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油菜不同器官高质量总蛋白提取方法和双向电泳体系的优化 被引量:23
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作者 刘海衡 胡胜武 +2 位作者 刘胜毅 董彩华 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期426-433,共8页
以显性核不育油菜Shaan—GMS不育株和可育株的花序和叶片为材料,采用TCA(三氯醋酸)-丙酮法提取油菜花蕾、花药及叶片总蛋白,对总蛋白提取方法、IPG(固定pH梯度)胶条种类、聚焦程序、凝胶浓度、上样量等环节进行了优化。结果表明... 以显性核不育油菜Shaan—GMS不育株和可育株的花序和叶片为材料,采用TCA(三氯醋酸)-丙酮法提取油菜花蕾、花药及叶片总蛋白,对总蛋白提取方法、IPG(固定pH梯度)胶条种类、聚焦程序、凝胶浓度、上样量等环节进行了优化。结果表明,采用理想的蛋白质裂解液(7mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%CHAPS(3-[3-(胆酰氨丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐),65mmol二硫苏糖醇,0.5%IPG缓冲液pH3~10或pH4~7,全蛋白酶抑制片剂(片/10mL))裂解蛋白,以150μg上样,按IEF程序Ⅱ(30V,12h;200V,1h;500V,1h;1000V,0.5h;10000V,2h;10000V,8h)进行等电聚焦,10%SDS—PAGE胶浓度进行第二向电泳,银染方法检测,可得到背景清晰、分辨率较高的油菜花蕾、花药及叶片蛋白质电泳图谱。高质量油菜蛋白的提取方法和蛋白质分离双向电泳体系的优化可为油菜蛋白质组学研究奠定技术基础。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 花药 花蕾 叶片 总蛋白提取 双向电泳
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一种适用于油菜、大豆、花生、芝麻四种油料作物种子的RNA提取方法 被引量:18
2
作者 孙海波 王智慧 +3 位作者 刘学群 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期353-358,共6页
油料作物种子中,大量油脂、蛋白、酚类物质的存在和易氧化的特点导致RNA提取困难。为了解决这一问题,本研究在商业化RNA提取试剂盒的基础上,通过以下3方面的改进,使之成功应用于油菜、花生、芝麻和大豆的各个时期种子RNA提取和后期的荧... 油料作物种子中,大量油脂、蛋白、酚类物质的存在和易氧化的特点导致RNA提取困难。为了解决这一问题,本研究在商业化RNA提取试剂盒的基础上,通过以下3方面的改进,使之成功应用于油菜、花生、芝麻和大豆的各个时期种子RNA提取和后期的荧光定量分析实验:1)增加抗氧化剂巯基乙醇和PVP;2)根据不同作物的油脂含量调整氯仿的比例;3)改进RNA沉淀方法,加大洗脱液体积后用乙醇沉淀。与常规的CTAB、TRIZOL及文献报道的RNA提取方法比较,本方法提取的RNA更完整、得率更高、纯度更高;所得RNA被成功应用于FAD2基因的荧光定量表达分析,发现了四种作物种子不同发育时期的FAD2基因的表达差异,证明了改良方法的有效性。 展开更多
关键词 RNA提取 油料作物 种子 荧光定量 油菜 大豆 花生 芝麻
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利用高密度SNP标记定位甘蓝型油菜株高QTL 被引量:12
3
作者 张凤启 刘越英 +5 位作者 程晓辉 童超波 董彩华 唐敏强 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期695-700,共6页
为了提高甘蓝型油菜株高的分子标记辅助育种效率,以888-5(矮秆)×M083(高秆)构建的重组自交系为材料,通过利用新开发的油菜60K SNP芯片对群体进行SNP标记分型,并结合单环境和多环境2种QTL检测方法对4个环境下株高进行了QTL定位... 为了提高甘蓝型油菜株高的分子标记辅助育种效率,以888-5(矮秆)×M083(高秆)构建的重组自交系为材料,通过利用新开发的油菜60K SNP芯片对群体进行SNP标记分型,并结合单环境和多环境2种QTL检测方法对4个环境下株高进行了QTL定位及其与环境互作分析。结果表明:2种QTL定位方法,共检测出27个油菜株高QTL,分布于8个连锁群(A2、A4、A5、A6、A9、A10、C3和C7),单个QTL可解释的表型变异为0.70%~26.10%。其中6个QTL与环境存在互作效应,在4个环境下效应大小不一,但效应方向表现一致。主效QTL q PH2-4在2个环境下重复检测到,对表型变异解释为17.96%~26.10%,而且有2个SNP标记距离该QTL的最大峰值小于0.2c M。这些QTL为油菜株高的遗传改良提供了有用的遗传信息。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 单核苷酸多态性 株高 QTL定位
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苏云金杆菌对甜菜夜蛾毒性的筛选 被引量:8
4
作者 郑大胜 +3 位作者 闫建平 袁志明 蔡全信 刘海舟 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第S1期101-104,共4页
测定了 10 0株野生型苏云金芽孢杆菌菌株对夜蛾科甜菜夜蛾幼虫的毒力活性 ,经回归分析 ,2 3株对甜菜夜蛾初孵幼虫的毒力与浓度有高相关性 (R >0 .90 ) ,按LC50 计算 ,CN73活性最强 ,LC50 达 2 .393微升培养液 /克饲料 ( μL/g) ;另有... 测定了 10 0株野生型苏云金芽孢杆菌菌株对夜蛾科甜菜夜蛾幼虫的毒力活性 ,经回归分析 ,2 3株对甜菜夜蛾初孵幼虫的毒力与浓度有高相关性 (R >0 .90 ) ,按LC50 计算 ,CN73活性最强 ,LC50 达 2 .393微升培养液 /克饲料 ( μL/g) ;另有 2 3株进行了不同浓度下校正死亡率的比较 ,得到高毒株 13株 ,CN33在 5μL/g浓度下校正死亡率达到 10 0 %。该结果为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 生物测定 甜菜夜蛾 致死率
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白菜型油菜PABP5基因启动子的克隆及表达特性分析 被引量:2
5
作者 石磊 董彩华 +4 位作者 白泽涛 郭学兰 柴国华 刘胜毅 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第2期341-346,共6页
本研究中利用基因组步移法从白菜型油菜中克隆到Poly(A)结合蛋白基因PABP5起始密码子上游长588bp的一段序列,经软件分析预测表明,该序列具有典型的启动子结构,并且具有多个与花药特异性表达相关的顺式作用元件,如TATA box,CAAT box,AGAA... 本研究中利用基因组步移法从白菜型油菜中克隆到Poly(A)结合蛋白基因PABP5起始密码子上游长588bp的一段序列,经软件分析预测表明,该序列具有典型的启动子结构,并且具有多个与花药特异性表达相关的顺式作用元件,如TATA box,CAAT box,AGAAA motif,AGGTCA motif,AAACCCTAA motif,GTGA motif等。为了研究该片段的表达特性,本文将克隆到的序列置换pPBI121中的CaMV35S启动子,驱动其下游的GUS基因,构建了植物表达载体,转化拟南芥,获得了转基因植株。组织化学染色表明,在PABP5启动子Ppabp5的驱动下,报告基因GUS在拟南芥的根尖、第一片真叶叶原基以及花药中特异表达。本研究为PABP5基因的进一步功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 白菜型油菜 PABP5 启动子 拟南芥 花药特异性表达
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甘蓝型油菜Bn19070的表达与同源基因At2g19070的amiRNAi研究 被引量:6
6
作者 李振波 王琢玉 +4 位作者 刘学群 覃瑞 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期197-202,209,共7页
基于原芯片杂交结果,油菜杂合双显性雄性核不育系差异表达基因Bn19070与拟南芥At2g19070基因高度同源,在油菜可育株雄蕊中高量表达,不育株雄蕊中表达量极低。从雄性不育基因At2g19070入手,利用amiR-NAi(人工微RNA干扰)技术对其两个RNA... 基于原芯片杂交结果,油菜杂合双显性雄性核不育系差异表达基因Bn19070与拟南芥At2g19070基因高度同源,在油菜可育株雄蕊中高量表达,不育株雄蕊中表达量极低。从雄性不育基因At2g19070入手,利用amiR-NAi(人工微RNA干扰)技术对其两个RNA区段分别设计靶标,转化拟南芥。在多个转基因拟南芥植株和后代中普遍观察到小孢子数量减少、成熟花粉萎缩失去活力、不结实或者少结实的不育表型。两个靶标的干扰使转基因拟南芥出现了类似的表型,基因表达抑制率都在90%以上,干扰效果好,暗示amiRNAi技术在靶标选择上具有一定的灵活性。At2g19070基因的干扰对Bn19070的功能研究有借鉴作用。 展开更多
关键词 amiRNA干扰 雄性不育 At2g19070 RNA靶标 拟南芥
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2009-2012年全国区域试验冬油菜品种菌核病抗性评价 被引量:6
7
作者 刘玲彦 董彩华 +3 位作者 程晓晖 刘越英 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期331-333,340,共4页
2009-2012年,利用菌核病田间人工病圃对当年参加全国油菜新品种区域试验(区试)的品种(系、组合)进行了菌核病抗性鉴定,以中油821为抗病对照,将参加区试的品种分为抗、感病两种类型,高、中、低抗和高、中、低感六个等级。本文对其中91份... 2009-2012年,利用菌核病田间人工病圃对当年参加全国油菜新品种区域试验(区试)的品种(系、组合)进行了菌核病抗性鉴定,以中油821为抗病对照,将参加区试的品种分为抗、感病两种类型,高、中、低抗和高、中、低感六个等级。本文对其中91份综合性状较好、连续两年参加了区试的材料(建议报审的材料)进行了菌核病抗性分析,结果表明:91份材料中抗(耐)性品种仅有31份,并且全部表现为低抗;按参试区域,长江上、中、下游及黄淮组和早熟组的参试品种中抗(耐)性品种所占比例分别为22.73%、37.5%、50%、28.57%和0;按类型,参试的10份常规双低类型材料中抗(耐)病品种有4份;81份杂交双低油菜品种中抗性品种所占比例仅为33.33%。以上研究结果说明,我国亟需加快油菜抗病育种的进程,培育更多适应性广、抗性强的新品种。 展开更多
关键词 油菜 人工病圃 菌核病 抗性评价
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甘蓝型油菜BnEIN3基因克隆及菌核病诱导表达 被引量:5
8
作者 许李明 +2 位作者 刘学群 覃瑞 刘胜毅 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第14期6378-6380,共3页
[目的]探讨甘蓝型油菜EIN3(BnEIN3)基因与菌核病抗性的关系。[方法]根据GenBank中已公布的拟南芥EIN3基因的保守区及甘蓝型油菜EST序列,设计特异性引物,分别进行基因组PCR和RT-PCR扩增,克隆BnEIN3基因。对菌核病不同抗性的3个油菜品种中... [目的]探讨甘蓝型油菜EIN3(BnEIN3)基因与菌核病抗性的关系。[方法]根据GenBank中已公布的拟南芥EIN3基因的保守区及甘蓝型油菜EST序列,设计特异性引物,分别进行基因组PCR和RT-PCR扩增,克隆BnEIN3基因。对菌核病不同抗性的3个油菜品种中BnEIN3的表达进行荧光定量PCR检测分析。[结果]克隆得到1 947 bp的基因片段,与拟南芥EIN3一致性高达82%,有完整的开放阅码框,编码614个氨基酸,其中包含1个EIN3结构域,初步认定该片段为油菜BnEIN3基因。在高抗品种(D083)中,菌核病在侵染后期快速诱导BnEIN3上调表达,且显著高于中抗(中双9号)及高感品种(84039)中该基因的表达水平。在中抗及高感品种中,菌核病均抑制BnEIN3的表达,且中抗品种BnEIN3表达量一直大于高感品种。[结论]BnEIN3可能与油菜对菌核病抗性相关。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 同源克隆 EIN3 核盘菌 荧光定量PCR
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甘蓝型油菜MAP激酶4的序列及其诱导表达分析 被引量:6
9
作者 王政 毛晗 +2 位作者 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期397-400,405,共5页
拟南芥MPK4(AtMPK4)在病害抗性中具有重要作用。本文克隆和分析了油菜MPK4(BnMPK4)的cD-NA及其氨基酸序列和诱导表达变化。推导的氨基酸序列含有T201E202Y203磷酸化位点和CD锚定区域,与AtMPK4的序列相似性为95%。用化学物质苯丙噻重氮... 拟南芥MPK4(AtMPK4)在病害抗性中具有重要作用。本文克隆和分析了油菜MPK4(BnMPK4)的cD-NA及其氨基酸序列和诱导表达变化。推导的氨基酸序列含有T201E202Y203磷酸化位点和CD锚定区域,与AtMPK4的序列相似性为95%。用化学物质苯丙噻重氮、甲基茉莉酸、草酸以及核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)分别处理油菜品种中双9号,采用荧光定量PCR方法测定BnMPK4在各诱导或处理后的表达量。结果表明,苯丙噻重氮快速诱导该基因的表达,甲基茉莉酸抑制其表达;草酸和核盘菌均快速诱导该基因上调表达,并且二者的上调表达趋势相似。结果表明油菜MPK4可能在油菜菌核病防卫反应中起作用。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 BnMPK4 表达 核盘菌
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宫腔压力检测辅助四维宫腔输卵管超声造影评估输卵管通畅性的临床价值
10
作者 邓妍妍 +2 位作者 马春花 文燕平 唐炯炯 《中国妇幼健康研究》 2024年第5期76-83,共8页
目的 探讨宫腔压力检测在四维宫腔输卵管超声造影(4D-HyCoSy)评估输卵管通畅性中的辅助作用及临床价值。方法 选择2019年2月至2022年9月在永州市中心医院就诊并接受治疗的132例疑似卵管性不孕患者为研究对象。所有患者均接受4D-HyCoSy... 目的 探讨宫腔压力检测在四维宫腔输卵管超声造影(4D-HyCoSy)评估输卵管通畅性中的辅助作用及临床价值。方法 选择2019年2月至2022年9月在永州市中心医院就诊并接受治疗的132例疑似卵管性不孕患者为研究对象。所有患者均接受4D-HyCoSy检查。以腹腔镜通液检测结果为诊断金标准,与4D-HyCoSy检查结果的诊断进行对比分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线和Logistic回归模型分析宫腔压力检测辅助4D-HyCoSy检查在输卵管通畅性诊断中的应用价值。结果 对132例患者完成了4D-HyCoSy检查,在264条输卵管中,145条通畅(54.92%)、77条通而不畅(29.17%)、42条完全阻塞(15.91%);腹腔镜通液检测结果显示,有132条通畅(50.00%)、77条通而不畅(29.17%)、55条完全阻塞(20.83%)。在4D-HyCoSy检查中,有216条输卵管符合腹腔镜通液检测结果,诊断符合率为81.82%(216/264);其中4D-HyCoSy检查与腹腔镜通液检测输卵管通畅的诊断符合率最高,为93.18%(123/132)。从输卵管的功能角度分层评估,4D-HyCoSy检查与腹腔镜通液检测输卵管的诊断符合率为86.36%(114/132)。双侧通畅(A组)、不完全通畅(B组)、双侧阻塞(C组)三组宫腔压力峰值比较差异有统计学意义(F=39.334,P<0.001)。A组与B组、A组与C组、B组与C组之间的宫腔压力峰值比较差异均有统计学意义(t值分别为28.178、66.049、30.774,P<0.001),阻塞越严重,宫腔压力峰值越大。ROC曲线分析显示,宫腔压力检测辅助4D-HyCoSy评估输卵管通畅性预测模型的曲线下面积(AUC)为0.853、灵敏度为88.13%、特异度为79.46%,明显高于4D-HyCoSy单项诊断结果。结论 宫腔压力检测辅助4D-HyCoSy检查可显著提高输卵管通畅性的诊断效能,其可作为临床评估输卵管通畅性的有效诊断方法,可在临床推广应用。 展开更多
关键词 不孕症 输卵管疾病 宫腔压力 四维宫腔输卵管超声造影
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甘蓝型油菜LOX2基因在MeJA、BTH和核盘菌诱导下的表达 被引量:5
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作者 任秋红 +2 位作者 毛晗 田保明 刘胜毅 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第7期22-25,共4页
利用荧光定量PCR技术,检测了甘蓝型油菜脂氧合酶基因LOX2在化学激素(MeJA和BTH)处理和核盘菌(Sclertinia sclerotiorum)接种后的表达差异,以及核盘菌诱导处理后LOX2基因在不同油菜菌核病抗性品种中的表达差异。结果显示:MeJA处理后,LOX... 利用荧光定量PCR技术,检测了甘蓝型油菜脂氧合酶基因LOX2在化学激素(MeJA和BTH)处理和核盘菌(Sclertinia sclerotiorum)接种后的表达差异,以及核盘菌诱导处理后LOX2基因在不同油菜菌核病抗性品种中的表达差异。结果显示:MeJA处理后,LOX2基因的表达水平在24 h达到最高,是处理前的30.3倍,表明LOX2基因的表达受MeJA诱导;相反,LOX2基因的表达受水杨酸类似物BTH的明显抑制。进一步研究表明:LOX2基因在核盘菌接种后期明显诱导上调表达,接种72 h后在高抗品种D083、中高抗品种ZS9和高感品种84039的表达量分别为接种前的5.0倍2、.7倍和1.7倍。因此,初步推测LOX2基因的高表达在油菜对菌核病抗性中起重要作用,参与了茉莉酸介导的菌核病抗性防御反应。 展开更多
关键词 油菜 菌核病 MEJA BTH LOX2
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Cloning of Brassica napus EIN3 Gene and Its Expression Induced by Sclerotinia sclerotiorum 被引量:4
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作者 许李明 +2 位作者 刘学群 覃瑞 刘胜毅 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第2期33-36,共4页
[Objective] The study was to investigate roles of Brassica napus EINB in ( BnEIN3 ) resistance to Sclerotinia sclerotiorum. [ Methods] Genomic PCR and RT-PCR were carded out to isolate genomic DNA and cDNA sequences... [Objective] The study was to investigate roles of Brassica napus EINB in ( BnEIN3 ) resistance to Sclerotinia sclerotiorum. [ Methods] Genomic PCR and RT-PCR were carded out to isolate genomic DNA and cDNA sequences of BnEIN3 from oilseed rape, based on the highly conserved region of EIN3 gene from Arabidopsis thaliana and the homologous sequences of oilseed rape ESTs. Expression levels of BnEIN3 were detected in three varieties of oilseed rape inoculated with S. sclerotiorum by real-time quantitative PCR.[Results] A 1 947 bp DNA fragment was obtained from oilseed rape. The fragment shared 82% identity to A. thaliana EIIV3, encoded 614 amino acids containing an EIN3 domain, and was named as BnEIN3. Real-time PCR results showed that expression patterns of BnEIN3 were drastically different in different varieties. In highly resistant oilseed rape variety D083, BnEIN3 expression level was significantly increased 72 h after S. sclerotiorum inoculation whereas in middle resistant and susceptible varieties Zhongshuang 9 and 84039, BnEIN3 expression was suppressed. [ Conclusion ] BnEIIV3 may play an important role in oilseed rape resistance to S. sclerotiorum. 展开更多
关键词 Brassica napus L. EINB RESISTANCE Sclerotinia sclerotiorum Real time PCR
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甘蓝型油菜BnERF104超表达增强了转基因拟南芥对核盘菌的抗性 被引量:4
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作者 汪承刚 蔡丽 +4 位作者 董彩华 赵美霞 周瑢 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期325-330,共6页
根据拟南芥乙烯响应因子AtERF104的序列设计保守引物,从甘蓝型油菜品种中双9号中克隆到同源基因BnERF104。序列分析表明BnERF104蛋白含有一个典型的ERF domain保守结构域,属于乙烯响应转录因子ERF家族的成员。甘蓝型油菜用核盘菌(Sclero... 根据拟南芥乙烯响应因子AtERF104的序列设计保守引物,从甘蓝型油菜品种中双9号中克隆到同源基因BnERF104。序列分析表明BnERF104蛋白含有一个典型的ERF domain保守结构域,属于乙烯响应转录因子ERF家族的成员。甘蓝型油菜用核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)接种6h后,BnERF104基因被诱导显著上调表达。BnERF104基因在转基因拟南芥中的超表达提高了病原相关蛋白(PR)防御素PDF1.2和几丁质酶ChiB基因的表达量,显著增强了对腐生营养型真菌核盘菌的抗性。 展开更多
关键词 乙烯响应转录因子 BnERF104 PR蛋白基因 核盘菌
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芸薹属AC基因组中SUC基因家族的鉴定与进化分析 被引量:4
14
作者 袁午舟 周荣芳 +5 位作者 童超波 程晓晖 于景印 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期289-299,共11页
为分析芸薹属AC基因组中SUC基因(负责蔗糖和质子同向转运的蛋白基因)家族的扩张与丢失,基于已公布的白菜和尚未公布的甘蓝及甘蓝型油菜基因组数据对SUC基因进行全基因组鉴定,并分析基因结构域特征、生化特征、进化关系和表达特性。依据H... 为分析芸薹属AC基因组中SUC基因(负责蔗糖和质子同向转运的蛋白基因)家族的扩张与丢失,基于已公布的白菜和尚未公布的甘蓝及甘蓝型油菜基因组数据对SUC基因进行全基因组鉴定,并分析基因结构域特征、生化特征、进化关系和表达特性。依据HMMER程序构建的SUC基因家族的HMM(隐马尔科夫)模型,在白菜、甘蓝、甘蓝型油菜中,各检索出12、11和24个SUC候选基因;通过用SUC家族特征进行筛选,最终各保留了12、4和7个SUC基因;通过对SUC基因在拟南芥、白菜、甘蓝和甘蓝型油菜中的系统发育分析,SUC基因家族在芸薹属物种中分成了3个亚类。利用MCscan对这4个物种基因组的共线性分析,结果表明SUC基因家族成员在芸薹属物种基因组加倍后以及白菜和甘蓝杂交形成油菜以后发生了不同程度的丢失。同时,序列生化特性预测结果表明SUC蛋白是属于偏碱性的疏水性蛋白且结构稳定;表达谱分析显示,所有SUC基因基本上在所有的组织中都有不同程度的表达;启动子分析表明,SUC基因的启动子区富含LTRE、ABRE、MYC、MYB和W-box等逆境应答相关顺式作用元件,因而该基因可能也与抗逆性相关。 展开更多
关键词 白菜 甘蓝 甘蓝型油菜 全基因组 SUC基因家族 分类 进化分析
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植物内切β-1,4-葡聚糖酶基因研究进展 被引量:3
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作者 柴国华 付先虎 +2 位作者 白泽涛 刘胜毅 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第5期17-22,共6页
植物内切β-1,4-葡聚糖酶基因在植物生长发育过程中扮演重要角色。近年来,随着分子生物学的不断发展,对其研究也取得了重要进展。综述了植物内切β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆、功能、表达调控以及编码蛋白质的结构、底物等方面的研究进展... 植物内切β-1,4-葡聚糖酶基因在植物生长发育过程中扮演重要角色。近年来,随着分子生物学的不断发展,对其研究也取得了重要进展。综述了植物内切β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆、功能、表达调控以及编码蛋白质的结构、底物等方面的研究进展,可为进一步阐明该基因对植物生长发育的影响提供依据。 展开更多
关键词 植物内切β-1 4-葡聚糖酶基因 克隆 功能 表达调控 结构 底物
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大豆灰斑病菌菌丝块离体叶接种快速鉴定方法的建立 被引量:3
16
作者 张彪 +3 位作者 刘胜毅 赵美霞 汪承刚 董彩华 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第21期12714-12718,12723,共6页
[目的]建立一种室内可重复、快速准确鉴定大豆对灰斑病抗性的方法。[方法]利用大豆灰斑病1号和7号生理小种及6种不同抗性的大豆品种为材料,研究并建立了大豆灰斑病抗性的菌丝块接种快速鉴定方法。[结果]在28℃、12h光照与12h黑暗交替的... [目的]建立一种室内可重复、快速准确鉴定大豆对灰斑病抗性的方法。[方法]利用大豆灰斑病1号和7号生理小种及6种不同抗性的大豆品种为材料,研究并建立了大豆灰斑病抗性的菌丝块接种快速鉴定方法。[结果]在28℃、12h光照与12h黑暗交替的条件下,Minimal培养基生长的菌丝块接种抗感大豆叶片,菌斑面积明显不同,且鉴定结果与已知抗感品种报道的灰斑病抗性一致。[结论]菌丝块离体叶接种鉴定具有不受生育期和环境条件限制、可重复性强的特点,是大豆灰斑病抗性室内鉴定的一种有效方法。 展开更多
关键词 大豆灰斑病 菌丝块 离体叶 接种 抗性
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芸薹属AC基因组中VIT基因家族的鉴定与进化 被引量:3
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作者 周荣芳 袁午舟 +6 位作者 童超波 程晓晖 于景印 董彩华 刘越英 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期551-561,共11页
为了解液泡铁离子转运蛋白(vacuolar iron transporter,VIT)编码基因在芸薹属作物中的进化关系,在已完成的拟南芥、白菜、甘蓝以及甘蓝型油菜全基因组测序基础上,利用HMMER软件根据VIT保守的结构域对拟南芥、白菜、甘蓝和甘蓝型油菜全... 为了解液泡铁离子转运蛋白(vacuolar iron transporter,VIT)编码基因在芸薹属作物中的进化关系,在已完成的拟南芥、白菜、甘蓝以及甘蓝型油菜全基因组测序基础上,利用HMMER软件根据VIT保守的结构域对拟南芥、白菜、甘蓝和甘蓝型油菜全基因组的蛋白质序列进行同源检索,在四个物种中分别鉴定得到了9个、13个、12个和14个VIT候选基因;并且系统发育分析显示,VIT基因家族在四个物种可分为3类。VIT基因的启动子区域富含LTRE、ABRE、MYC、MYB和W-box等逆境应答相关顺式作用元件。蛋白质特性分析结果表明VIT结构域中具有多个保守的疏水氨基酸位点。表达谱分析显示所有VIT基因在所选取的组织中都有不同程度的表达。同时,线性对应的同源基因表达模式既有相似之处,又存在分化,而串联重复基因簇表达模式基本一致。 展开更多
关键词 白菜 甘蓝 甘蓝型油菜 全基因组 液泡铁离子转运蛋白 进化分析
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抗菌肽基因BnPCD842895克隆表达及活性检测 被引量:2
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作者 +8 位作者 柯涛 周瑢 曹慧慧 马向东 童超波 于景印 吴南 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期357-363,共7页
为寻找新型植物抗菌肽,通过生物信息学的手段在全基因组范围内进行油菜抗菌肽基因的预测和分析,初步筛选出与已知抗菌肽具有类似序列结构特征的候选基因BnPCD842895。BnPCD842895基因长度为189bp,编码48个氨基酸,通过overlap PCR方法,... 为寻找新型植物抗菌肽,通过生物信息学的手段在全基因组范围内进行油菜抗菌肽基因的预测和分析,初步筛选出与已知抗菌肽具有类似序列结构特征的候选基因BnPCD842895。BnPCD842895基因长度为189bp,编码48个氨基酸,通过overlap PCR方法,将合成的抗菌肽基因克隆到pET30a-EDDIE-GFP表达载体上。将大肠杆菌中表达得到的包涵体融合蛋白在体外复性,并通过融合蛋白EDDIE的自我剪切,从而获得不增加任何多余氨基酸的抗菌肽产物。抑菌活性检测结果表明BnPCD842895对革兰氏阳性菌和阴性菌都具有较强的抑菌活性。 展开更多
关键词 抗菌肽 甘蓝型油菜 抗菌肽基因BnPCD842895 融合表达 活性检测
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甘蓝型油菜BnERF50的超表达增强了转基因拟南芥对核盘菌的抗性 被引量:2
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作者 汪承刚 李丹 +4 位作者 许李明 董彩华 方菊萍 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期427-432,共6页
从接种核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)后的甘蓝型油菜品种中双9号cDNA芯片中筛选出一个新的抗性相关基因BnERF50。序列分析表明该基因产物BnERF50蛋白含有一个典型的ERF(乙烯相应转录因子)保守结构域,属于ERF家族成员。接种核盘菌24h... 从接种核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)后的甘蓝型油菜品种中双9号cDNA芯片中筛选出一个新的抗性相关基因BnERF50。序列分析表明该基因产物BnERF50蛋白含有一个典型的ERF(乙烯相应转录因子)保守结构域,属于ERF家族成员。接种核盘菌24h后,该基因的表达量被诱导显著上调。在它的超表达转基因拟南芥中,病原相关蛋白(PR)防御素基因PDF1.2和几丁质酶基因ChiB的表达量升高,对腐生营养型真菌核盘菌的抗性显著增强。 展开更多
关键词 乙烯响应转录因子 BnERF50 病原相关蛋白基因 核盘菌
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苏云金芽胞杆菌大质粒pBMB165的克隆与分析 被引量:1
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作者 王莉 郭素霞 +2 位作者 喻子牛 孙明 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期15-20,共6页
以pBeloBAC11为载体,成功构建了苏云金芽胞杆菌YBT-1765的基因组人工染色体(BAC)文库和质粒BAC文库。根据已克隆的包含复制子ori165在内的3.6kb片段中编码复制蛋白Rep165的核苷酸序列设计探针,通过染色体步移方式,对质粒文库和基因组文... 以pBeloBAC11为载体,成功构建了苏云金芽胞杆菌YBT-1765的基因组人工染色体(BAC)文库和质粒BAC文库。根据已克隆的包含复制子ori165在内的3.6kb片段中编码复制蛋白Rep165的核苷酸序列设计探针,通过染色体步移方式,对质粒文库和基因组文库进行筛选,得到13个覆盖YBT-1765菌株中质粒pBMB165不同区域的克隆子。通过HindⅢ和BamHⅠ酶切分析,建立了质粒pBMB 165的物理图谱和线状重叠连锁图,并测算出该质粒的大小为82kb。根据部分核苷酸序列初步统计了pBMB 165上转座因子的存在机率。YBT-1765菌株基因组文库的构建和物理图谱的绘制为克隆苏云金芽胞杆菌大质粒提供了一套可行的方案,成功解决了大质粒难克隆的问题。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 大质粒克隆 BAC文库 物理图谱
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