目的探讨不同浓度吐温80对戊型肝炎病毒(hepatitis E virus)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)稳定性的影响以及对比吐温80与海藻糖及山梨醇对VLP的稳定性作用,为VLP疫苗制剂优化提供一定的参考。方法验证4种不同浓度(0.0025%、0.00...目的探讨不同浓度吐温80对戊型肝炎病毒(hepatitis E virus)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)稳定性的影响以及对比吐温80与海藻糖及山梨醇对VLP的稳定性作用,为VLP疫苗制剂优化提供一定的参考。方法验证4种不同浓度(0.0025%、0.0050%、0.0100%和0.0200%)的吐温80对戊型肝炎病毒VLP稳定性的作用,在-80℃将戊型肝炎病毒VLP反复冻融3次,检测不同试验组VLP粒径大小、蛋白纯度及相对含量。在筛选出适宜浓度的吐温80后,选择15.0000%海藻糖及10.0000%山梨醇,分别对比3种不同类型的保护剂对戊型肝炎病毒VLP的保护作用。结果在不同浓度吐温80冻融试验中,对照组(冻融后)VLP平均粒径大小均远超出质量标准,而4种浓度的吐温80组VLP粒径大小均在质量标准范围内。经过方差分析,对照组(冻融前)与试验组各组峰面积差异无统计学意义(P=0.0531,P>0.05),对照组(冻融后)与试验组各组峰面积之间差异有统计学意义(P=0.0053,P<0.05)。同时,随着吐温80浓度的增加,VLP蛋白相对含量也逐渐增加。在不同类型保护剂冻融试验中,海藻糖组、山梨醇组以及对照组(冻融后)VLP平均粒径大小均不符合质量标准,仅0.0100%吐温80组3批次VLP平均粒径为56.27 nm,处于质量标准内。同时,体积排阻色谱检测结果显示,山梨醇组VLP蛋白纯度低于95.00%,山梨醇组和海藻糖组VLP蛋白纯度低于0.0100%吐温80组。经过t检验分析,与对照组(冻融前)相比,对照组(冻融后)以及3组试验组峰面积均出现下降,其中对照组(冻融后)下降幅度最大,10.0000%山梨醇组峰面积下降幅度次之,且峰面积差异具有统计学意义(P=0.0007,P<0.01),而15.0000%海藻糖组和0.0100%吐温80组峰面积差异无统计学意义(P=0.0723,P=0.2569,P>0.05)。另外,电镜下可以观察到在0.0100%吐温80组冻融后大部分VLP形态均一,未聚集成团。结论0.0100%吐温80对戊型肝炎病毒VLP具有良好的稳定作用。展开更多
文摘目的探讨不同浓度吐温80对戊型肝炎病毒(hepatitis E virus)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)稳定性的影响以及对比吐温80与海藻糖及山梨醇对VLP的稳定性作用,为VLP疫苗制剂优化提供一定的参考。方法验证4种不同浓度(0.0025%、0.0050%、0.0100%和0.0200%)的吐温80对戊型肝炎病毒VLP稳定性的作用,在-80℃将戊型肝炎病毒VLP反复冻融3次,检测不同试验组VLP粒径大小、蛋白纯度及相对含量。在筛选出适宜浓度的吐温80后,选择15.0000%海藻糖及10.0000%山梨醇,分别对比3种不同类型的保护剂对戊型肝炎病毒VLP的保护作用。结果在不同浓度吐温80冻融试验中,对照组(冻融后)VLP平均粒径大小均远超出质量标准,而4种浓度的吐温80组VLP粒径大小均在质量标准范围内。经过方差分析,对照组(冻融前)与试验组各组峰面积差异无统计学意义(P=0.0531,P>0.05),对照组(冻融后)与试验组各组峰面积之间差异有统计学意义(P=0.0053,P<0.05)。同时,随着吐温80浓度的增加,VLP蛋白相对含量也逐渐增加。在不同类型保护剂冻融试验中,海藻糖组、山梨醇组以及对照组(冻融后)VLP平均粒径大小均不符合质量标准,仅0.0100%吐温80组3批次VLP平均粒径为56.27 nm,处于质量标准内。同时,体积排阻色谱检测结果显示,山梨醇组VLP蛋白纯度低于95.00%,山梨醇组和海藻糖组VLP蛋白纯度低于0.0100%吐温80组。经过t检验分析,与对照组(冻融前)相比,对照组(冻融后)以及3组试验组峰面积均出现下降,其中对照组(冻融后)下降幅度最大,10.0000%山梨醇组峰面积下降幅度次之,且峰面积差异具有统计学意义(P=0.0007,P<0.01),而15.0000%海藻糖组和0.0100%吐温80组峰面积差异无统计学意义(P=0.0723,P=0.2569,P>0.05)。另外,电镜下可以观察到在0.0100%吐温80组冻融后大部分VLP形态均一,未聚集成团。结论0.0100%吐温80对戊型肝炎病毒VLP具有良好的稳定作用。