目的研究淫羊藿苷(ICA)对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、分化的影响,以及骨形态发生蛋白2(BMP-2)/Smads信号通路在成骨细胞增殖、分化中的作用。方法用含不同浓度ICA(0、10、20、40 ng/ml)的完全培养液分别培养MC3T3-E1细胞48、72...目的研究淫羊藿苷(ICA)对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、分化的影响,以及骨形态发生蛋白2(BMP-2)/Smads信号通路在成骨细胞增殖、分化中的作用。方法用含不同浓度ICA(0、10、20、40 ng/ml)的完全培养液分别培养MC3T3-E1细胞48、72、96 h。HE染色法观察ICA对MC3T3-E1细胞形态的影响;分别用CCK-8及碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测ICA对MC3T3-E1细胞增殖活性和细胞ALP活性的影响;Western blot检测ICA对MC3T3-E1细胞BMP-2、骨形态发生蛋白2受体(BMPR-2)、Smad4和Smad1/5/8蛋白表达水平的影响。向细胞培养液中加入BMP抑制剂头蛋白(Noggin,100 ng/ml)阻断BMP-2/Smads信号通路后,再次检测上述各实验指标的变化。结果 ICA对MC3T3-E1细胞形态无明显影响;ICA(10、20 ng/ml)可增强MC3T3-E1细胞增殖活性( P 均<0.01)。ICA(10、20 ng/ml)可增强MC3T3-E1细胞ALP活性( P 均<0.01)。阻断BMP-2/Smads信号通路后,ICA促细胞增殖作用( P <0.01)及促分化作用( P <0.01)明显下降。ICA(10、20 ng/ml)可提高MC3T3-E1细胞BMP-2、BMPR-2、Smad4和Smad1/5/8蛋白表达水平( P 均<0.01)。当阻断BMP-2/Smads信号通路后,ICA促BMP-2、BMPR-2、Smad4和Smad1/5/8蛋白表达作用均受到抑制。结论 ICA对MC3T3-E1细胞形态无明显影响,ICA可能是通过上调MC3T3-E1前体成骨细胞BMP-2蛋白的表达,激活BMP-2/Smads信号通路,启动下游成骨相关基因的表达,从而促进细胞的增殖、分化。展开更多
文摘目的研究化合物xy9902对成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化的影响,并初步探讨其机制。方法采用MTT比色法测定化合物对成骨细胞MC3T3-E1的增殖作用;通过硝基苯磷酸盐法测定细胞内碱性磷酸酶(A lkaline phosphatase,ALP)活性的变化,观察化合物对细胞分化的影响;用放射性配体结合法考察化合物与雌激素受体(Estrogen ic recep-tor,ER)的亲和力。结果化合物xy9902对成骨细胞有促增殖和促分化作用,这一作用可被tamoxifen阻断;xy9902与ER有亲和力,对ERα和ERβ的IC50分别为8.45×10-6mol.L-1和1.66×10-6mol.L-1。结论化合物xy9902对成骨细胞有促增殖和促分化作用,其作用机制可能与ER激动有关。
文摘目的研究淫羊藿苷(ICA)对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、分化的影响,以及骨形态发生蛋白2(BMP-2)/Smads信号通路在成骨细胞增殖、分化中的作用。方法用含不同浓度ICA(0、10、20、40 ng/ml)的完全培养液分别培养MC3T3-E1细胞48、72、96 h。HE染色法观察ICA对MC3T3-E1细胞形态的影响;分别用CCK-8及碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测ICA对MC3T3-E1细胞增殖活性和细胞ALP活性的影响;Western blot检测ICA对MC3T3-E1细胞BMP-2、骨形态发生蛋白2受体(BMPR-2)、Smad4和Smad1/5/8蛋白表达水平的影响。向细胞培养液中加入BMP抑制剂头蛋白(Noggin,100 ng/ml)阻断BMP-2/Smads信号通路后,再次检测上述各实验指标的变化。结果 ICA对MC3T3-E1细胞形态无明显影响;ICA(10、20 ng/ml)可增强MC3T3-E1细胞增殖活性( P 均<0.01)。ICA(10、20 ng/ml)可增强MC3T3-E1细胞ALP活性( P 均<0.01)。阻断BMP-2/Smads信号通路后,ICA促细胞增殖作用( P <0.01)及促分化作用( P <0.01)明显下降。ICA(10、20 ng/ml)可提高MC3T3-E1细胞BMP-2、BMPR-2、Smad4和Smad1/5/8蛋白表达水平( P 均<0.01)。当阻断BMP-2/Smads信号通路后,ICA促BMP-2、BMPR-2、Smad4和Smad1/5/8蛋白表达作用均受到抑制。结论 ICA对MC3T3-E1细胞形态无明显影响,ICA可能是通过上调MC3T3-E1前体成骨细胞BMP-2蛋白的表达,激活BMP-2/Smads信号通路,启动下游成骨相关基因的表达,从而促进细胞的增殖、分化。
