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石蜡组织DNA提取方法的比较 被引量：3
1
作者 周敏 谢海龙 +1 位作者 马恒辉 周晓军 《医学研究生学报》 CAS 2003年第10期726-729,共4页
目的 :选择一种高效、简便、稳定的从蜡块中提取基因组DNA进行聚合酶链反应 (PCR)扩增的方法。　方法 :分别采用四种不同的方法从石蜡组织中提取DNA ,比较所提取的DNA质量 ,PCR扩增cyclinD1基因的效率。对其中的一种方法进行了改良。　... 目的 :选择一种高效、简便、稳定的从蜡块中提取基因组DNA进行聚合酶链反应 (PCR)扩增的方法。　方法 :分别采用四种不同的方法从石蜡组织中提取DNA ,比较所提取的DNA质量 ,PCR扩增cyclinD1基因的效率。对其中的一种方法进行了改良。　结果 :四种方法提取的DNA质量都能达到相关分子生物学实验的要求 ,但在操作程序、扩增效率等方面存在差异。　结论 :微波脱蜡法操作简单、快速、扩增成功率高 ,适合于应用PCR技术对病理标本进行相关研究。 展开更多
关键词 DNA提取 石蜡组织 聚合酶链反应 CYCLIN DI基因
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间接酶标抗体染色法检测石蜡切片中鸡肾型传染性支气管炎病毒的研究 被引量：4
2
作者 许金俊 王宝安 +3 位作者 许益民 万洪全 吴力力 朱坤熹 《中国兽医科技》 CSCD 1999年第8期5-8,共4页
以抗鸡肾型传染性支气管炎病毒（ＮＩＢＶ）Ｔ株的鼠源超免疫血清为一级抗体，辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的羊抗鼠ＩｇＧ为二级抗体，建立了检测石蜡切片中ＮＩＢＶ抗原的间接酶标抗体染色技术。经过特异性试验和阻断性试验，表明该... 以抗鸡肾型传染性支气管炎病毒（ＮＩＢＶ）Ｔ株的鼠源超免疫血清为一级抗体，辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记的羊抗鼠ＩｇＧ为二级抗体，建立了检测石蜡切片中ＮＩＢＶ抗原的间接酶标抗体染色技术。经过特异性试验和阻断性试验，表明该方法具有高度的敏感性和特异性。应用该法对人工感染ＮＩＢＶＣ９００１株的鸡气管和肾石蜡切片中的病毒抗原进行了检测，结果：气管从感染后０．５～１１ｄ，肾从感染后１～２０ｄ，均检测到病毒抗原，阳性染色主要集中于气管粘膜上皮细胞和肾小管上皮细胞浆内。 展开更多
关键词 鸡 NIB NIBV 石蜡间片 间接酶标 抗体染色法
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福尔马林固定石蜡包埋组织中DNA提取 被引量：32
3
作者 谭卓毅 丁梅 王保捷 《法医学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期455-458,共4页
由于甲醛介导的DNA损伤和石蜡对DNA提取的阻碍作用,使得常规DNA提取方法很难从福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中获取高质量的DNA。近年来,众多学者的研究表明,通过改良预处理方法,优化蛋白酶K消化作用,简化DNA提取步骤,纯化DNA提取物... 由于甲醛介导的DNA损伤和石蜡对DNA提取的阻碍作用,使得常规DNA提取方法很难从福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中获取高质量的DNA。近年来,众多学者的研究表明,通过改良预处理方法,优化蛋白酶K消化作用,简化DNA提取步骤,纯化DNA提取物等,可以有效提高FFPET中提取的DNA质量,为FFPET的DNA分析奠定了基础。 展开更多
关键词 福尔马林固定 石蜡包埋组织 DNA提取
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肺癌石蜡包埋组织及新鲜标本组织芯片制备方法学探讨 被引量：17
4
作者 韩瑞刚 张建中 +4 位作者 黄英武 郑燕华 赵尔增 周金莲 张卫国 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期404-407,共4页
目的 :探讨和建立石蜡包埋组织和新鲜冷冻标本制备组织芯片的方法 ,以及在基因表达分析中的应用。方法 :选取肺癌石蜡包埋组织 90例 ,新鲜液氮冻存肺癌及癌旁肺组织 2 0例 ,常规切片HE染色下确定穿刺部位 ,石蜡包埋组织芯片制作按Konone... 目的 :探讨和建立石蜡包埋组织和新鲜冷冻标本制备组织芯片的方法 ,以及在基因表达分析中的应用。方法 :选取肺癌石蜡包埋组织 90例 ,新鲜液氮冻存肺癌及癌旁肺组织 2 0例 ,常规切片HE染色下确定穿刺部位 ,石蜡包埋组织芯片制作按Kononem等方法 (1998) ,每例穿取 0 6mm组织柱 2条 ,制备 180点阵组织芯片 ;而新鲜组织芯片参考Fejzo等方法 (2 0 0 1) ,并略作改良 ,制备 5 0点阵组织芯片。所有组织芯片模块 ,经 4 μm切片、常规组织学染色和免疫组化染色 ,以评价其在形态学及基因表达分析中应用的可行性。结果 :180点阵石蜡包埋肺癌组织芯片 ,组织排列整齐 ,HE染色后组织形态可观察率在 98%以上 ;p5 3、c myc、bcl 2、bax和Ki 6 7等免疫组化染色后 ,肺癌组织可见不同程度的抗原表达 ,组织点阵的形态可观测率在 89%～ 95 %之间。新鲜组织芯片经HE染色后 ,形态可观测率和基因表达可分析率在 70 %左右。结论 :手工法组织芯片制备简便易行 ,使用组织少 ,不破坏原蜡块 ;实验均一性、可比性好 ,且节省试剂。与常规组织切片相比 ,2点 0 6mm组织可以获得原蜡块 95 %以上的信息 ,完全可以用于组织形态学和蛋白水平上的基因表达分析 ;新鲜组织芯片技术已经初步建立 ,但尚有待于进一步完善制备技术和mRNA分析方法。 展开更多
关键词 肺癌 石蜡包埋组织 新鲜标本组织芯片 制备 方法学
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石蜡包埋软组织肉瘤中融合基因表达的检测及其诊断学价值 被引量：15
5
作者 李锋 李新霞 +9 位作者 常彬 庞丽娟 杨江华 胡文浩 陆天才 李洪安 王坚 陆红芬 孙孟红 施达仁 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第18期1518-1522,共5页
目的　探讨检测软组织肉瘤组织中特异性染色体易位融合基因表达的诊断学意义。方法　运用一步法RT PCR技术检测 10 5例石蜡包埋软组织肉瘤 ,包括 30例滑膜肉瘤、15例横纹肌肉瘤(RMS)、2 5例尤因肉瘤 /外周原始神经外胚层瘤 (ES/pPNET)... 目的　探讨检测软组织肉瘤组织中特异性染色体易位融合基因表达的诊断学意义。方法　运用一步法RT PCR技术检测 10 5例石蜡包埋软组织肉瘤 ,包括 30例滑膜肉瘤、15例横纹肌肉瘤(RMS)、2 5例尤因肉瘤 /外周原始神经外胚层瘤 (ES/pPNET)、12例隆突性皮肤纤维肉瘤 (DFSP)、14例腺泡状软组织肉瘤 (ASPS)、3例平滑肌肉瘤 (LMS)、2例恶性纤维组织细胞瘤 (MFH)、2例纤维肉瘤和2 0例对照组肿瘤组织中特异性染色体易位融合基因SSX1/SSX2 SYT、PAX3/PAX7 FKHR、EWS FLI1、COL1A1 PDGFB、ASPL TFE3的表达。结果　 30例滑膜肉瘤中 ,2 8例 ( 93 3% )检出SYT SSX融合基因的表达 ,其中 14例表达SYT SSX1,9例表达SYT SSX2 ;6例腺泡型RMS 4例表达PAX3/PAX7 FKHR ,其余9例胚胎型和多形性RMS均无PAX FKHR表达 ;80 % ( 2 0 / 2 5 )的ES/pPNET中表达EWS FLI1或EWS ERG ;12例DFSP中 8例 ( 6 7% )检出COL1A1 PDGFB融合基因的表达 ,14例ASPS中 10例 ( 71% )检出融合基因ASPL TFE3的表达。 3例LMS、2例MFH、2例纤维肉瘤和对照组 2 0例肿瘤组织中均未检出上述易位融合基因的表达。结论　软组织肉瘤特异性染色体易位融合基因的表达是其分子诊断的可靠指标 ,一步法RT PCR技术检测染色体易位融合基因为临床软组织肉瘤疑难病例的诊断? 展开更多
关键词 表达 融合基因 软组织肉瘤 检出 易位 诊断学 石蜡包埋 一步法RT-PCR 性染色体 特异性
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石蜡包埋组织中4种DNA提取方法的比较研究 被引量：8
6
作者 张旭垠 易晓芳 +1 位作者 丁景新 丰有吉 《中国妇幼健康研究》 2007年第4期291-293,共3页
目的探讨石蜡包埋组织中提取DNA的简易有效方法。方法取我院2003年肿瘤细胞减灭术切除的10%甲醛固定石蜡包埋的上皮性卵巢癌标本20例,分别以一步法、氯化钠盐析法、酚氯仿抽提法、试剂盒法提取其DNA,然后进行电泳和聚合酶链反应扩增分... 目的探讨石蜡包埋组织中提取DNA的简易有效方法。方法取我院2003年肿瘤细胞减灭术切除的10%甲醛固定石蜡包埋的上皮性卵巢癌标本20例,分别以一步法、氯化钠盐析法、酚氯仿抽提法、试剂盒法提取其DNA,然后进行电泳和聚合酶链反应扩增分析。结果酚氯仿抽提法所得样本DNA的产量为55.12±8.81μg,氯化钠盐析法为58.39±5.76μg,两者比较无显著差异(P>0.05),但分别和另外两组相比有显著差异(P<0.001);酚氯仿抽提法所得样本DNA的OD260/OD280比值为1.81±0.16,氯化钠盐析法为1.84±0.18,两者比较无显著差异(P>0.05),但分别和另外两组相比有显著差异(P<0.01);酚氯仿抽提法,氯化钠盐析法所得DNA产量和质量均高于一步法和试剂盒法。结论蛋白酶K消化氯化钠盐析法简便快捷,不用接触有毒的化学药品,是理想的石蜡包埋组织DNA提纯方法。 展开更多
关键词 DNA提取 聚合酶链反应 石蜡包埋组织 氯化钠盐析法
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两种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较 被引量：9
7
作者 张晓萍 刘辉 +2 位作者 袁健 冯振兴 李勇 《兰州大学学报（医学版）》 CAS 2009年第1期35-37,共3页
目的比较两种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响。方法选取石蜡包埋的病理组织24例,采用二甲苯脱蜡法和改良TES水浴法提取DNA。通过对所提DNA的浓度、纯度及完整性的检测,比较两种DNA提取方法的优劣。结果二甲苯脱蜡法提取样品D_(260)/D... 目的比较两种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响。方法选取石蜡包埋的病理组织24例,采用二甲苯脱蜡法和改良TES水浴法提取DNA。通过对所提DNA的浓度、纯度及完整性的检测,比较两种DNA提取方法的优劣。结果二甲苯脱蜡法提取样品D_(260)/D_(280)比值在1.6～1.8之间的为62.5%,电泳条带清晰可见;改良TES水浴法提取样品D_(260)/D_(280)比值在1.6～1.8之间的为41.2%,电泳条带模糊不清。结论二甲苯脱蜡法提取DNA简单快速,需要的组织样品少,是一个值得推荐的石蜡包埋组织DNA的提取方法。 展开更多
关键词 石蜡包埋组织 DNA 比较
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石蜡包埋淋巴组织三种微量DNA提取方法的比较 被引量：6
8
作者 齐宗利 韩西群 +2 位作者 黄宏宇 朱梅刚 赵彤 《中国实验诊断学》 2006年第4期351-355,共5页
目的为寻找一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法，本研究比较了三种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响。方法选取淋巴相关组织的蜡块21例。三种DNA提取方法分别是简单消化煮沸法，酚／氯仿提纯法和试剂盒法。通过提取DNA的浓... 目的为寻找一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法，本研究比较了三种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响。方法选取淋巴相关组织的蜡块21例。三种DNA提取方法分别是简单消化煮沸法，酚／氯仿提纯法和试剂盒法。通过提取DNA的浓度和纯度、PCR扩增保守序列pglobin等方法，比较三种DNA提取方法的优劣。结果试剂盒法提取样品OD260／OD280平均比值位于1．6～1．8之间；提纯法位于1．3—1．5之间；简单消化煮沸法位于1，2—1．3之间。三种方法中，试剂盒法提取的DNA最为稳定。以3种DNA提取方法所获取DNA为模板，PCR扩增阳性率无统计学差异。结论从实用、快速、经济的角度综合分析，简单消化煮沸法简单快速，需要的组织样品少，是一个值得推荐的石蜡组织DNA提取方法。 展开更多
关键词 石蜡包埋组织 PCR DNA提取
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石蜡包埋组织中DNA提取方法的对比研究 被引量：8
9
作者 宋丽新 高兴华 +1 位作者 张士发 宋芳吉 《中国麻风皮肤病杂志》 2006年第4期268-269,共2页
目的：探讨石蜡包埋组织中提取DNA的简易有效方法。方法：将58份10％福尔马林固定、石蜡包埋组织标本按保存时间分为1-5年组和6～10年组，采用微卫星引物PCR扩增技术对“一步法”和酚氯仿法进行DNA检出率的比较研究。结果：58份标本中... 目的：探讨石蜡包埋组织中提取DNA的简易有效方法。方法：将58份10％福尔马林固定、石蜡包埋组织标本按保存时间分为1-5年组和6～10年组，采用微卫星引物PCR扩增技术对“一步法”和酚氯仿法进行DNA检出率的比较研究。结果：58份标本中“一步法”和酚氯仿法总阳性数分别为45份和32份（P〈0．05）；其中35份保存1～5年标本中，“一步法”和酚氯仿法阳性数分别为29份和24份（P〉0．05）；23份保存6～10年标本中，“一步法”和酚氯仿法阳性数分别为16份和8份（P〈0．05）。结论：“一步法”标本用量少、DNA检出率高且简便易行，尤其对保存较长时问的石蜡标本是一种值得推荐的方法。 展开更多
关键词 石蜡包埋组织 聚合酶链反应 DNA
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PCR技术检测输卵管异位妊娠石蜡包埋组织支原体感染 被引量：4
10
作者 刘德莉 贺子秋 +2 位作者 汪佩鑫 张慧娟 吴娟娟 《中国优生与遗传杂志》 2000年第2期23-25,共3页
目的 :建立一种简便有效的石蜡包埋组织脱蜡及DNA提取方法 ,探讨支原体感染与输卵管异位妊娠的发生是否有关。方法 :应用套式聚合酶链反应技术 ,对 5 2例输卵管异位妊娠石蜡包埋组织 (病例组 )以及 2 0例输卵管结扎切除的石蜡包埋组织 ... 目的 :建立一种简便有效的石蜡包埋组织脱蜡及DNA提取方法 ,探讨支原体感染与输卵管异位妊娠的发生是否有关。方法 :应用套式聚合酶链反应技术 ,对 5 2例输卵管异位妊娠石蜡包埋组织 (病例组 )以及 2 0例输卵管结扎切除的石蜡包埋组织 (对照组 )进行PCR检测。结果 :病理组解脲支原体 (UU)与生殖支原体 (Mg)阳性率分别为 38.5 % ( 2 0 / 5 2 )及 5 .8% ( 3/ 5 2 ) ,阳性率为 44 .3 % ( 2 3/ 5 2 ) ;对照组UU与Mg阳性率分别为 15 % ( 3/ 2 0 )及 0 % ( 0 / 2 0 ) ,阳性率 15 % ( 3/ 2 0 )。两组支原体阳性率经卡方检验有显著性差别 (x2 =5 .35 ,P <0 .0 2 5 )。结论 :输卵管异位妊娠石蜡组织中存在支原体感染 ,并且支原体感染与输卵管异位妊娠的发生有一定关系。水浴脱蜡及NAI沉淀DNA方法比传统的二甲苯脱蜡以及苯酚抽提DNA有较多优点 :无毒无害易于操作 ,方法稳定重复性好 。 展开更多
关键词 支原体感染 异位妊娠 石蜡包埋组织 PCR
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贲门胃底癌中CIP2A mRNA表达与HER-2基因的扩增及其意义 被引量：4
11
作者 张洪兰 陈昊 +5 位作者 张春芳 张昶 齐冬雪 李伟 刘新丽 刘华 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第24期4032-4036,共5页
目的检测贲门胃底癌中CIP2A mRNA表达与HER-2基因的扩增并探讨其相关性和临床意义。方法采用半定量RT-PCR法检测47例贲门胃底癌石蜡包埋组织中CIP2A mRNA的转录水平,荧光原位杂交方法(FISH)检测HER-2基因的扩增情况,统计分析CIP2A mRNA... 目的检测贲门胃底癌中CIP2A mRNA表达与HER-2基因的扩增并探讨其相关性和临床意义。方法采用半定量RT-PCR法检测47例贲门胃底癌石蜡包埋组织中CIP2A mRNA的转录水平,荧光原位杂交方法(FISH)检测HER-2基因的扩增情况,统计分析CIP2A mRNA与HER-2扩增情况的相关性,同时了解二者与贲门胃底癌患者临床病理参数的关系。另选取47例对应的癌旁组织纳入半定量RT-PCR方法检测,并统计分析CIP2A mRNA在癌和癌旁组织中转录水平的差异。结果 CIP2A mRNA高水平转录与肠型胃癌、较高的分化程度、较大的肿瘤浸润深度、较高的TNM分期、血管癌栓、神经侵犯等临床病理参数相关(P <0.05);HER-2扩增与肠型胃癌、较高的分化程度、神经侵犯等临床病理参数相关(P <0.05)。CIP2AmRNA高水平转录与HER-2扩增呈正相关。贲门胃底癌组织中CIP2A m RNA的转录水平显著高于其对应的癌旁组织(P <0.05)。结论 CIP2A基因在贲门胃底癌组织中高表达,与患者的恶性临床病理参数密切相关。CIP2A基因可能成为贲门胃底癌患者新的分子标志物和治疗靶点,其可受到HER-2正调节。 展开更多
关键词 贲门胃底癌 CIP2A HER-2 石蜡包埋组织 预后 RT-PCR FISH
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抗酸染色与PCR-荧光探针法在石蜡包埋组织结核分枝杆菌检测的比较 被引量：4
12
作者 吴俊峰 任淑婷 《智慧健康》 2021年第1期34-37,共4页
目的比较抗酸染色与PCR-荧光探针法检测在福尔马林固定、石蜡包埋组织中结核分枝杆菌(Mycobaeterium tuberculosis,MTB)检测的应用。方法收集西京医院2018年1月至2019年10月共543例疑似结核患者,所有组织标本均经10%中性福尔马林固定,... 目的比较抗酸染色与PCR-荧光探针法检测在福尔马林固定、石蜡包埋组织中结核分枝杆菌(Mycobaeterium tuberculosis,MTB)检测的应用。方法收集西京医院2018年1月至2019年10月共543例疑似结核患者,所有组织标本均经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋、切片,HE染色,行抗酸染色及PCR-荧光探针法检测。结果 543例疑似结核患者的石蜡包埋组织中,抗酸法检测MTB阳性58例,阳性率为10.68%,PCR-荧光探针法检测MTB阳性211例,阳性率为38.86%,两者阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05),两种方法符合率为69.98%。其中明确临床诊断结果者187例,PCR-荧光探针法Youden指数(J=0.5245)较抗酸染色法Youden指数(J=0.2095)高。结论 PCR-荧光探针法检测石蜡包埋组织中的结核分枝杆菌,阳性检出率显著高于抗酸染色法,且诊断价值高,能够为临床提供可靠的诊断依据。 展开更多
关键词 抗酸染色 PCR-荧光探针法 石蜡包埋组织 结核分枝杆菌
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石蜡包埋组织切片原位核酸杂交研究 被引量：2
13
作者 任立群 赵志涛 +2 位作者 孙波 李广生 朴松旭 《白求恩医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期235-237,共3页
目的 :探讨石蜡包埋组织切片的原位核酸杂交方法 ,以检测克山病 ( KSD)尸检心肌中的RNA。方法 :应用生物素标记的人工合成寡核苷酸探针 ,对 72例心肌石蜡包埋组织切片进行原位核酸杂交。结果 :各型克山病心肌石蜡组织切片的阳性杂交信号... 目的 :探讨石蜡包埋组织切片的原位核酸杂交方法 ,以检测克山病 ( KSD)尸检心肌中的RNA。方法 :应用生物素标记的人工合成寡核苷酸探针 ,对 72例心肌石蜡包埋组织切片进行原位核酸杂交。结果 :各型克山病心肌石蜡组织切片的阳性杂交信号为 80 %～ 87.9% ,而正常对照仅为 14.3%。结论 :应用人工合成寡核苷酸之原位核酸杂交技术 ,对长期保存的石蜡组织进行回顾性研究是可行的。 展开更多
关键词 原位核酸杂交 寡核苷酸探针 石蜡包埋组织 肠道病毒 克山病 KSD RNA
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从石蜡包埋组织高效提取RNA的优化及Shh的RT-PCR检测 被引量：4
14
作者 曹慧仁 张元鑫 张红卫 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期101-103,共3页
从石蜡包埋组织中提取高质量的RNA是对肿瘤实体组织进行分子生物学研究的重要方法之一 .利用人的胃肠道肿瘤材料 ,通过蛋白酶K消化 ,经酚 氯仿、异戊醇抽提去蛋白及异丙醇沉淀 ,优化了 1套从石蜡包埋组织中提取RNA的方法 ,提高了所提取... 从石蜡包埋组织中提取高质量的RNA是对肿瘤实体组织进行分子生物学研究的重要方法之一 .利用人的胃肠道肿瘤材料 ,通过蛋白酶K消化 ,经酚 氯仿、异戊醇抽提去蛋白及异丙醇沉淀 ,优化了 1套从石蜡包埋组织中提取RNA的方法 ,提高了所提取RNA的质量和产量 .所得RNA经电泳检测 ,并进行RT PCR扩增Shh(sonichedgehog)信号分子 ,结果良好 .故认为此提取RNA的方法值得推广 . 展开更多
关键词 RNA提取 石蜡包埋 蛋白酶K
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石蜡包埋骨组织切片核酸原位杂交研究 被引量：1
15
作者 刘少华 程刚 +4 位作者 李声伟 田卫东 刘磊 魏世成 陈伟辉 《临床口腔医学杂志》 2002年第5期347-348,共2页
目的 探讨石蜡包埋骨组织切片的核酸原位杂交方法,以检测下颌骨骨折愈合过程中骨组织内整合素β_1mRNA的表达。方法 用地高辛标记的整合素β_1mRNA的寡核苷酸探针,对36只新西兰大耳白兔下颌骨骨折后不同愈合时期的骨组织标本石蜡切片进... 目的 探讨石蜡包埋骨组织切片的核酸原位杂交方法,以检测下颌骨骨折愈合过程中骨组织内整合素β_1mRNA的表达。方法 用地高辛标记的整合素β_1mRNA的寡核苷酸探针,对36只新西兰大耳白兔下颌骨骨折后不同愈合时期的骨组织标本石蜡切片进行核酸原位杂交,观察整合素β_1mRNA的时空变化规律。结果 在骨折愈合过程中的不同时期,整合素β_1mRNA在骨组织中的各种细胞的细胞质与细胞核中均呈阳性表达,骨折7天后整合素β_1mRNA表达增强,14～30天最强,90天后接近正常。结论 应用寡核苷酸探针进行核酸杂交技术,对于石蜡包埋骨组织的mRNA进行研究是可行的。 展开更多
关键词 石蜡包埋骨组织切片 核酸原位杂交 寡核苷酸探针 骨组织 下颌骨骨折
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PCR反应体系中Mg^(2+)浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响 被引量：2
16
作者 盖宝东 杨新宇 +6 位作者 赵吉生 张学文 森隆弘 滕盛启成 大内宪明 里见进 张德恒 《中国实验诊断学》 2004年第4期384-386,共3页
目的　探讨PCR反应体系中Mg2 + 浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响。方法　从石蜡包埋组织中提取DNA ,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 13外显子 ,分析PCR反应体系中Mg2 + 浓度分别为1 5mmol L、2 0mmol L、2 5mmol L... 目的　探讨PCR反应体系中Mg2 + 浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响。方法　从石蜡包埋组织中提取DNA ,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 13外显子 ,分析PCR反应体系中Mg2 + 浓度分别为1 5mmol L、2 0mmol L、2 5mmol L、3 0mmol L、4 0mmol L时PCR反应产物中目的基因含量及对PCR产物基因序列测定的影响。结果　 5种条件扩增的目的基因经纯化后DNA含量分别为 4 8ng μl(1 5mmol L)、2 6 6ng μl(2 0mmol L)、4 0 2ng μl(2 5mmol L)、38 5ng μl(3 0mmol L)、4 4 5ng μl(4 0mmol L) ;Mg2 + 浓度为 4 0mmol L时PCR产物电泳图见到多条非特异性条带 ;Mg2 + 浓度为 2 5mmol L时PCR产物直接测序反应曲线峰图背景噪音 (噪峰 )减小 ,信噪比 (信号 噪音 )增高。结论　从石蜡包埋组织中提取DNA行PCR反应 ,Mg2 + 浓度为 2 5mmol L时反应特异性强 ,PCR产物质量高。较高的Mg2 + 浓度可以增加PCR反应产量 。 展开更多
关键词 MG^2+ 石蜡包埋组织 DNA提取 多聚酶链反应 DNA序列测定
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石蜡淋巴瘤组织中IgH FR3区基因重排引物分析 被引量：3
17
作者 齐宗利 张宝 +3 位作者 韩西群 霍霞 朱梅刚 赵彤 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期91-95,共5页
目的利用生物信息学方法分析免疫球蛋白重链(IgH)框架区(FR3)基因重排引物并探讨其在石蜡包埋非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织中应用价值。方法通过ClustalW软件比较44条有效的IgH可变区和6条J区的基因片段,选取IgHFR3区3对(P1,P2,P3)基因重排... 目的利用生物信息学方法分析免疫球蛋白重链(IgH)框架区(FR3)基因重排引物并探讨其在石蜡包埋非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织中应用价值。方法通过ClustalW软件比较44条有效的IgH可变区和6条J区的基因片段,选取IgHFR3区3对(P1,P2,P3)基因重排引物,其中,P2为改进的引物。另选一对TCRγ引物作为T细胞淋巴瘤重排引物,通过PCR扩增,检测经形态学及免疫组织化学确诊的144例石蜡包埋组织标本,包括113例B细胞淋巴瘤、24例T细胞淋巴瘤和7例淋巴结反应性增生组织。以DG75淋巴瘤细胞系DNA作为对照组。结果引物对P1、P2、P3在B细胞淋巴瘤检出阳性率分别为71.7%(81/113),82.3%(93/113)和76.1%(86/113),三者检出率差异无统计学意义;在T细胞淋巴瘤检出率分别12.5%(3/24)、12.5%(3/24)、16.7%(4/24)。将P1和P2引物组合分析,B细胞淋巴瘤阳性检出率可以达到92.3%。以上重排引物在7例反应性淋巴结中均未检出。结论3对IgHFR3区中,新改进的P2引物在B细胞淋巴瘤中的检出率最高(82.3%)。2对IgHFR3区引物联合检测可明显提高石蜡组织中B细胞淋巴瘤的检出率。 展开更多
关键词 淋巴瘤 B淋巴细胞 基因重排 聚合酶链反应 石蜡包埋
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IgH不同区域基因重排引物的分析及在石蜡淋巴瘤诊断中的应用 被引量：2
18
作者 齐宗利 张宝 +2 位作者 韩西群 朱梅刚 赵彤 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1964-1967,共4页
目的通过生物信息学方法分析并优化免疫球蛋白重链(IgH)不同框架(FR)区域基因重排的引物,探索其对石蜡包埋的淋巴瘤组织基因重排检测中的应用。方法通过Clustal W软件比较44条有效的IgH可变区和6条J区的基因片段,选取3对(IgHFR1、FR2、... 目的通过生物信息学方法分析并优化免疫球蛋白重链(IgH)不同框架(FR)区域基因重排的引物,探索其对石蜡包埋的淋巴瘤组织基因重排检测中的应用。方法通过Clustal W软件比较44条有效的IgH可变区和6条J区的基因片段,选取3对(IgHFR1、FR2、FR3区各一对,分别为P1c,P2A,P31)IgH基因重排引物作为B细胞基因重排引物。另选一对TCRγ引物作为T细胞基因重排引物。通过PCR扩增,检测经形态学及免疫组织化学确诊的101例(80例B细胞淋巴瘤、14例T细胞淋巴瘤和7例淋巴结反应性增生组织)石蜡包埋组织标本的基因重排状况。以DG75、Jurkat淋巴瘤细胞系DNA作为B和T细胞淋巴瘤基因重排的阳性对照,以反应性增生组织DNA作为阴性对照。结果IgHFR1、FR2和FR3区域引物对80例B细胞淋巴瘤的阳性检出率分别为37.5%(30/80)、52.5%(42/80)和70.0%(56/80),在14例T细胞淋巴瘤中均为7.1%,三者的检出率两两之间差异有显著性;IgHFR3区和IgHFR2区引物的组合可将其检出率提高到83.9%。以上引物在7例反应性淋巴结中均未检出阳性。结论IgH不同区域引物比较,FR3区引物检出率明显高于FR1区和FR2区。FR3区和FR2区引物联合检测可明显提高石蜡组织中B细胞淋巴瘤基因重排的检出率。 展开更多
关键词 免疫球蛋白重链 基因重排 B细胞淋巴瘤 聚合酶链反应 石蜡组织
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甲醛固定石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织蛋白提取方法的比较 被引量：1
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作者 焦叶林 赵云岗 +3 位作者 刘其伟 阮豪杰 高社干 齐义军 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期141-145,共5页
目的探讨从甲醛固定石蜡包埋(FFPE)食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中高效率提取蛋白质的方法。方法6种裂解液和100℃、105℃两种条件分别提取8例甲醛固定石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织蛋白,Bradford法测定蛋白浓度、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺... 目的探讨从甲醛固定石蜡包埋(FFPE)食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中高效率提取蛋白质的方法。方法6种裂解液和100℃、105℃两种条件分别提取8例甲醛固定石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织蛋白,Bradford法测定蛋白浓度、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blotting和免疫组织化学评价各方法提取组织蛋白的效率和质量,不同蛋白沉淀方法纯化提取蛋白。结果Laemmli裂解液(4号)100℃处理提取癌组织蛋白效率最高,Western blotting检测癌组织中14-3-3σ蛋白表达与免疫组织化学检测结果一致;2倍体积乙腈(含0.1%三氟乙酸)沉淀FFPE提取蛋白能够降低蛋白电泳背景。结论Laemmli裂解液100℃处理可高效提取的甲醛固定石蜡包埋组织蛋白且适用于Western blotting检测蛋白标志物分子,乙腈蛋白沉淀法能够进一步去除残余的交联蛋白质分子。 展开更多
关键词 甲醛固定 石蜡包埋 蛋白提取 蛋白纯化 免疫印迹法
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用RT-PCR技术检测石蜡包埋组织中的肠道病毒RNA 被引量：1
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作者 李相军 任立群 李广生 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期574-576,共3页
目的 :应用逆转录 PCR技术 ( RT- PCR)在石蜡包埋的心肌组织切片中检测肠道病毒 (柯萨奇病毒 B3 ,CVB3 ) RNA。方法 :用 Trizol法从石蜡包埋的心肌组织切片中提取 CVB3 RNA,用适当的引物合成 c DNA第一链 ,从中取出适量进行聚合酶链反应... 目的 :应用逆转录 PCR技术 ( RT- PCR)在石蜡包埋的心肌组织切片中检测肠道病毒 (柯萨奇病毒 B3 ,CVB3 ) RNA。方法 :用 Trizol法从石蜡包埋的心肌组织切片中提取 CVB3 RNA,用适当的引物合成 c DNA第一链 ,从中取出适量进行聚合酶链反应 ( PCR)。PCR结果用琼脂糖凝胶电泳检测并将 PCR产物做核苷酸序列分析。阳性对照采用 CVB3 感染的人羊膜细胞。结果 :用RT- PCR技术可扩增出一条约 5 0 0 bp( 5 4 0 bp)的核苷酸片段 ,测序结果表明是 CVB3 的一个片段。结论 :RT- PCR技术应用于长期保存的石蜡包埋的组织切片进行肠道病毒的检测可获得较满意结果 ,可将 RT- 展开更多
关键词 RT-PCR 检测 石蜡包埋组织 肠道病毒
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