菌菌核形成中的差异表达基因。结果表明:从菌核开始形成到菌核成熟的过程中,这5个基因的表达量逐渐降低,且菌核在成熟时表达量最低,但成熟后这些基因的表达量迅速恢复到之前的水平,之后表达量基本保持不变。提示这5个基因在水稻纹枯病菌菌核形成的不同时期的表达有显著差异,说明这5个基因可能受菌核形成过程中胁迫条件的诱导表达。 展开更多
关键词 水稻纹枯病菌 菌核形成 实时荧光定量rt pcr 基因差异表达
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下丘脑-垂体-肾上腺轴大鼠下丘脑 CRH mRNA 表达 被引量：6
13
作者 钟历勇 沈自尹 +1 位作者 郑仲承 陈晓红 《上海铁道大学学报》 1998年第S1期12-14,共3页
目的探讨下丘脑垂体肾上腺轴（ＨＰＡ轴）受抑状态下下丘脑ＣＲＨｍＲＮＡ的表达。方法本研究采用较新颖的逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ）化学发光定量法，检测了ＨＰＡ轴受抑大鼠下丘脑室旁核ＣＲＨｍＲＮＡ的表达。结果ＨＰ... 目的探讨下丘脑垂体肾上腺轴（ＨＰＡ轴）受抑状态下下丘脑ＣＲＨｍＲＮＡ的表达。方法本研究采用较新颖的逆转录多聚酶链反应（ＲＴＰＣＲ）化学发光定量法，检测了ＨＰＡ轴受抑大鼠下丘脑室旁核ＣＲＨｍＲＮＡ的表达。结果ＨＰＡ轴受抑大鼠下丘脑室旁核ＣＲＨｍＲＮＡ的表达量明显比正常对照组减少，且ＲＴＰＣＲ化学发光定量法能较灵敏地检测出ＣＲＨｍＲＮＡ低水平表达含量。结论这种新的ＰＣＲ定量分析技术为在分子水平研究神经内分泌功能紊乱提供了灵敏、准确、可靠的方法。 展开更多
关键词 促肾上腺皮质激素释放激素 信使核糖核酸 逆转录多聚酶链反应化学发光定量法 大鼠
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FQ-RT-PCR法检测β地中海贫血患者β与γ珠蛋白mRNA水平的研究 被引量：3
14
作者 宁自觉 赖永榕 《广西医学》 CAS 2003年第7期1117-1120,共4页
目的 :探讨 β地中海贫血患者中 β与γ珠蛋白mRNA水平及意义。方法 :用FQ RT PCR技术检测 2 7例 β地中海贫血患者和 2 5例正常对照组外周血中 β与γ珠蛋白mRNA水平。结果 :重型 β地中海贫血患者中γ/ (β+γ)mRNA比值 (70 83±... 目的 :探讨 β地中海贫血患者中 β与γ珠蛋白mRNA水平及意义。方法 :用FQ RT PCR技术检测 2 7例 β地中海贫血患者和 2 5例正常对照组外周血中 β与γ珠蛋白mRNA水平。结果 :重型 β地中海贫血患者中γ/ (β+γ)mRNA比值 (70 83±2 2 1 7% )显著高于轻型 β地中海贫血患者 (0 99± 1 0 1 % )及正常对照组 (1 5 5± 4 1 4 % ) (P <0 0 0 1 )。轻型 β地中海贫血患者及正常对照组的γ/ (β +γ)mRNA比值两组比较无明显差别 (P >0 0 5 )。结论 :(1 )FQ RT PCR技术是一种敏感性强、特异性强、定量准确的新方法 ,适合于血红蛋白珠蛋白mRNA水平的定量测定。 (2 )γ/ (β+γ)mRNA比值增高是重型β地贫病人的特征之一。对 展开更多
关键词 Β地中海贫血 Γ珠蛋白 信使核糖核酸 FQ-rt-pcr法
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番木瓜GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶基因的克隆及分析 被引量：3
15
作者 申艳红 陈晓静 +1 位作者 卢秉国 何玮毅 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第2期172-177,共6页
采用cDNA末端快速扩增方法,获得了番木瓜果实GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)基因的cDNA全长序列,将其命名为CpGMP,GenBank登录号为FJ489652.然后,根据拼接序列设计开放性阅读框上、下游引物,扩增得到了CpGMP基因的开放性阅读框序列和DNA序... 采用cDNA末端快速扩增方法,获得了番木瓜果实GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)基因的cDNA全长序列,将其命名为CpGMP,GenBank登录号为FJ489652.然后,根据拼接序列设计开放性阅读框上、下游引物,扩增得到了CpGMP基因的开放性阅读框序列和DNA序列.ORF序列编码361个氨基酸,DNA序列包含4个外显子和3个内含子.序列分析表明,番木瓜GMP与大果黄褥花、桃、番茄、拟南芥、水稻GMP的同源性分别为90.30%、89.47%、88.92%、88.09%、85.87%.半定量RT-PCR分析表明,CpGMP基因随着番木瓜果实的成熟表达量逐渐增加,软化时又逐渐降低. 展开更多
关键词 番木瓜 GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶 CDNA末端快速扩增 半定量rt-pcr
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梅迪-维斯纳病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：2
16
作者 张太翔 凌宗帅 +8 位作者 孙涛 袁涛 徐彪 梁成珠 刘文鹏 孙军 王洪兵 肖越强 杨慧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期163-165,共3页
为建立检测梅迪-维斯纳病毒(MVV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,本研究根据MVV核苷酸保守序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有MVV目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示:5.0×105～5.0×101拷贝范围内定... 为建立检测梅迪-维斯纳病毒(MVV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,本研究根据MVV核苷酸保守序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有MVV目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示:5.0×105～5.0×101拷贝范围内定量PCR均有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为50拷贝。对羊的其他病毒核酸均无扩增反应。本研究建立的实时定量PCR方法,灵敏度高,特异性好,在MVV的快速检测中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 梅迪-维斯纳病毒 实时荧光定量pcr TAQMAN探针
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地高辛掺入RTPCR半定量检测WT1基因在AML中的表达及其意义 被引量：1
17
作者 王玲 王玮 +1 位作者 傅建新 陈子兴 《江苏医药》 CAS CSCD 2000年第10期781-783,共3页
目的　建立客观的半定量检测WT1基因表达的方法 ,探讨WT1基因表达水平与急性髓细胞性白血病 (AML)预后的关系。方法　用地高辛标记的脱氧三磷酸尿苷 (DIG 11 dUTP)掺入逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)的方法检测 ,用KG 1细胞建立WT1表达的... 目的　建立客观的半定量检测WT1基因表达的方法 ,探讨WT1基因表达水平与急性髓细胞性白血病 (AML)预后的关系。方法　用地高辛标记的脱氧三磷酸尿苷 (DIG 11 dUTP)掺入逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)的方法检测 ,用KG 1细胞建立WT1表达的半定量稀释曲线 ,分析5 3例AML及 2 1例非恶性疾患病人骨髓中WT1基因的表达。结果　倍比稀释的KG 1细胞WT1基因表达水平与稀释倍数有良好的线性关系 ;将WT1基因与 β actin基因的表达水平之比 <0 16定为 (- ) ,≥ 0 16～ <0 6为 (+ ) ,≥ 0 6～ <1 0为 ( ) ,≥ 1 0为 ( )。 2 1例非恶性疾患病人骨髓中WT1基因均为阴性 ,41例初治AML病人WT1基因表达阳性率为 92 7% ,随着WT1基因表达水平的升高 ,完全缓解 (CR)率有明显下降的趋势 (<0 6及≥ 0 6组比较P <0 0 2 5 )。CR后WT1基因表达水平明显下降 ,复发后又显著升高。结论　DIG掺入RT PCR半定量检测WT1基因表达的方法客观、准确 。 展开更多
关键词 急性髓细胞性白血病 地高辛 半定量rt-pcr WT1基
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大劣按蚊AdS7基因的克隆及分析
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作者 郝宏兴 黄复生 +2 位作者 段建华 况明书 王英 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期476-478,共3页
目的　克隆AdS7基因cDNA序列 ,为大劣按蚊基因定量研究提供内参照。方法　采用RT PCR扩增、TA克隆技术获得AdS7cDNA部分序列 ,标记地高辛AdS7探针 ,从大劣按蚊cDNA文库中筛选得到AdS7全长克隆 ,以半定量RT PCR方法研究血餐和约氏疟原虫... 目的　克隆AdS7基因cDNA序列 ,为大劣按蚊基因定量研究提供内参照。方法　采用RT PCR扩增、TA克隆技术获得AdS7cDNA部分序列 ,标记地高辛AdS7探针 ,从大劣按蚊cDNA文库中筛选得到AdS7全长克隆 ,以半定量RT PCR方法研究血餐和约氏疟原虫感染对其表达水平的影响。结果　从大劣按蚊cDNA克隆得到长 464bp的AdS7基因cD NA部分序列 ,从大劣按蚊cDNA文库筛选获得了长 871bp的AdS7基因全长克隆 ,大劣按蚊吸血和感染约氏疟原虫后 2 4h ,AdS7表达水平没有显著变化。 展开更多
关键词 AdS7 基因克隆 半定量rt-pcr
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蓖麻毒蛋白前体基因的时空表达模式分析
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作者 金璐 邢超 +2 位作者 刘阳 莫祎 阮颖 《作物研究》 2014年第3期254-258,共5页
蓖麻毒蛋白（Ricin）是一类异二聚体复合物，包括一条具有催化活性的A链和具有半乳糖识别功能的B链，具有剧毒性。以RC2蓖麻为材料，利用半定量PCR和定量PCR技术分析蓖麻毒蛋白前体基因的时空表达模式。结果表明，在苗期蓖麻各组织中蓖... 蓖麻毒蛋白（Ricin）是一类异二聚体复合物，包括一条具有催化活性的A链和具有半乳糖识别功能的B链，具有剧毒性。以RC2蓖麻为材料，利用半定量PCR和定量PCR技术分析蓖麻毒蛋白前体基因的时空表达模式。结果表明，在苗期蓖麻各组织中蓖麻毒蛋白前体基因不表达，而在成熟开花植株的各组织部位中，只在根和种子中有表达；而在种子发育过程中，授粉后1～2d内，子房中蓖麻毒蛋白前体基因有表达，之后伴随种子生长发育特异性表达消失；授粉后24 d，蓖麻毒蛋白前体基因再次表达，并且表达量快速增高。这一规律的发现为进一步研究蓖麻毒蛋白合成积累以及选育低毒蓖麻提供了重要参考。 展开更多
关键词 蓖麻 毒蛋白前体基因 半定量pcr 定量pcr 基因表达
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百合S-RNase基因cDNA全长克隆及表达分析
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作者 丁榕 王杰 +2 位作者 赵和文 张克中 崔金腾 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第9期649-655,共7页
[目的]克隆百合S-RNase基因cDNA全长序列并进行表达信息分析,为百合不亲和机制的研究奠定基础。[方法]以东方百合(Lilium oriental)品种‘Justina’为材料,通过RACE技术克隆百合S-RNase基因的cDNA全长序列;采用半定量RT-PCR技术对百合... [目的]克隆百合S-RNase基因cDNA全长序列并进行表达信息分析,为百合不亲和机制的研究奠定基础。[方法]以东方百合(Lilium oriental)品种‘Justina’为材料,通过RACE技术克隆百合S-RNase基因的cDNA全长序列;采用半定量RT-PCR技术对百合同一时期不同器官的S-RNase基因的表达量进行定性分析;并通过NCBI在线工具以及ProtParam、SignalP、MEGA5对其序列进行生物信息学分析。[结果]克隆基因全长为766bp,开放阅读框为672bp,推导编码223个氨基酸;其半定量分析显示表达量由高到低的器官依次为花瓣、叶、茎、大量分泌液时的花柱、无分泌液时的花柱、鳞茎。通过生物信息学分析发现,该蛋白为一个不稳定的亲水蛋白、存在信号肽序列,属于分泌型蛋白。具有典型的RNase T2家族蛋白保守结构域特征,二级结构富含环形结构。在已知的S-RNase基因中,与野茶树的亲缘关系最近。[结论]获得百合S-RNase基因cDNA全长序列及在同一时期不同器官的S-RNase基因的表达量。 展开更多
关键词 百合 S-RNASE基因 克隆 半定量
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