布鲁氏菌微滴式数字PCR方法的建立与应用 被引量：10

1

作者 田国忠 姜海 +4 位作者 薛盼盼 朴东日 赵鸿雁 杨晓雯 张京云 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期301-305,共5页

目的建立可对布鲁氏菌准确定量的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法。方法使用以布鲁氏菌bscp31基因为靶标的引物和探针,摸索最佳的引物和探针工作浓度,确定反应体系和扩增条件,评价所建立方法的灵敏性、特异性及对疫情相... 目的建立可对布鲁氏菌准确定量的微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)方法。方法使用以布鲁氏菌bscp31基因为靶标的引物和探针,摸索最佳的引物和探针工作浓度,确定反应体系和扩增条件,评价所建立方法的灵敏性、特异性及对疫情相关血液标本的检测效果。结果ddPCR反应体系中最佳引物和探针浓度分别为0.8μmol/L和0.4μmol/L;最佳扩增条件:95℃10 min;95℃30 s,60℃1 min,循环40次;98℃酶失活10 min。布鲁氏菌核酸DNA为0.96 ng/反应~3.68 fg/反应时,ddPCR检出靶标基因拷贝数为2.00×105拷贝/反应~1拷贝/反应,ddPCR测得值的对数值与DNA浓度的对数值有线性关系。在疫情相关血液标本DNA的检测中,ddPCR阳性率远高于培养法和试管凝集法;16份人血液标本中靶标基因浓度为5~65拷贝/mL血液(平均29拷贝/mL血液),5份羊血液标本中靶标基因浓度为25~245拷贝/mL血液(平均98拷贝/mL血液)。结论ddPCR灵敏性高,可检测微量核酸DNA,适合临床血液标本的检测以及布病病原体的分子流行病学调查。 展开更多

关键词 微滴式数字PCR 荧光定量PCR 布鲁氏菌

下载PDF 职称材料

内蒙古羊种布鲁氏菌传播模式调查研究 被引量：7

2

作者 刘志国 王妙 +3 位作者 赵鸿雁 朴东日 崔步云 李振军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期465-471,共7页

目的调查内蒙古羊种布鲁氏菌的传播模式和流行规律。方法采用AMOS-PCR对60株布鲁氏菌的种型进行鉴定,用Hunter-Gaston Diversity Index(HGDI)评价菌株的遗传多态性特征,采用MLVA-16分型方法对菌株进行基因分型,确定菌株的亲缘关系。结果... 目的调查内蒙古羊种布鲁氏菌的传播模式和流行规律。方法采用AMOS-PCR对60株布鲁氏菌的种型进行鉴定,用Hunter-Gaston Diversity Index(HGDI)评价菌株的遗传多态性特征,采用MLVA-16分型方法对菌株进行基因分型,确定菌株的亲缘关系。结果 60株试验菌全部为羊种布鲁氏菌。MLVA-16对菌株具有极高的分辨力,多态性指数为0.981;Panel 1,Panel 2A和Panel 2B的多态性指数分别为0.264,0.345和0.980;Panel 2B中Bru16位点的多态性指数最高,多态性指数为0.835。60株羊种布鲁氏菌聚为5大类37个基因型,其中15个共享基因型包括38株羊种布鲁氏菌,聚类率为63.3%(38/60),提示病例多为有流行病学关联的暴发流行;另外22株菌表现为独特基因型表明菌株无明显的流行病学相关性。共享基因型GT5包括2株分别分离自羊和骆驼的菌株且有相同的MLVA-16基因型,提示布鲁氏菌在羊和骆驼中循环传播;3个共享基因型(GT11、GT17和GT23)分别包含来自人和羊的菌株并呈现完全相同的MLVA-16基因型,表明羊是人间布病的传染源。GT35由3株分离自羊脾的菌株构成且共享相同的基因型,提示布病在羊中呈暴发流行。类群E由12个来自不同宿主(羊,牛,野生骆驼和人)的菌株构成,共享相同或相似的MLVA-16基因型,揭示了内蒙古羊种布鲁氏菌潜在的传播模式。结论疫羊是主要传染源,野生动物(骆驼)是贮藏宿主。羊种布鲁氏菌在羊牛(骆驼)和骆驼(羊牛)中相互循环传播,最后传染给人是内蒙古羊种布鲁氏菌的潜在传播模式。 展开更多

关键词 羊种布鲁氏菌 传播模式 内蒙古

下载PDF 职称材料

布鲁氏菌鞭毛研究进展 被引量：6

3

作者 路殿英 赵鸿雁 +2 位作者 朴东日 田国忠 姜海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期66-69,共4页

近几年研究表明,在特定的生长条件下,布鲁氏菌能够形成一种护鞘鞭毛结构,这种鞭毛可能在布鲁氏菌于宿主内的持续感染中发挥重要作用。为了解布鲁氏菌鞭毛结构功能信息及其可能致病机理,探索其应用价值,通过查阅相关文献,从布鲁氏菌鞭毛... 近几年研究表明,在特定的生长条件下,布鲁氏菌能够形成一种护鞘鞭毛结构,这种鞭毛可能在布鲁氏菌于宿主内的持续感染中发挥重要作用。为了解布鲁氏菌鞭毛结构功能信息及其可能致病机理,探索其应用价值,通过查阅相关文献,从布鲁氏菌鞭毛镜下观察、基因表达调控、免疫原性及毒力、免疫逃避、群体感应等方面对其研究现状做综合阐述。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 鞭毛 结构与功能 免疫原性

下载PDF 职称材料

内蒙古乌兰察布地区布鲁氏菌体外药物敏感性及耐药机制分析 被引量：4

4

作者 刘志国 王妙 +5 位作者 李晓燕 塔娜 赵鸿雁 朴东日 赵忠志 李振军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期393-398,共6页

目的调查内蒙古乌兰察布地区分离布鲁氏菌的抗生素药物敏感(耐受)性特征。方法采用E-test法测定了85株布鲁氏菌对13种临床常用药物的敏感性;同时,对利福平和阿奇霉素的耐药机制进行了初步探讨;并采用K-B法对来自全国的149株羊种布鲁氏... 目的调查内蒙古乌兰察布地区分离布鲁氏菌的抗生素药物敏感(耐受)性特征。方法采用E-test法测定了85株布鲁氏菌对13种临床常用药物的敏感性;同时,对利福平和阿奇霉素的耐药机制进行了初步探讨;并采用K-B法对来自全国的149株羊种布鲁氏菌对复方新诺明和利福平的敏感性进行了筛查。结果试验表明布鲁氏菌对阿奇霉素、复方新诺明和利福平耐药菌株数分别为100%(85/85),7.0%(6/85)和1.0%(1/85)。所有菌株对司帕沙星、米诺环素、多西环素、四环素、链霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、环丙沙星、头孢吡肟及头孢哌酮舒巴坦均表现为敏感;司帕沙星、米诺环素的MIC_(90)值(0.032μg/mL)最低。所有阿奇霉素耐药菌株的23S rRNA基因的第2632位碱基表现为T→C单位点突变,布鲁氏菌23S rRNA转肽酶中心的T/C点突变可能是一种羊种布鲁氏菌对阿奇霉素耐药的分子机制。K-B法筛查结果表明所有菌株对利福平敏感,25.5%(38/149)的菌株对复方新诺明耐药,耐药菌株分布于18个省市区。结论乌兰察布地区羊种布鲁氏菌耐药较为严重,应定期进行药物敏感性监测。推荐司帕沙星和米诺环素作为一线布病治疗药物。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 药物敏感性 耐药机制

下载PDF 职称材料

内蒙古阿拉善盟布鲁氏菌病流行特征及病原体分型研究 被引量：3

5

作者 徐创泽 朴东日 +5 位作者 姜海 刘慧兰 李萌 田海荣 焦红岩 田国忠 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2020年第6期648-651,666,共5页

目的研究内蒙古自治区(内蒙古)阿拉善盟地区人感染布鲁氏菌的分子流行病学特征。方法对2015-2019年间血培养阳性的疑似布鲁氏菌,应用常规生物学和多重PCR方法鉴定临床分离菌株,应用多位点串联重复序列分析(MLVA)方法研究其分子流行病学... 目的研究内蒙古自治区(内蒙古)阿拉善盟地区人感染布鲁氏菌的分子流行病学特征。方法对2015-2019年间血培养阳性的疑似布鲁氏菌,应用常规生物学和多重PCR方法鉴定临床分离菌株,应用多位点串联重复序列分析(MLVA)方法研究其分子流行病学特征。结果 2015-2019年间阿拉善盟地区布病确诊患者中分离到23株疑似布鲁氏菌,经常规生物学和多重PCR鉴定为羊种布鲁氏菌生物3型菌株。23例病例中牧民占30.43%(7/23),农民占39.13%(9/23),皆有羊接触史。血清布鲁氏菌抗体阳性率为78.26%(18/23)。MLVA分析表明23株菌株属于我国羊种布鲁氏菌主要流行菌株基因型,根据有差异的3个位点,分离自巴彦木仁苏木的菌株主要集中在一组内,来自吉兰泰镇的2株菌株集中在另一组内。23株布鲁氏菌分别与宁夏、辽宁、山东、浙江、上海、广东省(自治区、直辖市)分离菌株相关,而与其临近的甘肃省分离菌株无相关性。结论内蒙古阿拉善盟地区布鲁氏菌菌株与我国的布病流行菌株一致,与宁夏、辽宁、山东、浙江、上海、广东省(自治区、直辖市)分离菌株相关。 展开更多

关键词 布鲁氏菌病 流行病学特征 布鲁氏菌 基因分型 阿拉善盟

原文传递

布鲁氏菌鞭毛钩蛋白FlgE和融合蛋白BLS-FlgE的克隆、表达及免疫诊断研究 被引量：3

6

作者 路殿英 姜海 +4 位作者 田国忠 杨晓雯 赵鸿雁 朴东日 魏俊妮 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期881-885,共5页

目的分别构建含目的基因flgE和bls-flgE的原核表达载体,表达纯化重组蛋白,并对其免疫诊断价值进行初步评价。方法从NCBI得到布鲁氏菌鞭毛钩蛋白基因flgE和2,4二氧四氢蝶啶合酶基因(bls)序列,设计引物,利用PCR技术扩增得到目的基因,与载... 目的分别构建含目的基因flgE和bls-flgE的原核表达载体,表达纯化重组蛋白,并对其免疫诊断价值进行初步评价。方法从NCBI得到布鲁氏菌鞭毛钩蛋白基因flgE和2,4二氧四氢蝶啶合酶基因(bls)序列,设计引物,利用PCR技术扩增得到目的基因,与载体pET30a连接,转化E.coli BL21感受态细胞,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定,使用带His标签的蛋白纯化试剂盒纯化蛋白。纯化后的蛋白建立ELISA法检测布病阳性血清和健康人血清,收集灵敏度和特异度数据。结果成功克隆了FlgE鞭毛钩蛋白和BLS-FlgE融合蛋白,经过优化表达条件,目的蛋白获得较大量的表达,免疫印迹结果显示可被阳性病人血清识别。以FlgE蛋白构建ELISA法检测得到灵敏度和特异度分别为70.83%和41.67%,以BLS-FlgE蛋白构建ELISA法检测得到灵敏度和特异度分别为68.75%和52.08%。结论成功表达布鲁氏菌鞭毛钩蛋白FlgE和融合蛋白BLS-FlgE,分别作为诊断抗原总体符合率低,免疫诊断价值较低。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 鞭毛钩蛋白FlgE 融合蛋白BLS-FlgE 原核表达

下载PDF 职称材料

布鲁氏菌多重荧光定量PCR方法的建立与应用 被引量：2

7

作者 刘佳音 田国忠 +9 位作者 于高娃 杜松楠 陈俊杰 孟颖 杨晓雯 范玉 赵鸿雁 朴东日 杨文杰 姜海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期309-316,共8页

目的探讨应用多重荧光定量PCR方法检测待检者血液、血清以及环境样本中布鲁氏菌的价值。方法根据149名待测者的就诊情况进行分类,其中疑似组75人、治疗组74人。对收集的环境和待检者的样本应用多重荧光定量PCR方法检测,结果进行统计分... 目的探讨应用多重荧光定量PCR方法检测待检者血液、血清以及环境样本中布鲁氏菌的价值。方法根据149名待测者的就诊情况进行分类,其中疑似组75人、治疗组74人。对收集的环境和待检者的样本应用多重荧光定量PCR方法检测,结果进行统计分析。将3对引物、探针的目的基因克隆到PUC57载体上制作阳性标准品,进行灵敏度检测和标准曲线的绘制。结果通过对149名待检者的样本进行荧光定量PCR检测,单重、双重和三重方法的阳性率分别为79.2%、34.2%和27.5%。单重与双重,单重与三重荧光定量方法的阳性率差异均有统计学意义,χ^(2)值分别为55.42和73.42,P<0.05。布鲁氏菌属的单重荧光定量PCR结果生成的标准曲线为y=-3.7732x+43.188,R^(2)=0.9953,线性关系良好,最低检测范围为101 copies/μL。经过多重荧光定量方法检测的环境样本结果全部为阳性。结论单重荧光定量PCR方法灵敏度较好,建议与血清学方法联合使用对高危人群进行定期筛查,三重荧光定量方法可以在一次实验中既能完成属水平的鉴定又能区分牛种和羊种布鲁氏菌,对于环境样品具有良好的扩增效果,2种方法对于布鲁氏菌病的预防控制具有重要作用。 展开更多

关键词 多重荧光定量PCR 布鲁氏菌 灵敏度

下载PDF 职称材料

布鲁氏菌噬菌体基因组学研究进展 被引量：1

8

作者 张宇 朴东日 姜海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期718-722,共5页

布鲁氏菌噬菌体用于鉴定和鉴别布鲁氏菌种属,其种类、遗传特性以及基因组功能对布鲁氏菌鉴别分型具有重要作用,因此布鲁氏菌噬菌体的研究备受关注。基于当前的研究进展,本文对布鲁氏菌噬菌体的基本特征、基因组功能、基因组比对以及最... 布鲁氏菌噬菌体用于鉴定和鉴别布鲁氏菌种属,其种类、遗传特性以及基因组功能对布鲁氏菌鉴别分型具有重要作用,因此布鲁氏菌噬菌体的研究备受关注。基于当前的研究进展,本文对布鲁氏菌噬菌体的基本特征、基因组功能、基因组比对以及最新应用技术的相关研究进行综述,在了解布鲁氏菌噬菌体基因多样性和复杂性的基础上,进一步认识噬菌体与宿主的相互作用机制。 展开更多

关键词 布鲁氏菌噬菌体 布鲁氏菌 基因组

下载PDF 职称材料

犬种布鲁氏菌的遗传多样性分析 被引量：2

9

作者 刘志国 王衡 +5 位作者 王妙 李丹 赵鸿雁 朴东日 李明慧 李振军 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期3325-3334,共10页

【背景】犬种布鲁氏菌是犬种布病的病原菌,主要导致犬流产和繁殖障碍。虽然犬种布鲁氏菌感染人群的病例极为少见,但是犬种布鲁氏菌对人的安全风险仍存在争议。目前,我国犬种布病的流行病学特征及犬种布鲁氏菌的遗传多样性的研究相对缺... 【背景】犬种布鲁氏菌是犬种布病的病原菌,主要导致犬流产和繁殖障碍。虽然犬种布鲁氏菌感染人群的病例极为少见,但是犬种布鲁氏菌对人的安全风险仍存在争议。目前,我国犬种布病的流行病学特征及犬种布鲁氏菌的遗传多样性的研究相对缺乏。开展犬种布病的流行特征及遗传多样性调查对加强犬种布病的监测防控具有重要意义。【目的】对犬种布病的流行病学特征和犬种布鲁氏菌的遗传多态性进行调查,为犬种布病的防控提供参考。【方法】采用常规鉴定方法和BCSS-PCR对63株试验菌株进行鉴定。采用HGDI (Hunter and Gaston diversity index)多态性指数调查犬种布鲁氏菌的遗传多态性,用MLVA方法基于BioNumerics5.0软件对菌株进行聚类分析,揭示犬种布病的流行病学特点。此外,基于MLVA-11采用goeBURST软件构建犬种布鲁氏菌的最小生成树(Minimum spanning tree,MST),阐述我国犬种布鲁氏菌的地理起源特征。【结果】常规鉴定方法和BCSS-PCR扩增结果显示63株试验菌株全部为犬种布鲁氏菌。BCSS-PCR与常规鉴定方法的符合率为100%,BCSS-PCR的分析敏感性为10^-3 (即50 pg/μL犬种布鲁氏菌DNA)。我国犬种布鲁氏菌具有较高的遗传多样性,基于HGDI分析表明Panel 2B的5个位点具有较高的变异度,等位基因型由高到底依次为bruce09(11)> bruce07(8)>bruce16(7)>bruce04(6)>bruce30(5)。MLVA聚类分析表明北京地区出现了3次较小规模的犬种布病暴发流行,其余地区均为零星散发。我国犬种布鲁氏菌可分为5个地理集群,以MLVA-11基因26型克隆群为主导种群,该种群与来自美国、希腊、加拿大、法国、罗马尼亚和韩国等国家的菌株具有共同的地理起源,其余4个种群为中国特有。【结论】我国犬种布鲁氏菌呈现高度的遗传多样性并有广泛的地理来源,表现为输入性和中国特有血统共存的起源进化特征。 展开更多

关键词 犬种布鲁氏菌 遗传多样性

原文传递

人工诱变利福平抗性布鲁氏菌转录组测序分析 被引量：1

10

作者 杨晓雯 赵鸿雁 +2 位作者 朴东日 田国忠 姜海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期834-839,846,共7页

目的筛选布鲁氏菌中参与利福平代谢相关基因(除rpoB基因外)。方法利用人工诱变技术获得利福平抗性菌株,通过转录组测序获得标准菌株和利福平抗性菌株全基因组水平的基因表达量,利用EBSeq算法筛选差异表达基因,预测利福平代谢相关基因及... 目的筛选布鲁氏菌中参与利福平代谢相关基因(除rpoB基因外)。方法利用人工诱变技术获得利福平抗性菌株,通过转录组测序获得标准菌株和利福平抗性菌株全基因组水平的基因表达量,利用EBSeq算法筛选差异表达基因,预测利福平代谢相关基因及主要代谢途径。结果通过不同浓度的利福平人工诱变,能够获得抗性表型稳定的布鲁氏菌变异菌株。转录组测序发现利福平抗性菌株中有121个基因表达量上调,197个基因表达量下调,差异基因功能主要集中于催化活性、细胞膜和细胞成分、代谢过程和细胞过程;主要参与抗生素的生物合成、细菌分泌系统和ABC转运蛋白等代谢通路。结论包括virB操纵子在内的涉及碳代谢等代谢通路的基因,通过表达量的改变参与抵抗利福平的作用。本研究为布鲁氏菌耐药相关基因的筛选提供新思路,同时为布鲁氏菌耐药菌株的防控提供基础性数据。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 利福平抗性 IV型分泌系统 RPOB

下载PDF 职称材料

一株羊种变异布鲁氏菌分离株遗传特征分析 被引量：1

11

作者 杨晓雯 韩秀瑞 +3 位作者 朴东日 赵鸿雁 田国忠 姜海 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期894-899,共6页

目的为研究一株羊种布鲁氏菌粗糙型变异菌株的遗传特征。方法本研究利用布鲁氏菌表型鉴定方法、全基因组测序及比较基因组分析方法。结果分离株与单因子R血清、三胜黄素发生凝集且能够被结晶紫染色,全基因组测序表明,该分离株与羊种2型... 目的为研究一株羊种布鲁氏菌粗糙型变异菌株的遗传特征。方法本研究利用布鲁氏菌表型鉴定方法、全基因组测序及比较基因组分析方法。结果分离株与单因子R血清、三胜黄素发生凝集且能够被结晶紫染色,全基因组测序表明,该分离株与羊种2型菌株相似性最高;其基因组由2条染色体组成,大小为3311700 bp,GC含量为57.2%,含有3379个CDS,9个rRNA,55个tRNA和4个ncRNA;存在282个变异,其中243个SNPs,39个InDel;已知的LPS合成基因中,8个存在错义突变。结论基因水平上的突变导致LPS合成受阻,分离株表型由光滑型变为粗糙型。本研究为羊种布鲁氏菌粗糙型变异菌株的研究提供了基础数据,同时也为布鲁氏菌疫苗候选株的筛选提供新思路。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 LPS 全基因组测序 单核苷酸变异

下载PDF 职称材料

牛羊猪种布鲁氏菌快速鉴别PCR方法的建立及评价

12

作者 刘志国 塔娜 +6 位作者 李晓燕 王妙 赵鸿雁 朴东日 蔚瑞平 米景川 李振军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期399-403,共5页

目的建立一种可在一个反应体系中同时鉴别布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的快速PCR鉴别方法。方法将布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的扩增引物进行优化组合,建立全新的BAMS-PCR方法;随后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对现场分离的219... 目的建立一种可在一个反应体系中同时鉴别布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的快速PCR鉴别方法。方法将布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的扩增引物进行优化组合,建立全新的BAMS-PCR方法;随后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对现场分离的219株布鲁氏菌进行鉴别,评价其在布鲁氏菌鉴别中的应用价值。最后,用该方法对临床标本中布鲁氏菌的DNA进行扩增,评价其在临床诊断中的实用性。结果 BAMS-PCR方法可在同一反应中同时鉴别布鲁氏菌及牛种(1,2,4型),羊种(1,2和3型)和猪种(1型)布鲁氏菌,并有较好的特异性和敏感性。布鲁氏菌属,牛种,猪种和羊种布鲁氏菌引物的检测灵敏度分别为10 pg/μL,100 pg/μL, 10 pg/μL和100 pg/μL。BAMS-PCR对219株临床分离菌株的鉴定结果和常规生物分型方法的鉴定符合率为100%。经BAMS-PCR检测,97份临床血清样本仅6份为阳性,全血和组织(羊脾)样本全部为阴性。结论 BAMS-PCR是一种简便、快速、高效、准确的布鲁氏菌鉴别方法,可作为临床分离菌株的首选鉴别方法。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 聚合酶链式反应 鉴别 评价

下载PDF 职称材料

五种布鲁氏菌核酸检测试剂盒检测性能的评价 被引量：2

13

作者 范玉 姜海 +8 位作者 塔娜 宋春志 丛宇 刘佳音 杨晓雯 田国忠 赵鸿雁 张宇 朴东日 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期883-889,共7页

目的比较5种布鲁氏菌核酸实时荧光PCR检测试剂盒的一致性和检出能力,为临床实验室选择检测方法和布鲁氏菌的诊断提供参考依据。方法选用经病原学检测确定为布鲁氏菌阳性的血液样本38份,健康人的血液样本24份,潘氏变形杆菌、溶藻弧菌、... 目的比较5种布鲁氏菌核酸实时荧光PCR检测试剂盒的一致性和检出能力,为临床实验室选择检测方法和布鲁氏菌的诊断提供参考依据。方法选用经病原学检测确定为布鲁氏菌阳性的血液样本38份,健康人的血液样本24份,潘氏变形杆菌、溶藻弧菌、河弧菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌DNA各1份,使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行核酸检测,比较5种试剂盒临床样本检测的一致性;选择1份阳性样本核酸用无RNA酶水梯度稀释得到5个浓度(浓度1:4453.13 fg/μL,浓度2:1113.28 fg/μL,浓度3:278.32 fg/μL,浓度4:69.58 fg/μL,浓度5:17.40 fg/μL),每个浓度使用5种试剂盒(编号A-E)分别进行3次检测,比较5种试剂盒的阳性检出率及批内重复性。结果5种试剂盒检测67份DNA样品的符合率稍有不同,试剂盒ABDE的符合率均为100%,试剂盒C的符合率为98.51%。批内重复性显示5种试剂盒在浓度1、浓度2、浓度3水平重复检测DNA的Ct值变异系数均<5%;在浓度1与浓度4梯度区间,试剂盒的阳性检出能力比较显示试剂盒A、B、D较高,为11/12,试剂盒C和E较低,为8/12。结论5种试剂盒的真实性和可靠性较好,灵敏度和符合率稍有差别,特异度均为100%;重复性较好,检测性能良好。部分试剂盒对弱阳性样本的检出能力不强,该类样本可使用多种试剂盒复核,以保障结果的准确性。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 核酸 试剂盒 实时荧光PCR

下载PDF 职称材料