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枫香叶片变色期全长转录组测序及分析
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作者 刘雄盛 尹国平 +5 位作者 肖玉菲 蒋燚 王仁杰 黄荣林 姜英 王勇 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1710-1720,共11页
枫香因其树形优美,入秋后叶色红艳或橙黄,极具观赏价值,是优良的景观生态树种。为了解枫香叶片变色及其次级代谢过程的遗传基础,该文以枫香5个叶片变色期叶片混合样品为材料,利用单分子实时测序技术(PacBio平台)对其进行全长转录组测序... 枫香因其树形优美,入秋后叶色红艳或橙黄,极具观赏价值,是优良的景观生态树种。为了解枫香叶片变色及其次级代谢过程的遗传基础,该文以枫香5个叶片变色期叶片混合样品为材料,利用单分子实时测序技术(PacBio平台)对其进行全长转录组测序。结果表明:(1)全长转录组测序共获得41.04 Gb的高质量数据,从中鉴定出全长非嵌合序列563 180条,通过聚类和去冗余,获得27 269条高质量全长转录本。在27 269条全长转录本中预测到2 035条长链非编码RNA(lncRNA),并检测出14 892个简单重复序列(SSR)位点和1 856个转录因子。(2)基因注释结果表明,NR、GO、COG、KEGG等8个数据库共注释了24 857条转录本,KEGG数据库共获得了124个条代谢途径,主要有核糖体、碳代谢、氨基酸生物合成等,在类黄酮和叶绿素代谢途径中分别有49和71个转录本参与。上述结果初步揭示了枫香叶片变色期转录组信息以及功能特性,为后续研究枫香叶片变色分子机制、色素代谢合成途径和调控、相关功能基因克隆以及叶色改良提供基础数据。 展开更多
关键词 枫香 叶片变色期 单分子实时测序技术 全长转录组 基因功能注释
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重组降血压肽基因工程菌破碎方法研究 被引量:7
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作者 刘冬 吴亚丽 +2 位作者 张丽君 李世敏 梁世中 《河南工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2006年第3期53-56,共4页
对重组降血压肽基因工程菌细胞采用反复冻融法和超声波破碎法分别进行了破碎研究,并通过结晶紫染色镜检和亲和柱层析2种方法对所得细胞破碎效率进行了比较.结果表明,重组降血压肽基因工程菌最佳破碎方法为反复冻融7次,在此条件下,GST(... 对重组降血压肽基因工程菌细胞采用反复冻融法和超声波破碎法分别进行了破碎研究,并通过结晶紫染色镜检和亲和柱层析2种方法对所得细胞破碎效率进行了比较.结果表明,重组降血压肽基因工程菌最佳破碎方法为反复冻融7次,在此条件下,GST(谷胱甘肽转移酶)融合蛋白通过亲和层析柱后的吸附率可达80%以上. 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 细胞破碎 降血压肽
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利用酵母人工染色体(YAC)减数分裂同源重组构建人免疫球蛋白κ链基因组大片段 被引量:2
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作者 聂志妍 卢步峰 +2 位作者 徐燕萍 卢波 郭礼和 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2003年第2期130-136,共7页
具有同源重叠区的酵母人工染色体(YAC)可以利用酵母细胞减数分裂进行同源重组,从而构建更大的人工染色体基因组,这对生命科学基础研究和生物技术应用研究有着非常重要的意义。本实验以两个含人免疫球蛋白κ链基因簇片段的YAC克隆为材料... 具有同源重叠区的酵母人工染色体(YAC)可以利用酵母细胞减数分裂进行同源重组,从而构建更大的人工染色体基因组,这对生命科学基础研究和生物技术应用研究有着非常重要的意义。本实验以两个含人免疫球蛋白κ链基因簇片段的YAC克隆为材料,通过酵母改型、异型接合、二倍体发孢、单孢子筛选和分子生物学鉴定等技术和方法,利用酵母菌减数分裂同源重组机制,构建了一条包含人的免疫球蛋白κ轻链32个Vκ基因、5个Jκ基因、Cκ基因、Eκ基因和κde基因的YAC重组体,长度约400kb。同时,本实验利用溶壁酶消化法获取单孢子重组体,代替了传统的显微分孢操作。使得利用酵母人工染色体减数分裂同源重组的技术更加简便可行。 展开更多
关键词 人免疫球蛋白κ链 基因组 酵母人工染色体 减数分裂 同源重组
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缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)的基因特性与功能鉴定 被引量:1
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作者 房逢立 吴洪 周志刚 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1162-1172,共11页
酰基-CoA—二酰甘油酰基转移酶(DGAT)是微藻等植物三酰甘油(TAG)合成过程中的关键酶。为了解析缺刻缘绿藻TAG合成代谢的途径,在该藻转录组测序数据库中,通过同源搜索,发现了1个编码DGAT2的cDNA全长序列。该序列长1 997 bp,其中5'-... 酰基-CoA—二酰甘油酰基转移酶(DGAT)是微藻等植物三酰甘油(TAG)合成过程中的关键酶。为了解析缺刻缘绿藻TAG合成代谢的途径,在该藻转录组测序数据库中,通过同源搜索,发现了1个编码DGAT2的cDNA全长序列。该序列长1 997 bp,其中5'-非翻译区(UTR)长44 bp,3'-UTR长897 bp,开放阅读框(ORF)长1 056 bp,编码1个含有351个氨基酸的蛋白质,预测的分子量为39.43 ku,等电点为9.46。基于缺刻缘绿藻和其他物种相应的DGAT基因编码蛋白序列所构建的Neighbor-Joining(NJ)系统进化树,结果表明该基因与DGAT2聚成一支,显著不同于DGAT1和DGAT3。氨基酸序列比对发现,该基因编码产物含有DGAT2所具有的HPHG这4个氨基酸所组成的高度保守特征序列。因此,将该基因命名为MiDGAT2。将它的cDNA与其DNA序列进行比较后发现,MiDGAT2含有6个内含子,其剪接位点均符合"GT-AG"规则。为进一步了解其功能,利用反转录PCR克隆了该基因的ORF序列,然后将其亚克隆到表达载体pYES2中,成功地构建了重组表达质粒pY-MiDGAT2。通过电穿孔法将该重组质粒转入酿酒酵母TAG合成缺陷株H1246中,经筛选与序列验证得到含有重组质粒pY-MiDGAT2的酵母转化株。酵母转化株在用SC培养基并加入半乳糖诱导表达培养后,其脂类的薄层色谱分析结果表明,所转的MiDGAT2基因能使酵母转化株恢复TAG合成的能力,从而证实了MiDGAT2基因具有DGAT的功能;利用荧光染料Bodipy对酵母细胞的染色结果显示,MiDGAT2基因能使酵母转化株的细胞重现油滴,尽管重建的油滴大小明显比野生型酵母的小。 展开更多
关键词 缺刻缘绿藻 酿酒酵母 二酰甘油酰基转移酶(DGAT) 三酰甘油(TAG) 油滴
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东方拟无枝酸菌糖基转移酶基因gtfE的克隆(英文) 被引量:2
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作者 金飞燕 李国亮 +2 位作者 王旻 戈梅 陈代杰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期134-137,共4页
糖基转移酶基因 gtf E位于万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌 (Amycolatopsisorientalis)染色体上。通过 PCR的方法并对PCR反应条件进行了优化 ,扩增得到了较高产量的 PCR产物。PCR产物经酶切回收后克隆到 p Bluscript KS+质粒载体 ,转化E.... 糖基转移酶基因 gtf E位于万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌 (Amycolatopsisorientalis)染色体上。通过 PCR的方法并对PCR反应条件进行了优化 ,扩增得到了较高产量的 PCR产物。PCR产物经酶切回收后克隆到 p Bluscript KS+质粒载体 ,转化E.coli DH5 α感受态细胞 ,筛选得到一阳性克隆。测序后与文献报道的基因序列做同源比较 ,结果仅有两个碱基的差异。 展开更多
关键词 万古霉素 东方拟无枝酸菌 糖基转移酶 基因克隆
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人尿激酶原纤原受体识别区嵌合突变体的构建与表达
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作者 尹吉伟 岳俊杰 +1 位作者 李森 井健 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期554-557,共4页
采用同源转座方法,构建了在尿激酶原K区138-139位点插入了赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(KGD)序列的2种尿激酶原嵌合体基因(proUK-KGDW,proUK-KGDS),并以昆虫细胞SF9为宿主获得了高效表达,表达量在33.34μkat·mL^-1,细胞密度为10^6&#... 采用同源转座方法,构建了在尿激酶原K区138-139位点插入了赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(KGD)序列的2种尿激酶原嵌合体基因(proUK-KGDW,proUK-KGDS),并以昆虫细胞SF9为宿主获得了高效表达,表达量在33.34μkat·mL^-1,细胞密度为10^6·mL^-1,表达高峰期表达产物占细胞总蛋白的15%以上.表达产物展示出较高的纤溶活性,并具有良好的人尿激酶原免疫原性,同时,经SDS-PAGE试验检测,昆虫细胞分泌的突变体相对分子质量符合理论预期,为5.4×10^4,绝大多数为单链态形式.经过离子交换、分子筛层析及超滤浓缩等步骤对突变体蛋白进行了初步纯化,光浊度法试验表明含有KGDW序列的尿激酶原突变体具有较强的血小板聚集抑制活性,而含有KGDS序列的突变体几乎不具有任何活性,表明羧基端边侧序列对KGD展示正常的受体结合活性影响较大.溶解圈试验表明2种突变体均保留了较高的纤溶活性,说明插入序列不影响尿激酶原的酶切活性. 展开更多
关键词 尿激酶原 KGD序列 边侧序列 纤溶活性 血小板聚集抑制活性
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罗非鱼颗粒蛋白前体cDNA序列与表达分析 被引量:2
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作者 王瑞 陈明 +5 位作者 黄钧 李超 甘西 余晓丽 黄婷 梁万文 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期949-955,共7页
颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)在先天免疫反应调控及个体生长发育过程中均有重要作用。通过对罗非鱼外周血白细胞全长cDNA文库筛选得到的序列进行生物信息学分析,获得罗非鱼Pgrn全长cDNA序列(GenBank登录号为GQ241348)。该cDNA克隆总... 颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)在先天免疫反应调控及个体生长发育过程中均有重要作用。通过对罗非鱼外周血白细胞全长cDNA文库筛选得到的序列进行生物信息学分析,获得罗非鱼Pgrn全长cDNA序列(GenBank登录号为GQ241348)。该cDNA克隆总长843bp,包含一个完整的开放阅读框,编码206个氨基酸,其中推定信号肽20个氨基酸,两个GRN重复单位均56个氨基酸。研究采用实时定量PCR(Real-time RT-PCR)方法对感染海豚链球菌后奥尼罗非鱼、尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼和吉富罗非鱼4种组织(脑、肝脏、脾脏和头肾)Pgrn mRNA表达情况进行分析。结果显示,Pgrn mRNA在攻毒后4种罗非鱼4种组织中表达均有上调趋势,并且在脾中的表达量最高,提示PGRN在鱼类先天免疫反应调控中起重要作用。另外,奥尼罗非鱼在感染海豚链球菌后6h的脑和肝脏、6h和12h的脾脏和头肾中Pgrn mRNA表达均下调,然后表达升高,这种表达变化在其他三种鱼中不明显,这也许是奥尼罗非鱼抗病力较强的一个原因。研究为从分子水平探讨PGRN在罗非鱼先天免疫反应中的作用机制提供了数据,也为罗非鱼的抗病选育提供了参考分子标记。 展开更多
关键词 罗非鱼 实时定量PCR 抗病育种 PGRN 基因表达分析
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西藏米拉山草甸土壤PKS和NRPS基因多样性
8
作者 罗坤 杜桂萍 +2 位作者 赵志祥 谢丙炎 黎定军 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期506-511,共6页
为了解西藏米拉山草甸土壤中的聚酮合成酶(PKS)基因和非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因多样性,采用直接提取土壤总DNA,PCR扩增Ⅰ型PKS基因KS域和NRPS基因A域,并在NCBI进行Blast比对,分析其系统进化发育.得到27个PKS基因KS片段,经NCBI比对,... 为了解西藏米拉山草甸土壤中的聚酮合成酶(PKS)基因和非核糖体多肽合成酶(NRPS)基因多样性,采用直接提取土壤总DNA,PCR扩增Ⅰ型PKS基因KS域和NRPS基因A域,并在NCBI进行Blast比对,分析其系统进化发育.得到27个PKS基因KS片段,经NCBI比对,主要来自蓝细菌(Cyanobaeteria)、α-和γ-变形菌(Proteobaeteria)和不能培养的微生物,得到NPRSA片段32个,主要属于变形菌门、蓝细菌门等. 展开更多
关键词 聚酮合成酶 非核糖体多肽合成酶 土壤 西藏米拉山草甸
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新型人白细胞介素-2(125-Ser)表达载体的构建和大肠杆菌中的表达
9
作者 杨欣 胡晓方 +1 位作者 严君喜 曾献武 《预防医学情报杂志》 CAS 2001年第4期227-228,共2页
目的 构建新型人白细胞介素 2 ( 12 5 Ser)的表达载体 ,并在大肠杆菌中进行表达。方法 用PCR技术对天然人IL 2基因进行突变 ,并与表达载体 pET 11b连接 ,转化入大肠杆菌BL2 1中 ,用IPTG诱导表达。结果 将编码天然人IL 2的 12 5 Cy... 目的 构建新型人白细胞介素 2 ( 12 5 Ser)的表达载体 ,并在大肠杆菌中进行表达。方法 用PCR技术对天然人IL 2基因进行突变 ,并与表达载体 pET 11b连接 ,转化入大肠杆菌BL2 1中 ,用IPTG诱导表达。结果 将编码天然人IL 2的 12 5 Cys的密码子 (TGT)变成了编码 12 5 Ser的密码子 (TCT) ,在大肠杆菌中表达量达 2 7%。结论 构建了表达新型人IL 2 ( 12 5 Ser)的表达载体 ,并在大肠杆菌中获得高效表达 。 展开更多
关键词 人白细胞介素-2 表达载体 大肠杆菌 基因表达 聚合酶链反应
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板栗及其近缘种叶绿体SSR遗传多样性分析 被引量:7
10
作者 程丽莉 胡广隆 +1 位作者 苏淑钗 黄武刚 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期145-149,共5页
为了探明板栗及其近缘种的亲缘关系并分析栗属的遗传多样性,基于叶绿体微卫星标记技术,选用4对呈现多态性的cp SSR引物,对板栗及其近缘种、野生种共6个种,56份材料进行遗传结构、遗传关系等分析。4个位点扩增等位基因数(Na)平均为3.25,... 为了探明板栗及其近缘种的亲缘关系并分析栗属的遗传多样性,基于叶绿体微卫星标记技术,选用4对呈现多态性的cp SSR引物,对板栗及其近缘种、野生种共6个种,56份材料进行遗传结构、遗传关系等分析。4个位点扩增等位基因数(Na)平均为3.25,有效等位基因数(Ne)平均为2.554,期望杂合度(He)平均为0.606,群体Nei’s遗传多样性(Hs)为0.320,各遗传参数值均低于核基因组对群体研究的相应值。另外,各种之间有丰富的cp SSR多样性,尤以野生板栗多样性指数最高。结果表明,我国天然野生板栗群体内蕴含更丰富的遗传变异,为我国板栗野生种质保育及可持续开发利用提供了基础数据和科学依据。 展开更多
关键词 板栗 叶绿体微卫星DNA 遗传多样性 序列
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基于RAPD分析用百合DNA的提取 被引量:2
11
作者 瞿素萍 王继华 +2 位作者 吴学尉 杨秀梅 唐开学 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第6期40-42,共3页
对百合DNA的提取过程进行改良和优化,筛选出较理想的DNA提取方法.结果表明,该方法提取的百合DNA在1%的琼脂糖胶电泳上为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象,分子量大于23kb,OD260nm/OD280nm值为1.80~2.00.DNA的质量符合百合RAPD(随... 对百合DNA的提取过程进行改良和优化,筛选出较理想的DNA提取方法.结果表明,该方法提取的百合DNA在1%的琼脂糖胶电泳上为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象,分子量大于23kb,OD260nm/OD280nm值为1.80~2.00.DNA的质量符合百合RAPD(随机扩增多态DNA)分析要求,在百合遗传多态性分析和品种分子鉴定中具有良好的应用前景. 展开更多
关键词 百合 BAPD(随机扩增多态DNA) DNA提取
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谷胱甘肽过氧化物抗体酶ScFv的基因构建
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作者 冯书章 刘子 +4 位作者 郭学军 张国利 吴广谋 罗贵民 高姝娟 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期11-14,共4页
特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株5C9所分泌的McAb经化学修饰后,其抗体酶活性比兔肝谷胱甘肽过氧化物酶活性高2.6倍。在所建成的杂交瘤细胞株基础上,通过提取该细胞总RNA,分离mRNA,反转录合成cDNA,以及VH和V... 特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株5C9所分泌的McAb经化学修饰后,其抗体酶活性比兔肝谷胱甘肽过氧化物酶活性高2.6倍。在所建成的杂交瘤细胞株基础上,通过提取该细胞总RNA,分离mRNA,反转录合成cDNA,以及VH和VL基因的PCR扩增、组装,成功地构建了谷胱甘肽过氧化物抗体酶ScFv基因。电泳分析证明,VH和VL基因长度分别为340bp和325bp;所构建的ScFv基因长度约为750bp,并带有SfiⅠ和NotⅠ切点,可用于ScFv的基因重组及其表达。 展开更多
关键词 谷胱甘肽 过氧化物酶 抗体酶 ScFv基因 基因构建
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团头鲂Toll样受体3基因的克隆及特征研究 被引量:3
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作者 苏建国 朱作言 汪亚平 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期986-993,共8页
关键词 团头鲂 TOLL样受体3 基因克隆 特征分析
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RAPD和SRAP标记技术在苔藓植物亲缘关系研究中的比较分析 被引量:2
14
作者 张安世 张为民 +3 位作者 邢智峰 刘永英 韦慧彦 辛泽华 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第3期32-36,共5页
利用RAPD和SRAP标记技术研究11种苔藓植物的亲缘关系,并进行比较分析。结果表明:RAPD扩增的多态性比率达100%,SRAP扩增的多态性比率达96.9%,2种标记结果均显示了很高的多态性比率。利用SPSS11.5软件对RAPD和SRAP扩增结果进行了聚类分析... 利用RAPD和SRAP标记技术研究11种苔藓植物的亲缘关系,并进行比较分析。结果表明:RAPD扩增的多态性比率达100%,SRAP扩增的多态性比率达96.9%,2种标记结果均显示了很高的多态性比率。利用SPSS11.5软件对RAPD和SRAP扩增结果进行了聚类分析,两者均与形态学分类基本一致,但与形态学结果也有一定的差异,这种差异主要表现在科以上植物种类之间。同时,2种分子标记的聚类结果之间也存在一定的差异,主要是对大叶凤尾藓和小牛舌藓全缘亚种的划分。因此,RAPD和SRAP都有一定局限性,需要多种标记方法相互结合、相互印证,才能得出客观的结果。 展开更多
关键词 苔藓 RAPD 亲缘关系 遗传多样性
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龙牙楤木SE基因克隆与植物表达载体构建 被引量:4
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作者 成慧 杨光 +3 位作者 刘雅婧 赵春彦 原亚萍 吴颖 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期47-50,共4页
采用RT-PCR的方法,从龙牙楤木中克隆到鲨烯环氧酶(SE)基因,该基因的cDNA全长为1 682 bp,含有1 644 bp的开放阅读框(ORF),编码547个氨基酸,将所得的序列提交GenBank数据库,登录号为GU354314。序列分析结果表明:龙牙楤木SE基因的氨基酸序... 采用RT-PCR的方法,从龙牙楤木中克隆到鲨烯环氧酶(SE)基因,该基因的cDNA全长为1 682 bp,含有1 644 bp的开放阅读框(ORF),编码547个氨基酸,将所得的序列提交GenBank数据库,登录号为GU354314。序列分析结果表明:龙牙楤木SE基因的氨基酸序列与人参、三七、绞股蓝的同源性>90%,并构建了该基因的植物表达载体pAeSE。 展开更多
关键词 龙牙楤木 鲨烯环氧酶(SE)基因 植物表达载体 三萜皂苷
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南药益智AFLP-PCR体系的建立与优化 被引量:11
16
作者 高炳淼 潘坤 +3 位作者 田建平 唐天乐 魏娜 张俊清 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期251-255,共5页
[目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。[方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合... [目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。[方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合益智AFLP分析的引物组合进行筛选。[结果]实验结果表明最佳酶切反应体系:模板DNA 0.6μg,酶量20 U,酶切时间2 h;最佳AFLP-PCR选择性扩增反应体系(总体积为25μL):10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5μL,d NTPs 2μL,Mg2+(25mmol/L)1.5μL,引物(10 pmol/μL)各2.0μL,Taq酶(5 U/ml)0.5μL,模板稀释25倍2μL。利用建立的最佳扩增体系从64对引物中筛选获得8对选择性引物适合益智AFLP分析。[结论]建立了稳定的AFLP-PCR体系,为研究益智遗传多样性的AFLP分析奠定了基础。 展开更多
关键词 益智 AFLP-PCR 体系优化 引物筛选
原文传递
改良CTAB法提取林木树种基因组DNA的研究 被引量:43
17
作者 马明 杨克强 郭起荣 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第3期36-38,共3页
目的:验证改良CTAB法提取不同林木树种基因组DNA的效果,寻求一种对于不同林木树种基因组DNA提取普遍使用的方法。方法:采用改良的CTAB法提取22种木本植物基因组DNA,并对其进行定性、定量分析及酶切分析。结果:采用本法可以去除多糖和其... 目的:验证改良CTAB法提取不同林木树种基因组DNA的效果,寻求一种对于不同林木树种基因组DNA提取普遍使用的方法。方法:采用改良的CTAB法提取22种木本植物基因组DNA,并对其进行定性、定量分析及酶切分析。结果:采用本法可以去除多糖和其他次生代谢物并获得高质量的DNA。结论:该方法可以作为一种适于在实验室进行的林木树种基因组DNA的提取方法。 展开更多
关键词 基因组DNA 改良CTAB法 DNA提取 酶切分析
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艾美耳属球虫卵囊基因组DNA不同提取方法的比较 被引量:1
18
作者 李继东 《宁夏大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2009年第2期164-166,169,共4页
为了获得高质量的艾美耳属(Eimeria)球虫卵囊基因组DNA,采用了4种不同方法提取3种艾美耳属球虫卵囊的基因组DNA.对比结果表明,采用机械法破裂球虫卵囊壁,用裂解液裂解孢子囊和子孢子,释放出DNA,在保持碱性的环境下(pH=8.0),以苯酚-氯仿... 为了获得高质量的艾美耳属(Eimeria)球虫卵囊基因组DNA,采用了4种不同方法提取3种艾美耳属球虫卵囊的基因组DNA.对比结果表明,采用机械法破裂球虫卵囊壁,用裂解液裂解孢子囊和子孢子,释放出DNA,在保持碱性的环境下(pH=8.0),以苯酚-氯仿-异戊醇抽提,乙醇沉淀,可获得高质量的DNA分子,经PCR检验为艾美耳属球虫卵囊基因组DNA. 展开更多
关键词 艾美耳属球虫 基因组DNA 提取
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胸腺素A1基因串联体的构建 被引量:3
19
作者 薛晓畅 颜真 +1 位作者 韩苇 张英起 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第16期1532-1533,共2页
关键词 胸腺素Α1 串联体 构建
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野生型p53,GM-CSF和B7-1基因转移对卵巢癌细胞系SKOV-3增生的影响
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作者 林宇庚 张震宇 +1 位作者 王立生 吴彬 《首都医科大学学报》 CAS 2005年第5期588-592,共5页
目的研究人野生型p53、GM-CSF和协同刺激因子B7-1基因共转染对卵巢癌细胞增生的影响。方法以携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒载体转染卵巢癌细胞系SKOV-3,荧光显微镜观察,流式细胞计数计算转染效率;以携带野生型p53、GM-CSF和B7-1基... 目的研究人野生型p53、GM-CSF和协同刺激因子B7-1基因共转染对卵巢癌细胞增生的影响。方法以携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒载体转染卵巢癌细胞系SKOV-3,荧光显微镜观察,流式细胞计数计算转染效率;以携带野生型p53、GM-CSF和B7-1基因的腺病毒转染SKOV-3细胞,RT-PCR检测目的基因表达,观察转染前后细胞形态的变化,绘制细胞生长曲线。结果当腺病毒的感染强度达到400 pfu/细胞时,转染率可达到81%;以携带目的基因的腺病毒转染SKOV-3细胞,能检测到相应基因表达;转染后SKOV-3细胞形态发生改变,增生减缓。结论腺病毒载体能介导目的基因转入卵巢癌细胞,并有效表达;人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因共转染能减缓卵巢癌细胞的增生。 展开更多
关键词 基因治疗 卵巢癌 腺病毒
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