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CHO细胞表达系统研究新进展 被引量:41
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作者 申烨华 耿信笃 《生物工程进展》 CSCD 2000年第4期23-25,22,共4页
中国仓鼠卵巢细胞 (ChineseHamsterOvaryCell)是目前重组糖基蛋白生产的首选体系。本文综述近几年来该系统在生产基因工程药物方面的研究进展、存在问题和发展方向。
关键词 中国仓鼠卵巢细胞 基因工程药物 表达系统
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昆明水源水和自来水水质致突变性及化学背景值Ⅱ.蝌蚪红细胞微核和CHO细胞染色体畸变及SCE试验 被引量:32
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作者 王蕊芳 贺维顺 +5 位作者 吴世芳 袁棠 王欣 杨琼芝 李宝云 许慧明 《Zoological Research》 CSCD 1996年第4期469-475,共7页
本文研究的目的是以蝌蚪微核及CHO培养细胞染色体畸变(CA)及姐妹染色单体交换(SCE)为指示器,研究昆明市各水厂自来水和它们源水的潜在致突变性。结果表明:①各水厂自来水及它们的源水诱发蝌蚪微核率,除Y-水厂自来水外... 本文研究的目的是以蝌蚪微核及CHO培养细胞染色体畸变(CA)及姐妹染色单体交换(SCE)为指示器,研究昆明市各水厂自来水和它们源水的潜在致突变性。结果表明:①各水厂自来水及它们的源水诱发蝌蚪微核率,除Y-水厂自来水外都有显著性差异。②CA率的结果:各水厂自来水及源水和对照组除了W-水厂自来水外,都没有显著性差异。③SCE率:高浓度组(0.0625L/ml)的滇池源水及W-水厂自来水和低浓度组(0.03125L/ml)的W-水厂自来水同对照组相比,有极显著性差异。低浓度组滇池源水和高浓度组的E-,S-水厂自来水有显著性差异。 展开更多
关键词 水质分析 蝌蚪微核试验 染色体畸变 卫生毒理
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重组CHO细胞培养过程中氨对细胞代谢的影响 被引量:10
3
作者 孙祥明 张元兴 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期304-309,共6页
研究了重组CHO细胞批培养过程中 ,氨浓度对细胞的葡萄糖、谷氨酰胺及其它氨基酸代谢的影响。表明 ,细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的得率系数随着氨浓度的增加而降低 ,起始氨浓度为 5 6 6mmol L的批培养过程与起始氨浓度为 0 2 1mmol L的批... 研究了重组CHO细胞批培养过程中 ,氨浓度对细胞的葡萄糖、谷氨酰胺及其它氨基酸代谢的影响。表明 ,细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的得率系数随着氨浓度的增加而降低 ,起始氨浓度为 5 6 6mmol L的批培养过程与起始氨浓度为 0 2 1mmol L的批培养过程相比 ,细胞对葡萄糖和谷氨酰胺的得率系数分别下降了 78%和 74% ,细胞对其它氨基酸的得率系数也分别下降了 5 0 %~ 70 %。氨浓度的增加明显地改变了细胞的代谢途径 ,葡萄糖代谢更倾向于厌氧的乳酸生成。在谷氨酰胺的代谢过程中 ,谷氨酸经谷氨酸脱氢酶进一步生成α 酮戊二酸的过程受到了氨的抑制 ,而氨对谷氨酸经谷氨酸转氨酶反应生成α 酮戊二酸的过程有促进作用 ,但总体上谷氨酸进一步脱氨生成α 展开更多
关键词 动物细胞培养 细胞代谢 cho细胞 葡萄糖 谷氨酰胺
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Induction of mitochondrion-mediated apoptosis of CHO cells by tripchloro lide 被引量:11
4
作者 YANREN LEIXIONG JIARUIWU 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 2003年第4期295-300,共6页
Tripchlorolide (TC) is a potent antitumor reagent purified from a Chinese herb Tripterygium Wilfordii Hook. f.. However, its cellular effects and mechanism of action are unknown. We showed here that TC induced apoptos... Tripchlorolide (TC) is a potent antitumor reagent purified from a Chinese herb Tripterygium Wilfordii Hook. f.. However, its cellular effects and mechanism of action are unknown. We showed here that TC induced apoptosis of Chinese Hamster Ovary (CHO) cells in time- and dose-dependent manners. TC resulted in the degradation of Bcl-2, the translocation of Bax from the cytosol to mitochondria, and the release of cytochrome c from mitochondria. Stable overexpression of human Bcl-2 could reduce the apoptosis of TCtreated cells by blocking the translocation of Bax and the release of cytochrome c. These results indicate that TC induces apoptosis of CHO cell by activating the mitochondrion-mediated apoptotic pathway involving the proteins of Bcl-2 family and cytochrome c. 展开更多
关键词 APOPTOSIS mitochondrial pathway cho cell.
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携带共扩增基因的CHO细胞表达载体的构建 被引量:10
5
作者 刘国奇 陈小密 +4 位作者 徐静 宋宏彬 于长明 童贻刚 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期17-19,共3页
目的构建携带共扩增基因的CHO细胞表达载体。方法以质粒载体 pCI neo为骨架 ,应用小鼠二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的cDNA ,构建了哺乳动物细胞表达载体pCdhfr1。把绿色荧光蛋白基因亚克隆到pCdhfrl的多克隆位点 ,构建了表达质粒 pFP。结... 目的构建携带共扩增基因的CHO细胞表达载体。方法以质粒载体 pCI neo为骨架 ,应用小鼠二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的cDNA ,构建了哺乳动物细胞表达载体pCdhfr1。把绿色荧光蛋白基因亚克隆到pCdhfrl的多克隆位点 ,构建了表达质粒 pFP。结果经脂质体法转染CHO细胞 ,以氨甲喋呤为选择标记 ,经过一轮扩增后 ,获得表达绿色荧光蛋白的CHO细胞株。结论应用CHO/DHFR表达系统 ,为构建CHO细胞的工程细胞株建立了良好的模型。 展开更多
关键词 二氮叶酸还原酶 cho细胞 构建 表达载体
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纳米二氧化钛对卵巢肿瘤细胞的选择性凋亡的诱导作用 被引量:9
6
作者 朱融融 汪世龙 +3 位作者 陈小平 孙晓宇 张蕤 姚思德 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第21期2161-2164,共4页
以人肾上皮细胞293T和中国仓鼠卵巢肿瘤细胞CHO为研究对象,通过MTT法酶标仪检测、倒置显微镜观察和DNAladder实验等方法,研究了锐钛型TiO2对它们的选择性凋亡诱导作用.实验结果表明,纳米TiO2对肿瘤细胞具有非常明显的毒性作用,可侵入细... 以人肾上皮细胞293T和中国仓鼠卵巢肿瘤细胞CHO为研究对象,通过MTT法酶标仪检测、倒置显微镜观察和DNAladder实验等方法,研究了锐钛型TiO2对它们的选择性凋亡诱导作用.实验结果表明,纳米TiO2对肿瘤细胞具有非常明显的毒性作用,可侵入细胞内部,诱导CHO细胞产生细胞凋亡.对于293T细胞,虽然会抑制其增殖,但不能够进入细胞膜内,没有细胞凋亡现象的发生.这一结论为利用纳米TiO2治疗癌症提出了一条新思路. 展开更多
关键词 纳米TIO2 cho细胞 293T细胞 细胞凋亡 细胞毒性
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改造中国仓鼠卵巢细胞 被引量:8
7
作者 来大志 齐连权 +2 位作者 于长明 王海涛 陈薇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期415-419,共5页
与原核细胞、酵母细胞以及昆虫细胞相比 ,中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)作为宿主细胞表达的外源蛋白最接近其天然构象 ,因而CHO细胞表达系统是生物工程制药最为理想的表达系统。但这种系统也存在诸多缺点。如在大规模培养中CHO细胞会面临着对... 与原核细胞、酵母细胞以及昆虫细胞相比 ,中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)作为宿主细胞表达的外源蛋白最接近其天然构象 ,因而CHO细胞表达系统是生物工程制药最为理想的表达系统。但这种系统也存在诸多缺点。如在大规模培养中CHO细胞会面临着对无血清培养基的适应性差、细胞无限度增殖以及细胞凋亡等很多难题。所以除了在培养基、培养条件和表达载体方面下功夫优化该系统外 ,对CHO细胞本身进行改造已成为优化CHO表达系统的另一热点。 展开更多
关键词 改造 中国仓鼠卵巢细胞 cho细胞 大规模培养 细胞凋亡 细胞黏附 细胞周期
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无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞的比较 被引量:8
8
作者 付百年 赵睿 +3 位作者 王智宇 王佳凤 李德娟 金立杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期158-160,共3页
目的对无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞进行比较。方法应用两种培养基采用小方瓶培养CHO细胞,观察细胞维持时间、培养过程的形态变化及对血凝效价的影响。结果应用无血清培养基(A)培养CHO-C28细胞虽然可维持细胞正常生长,但贴壁... 目的对无血清培养基与含血清培养基培养CHO细胞进行比较。方法应用两种培养基采用小方瓶培养CHO细胞,观察细胞维持时间、培养过程的形态变化及对血凝效价的影响。结果应用无血清培养基(A)培养CHO-C28细胞虽然可维持细胞正常生长,但贴壁不好,逐渐降低(A)加量情况可得到相应改善。结论 目前无血清培养基尚不能完全取代含血清培养基用于培养CHO细胞。 展开更多
关键词 CH0细胞 血清 培养 培养基 生长
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CHO细胞体外微核高内涵筛选方法的建立及应用 被引量:11
9
作者 周飞 林海霞 常艳 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2011年第1期31-34,37,共5页
目的:探讨微核试验高内涵筛选方法在遗传毒性评价中的应用价值,建立简便、经济、快速、高效的微核试验高通量筛选方法。应用微核高内涵筛选方法对已知的遗传毒性阳性物质进行验证分析。方法:选择8种典型的断裂剂或非整倍体诱导剂进行试... 目的:探讨微核试验高内涵筛选方法在遗传毒性评价中的应用价值,建立简便、经济、快速、高效的微核试验高通量筛选方法。应用微核高内涵筛选方法对已知的遗传毒性阳性物质进行验证分析。方法:选择8种典型的断裂剂或非整倍体诱导剂进行试验。应用Cellomics ArrayScan高内涵筛选系统检测药物诱发的CHO细胞微核发生率。结果:苯并芘在25.15和50.3μg/ml可诱发微核显著增加(P<0.05);依托泊苷在0.16~20μg/ml浓度范围均可诱发微核发生率显著增加(P<0.01),在1.25~20μg/ml浓度,细胞存活率低于50%;2-氨基芴在0.1~1.26μg/ml的浓度范围内微核发生率和阴性对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05);2-氨基蒽在6.44、12.88、25.75和51.5μg/ml,秋水仙素在0.08~20.4μg/ml,甲基磺酸乙酯在0.754、1.509和3.018 mg/ml,氯化铬在2.344μg/ml,甲基磺酸甲酯在0.101 mg/ml浓度时,均可诱发CHO细胞微核发生率显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论:微核高内涵筛选方法可以满足快速、高效、经济、可靠检测微核的要求。 展开更多
关键词 微核 高内涵筛选 cho细胞 遗传毒性
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人IL-24基因在CHO细胞中的表达及其抗肿瘤效应 被引量:11
10
作者 缪竞诚 陈雄艳 +2 位作者 盛伟华 谢宇锋 杨吉成 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期567-570,共4页
目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性。方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR... 目的构建人IL-24基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并检测重组表达蛋白rhIL-24的抗肿瘤活性。方法将测序验证的人IL-24基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3,构建重组真核表达载体pcDNA3-hIL-24,转染CHO细胞进行稳定表达,经RT-PCR鉴定后用MTT法、Ho-echst染色和流式细胞术检测CHO细胞表达的rhIL-24诱导A549人肺腺癌细胞凋亡的抗肿瘤效应,用ELISA检测其刺激免疫细胞分泌IL-6和IFN-γ的功能。结果经双酶切和PCR鉴定,重组真核表达载体构建正确,人IL-24在CHO细胞中获得稳定表达,且所表达的人IL-24具有较强的诱导A549人肺腺癌细胞凋亡及上调免疫细胞表达IL-6和IFN-γ的免疫刺激活性。结论人IL-24基因的稳定表达和抗肿瘤效应的实验研究,为进一步研究人IL-24抗肿瘤的分子机制及潜在的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素-24 稳定转染 cho细胞 凋亡
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用于重组蛋白表达的哺乳动物细胞系的研究进展 被引量:8
11
作者 王登 刘煜 《药物生物技术》 CAS 2014年第5期478-482,共5页
随着重组蛋白类药物种类、性质等需求的不断变化,相应的蛋白表达系统也不断改进。目前,用来表达重组蛋白药物的宿主系统包括微生物、昆虫细胞和哺乳动物细胞等。由于哺乳动物细胞对蛋白的翻译后修饰作用,使其具有与人源蛋白分子结构更... 随着重组蛋白类药物种类、性质等需求的不断变化,相应的蛋白表达系统也不断改进。目前,用来表达重组蛋白药物的宿主系统包括微生物、昆虫细胞和哺乳动物细胞等。由于哺乳动物细胞对蛋白的翻译后修饰作用,使其具有与人源蛋白分子结构更为接近的优势,因此其已经成为临床治疗蛋白的主要表达宿主,其中应用最广泛的是中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)。构建高效表达重组蛋白的哺乳动物细胞系已成为生产重组治疗蛋白的关键所在。各种生物技术的快速发展,促进了哺乳动物细胞表达系统的不断完善。本文就哺乳动物细胞表达载体构建、克隆筛选、和工程细胞改造等方面作一综述。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 cho细胞 重组蛋白 抗凋亡 细胞工程 载体工程 高表达细胞系
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人CD59基因的突变和表达及其活性研究 被引量:6
12
作者 张艳丽 高美华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期151-154,共4页
 目的: 构建人突变CD59(hmCD59)基因的真核表达系统, 深入研究hmCD59在糖尿病血管并发症中的作用。方法: 分别构建两种含有hmCD59全长cDNA序列的重组pALTER质粒, 运用脂质体介导法, 与pcDNA3质粒共转染CHO细胞, 以G418筛选阳性克隆(编...  目的: 构建人突变CD59(hmCD59)基因的真核表达系统, 深入研究hmCD59在糖尿病血管并发症中的作用。方法: 分别构建两种含有hmCD59全长cDNA序列的重组pALTER质粒, 运用脂质体介导法, 与pcDNA3质粒共转染CHO细胞, 以G418筛选阳性克隆(编号为hmCD59- 1- CHO及hmCD59 -2- CHO)。应用荧光抗体技术、免疫酶联技术及Westernblot, 进一步检测hmCD59蛋白在转染细胞膜表面的表达。通过双羧乙基碳氧荧光素四乙酰氧甲酯 (BCECF/AM)荧光染料释放试验, 对hmCD59蛋白糖基化前后的抗补体活性进行检测。结果: 筛选出的阳性克隆细胞用荧光抗体技术免疫酶联技术检测表明, 在细胞膜表面有hmCD59分子表达。将细胞的裂解物进行Westernblot证实, 在其相对分子质量(Mr)为 20 000处可见 1条与CD59的Mr相当的蛋白带。BCECF/AM荧光染料释放试验提示, 两种突变质粒的表达产物均具有抗补体活性, 糖基化后活性减弱。结论: 获得两株可稳定表达hmCD59的细胞。表达的hmCD59具有抗补体活性, 但糖基化后活性减弱。 展开更多
关键词 人突变CD59 真核表达 中国仓鼠卵巢细胞 抗补体活性
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一种被毛孢菌丝体中抗肿瘤活性组分的分离纯化和液质联用分析 被引量:7
13
作者 何亚琼 胡丰林 +3 位作者 王利 李春如 樊美珍 李增智 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期431-438,共8页
在一次多菌株的生物活性测定中,发现一株被毛孢菌株RCEF0851菌丝体提取物具有较强的抗肿瘤CHO细胞的活性。本研究用不同溶剂对活性组分进行了提取试验,发现乙酸乙酯能最大程度地提取出该活性成分。分离试验表明该提取物较适于用反相柱Sy... 在一次多菌株的生物活性测定中,发现一株被毛孢菌株RCEF0851菌丝体提取物具有较强的抗肿瘤CHO细胞的活性。本研究用不同溶剂对活性组分进行了提取试验,发现乙酸乙酯能最大程度地提取出该活性成分。分离试验表明该提取物较适于用反相柱Synergi Hydro进行分离。活性指导下的分离得到一活性组分的纯品Hh-1。该组分在40μg/mL时对CHO细胞的抑制率达到83.61%。高分辨质谱分析表明该活性化合物的可能分子式是C30H22O10。该分子为首次从虫生真菌中发现。 展开更多
关键词 菌丝体提取物 cho细胞 活性物质 高分辨质谱分析
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人Delta-like-1胞外区在CHO细胞的表达纯化及对造血祖细胞的扩增作用 被引量:7
14
作者 鲁茁壮 吴祖泽 +3 位作者 刘红军 张群伟 贾向旭 王立生 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期222-226,共5页
Notch信号通路在调控造血干细胞的增殖分化中具有重要作用。本研究克隆表达人Notch配体Delta like 1(Dll 1)的胞外区 (hDll 1ext) ,并观察其对脐带血造血祖细胞的扩增作用。从人骨髓单个核细胞中提取总RNA ,用RT PCR的方法扩增Delta lik... Notch信号通路在调控造血干细胞的增殖分化中具有重要作用。本研究克隆表达人Notch配体Delta like 1(Dll 1)的胞外区 (hDll 1ext) ,并观察其对脐带血造血祖细胞的扩增作用。从人骨髓单个核细胞中提取总RNA ,用RT PCR的方法扩增Delta like 1基因胞外区 ,克隆到T载体。测序正确后 ,亚克隆到pcDNA3.1/Myc His(+)A表达载体。用脂质体转染CHO细胞 ,G4 18筛选单克隆 ,Western印迹检测hDll 1ext的分泌表达情况。选择表达量高的细胞克隆 ,扩增并收集上清。用金属亲和层析柱从上清中纯化融合蛋白hDll 1ext。利用免疫磁性分离方法分离脐带血CD34+ 细胞。结果表明 ,RT PCR方法检测到脐带血CD34+ 细胞表达Notch 1受体。在含rhIL 3,rhSCF及rhVEGF的脐带血CD34+ 细胞无血清培养体系中 ,加入纯化的hDll 1ext,通过集落培养检测hDll 1ext对造血祖细胞的扩增作用。含hDll 1ext组中CFU Mix和HPP CFC数量是对照组的 1.5倍 ,结论 :重组的hDll 展开更多
关键词 Delta-like-1 NOTCH cho细胞 造血祖细胞
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t-PA cDNA在CHO细胞中的高效稳定表达 被引量:6
15
作者 欧阳应斌 黄培堂 +2 位作者 徐秀英 陈琳 黄翠芬 《生物技术通讯》 CAS 1995年第1期11-15,共5页
我们曾报道t-PA mRNA非翻译区序列对其表达有明显的抑制作用,在此基础上,通过对5′-UTR及3′-UTR的改造,使t-PA在COS-7细胞中的表达水平提高30倍左右。将t-PA表达质粒用电击法转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-dhfr),经过... 我们曾报道t-PA mRNA非翻译区序列对其表达有明显的抑制作用,在此基础上,通过对5′-UTR及3′-UTR的改造,使t-PA在COS-7细胞中的表达水平提高30倍左右。将t-PA表达质粒用电击法转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷株(CHO-dhfr),经过混合加压及筛选,在CHO细胞中高效表达了t-PA,表达水平达到5000~6000 IU/10~6细胞/24hr。重组t-PA具有与天然t-PA相同的分子量及酶活性。经过8个月连续传代,表达水平未下降,表明细胞株是稳定的,其主要指标均符合工程细胞株的要求。 展开更多
关键词 人组织型纤溶酶原激活剂 cho细胞 高效表达
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葡萄糖对重组CHO细胞生长代谢及EPO表达的影响 被引量:4
16
作者 孙祥明 张元兴 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期698-702,共5页
在CHO细胞批培养中 ,葡萄糖浓度从 8 9增加到 4 9 6mmol L ,最大活细胞密度没有明显的差异 ,乳酸对葡萄糖的得率系数首先随着葡萄糖浓度的增加而增加 ,葡萄糖浓度达到 17 9mmol L后 ,乳酸对葡萄糖的得率系数基本上维持恒定。在本实验中 ... 在CHO细胞批培养中 ,葡萄糖浓度从 8 9增加到 4 9 6mmol L ,最大活细胞密度没有明显的差异 ,乳酸对葡萄糖的得率系数首先随着葡萄糖浓度的增加而增加 ,葡萄糖浓度达到 17 9mmol L后 ,乳酸对葡萄糖的得率系数基本上维持恒定。在本实验中 ,葡萄糖浓度对谷氨酰胺代谢没有明显的影响。EPO的累积浓度首先随着起始葡萄糖浓度的增加 ( 8 9~ 17.9mmol L)而增加 ,进而又随着葡萄糖浓度的增加 ( 17 9~ 4 9.6mmol L)而下降 ,表明存在一最适浓度 ,在此浓度下重组CHO细胞的EPO表达最大。 展开更多
关键词 cho细胞 葡萄糖 代谢 红细胞生成素 动物细胞培养
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重组蛋白的CHO细胞瞬时表达体系的研究进展 被引量:6
17
作者 韩阳 蔡洁行 +1 位作者 张朗 李谦 《药物生物技术》 CAS 2017年第3期243-248,共6页
单抗等治疗性重组蛋白具有巨大的商业价值和科研价值,而哺乳动物细胞瞬时表达体系能够快速生产毫克到克级别的重组蛋白,且生化特性(如翻译后的糖基化修饰类型等)均与人源相似,使该技术成为当前高校和企业研究的热点。该体系在工业界的... 单抗等治疗性重组蛋白具有巨大的商业价值和科研价值,而哺乳动物细胞瞬时表达体系能够快速生产毫克到克级别的重组蛋白,且生化特性(如翻译后的糖基化修饰类型等)均与人源相似,使该技术成为当前高校和企业研究的热点。该体系在工业界的广泛使用推动了其向高通量和大规模的发展,然而由于它存在着表达量低的天然缺陷,制约了其进一步发展。通过整理和研究最近一段时间发表的研究数据和研究观点,文章从宿主细胞的改造、表达载体的设计、转染方法的选择、补料策略4个角度综述近年来在工业界和学术界,CHO细胞(中国仓鼠卵巢细胞)重组蛋白瞬时表达体系的现状和最新突破,并展望其未来发展方向。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 cho细胞 重组蛋白 瞬时表达 基因定点编辑 转座子载体 大体积电转 解除转录 抑制
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人β-NGF真核表达载体的构建及其表达产物的生物活性 被引量:7
18
作者 陈勇 蒋琳 +4 位作者 杨军 李萍 梁凌宇 沈心亮 谢云飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期457-460,共4页
目的在CHO细胞中共表达二氢叶酸还原酶(DHFR)基因及人神经生长因子β亚基(-βhNGF)基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。方法克隆DHFR和-βhNGF基因,测序,酶切,连接到真核表达载体pBudCE4.1中,构建人NGF基因重组表达质粒pBudCE4.1... 目的在CHO细胞中共表达二氢叶酸还原酶(DHFR)基因及人神经生长因子β亚基(-βhNGF)基因,并对表达产物进行鉴定和生物活性分析。方法克隆DHFR和-βhNGF基因,测序,酶切,连接到真核表达载体pBudCE4.1中,构建人NGF基因重组表达质粒pBudCE4.1/DHFR/-βhNGF,经电转染法导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-DHFR-)中,经添加Zeocin抗生素和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶脱氧核苷)双筛选,获得了DHFR+细胞克隆。经MTX加压筛选高表达-βhNGF的CHO细胞株。SDS-PAGE、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定,并利用鸡胚背根神经节法检测表达蛋白的生物活性。结果人神经生长因子在CHO细胞中得到较高表达,表达量达0.3μg/ml,且表达产物具有良好的生物活性。结论为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了基础。 展开更多
关键词 真核表达载体 基因表达 生物活性 二氢叶酸还原酶 人神经生长因子β亚基
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利用谷氨酰胺合成酶基因(GS)作扩增标记在CHO细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因 被引量:5
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作者 刘文军 杨芙蓉 +2 位作者 阮力 任贵方 朱既明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期103-109,共7页
利用谷氨酰胺合成酶基因(GS)[1]作扩增选择标记,结合CMV-IE启动子,在CHO细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因。初筛克隆表达水平RPHA检测为1:64,经过谷氨酰胺合成酶基因的抑制剂MSX的两轮基因扩增,HB... 利用谷氨酰胺合成酶基因(GS)[1]作扩增选择标记,结合CMV-IE启动子,在CHO细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因。初筛克隆表达水平RPHA检测为1:64,经过谷氨酰胺合成酶基因的抑制剂MSX的两轮基因扩增,HBsAg的表达水平RPHA在1:256以上。方瓶静置培养收液,RIA检测HBsAg最高产量为9.5μg/毫升。表达水平较以前利用dhfr基因扩增选择系统所得到的高表达细胞系B43高一倍以上。利用GS基因扩增选择系统可以在哺乳动物细胞中高水平表达外源基因。 展开更多
关键词 谷氨酰胺合成酶 基因 表达 乙型肝炎 表面抗原
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人重组白细胞介素12在CHO细胞中的表达 被引量:3
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作者 戴燕 陈慰峰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第3期254-258,共5页
将人白细胞介素12(interleukin12,IL12)两条链p35及p40全长cDNA分别亚克隆至真核表达载体pcDNA3中,构建了pcDNA3/p35a,pcDNA3/p40a,pcDNA3/p35b,pcD... 将人白细胞介素12(interleukin12,IL12)两条链p35及p40全长cDNA分别亚克隆至真核表达载体pcDNA3中,构建了pcDNA3/p35a,pcDNA3/p40a,pcDNA3/p35b,pcDNA3/p40b四种真核细胞重组表达质粒,利用磷酸钙共沉淀法转染中国苍鼠卵巢(CHO)细胞.通过对阳性克隆的筛选鉴定,获得了稳定表达人IL12的CHO细胞株,活性最高的一株表达量为105U/ml.此细胞株经半年的传代培养,能够稳定地分泌IL12.结果显示:IL12在CHO细胞中的稳定表达受到重组质粒结构、DNA整合、mRNA转录、蛋白质翻译等多因素的影响,IL12两个亚基在CHO细胞中的共同表达是产生有生物活性IL12的基础. 展开更多
关键词 白细胞介素12 表达 卵巢细胞 cho细胞
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