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热休克转录因子1对视网膜色素上皮细胞抗氧化和抗衰老的调控作用
1
作者 蒋明君 尚国辉 +4 位作者 张凤妍 殷凡响 薛梦姣 胡延忠 彭旭艳 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期417-427,共11页
目的探讨热休克转录因子1(HSF1)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)抗氧化和抗衰老的作用。方法利用成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除人ARPE-19细胞系中HSF 1基因,构建并获得2种HSF1缺失ARPE细胞株(AR... 目的探讨热休克转录因子1(HSF1)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)抗氧化和抗衰老的作用。方法利用成簇规律间隔短回文重复序列及相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因编辑技术敲除人ARPE-19细胞系中HSF 1基因,构建并获得2种HSF1缺失ARPE细胞株(ARPE/Hsf1-/-),分别命名为H8、H9细胞株。取野生型、H8和H9细胞株,应用DHE探针染色结合流式分析技术测定细胞内活性氧簇(ROS)含量,应用流式细胞分析方法测定细胞周期;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定不同培养时间点细胞活力值;采用结晶紫染色实验测定细胞相对存活率;采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色实验检测衰老细胞比率;采用Western blot法检测各细胞株中热休克蛋白(HSP)70、HSP27、聚集素(CLU)、p53、p21和白细胞介素(IL)-1β蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR法测定各细胞株中p53、p21、IL-6、IL-8、IL-1β、单核细胞趋化蛋白1(MCP1)mRNA表达水平。比较各细胞株在不同热休克处理条件下和HSP90抑制剂IPI504处理下热休克反应相关蛋白相对表达量,比较各细胞株不同浓度H_(2)O_(2)处理后相对存活率,比较各细胞株经或未经ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理后p21蛋白相对表达量。结果基因测序显示H8和H9细胞株成功携带突变基因,Western blot检测结果显示H8、H9细胞株不表达HSF1蛋白,HSF1在ARPE-19细胞中被成功敲除。与野生型细胞株相比,H8、H9细胞株中的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);各细胞株HSP90蛋白相对表达水平总体比较,差异无统计学意义(F=0.29,P>0.05)。在不同热休克刺激和IPI504诱导下野生型细胞株中HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与野生型细胞株相比,H8和H9细胞株的HSP70、HSP27、CLU蛋白相对表达水平显著低于相应处理的野生型细胞,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与野生 展开更多
关键词 热休克转录因子1 年龄相关性黄斑变性 细胞衰老 视网膜色素上皮 衰老治疗 氧化应激
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基于改进YOLO V5的无人机航拍图像小目标检测方法 被引量：2
2
作者 程向红 曹毅 +2 位作者 胡彦钟 张文卓 钱荣辉 《飞控与探测》 2023年第1期80-85,共6页
针对无人机航拍目标检测技术中目标聚集、目标较小及实时性差等问题,对YOLO V5的主干架构进行改进,简化Neck网络,提出了一种既能提高检测速度又能准确识别的无人机航拍图像检测技术方案。经过仿真实验测试,改进后的YOLO V5网络在保持识... 针对无人机航拍目标检测技术中目标聚集、目标较小及实时性差等问题,对YOLO V5的主干架构进行改进,简化Neck网络,提出了一种既能提高检测速度又能准确识别的无人机航拍图像检测技术方案。经过仿真实验测试,改进后的YOLO V5网络在保持识别精度的同时,检测速率提升了31%,满足无人机在航拍作业时对于准确性与实时性的要求。 展开更多
关键词 深度学习 无人机航拍 目标检测
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涂布介入器械的人血管内皮生长因子真核表达载体的构建 被引量：3
3
作者 张一林 贺迎坤 +3 位作者 李天晓 刘刚 胡延忠 崔秀坤 《中华介入放射学电子杂志》 2019年第1期40-43,共4页
目的:构建可涂布于介入器械的人血管内皮生长因子(VEGF)真核表达载体。方法:根据人VEGFA(NM_001025366)目的序列设计引物制备目的基因及载体,双酶切载体p IRES2-ZsGreen1和目的基因homo VEGFA进行连接后转化入大肠杆菌,构建质粒p IRES2-... 目的:构建可涂布于介入器械的人血管内皮生长因子(VEGF)真核表达载体。方法:根据人VEGFA(NM_001025366)目的序列设计引物制备目的基因及载体,双酶切载体p IRES2-ZsGreen1和目的基因homo VEGFA进行连接后转化入大肠杆菌,构建质粒p IRES2-ZsGreen1-homo-VEGFA并测序鉴定。结果:目的基因VEGFA已连接到载体pIRES2-ZsGreen1,大小约1400 bp,与人VEGFA(NM_001025366)目的序列比对结果一致,未见变异。质粒p IRES2-ZsGreen1-homo-VEGFA构建成功。结论:成功构建重组人血管内皮生长因子真核表达载体,可用于涂布介入器械表面进行下一步实验。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 介入器械 质粒 基因
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过表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2型刺突蛋白抑制人视网膜色素上皮细胞生长
4
作者 张宇航 薛梦姣 +2 位作者 谢潇杭 胡延忠 张凤妍 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期232-237,共6页
目的观察过表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)刺突蛋白(S-蛋白)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞生长的抑制作用。方法构建SARS-CoV-2S-蛋白基因片段表达质粒(p3xflag-S),并转染至ARPE-19、HEK293细胞内,应用DNA测序进行鉴定,... 目的观察过表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)刺突蛋白(S-蛋白)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞生长的抑制作用。方法构建SARS-CoV-2S-蛋白基因片段表达质粒(p3xflag-S),并转染至ARPE-19、HEK293细胞内,应用DNA测序进行鉴定,并对表达的标签蛋白进行蛋白免疫印迹法(Western blot)检测。HEK293细胞分为细胞1、2、3、4,分别转染GFP11质粒和空载质粒、GFP1-10质粒和空载质粒、GFP11质粒和pCMV-HA-ACE2质粒、GFP1-10和p3xflag-S质粒。将细胞1与细胞2(对照组1)、细胞2与细胞3(对照组2)、细胞3与细胞4(观察组)、细胞1与细胞2、3、4(对照组3)混合共培养。明场显微镜和荧光显微镜观察细胞融合情况。将RPE细胞分为对照组、过表达S-蛋白组。流式细胞仪检测RPE细胞周期;计数试剂盒8(CCK-8)检测RPE细胞增生水平;Western blot检测RPE细胞中S-蛋白表达水平。组间比较行最小显著差法t检验。结果DNA序列测定结果显示,S-蛋白cDNA与标签蛋白融合;Western blot检测结果显示,与未转染p3xflag-S质粒的细胞比较,转染HEK293细胞中S-蛋白相关表达量升高。明场显微镜下可见大而多核的融合细胞团;荧光显微镜下可见融合细胞内有多个细胞核且呈明显绿色荧光。Western blot检测结果显示,与未转染p3xflag-S质粒的RPE细胞比较,转染p3xflag-S质粒的RPE细胞中S-蛋白相关表达量升高。CCK-8增生分析结果显示,与对照组比较,过表达S-蛋白组RPE细胞增生能力显著降低,差异有统计学意义(t-22.70、16.75、23.38,P<0.0001)。流式细胞仪检测结果显示,对照组、过表达S-蛋白组G1期细胞分别为41.1%、67.0%;与对照组比较,过表达S-蛋白组G1期细胞明显升高,差异有统计学意义(t=4.76,P=0.018)。过表达S-蛋白组细胞凋亡率较对照组明显增加,差异有统计学意义(t=4.91,P=0.008)。结论过表达SARS-CoV-2S-蛋白可抑制RPE细胞生长活性。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2型 刺突蛋白 视网膜色素上皮细胞
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