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红霉素基因工程研究进展 被引量:19
1
作者 张部昌 赵志虎 马清钧 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2002年第3期40-44,共5页
红霉素是一类广谱大环内酯类抗生素 ,在临床上具有广泛的应用。近 10年来用基因工程方法对红霉素结构改造已经取得了很大的进展。通过基因工程不仅可以改造红霉素内酯环环的大小、环的骨架和环的侧链 ,而且可以对后修饰的羟基、糖基和... 红霉素是一类广谱大环内酯类抗生素 ,在临床上具有广泛的应用。近 10年来用基因工程方法对红霉素结构改造已经取得了很大的进展。通过基因工程不仅可以改造红霉素内酯环环的大小、环的骨架和环的侧链 ,而且可以对后修饰的羟基、糖基和甲基进行改造。迄今用基因工程方法合成的新的大环内酯环结构已超过 10 0种 ,所合成的各种红霉素类似物也有数十种 ,且经过基因改造的红霉素类似物都具有生物活性。但基因工程产物产量都普遍降低 ,抑菌活性也不理想 ,因此未来红霉素基因工程研究的重点应加强产量和高活性结构筛选的研究。 展开更多
关键词 红霉素 基因工程 研究进展 大环内酯类
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合成酮内酯类3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B糖多孢红霉菌M的构建 被引量:24
2
作者 张部昌 赵志虎 +1 位作者 王以光 马清钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期198-203,共6页
大环内酯类抗生素基因工程是近年来研究的一个新领域 ,迄今已合成了 10 0多种新的聚酮类化合物。以糖多孢红霉菌A2 2 6基因组DNA为模板 ,用重叠PCR方法扩增出去除KR6酶域DNA的约 3 2kbDNA片段 ,克隆于pWHM3载体 ,构建了同源重组质粒pWHM... 大环内酯类抗生素基因工程是近年来研究的一个新领域 ,迄今已合成了 10 0多种新的聚酮类化合物。以糖多孢红霉菌A2 2 6基因组DNA为模板 ,用重叠PCR方法扩增出去除KR6酶域DNA的约 3 2kbDNA片段 ,克隆于pWHM3载体 ,构建了同源重组质粒pWHM2 2 0 1。PEG介导原生质体转化法将pWHM2 2 0 1转入糖多孢红霉菌A2 2 6 ,并整合于染色体红霉素合成基因位点。整合体在R3M斜面上生长两代后 ,制备原生质体涂R3M平皿。利用PCR鉴定筛选出 8株KR6敲除的突变体糖多孢红霉菌M(1 8)。ZabsPecFab质谱鉴定 ,证实糖多孢红霉菌M1合成了 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B 。 展开更多
关键词 糖多孢红霉菌 3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B 酮内酯类 原生质体转化 同源重组
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糖多孢红霉菌A226的原生质体转化和染色体同源整合 被引量:20
3
作者 张部昌 赵志虎 +3 位作者 王以光 于秀琴 刘传暄 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 2002年第2期107-111,共5页
糖多孢红霉菌的原生质体转化和染色体同源整合,是红霉素生物合成基因改造的重要途径。本研究对糖多孢红霉菌A226原生质体制备和转化条件进行了优化,结果表明以对数生长后期和稳定期菌丝体制备的原生质体转化效率较高;质粒、原生质体和PE... 糖多孢红霉菌的原生质体转化和染色体同源整合,是红霉素生物合成基因改造的重要途径。本研究对糖多孢红霉菌A226原生质体制备和转化条件进行了优化,结果表明以对数生长后期和稳定期菌丝体制备的原生质体转化效率较高;质粒、原生质体和PEG-T缓冲液体积比例为15:40:200(μl)时转化效果较好;比重小原生质体的转化效率虽高,但在转化子中有效整合的比例较低;PEG1000和PEG3350对转化效率没有显著差异;而Yamamoto转化系统优于Weber转化系统。PCR鉴定、抑菌活性鉴定和质谱分析均表明,转化质粒已整合到染色体红霉素合成基因位点。 展开更多
关键词 糖多孢红霉菌 原生质体转化 染色体同源整合 红霉素
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响应面法优化红霉素发酵培养基 被引量:19
4
作者 应惟娲 郝玉有 +2 位作者 储炬 王永红 庄英萍 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期272-276,共5页
采用响应面法对红色糖多孢菌产红霉素发酵培养基进行优化。用Minimum Run Equireolicated Res IV设计对初始发酵培养基添加的6个影响因素的效应进行评价,选择有显著影响的4个因素,即硫酸镁、甜菜碱、硫酸铜和氯化钴。再用最陡爬坡实验... 采用响应面法对红色糖多孢菌产红霉素发酵培养基进行优化。用Minimum Run Equireolicated Res IV设计对初始发酵培养基添加的6个影响因素的效应进行评价,选择有显著影响的4个因素,即硫酸镁、甜菜碱、硫酸铜和氯化钴。再用最陡爬坡实验为中心组合实验确定最大响应区间,最后经过响应面分析得到最优化结果,硫酸镁0.106%(w/v),甜菜碱0.0185%(w/v),硫酸铜0.106mmol/L,氯化钴0.0003%(w/v)。优化后红霉素生物效价比优化前提高了30%。 展开更多
关键词 红色糖多孢菌 响应面法 优化 发酵培养基
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糖多孢红霉菌表达载体pZMW的构建 被引量:10
5
作者 张部昌 李凌凌 +4 位作者 于秀琴 刘传暄 王以光 贺秉坤 马清钧 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第3期176-179,共4页
目的 :构建能够在糖多孢红霉菌中稳定存在的表达性载体。方法 :用PCR方法从糖多孢红霉菌染色体上扩增红霉素抗性基因启动子PermE作为表达载体的启动子 ,并利用pSET1 5 2质粒上链霉菌染色体整合位点 (attP)和安普霉素抗性基因 ,构建了染... 目的 :构建能够在糖多孢红霉菌中稳定存在的表达性载体。方法 :用PCR方法从糖多孢红霉菌染色体上扩增红霉素抗性基因启动子PermE作为表达载体的启动子 ,并利用pSET1 5 2质粒上链霉菌染色体整合位点 (attP)和安普霉素抗性基因 ,构建了染色体整合型糖多孢红霉菌表达载体pZMW。结果 :pZMW表达载体能够整合到链霉菌和糖多孢红霉菌染色体上 ,并能够在链霉菌和糖多孢红霉菌体内表达硫链丝菌素抗性基因tsr。结论 展开更多
关键词 糖多孢红霉菌 红霉素 表达载体 基因表达
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豆油在红霉素发酵中的作用及作用机制的研究 被引量:11
6
作者 沈兆兵 陈国豪 陈长华 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期657-660,共4页
红色糖多孢菌D在15L发酵罐的基础培养基和发酵过程中补加豆油,当基础培养基中豆油量加倍时,效价提高43.1%;发酵过程补加豆油罐的红霉素效价、生产强度和Yp/s比不补豆油的分别提高了69.7%、69.6%和63.8%。通过实验测定发现,发酵过程补加... 红色糖多孢菌D在15L发酵罐的基础培养基和发酵过程中补加豆油,当基础培养基中豆油量加倍时,效价提高43.1%;发酵过程补加豆油罐的红霉素效价、生产强度和Yp/s比不补豆油的分别提高了69.7%、69.6%和63.8%。通过实验测定发现,发酵过程补加豆油后,异柠檬酸脱氢酶、甲基丙二酰CoA异构酶的比活以及α-酮戊二酸的量均高于不补加豆油时的值,而琥珀酸的量低于不补加豆油时的值。推测豆油经过红色糖多孢菌代谢后进入红霉素合成的一条可能途径:豆油经过代谢后进入TCA循环,并强化了TCA循环的通量,产生了大量α-酮戊二酸,再生成琥珀酰CoA,琥珀酰CoA在甲基丙二酰CoA异构酶的作用下生成甲基丙二酰CoA作为红霉素合成的前体。 展开更多
关键词 豆油 红色糖多孢菌 红霉素发酵 Α-酮戊二酸 甲基丙二酰CoA 琥珀酸
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糖多孢红霉菌同源片段长度与染色体重组率关系的研究 被引量:7
7
作者 张部昌 赵志虎 +3 位作者 王以光 于秀琴 刘传暄 马清钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期13-18,共6页
为了探索同源片段长度与糖多孢红霉菌染色体同源重组率的关系 ,化学合成或用重叠PCR合成带有突变位点、在突变位点两侧长度为 (2 6bp +2 7bp)、(5 0 0bp +5 76bp)和 (190 8bp +174 9bp)的同源序列 ,克隆于糖多孢红霉菌同源重组载体pWHM3... 为了探索同源片段长度与糖多孢红霉菌染色体同源重组率的关系 ,化学合成或用重叠PCR合成带有突变位点、在突变位点两侧长度为 (2 6bp +2 7bp)、(5 0 0bp +5 76bp)和 (190 8bp +174 9bp)的同源序列 ,克隆于糖多孢红霉菌同源重组载体pWHM3后 ,分别构建了pWHM1113、pWHM1116和pWHM1119质粒。以PEG介导转化糖多孢红霉菌A2 2 6原生质体 ,3个质粒分别获得每皿 30个、6 9个和 170个转化子 ,但pWHM1113质粒不能与染色体有效整合 ,pWHM1116质粒与染色体整合率为转化子的 2 % ,而pWHM1119质粒与染色体整合率达到转化子的 19%。pWHM1116和pWHM1119质粒均可进行有效的染色体二次重组 ,将突变位位点引入染色体。因此 ,同源片段长度为(5 0 0bp +5 76bp)或更长时 ,可与糖多孢红霉菌染色体进行有效的单重组和双重组。 展开更多
关键词 糖多孢红霉菌 同源片段长度 染色体重组率 关系
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糖多孢红霉菌λC3-SRR突变体的构建及其产物鉴定 被引量:6
8
作者 李凌凌 张部昌 +3 位作者 张华 任洌 刘传暄 马清钧 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2004年第4期314-318,共5页
目的 :构建糖多孢红霉菌KR6酶域基因失活突变体 ,探讨SRR氨基酸相应 9核苷酸去除突变体与合成酮内酯类化合物 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B的关系。方法 :以糖多孢红霉菌基因组DNA为模板 ,用重叠PCR技术扩增出缺少SRR氨基酸相应 9核苷酸的KR... 目的 :构建糖多孢红霉菌KR6酶域基因失活突变体 ,探讨SRR氨基酸相应 9核苷酸去除突变体与合成酮内酯类化合物 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B的关系。方法 :以糖多孢红霉菌基因组DNA为模板 ,用重叠PCR技术扩增出缺少SRR氨基酸相应 9核苷酸的KR6酶域DNA片段 ,并克隆到载体pWHM3上 ,构建了同源重组质粒pWHM3 SRR。将pWHM3 SRR质粒转化糖多孢红霉菌λC3菌株 ,筛选出质粒整合到染色体上红霉素合成基因位点的整合体λC3 A、B和C。λC3 A在无硫链丝菌肽 (Thio)的R3M斜面上生长两代后 ,制备的原生质体涂R3M平皿 ,挑选出不能在含Thio的R3M斜面上生长、发酵液也无抑制枯草芽孢杆菌活性的突变菌株λC3 SRR。结果 :部分基因组DNA序列分析表明 ,糖多孢红霉菌λC3 SRR染色体上SRR氨基酸相应 9核苷酸已经敲除 ,ZabspecFab质谱分析证实λC3 SRR菌株合成了 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B。结论 :糖多孢红霉菌KR6酶域SRR氨基酸相应 9核苷酸敲除的λC3 SRR突变菌株可以合成 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B ,SRR为KR6酶域上NADPH 2′ 磷酸结合位点。 展开更多
关键词 糖多孢红霉菌 聚酮合成酶 同源重组 酮内酯类 3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B
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红霉素抗性基因ermE在链霉菌中的表达及抗性测定 被引量:3
9
作者 金慧怡 张惠展 《上海师范大学学报(自然科学版)》 2006年第2期80-84,共5页
红霉素抗性基因ermE编码一种甲基化酶,可以对50S核糖体亚基上的23S rRNA进行甲基化修饰.甲基化作用可能引起核糖体构型变化,阻碍红霉素与50S核糖体亚基的结合,从而使宿主获得抗性.研究中将来自红色糖多孢茵(Saccharopolyspora erythra... 红霉素抗性基因ermE编码一种甲基化酶,可以对50S核糖体亚基上的23S rRNA进行甲基化修饰.甲基化作用可能引起核糖体构型变化,阻碍红霉素与50S核糖体亚基的结合,从而使宿主获得抗性.研究中将来自红色糖多孢茵(Saccharopolyspora erythraea)的ermE基因克隆到链霉菌高拷贝表达载体pUWL201和pIJ6021上组成型启动子ermEp和硫链丝菌素诱导型启动子PtipA的下游,构建出了链霉菌表达质粒pKIM4,pKIM7和pKIM8.将pKIM4,pKIM7和pKIM8分别转入S.lividans链霉菌中,每种转化子都能表现出明显的红霉素抗性,并且ermE基因在TK64/pKIM8转化子中还实现了高效表达. 展开更多
关键词 ermE基因 红色糖多孢菌 表达 最小抑菌浓度(MIC)
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透明颤菌血红蛋白基因在红色糖多孢菌株中表达及对红霉素产量的影响 被引量:6
10
作者 吴益民 王洪军 +5 位作者 孙艳 吴琼 冯立 张志强 杨青 杨国平 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期599-601,614,共4页
目的利用已含有血红蛋白基因(vgb)的红色糖多孢基因工程重组菌,探讨vgb表达产物对重组糖多孢红霉菌提高红霉素产率的影响。方法用SDS-PAGE、Western blot方法鉴定血红蛋白,用葡萄糖浓度与总蛋白质含量比较原始菌株与重组菌株的差别。结... 目的利用已含有血红蛋白基因(vgb)的红色糖多孢基因工程重组菌,探讨vgb表达产物对重组糖多孢红霉菌提高红霉素产率的影响。方法用SDS-PAGE、Western blot方法鉴定血红蛋白,用葡萄糖浓度与总蛋白质含量比较原始菌株与重组菌株的差别。结果红色糖多孢基因工程重组菌与原始菌株比较,重组菌株发酵过程葡萄糖浓度的变化出现在第二时段(约38h),原始菌株达到了0.4g/L,而重组菌株只有0.25g/L;第三时段原始菌株出现了游离葡萄糖浓度高峰而重组菌株未出现。在两个菌株中生物物质浓度[以总蛋白质(g/L)表示]存在不同,重组菌株比原始菌株约低27%。红霉素效价,原始菌株和重组菌株分别为3.98和5.15g/L,相当于重组菌株提高红霉素体积产率约29%。结论重组红色糖多孢菌表达了透明颤菌血红蛋白,提高了红霉素产率,对解决抗生素工业和基因工程菌高密度发酵有良好的应用前景。 展开更多
关键词 透明颤菌 血红蛋白基因 红色糖多孢菌 基因重组
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红霉素发酵生产后期的调控研究 被引量:5
11
作者 李啸 陈长华 +1 位作者 李友元 涂志英 《三峡大学学报(自然科学版)》 CAS 2005年第6期555-558,共4页
采用FUS-50L(A)生物反应器对红霉素发酵生产过程进行调控,在后期按优化方案向发酵液中补入混合物X,可使最终发酵液的生物效价和红霉素A组分的相对百分含量分别由对照样品的6089 u/mL、81.16%提高至条件样品的8316 u/mL、89.78%.同时,通... 采用FUS-50L(A)生物反应器对红霉素发酵生产过程进行调控,在后期按优化方案向发酵液中补入混合物X,可使最终发酵液的生物效价和红霉素A组分的相对百分含量分别由对照样品的6089 u/mL、81.16%提高至条件样品的8316 u/mL、89.78%.同时,通过多尺度参数分析,阐明了红霉素发酵生产后期优化控制的重要性. 展开更多
关键词 红霉素 糖多孢红霉菌 发酵 调控 多尺度参数
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bldD基因过量表达对红色糖多孢菌红霉素产量及孢子形成的影响 被引量:5
12
作者 何晶晶 黄训端 +4 位作者 宋平 郭金华 陈惠鹏 曹诚 张部昌 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2010年第3期251-254,共4页
目的通过增加红色糖多孢菌调控基因bldD拷贝,获得红霉素高产菌株,并探讨bldD基因过量表达对红色糖多孢菌形态分化的影响。方法以红色糖多孢菌A226为出发菌株,通过染色体同源重组方法获得红色糖多孢菌A226bldD基因失活突变菌株A226-△bld... 目的通过增加红色糖多孢菌调控基因bldD拷贝,获得红霉素高产菌株,并探讨bldD基因过量表达对红色糖多孢菌形态分化的影响。方法以红色糖多孢菌A226为出发菌株,通过染色体同源重组方法获得红色糖多孢菌A226bldD基因失活突变菌株A226-△bldD。将bldD基因表达质粒pZMW-bldD分别导入突变株A226-△bldD及出发菌株A226中,获得A226-△bldD/bldD菌株和A226/bldD菌株,利用TLC法和HPLC法对其发酵产物进行分析,并观察孢子生长状况。结果红色糖多孢菌A226中bldD基因失活后产红霉素水平明显降低,不能形成孢子;bldD基因的回复表达使A226-△bldD突变菌株产红霉素能力得到恢复,且孢子形成恢复正常;在红色糖多孢菌A226中过量表达bldD基因可提高红霉素产量,较出发菌株A226提高20%,同时可使孢子形成时间提前。结论在红色糖多孢菌中过量表达bldD基因,可获得红霉素高产菌株,同时会影响红色糖多孢菌形态分化进程。 展开更多
关键词 红色糖多孢菌 bldD 红霉素 形态分化 基因表达
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糖多孢红霉菌红霉素高产菌种的诱变选育 被引量:3
13
作者 孟祥学 王凤山 《食品与药品》 CAS 2009年第4期35-37,共3页
目的诱变和筛选糖多孢红霉菌(Saccharopolyspora erythraea)红霉素的高产菌种。方法以糖多孢红霉菌L1为出发菌株,紫外线作为诱变剂,诱变和筛选生产所用菌种。结果获得了高产变株L2-26,其发酵水平较出发菌株提高了19.8%。结论此方法可有... 目的诱变和筛选糖多孢红霉菌(Saccharopolyspora erythraea)红霉素的高产菌种。方法以糖多孢红霉菌L1为出发菌株,紫外线作为诱变剂,诱变和筛选生产所用菌种。结果获得了高产变株L2-26,其发酵水平较出发菌株提高了19.8%。结论此方法可有效地获得高产变株,发酵水平明显提高。 展开更多
关键词 糖多孢红霉菌 高产变株 紫外线诱变
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产红霉素C的糖多孢红霉菌A226G^-突变体的构建 被引量:3
14
作者 袁华 黄训端 +4 位作者 张部昌 刘道琴 赵皓 孔小卫 张书祥 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期653-658,共6页
糖多孢红霉菌eryG基因编码产物为红霉素3"-O-甲基转移酶(EryG),失活eryG基因能阻断红霉素A的生物合成,积累其中间产物红霉素C。以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模版,用重叠PCR方法扩增出eryG基因两侧约1600bp DNA片段(ΔG),其中去除... 糖多孢红霉菌eryG基因编码产物为红霉素3"-O-甲基转移酶(EryG),失活eryG基因能阻断红霉素A的生物合成,积累其中间产物红霉素C。以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模版,用重叠PCR方法扩增出eryG基因两侧约1600bp DNA片段(ΔG),其中去除了EryG上S-腺苷甲硫氨酸结合区域对应的290bp DNA片段。将该片段克隆于质粒pWHM3,构建了同源重组质粒pWHMΔG。PEG介导原生质体转化法将pWHMΔG转入糖多孢红霉菌A226中,通过染色体同源重组突变染色体上eryG基因。利用薄层层析、PCR和质谱方法筛选出一株eryG基因突变的糖多孢红霉菌A226G-突变体,此突变体主要积累中间产物红霉素C而不再合成红霉素A。通过eryG基因的功能补偿,糖多孢红霉菌基因工程菌A226G-G+可以恢复红霉素A的合成能力。 展开更多
关键词 糖多孢红霉菌 红霉素 3″-O-甲基转移酶 同源重组 功能补偿
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红色糖多孢菌A226-YA突变体构建及产物分析 被引量:3
15
作者 曹孟婵 张部昌 马清钧 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2006年第5期428-431,435,共5页
目的:用红色糖多孢菌(前称糖多孢红霉菌)KR6突变体合成酮内酯类化合物3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B,同时,KR6突变体不合成红霉素。方法:以红色糖多孢菌A226基因组DNA为模板,用重叠PCR技术扩增KR6酶域中Tyr2699密码子TAC突变为A la密码子GCC... 目的:用红色糖多孢菌(前称糖多孢红霉菌)KR6突变体合成酮内酯类化合物3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B,同时,KR6突变体不合成红霉素。方法:以红色糖多孢菌A226基因组DNA为模板,用重叠PCR技术扩增KR6酶域中Tyr2699密码子TAC突变为A la密码子GCC的1 000 bp DNA序列,克隆到载体pWHM3上构建同源重组质粒pWHM3-YA。将pWHM3-YA转化到A226中,并整合到红霉素合成基因座,经染色体二次重组后筛选TAC突变为GCC的突变体A226-YA,再进行突变体A226-YA产物分析。结果:通过染色体同源重组,构建了红色糖多孢菌突变菌株A226-YA,Zabspec Fab质谱分析结果显示A226-YA突变体合成了3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B,而没有检测到红霉素。结论:突变Tyr2699能有效失活KR6,但3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B的产量较低。 展开更多
关键词 红色糖多孢菌 聚酮合成酶 酮还原酶 3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B
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红霉素产生菌的诱变及培养基优化研究 被引量:4
16
作者 左勇 李杨 +3 位作者 任永利 鞠帅 谢晖 祁峰 《四川理工学院学报(自然科学版)》 CAS 2012年第1期14-18,共5页
以红色糖多孢菌08L作为出发菌株进行诱变,选育高产菌株。结果表明,诱变得到的UL5菌株发酵水平比出发菌株提高12.6%。再通过培养基优化,其组成为淀粉3%,糊精3%,葡萄糖2%,黄豆饼粉3%,玉米浆1%,硫酸铵0.15%,碳酸钙0.6%,磷酸二氢钾0.02%的... 以红色糖多孢菌08L作为出发菌株进行诱变,选育高产菌株。结果表明,诱变得到的UL5菌株发酵水平比出发菌株提高12.6%。再通过培养基优化,其组成为淀粉3%,糊精3%,葡萄糖2%,黄豆饼粉3%,玉米浆1%,硫酸铵0.15%,碳酸钙0.6%,磷酸二氢钾0.02%的条件下,UL5菌株在诱变的基础上,发酵水平再提高15.2%。 展开更多
关键词 红色糖多孢菌 诱变 正交实验 发酵
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钼对红霉素生物合成的影响 被引量:4
17
作者 李啸 陈长华 +1 位作者 李友元 涂志英 《三峡大学学报(自然科学版)》 CAS 2006年第4期355-359,共5页
在利用糖多孢红色链霉菌HB发酵生产红霉素的过程中,于48 h向发酵液中加入钼酸钠,通过对代谢途径关键调控酶活力的测定以及运用高效液相色谱法对发酵液中相关有机酸含量的测定,结论显示:当发酵液中钼酸钠的加入量为0.056 g/100 mL时,部... 在利用糖多孢红色链霉菌HB发酵生产红霉素的过程中,于48 h向发酵液中加入钼酸钠,通过对代谢途径关键调控酶活力的测定以及运用高效液相色谱法对发酵液中相关有机酸含量的测定,结论显示:当发酵液中钼酸钠的加入量为0.056 g/100 mL时,部分代谢流向有利于红霉素生物合成的方向迁移,在一定程度上提高了红霉素的生产速率和产量. 展开更多
关键词 红霉素 糖多孢红霉菌 酶活 有机酸 钼酸钠
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糖多孢红霉菌酮还原酶域在羰基还原中的应用 被引量:4
18
作者 李凌凌 吕早生 +1 位作者 关海燕 贾伟伟 《华中科技大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第2期72-75,共4页
为研究糖多孢红霉菌聚酮合成酶模块1的酮还原酶域,催化羰基还原的底物特异性和立体选择性,PCR扩增了该酶域的编码基因(eryKR1),并将其克隆到表达载体pET-28a,得到重组质粒pET-eryKR1,转化到Escherichia coli BL21(DE3)后,获得了重组菌株... 为研究糖多孢红霉菌聚酮合成酶模块1的酮还原酶域,催化羰基还原的底物特异性和立体选择性,PCR扩增了该酶域的编码基因(eryKR1),并将其克隆到表达载体pET-28a,得到重组质粒pET-eryKR1,转化到Escherichia coli BL21(DE3)后,获得了重组菌株E.coli BL21(pET-eryKR1).将E.coli BL21(pET-eryKR1)和异源表达枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因的重组大肠杆菌E.coli BL21(pET-gdh1)进行双重组菌耦合,对4-氯乙酰乙酸乙酯、苯乙酮、2-辛酮和环己酮4种底物进行转化还原,利用气相色谱分析转化液,结果显示E.coli BL21(pET-eryKR1)对环己酮的还原效果较好,产物环己醇的得率最高可达93.24%,而对其他3种底物几乎没有还原能力.利用E.coli BL21(pET-eryKR1)2催化2-甲基环己酮不对称还原,产物主要为顺式-2-甲基环己醇,产率可达41.87%,产物的对映体过量值为74.81%. 展开更多
关键词 2-甲基环己酮 酮还原酶域 聚酮合成酶 糖多孢红霉菌 生物催化
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运用高通量筛选技术优化红霉素A发酵的合成培养基 被引量:3
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作者 廖建国 洪铭 储炬 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2018年第1期51-58,共8页
目的设计并优化出一种适用于红霉素发酵的合成培养基。方法利用单因素缺失实验设计来减少培养基组分,然后利用Plackett-Burman实验设计来优化组分浓度。上述实验都是采用高通量方法进行的。结果最初选取了38种与生长和次级代谢相关的物... 目的设计并优化出一种适用于红霉素发酵的合成培养基。方法利用单因素缺失实验设计来减少培养基组分,然后利用Plackett-Burman实验设计来优化组分浓度。上述实验都是采用高通量方法进行的。结果最初选取了38种与生长和次级代谢相关的物质;然后通过2次单因素缺失实验将培养基组分减少到了19种;最后通过Plackett-Burman实验对19种组分的浓度进行了进一步优化,确定各物质的浓度。5L罐发酵结果表明本研究获得的优化后合成培养基生成的红霉素A产量是采用现有文献报道合成培养基得到红霉素A产量的13.6倍。结论高通量筛选技术是一种快速有效的筛选方法,该方法适合于优化培养基的组分。采用本论文中得到合成培养基可以对红色糖多孢菌的胞内代谢特征和红霉素A合成的关键代谢因素进行深入分析,利用这些代谢特点和影响代谢的关键因素,本文可以更加理性地对红霉素A的发酵过程进行调控,进而提高工业红霉素A产量并降低生产成本。 展开更多
关键词 高通量筛选 单因素缺失实验 红霉素A 红色糖多孢菌 合成培养基
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糖多孢菌属菌株的体内转座诱变系统 被引量:1
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作者 白露露 贺卫军 +3 位作者 龙青山 王业民 邓子新 陶美凤 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期85-91,共7页
为实现糖多孢菌的体内转座诱变,采用刺糖多孢菌的强启动子促进Tn5转座酶基因tnp(5)的表达,优化链霉菌高效转座质粒pHL734,构建了转座质粒pJTn1、pJTn2、pJTn3、pJTn4、pJTn5、pJTn6。结果显示:pJTn1~pJTn6系列转座质粒均可在红色糖多孢... 为实现糖多孢菌的体内转座诱变,采用刺糖多孢菌的强启动子促进Tn5转座酶基因tnp(5)的表达,优化链霉菌高效转座质粒pHL734,构建了转座质粒pJTn1、pJTn2、pJTn3、pJTn4、pJTn5、pJTn6。结果显示:pJTn1~pJTn6系列转座质粒均可在红色糖多孢菌中高效转座;pJTn1和pJTn5可在刺糖多孢菌中进行转座,获得31个刺糖多孢菌转座突变株;其中30个菌株的基因组中检测到标准的Tn5转座,8个突变株的多杀菌素产量显著降低。表明pJTn系列转座质粒可作为糖多孢菌的体内转座诱变工具,为抗生素的产量调控研究和高产育种靶标基因筛选提供理论依据。 展开更多
关键词 链霉菌 高产菌种 刺糖多孢菌 多杀菌素 红色糖多孢菌 Tn5转座质粒 体内转座
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