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流式细胞仪的发展历史及其原理和应用进展 被引量:40
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作者 牛瑞芳 《现代仪器》 2006年第4期8-11,共4页
流式细胞分析(flow cytometry FCM),即流式细胞术,是用流式细胞仪(flow cytome-ter FCM)测量液相中悬浮细胞或微粒的一种现代分析技术。它是众多不同学术背景、不同科技领域相结合的结晶。它是物理学、生物学、医学等综合运用的产物。... 流式细胞分析(flow cytometry FCM),即流式细胞术,是用流式细胞仪(flow cytome-ter FCM)测量液相中悬浮细胞或微粒的一种现代分析技术。它是众多不同学术背景、不同科技领域相结合的结晶。它是物理学、生物学、医学等综合运用的产物。本文就流式细胞术的发展历史、流式细胞仪的原理及在各领域的应用进行综述,阐明现代流式细胞术由于结合单克隆抗体技术、定量荧光细胞化学技术,使其在生物学、临床医学、药物学、材料学等众多研究领域中的应用有更加突飞猛进的发展。 展开更多
关键词 流式细胞术(FCM) 历史 原理 应用
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肺癌患者外周血T-淋巴细胞亚群NK细胞的基线数值及其与预后的关系 被引量:34
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作者 李月雅 张翠翠 +2 位作者 王心悦 李凯 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期204-210,共7页
目的:对比肺癌患者与健康者之间淋巴细胞亚群差异,评估肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群及自然杀伤细胞(NK)之基线值与预后的关系。方法:收集2006年2月至2013年3月就诊于天津医科大学肿瘤医院病例资料完整的肺癌患者105例,其中非小细胞肺癌(... 目的:对比肺癌患者与健康者之间淋巴细胞亚群差异,评估肺癌患者外周血T淋巴细胞亚群及自然杀伤细胞(NK)之基线值与预后的关系。方法:收集2006年2月至2013年3月就诊于天津医科大学肿瘤医院病例资料完整的肺癌患者105例,其中非小细胞肺癌(NSCLC)86例、小细胞肺癌(SCLC)19例,另选健康对照35例,对比接受治疗前肺癌患者和健康对照者外周血中的CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞及NK细胞所占百分比,并回顾性分析86例NSCLC患者初治时外周血淋巴细胞亚群与预后的关系。结果:肺癌患者外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞及CD4/CD8比值均明显低于健康对照组(P=0.011,P=0.007,P<0.001,P=0.025),而CD8+T细胞比例高于健康对照组(P=0.013)。当CD8+T≥31.8%及CD4/CD8<1.28时NSCLC患者可以获得一个更长的OS(中位OS分别为36.2 m vs.20.0 m,P=0.010;30.8 m vs.20.0 m,P=0.035)。而CD3+T细胞、CD4+T细胞及NK细胞百分比对NSCLC患者预后无显著影响。结论:外周血CD8+T细胞基线水平较高的NSCLC患者生存较长,此基线水平可能对NSCLC患者预后有指示作用。 展开更多
关键词 肺癌 非小细胞肺癌 淋巴细胞亚群 NK细胞 CD4+T细胞CD8+T细胞CD4/CD8比值
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晚期非小细胞肺癌循环血管内皮细胞水平的研究 被引量:27
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作者 黄纯 李凯 +9 位作者 牛瑞芳 孙燕 王金万 朱允中 徐丽焱 刘晓晴 高红军 周静敏 王秀问 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期780-783,共4页
目的分析晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者治疗前后外周血中循环血管内皮细胞(CEC)的变化,探讨CEC在NSCLC中的应用价值。方法采用NP方案联合内皮抑素(治疗组)及单用NP方案(对照组)治疗晚期NSCLC 67例,流式细胞法检测治疗前后外周血CEC数量... 目的分析晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者治疗前后外周血中循环血管内皮细胞(CEC)的变化,探讨CEC在NSCLC中的应用价值。方法采用NP方案联合内皮抑素(治疗组)及单用NP方案(对照组)治疗晚期NSCLC 67例,流式细胞法检测治疗前后外周血CEC数量及细胞角蛋白(CK)水平。结果治疗组临床有效率为44.4%,对照组为27.3%(P=0.176);治疗组临床受益率为80.0%,对照组为50.0%(P=0.012)。治疗组肿瘤进展时间(TTP)为146.7 d,对照组为91.1 d (P=0.061)。当TTP的cut-off值>170时,两组TTP比较,差异有统计学意义(cut-off值=170,P= 0.034;cut-off值=180,P=0.009)。治疗组CEC平均下降(0.29±0.47)%,对照组平均下降(0.01±0.43)%(P=0.033)。全部患者治疗前CEC与CK水平呈正相关(r=0.381,P=0.013),治疗后亦呈正相关(r=0.450,P=0.004)。结论化疗联合血管靶向治疗晚期NSCLC优于单用化疗,CEC是一个较好的预测疗效的指标。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 循环血管内皮细胞
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小干扰RNA引发多药耐药乳腺癌细胞内MDR1基因沉默的研究 被引量:18
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作者 李臣宾 张峰 +3 位作者 史玉荣 杨毅 牛瑞芳 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1199-1201,共3页
目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制耐药乳腺癌细胞系MDR1基因表达的可行性。方法 选用耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF7/ADR及其药物敏感细胞系MCF7作为研究对象。将预先设计的siRNA包装入质粒载体 ,然后转化质粒到大肠杆菌中 ,经过克隆、扩... 目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制耐药乳腺癌细胞系MDR1基因表达的可行性。方法 选用耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF7/ADR及其药物敏感细胞系MCF7作为研究对象。将预先设计的siRNA包装入质粒载体 ,然后转化质粒到大肠杆菌中 ,经过克隆、扩增、纯化后转染到MCF7/ADR细胞中 ,10 0mg/L潮霉素筛选 2周 ,用流式细胞术从蛋白水平检测P gp的表达率 ,及作实时定量聚合酶链式反应从基因转录水平检测MDR1基因的表达率。结果 流式细胞术检测结果显示 ,MCF7/ADR细胞经特异性siRNA作用后P gp的表达率由99.8%下降到 12 .3 % ;作为阳性对照的转染过GFP基因的LA795细胞的GFP蛋白表达率由 74.8%下降到 10 .6%。实时相对定量PCR检测结果显示 ,MCF7/ADR细胞经特异性siRNA作用后其Ct值由 2 5 .2 2增加到 3 0 .64。结论 siRNA能抑制人乳腺癌多耐药细胞系MCF7/ADR内MDR1基因表达 ,从而为逆转肿瘤细胞的耐药性提供了一种新的方法。 展开更多
关键词 小干扰RNA 多药耐药 乳腺癌 癌细胞 MDR1基因
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乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR中Twist的表达与EMT现象的实验研究 被引量:14
5
作者 张飞 史玉荣 +5 位作者 张霖 张斌 杨毅 席广民 牛瑞芳 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期361-365,共5页
目的:观察乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR中Twist表达及上皮-间质转化现象,探讨其与MCF-7/ADR侵袭转移能力增强的相关性。方法:分别以RT-PCR法、链霉亲和素-生物素酶复合物(Strept avidin biotin complex,SABC)免疫组织化学方法和Western ... 目的:观察乳腺癌多药耐药细胞MCF-7/ADR中Twist表达及上皮-间质转化现象,探讨其与MCF-7/ADR侵袭转移能力增强的相关性。方法:分别以RT-PCR法、链霉亲和素-生物素酶复合物(Strept avidin biotin complex,SABC)免疫组织化学方法和Western blot法检测乳腺癌细胞系MCF-7及其多药耐药株MCF-7/ADR中介导EMT发生的转录因子Twist、上皮性标记基因E-钙粘素(E-cadherin)和间质性标记基因N-钙粘素(N-cadherin)表达的改变情况。结果:亲本细胞MCF-7中E-cadherin mRNA的表达和蛋白水平的表达均为阳性,Twist和N-cadherin表达阴性;多药耐药株MCF-7/ADR中E-cadherin mRNA和蛋白表达缺失,而在亲本细胞MCF-7中不表达的Twist和N-cadherin表达阳性。结论:在多药耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR中,其侵袭力增强可能与Twist介导的EMT发生有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 多药耐药 EMT 转移
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三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞株的作用及临床研究初探 被引量:11
6
作者 陈德福 李睿 +2 位作者 梁彦 杜德奎 《天津医药》 CAS 北大核心 2003年第4期210-212,共3页
目的 :研究不同浓度的三氧化二砷 (As2O3)对恶性淋巴瘤细胞系和淋巴瘤患者活体淋巴瘤细胞作用及其初步临床应用效果。方法 :用MTT法检测不同浓度的As2O3 对Daudi,Raji及活体细胞株生长的影响 ,用电镜及流式细胞仪检测As2O3 诱导淋巴瘤... 目的 :研究不同浓度的三氧化二砷 (As2O3)对恶性淋巴瘤细胞系和淋巴瘤患者活体淋巴瘤细胞作用及其初步临床应用效果。方法 :用MTT法检测不同浓度的As2O3 对Daudi,Raji及活体细胞株生长的影响 ,用电镜及流式细胞仪检测As2O3 诱导淋巴瘤细胞凋亡情况。12例III~IV期的非霍奇金淋巴瘤患者 ,给予0 1%As2O310mL/d ,30d为1个疗程 ,缓解后巩固治疗采用原方案每月连用7d。结果 :1 0~2.0μmol/L的As2O3 可明显降低Daudi,Raji及活体细胞株活力 ,可见明显凋亡小体 ;用流式细胞仪检测出现DNA含量低于G1 期的亚G1 期细胞 ,在G1/G0 期前出现凋亡峰 ,其数量与药物作用时间呈正相关。12例患者单用As2O3 治疗1个疗程 ,完全缓解1例 ,部分缓解2例 ,稳定6例 ,均无骨髓抑制及其它副作用等。结论 :一定浓度的As2O3 显著抑制3株淋巴瘤细胞的生长 ,诱导凋亡。As2O3 对一般化疗无效者 ,仍有一定疗效。 展开更多
关键词 三氧化二砷 恶性淋巴瘤 细胞株 作用 临床研究
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肺癌患者外周血淋巴细胞亚群与预后的关系 被引量:17
7
作者 张翠翠 +1 位作者 臧凤琳 李凯 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期390-393,共4页
目的:探讨肺癌患者外周血T细胞亚群及NK细胞与临床病理特征及预后的关系。方法:回顾性观察102例肺癌患者、12例肺良性疾病患者及23例健康体检者,记录其外周血T细胞亚群及NK细胞占外周血淋巴细胞的百分比,对比二者分布在肺癌、肺良性疾... 目的:探讨肺癌患者外周血T细胞亚群及NK细胞与临床病理特征及预后的关系。方法:回顾性观察102例肺癌患者、12例肺良性疾病患者及23例健康体检者,记录其外周血T细胞亚群及NK细胞占外周血淋巴细胞的百分比,对比二者分布在肺癌、肺良性疾病及健康体检者之间的差异,并对患者的临床病理资料进行回顾性分析,分析淋巴细胞亚群与预后的关系及其与临床病理特征的相关性。结果:肺癌患者外周血CD4+T细胞低于健康体检者,而CD8+T细胞却较高,差异有统计学意义(P<0.05);单因素分析显示T细胞亚群及NK细胞分布与预后并无显著关系(P>0.05),而与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤标志物等存在相关性(P<0.05)。结论:肺癌患者外周血T亚群及NK细胞分布异常,动态监测患者外周血T细胞亚群及NK细胞有助于评估患者免疫功能,有望成为判断患者预后的一种指标。 展开更多
关键词 肺癌 细胞免疫 淋巴细胞亚群 预后
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重组人血管内皮抑制素对小鼠肿瘤和心肌中血管结构及血管生成相关因子表达的影响 被引量:13
8
作者 张翠翠 李凯 +3 位作者 陈程 袁静 王晶 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期415-420,共6页
目的观察重组人血管内皮抑制素对小鼠肿瘤及心肌中微血管影响的差异。方法40只小鼠随机分为空白对照组(未荷瘤,生理盐水100ml/d)、药物对照组(未荷瘤,重组人血管内皮抑制素400μg/d)、模型组(荷瘤,生理盐水100μl/d)和实验... 目的观察重组人血管内皮抑制素对小鼠肿瘤及心肌中微血管影响的差异。方法40只小鼠随机分为空白对照组(未荷瘤,生理盐水100ml/d)、药物对照组(未荷瘤,重组人血管内皮抑制素400μg/d)、模型组(荷瘤,生理盐水100μl/d)和实验组(荷瘤,重组人血管内皮抑制素400μg/d),分别处理28d。实验前后称量小鼠体重,测量移植瘤体积。采用免疫组化法检测小鼠心脏和移植瘤组织中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、缺氧诱导因子1α(HIF—1α)以及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达情况,计数微血管密度(MVD)。以CD34与Masson双染法观察微血管结构的变化。结果实验组小鼠肿瘤体积的增加值为(48.18±37.31)mm^3,低于模型组[(113.80±73.27)mm^3,P〈0.05];各组小鼠体重变化的差异无统计学意义(P〉0.05)。应用重组人血管内皮抑制素后,移植瘤组织中MMP-9和VEGF蛋白的表达显著降低,移植瘤组织中MMP-2、HIF-1α以及心肌组织中MMP-2、MMP-9、HIF—1α和VEGF蛋白的表达均无显著变化;移植瘤组织的MVD显著降低,胶原覆盖血管的比例升高,而心肌组织的MVD和结构几乎无变化。结论重组人血管内皮抑制素可通过下调移植瘤组织中MMPs和VEGF蛋白的表达,降低MVD,抑制移植瘤的生长,并可使移植瘤血管趋向成熟,但不能降低心肌组织中MMPs的表达和成熟血管的MVD。 展开更多
关键词 重组人血管内皮抑制素 移植瘤组织 心肌组织 微血管 小鼠
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重组人血管内皮抑制素注射液与多西紫杉醇不同顺序用药的抗肿瘤效应观察 被引量:13
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作者 袁静 吴春娃 +2 位作者 刘竹君 李凯 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期580-585,共6页
目的 观察重组人血管内皮抑制素注射液(商品名:恩度)与多西紫杉醇联合使用时不同给药顺序的抗肿瘤效应.方法 建立肺腺癌A549荷瘤裸鼠模型,随机分为3组,每组8只.(1)同时用药组:每只小鼠恩度400μg/d,第1~35天;多西紫杉醇10 mg/kg,... 目的 观察重组人血管内皮抑制素注射液(商品名:恩度)与多西紫杉醇联合使用时不同给药顺序的抗肿瘤效应.方法 建立肺腺癌A549荷瘤裸鼠模型,随机分为3组,每组8只.(1)同时用药组:每只小鼠恩度400μg/d,第1~35天;多西紫杉醇10 mg/kg,第1~19天,每3 d给药1次.(2)先恩度组:每只小鼠恩度400 μg/d,第1~35天;多西紫杉醇10 mg/kg,第16~34天,每3 d给药1次.(3)模型组:每只小鼠生理盐水100 μl/d,第1~35天;注射用水200 μl/d,第1~35天,每3 d注射1次.同时设立空白对照组(未荷瘤的正常裸鼠,8只),注射方法同模型组.实验过程中测量各组裸鼠体重、移植瘤体积,并计算抑瘤率.实验结束后,采用流式细胞术检测裸鼠外周血循环内皮细胞(CECs)数,采用免疫组化法检测移植瘤组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、MMP-2的抑制剂(TIMP-2)、MMP-9的抑制剂(TIMP-1)、细胞外MMP诱导因子(EMMPRIN)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达情况,并计数微血管密度(MVD).结果 同时用药组肿瘤体积增长为39.94 mm3,先恩度组肿瘤体积增长为(99.57±74.48)mm3,二者均明显小于模型组[(217.67±95.44)mm3,均P<0.05].同时用药组、先恩度组、模型组和空白对照组裸小鼠外周血中CECs的数量分别为(25.86±11.77)个/104个细胞、(77.25±24.02)个/104个细胞、(14.71±11.07)个/104个细胞和(12.90±11.20)个/104个细胞,同时用药组、模型组和空白对照组均明显低于先恩度组(均P<0.01).同时用药组和先恩度组移植瘤组织中MMP-2和MMP-9的表达均较模型组下调(均P<0.05),先恩度组移植瘤组织中TIMP-1和同时用药组TIMP-2的表达均较模型组上调(均P<0.05),同时用药组EMMPRIN的表达较模型组下调(P<0.05).同时用药组和先恩度组移植瘤组织的MVD及α-SMA的水平均低于模型组(均P<0.05).结论 同时用药组的抑瘤效果及小 展开更多
关键词 恩度 多西紫杉醇 给药顺序 循环内皮细胞 肺腺癌细胞系A549 裸鼠
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同源异型盒基因BP1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义 被引量:9
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作者 于满 杨毅 +4 位作者 牛瑞芳 史玉荣 张霖 王德发 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期855-859,共5页
背景与目的BP1(beta-protein1)基因是新近发现的转录因子,定位于染色体17q21-22,属同源异型盒基因DLX家族,在急性髓系白血病和急性T淋巴细胞白血病中均呈过度表达。本研究通过观察BP1mRNA在乳腺癌中的表达情况,分析并探讨其与乳腺癌临... 背景与目的BP1(beta-protein1)基因是新近发现的转录因子,定位于染色体17q21-22,属同源异型盒基因DLX家族,在急性髓系白血病和急性T淋巴细胞白血病中均呈过度表达。本研究通过观察BP1mRNA在乳腺癌中的表达情况,分析并探讨其与乳腺癌临床病理特征的关系。方法以β-actin基因作为参照,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测82例乳腺肿瘤组织、12例近端肿瘤旁组织和10例远端癌旁组织中BP1mRNA的表达。结果82例肿瘤组织中有53例BP1阳性(64.63%),而在近端癌旁组和远端癌旁组中则表达很弱(16.67%)或不表达(0%),差异具有统计学意义(P<0.05)。BP1基因的过表达与组织学分级有关(P<0.05),而与肿瘤大小、有无淋巴结转移、病理类型、肿瘤家族史、初潮年龄、初产年龄、怀孕次数、绝经状况、雌激素受体及孕酮受体状态无关。结论BP1基因在部分乳腺癌中上调,其表达与肿瘤组织学分级有关。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 BP1基因 同源异型盒 基因表达 逆转录聚合酶链反应 诊断
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趋化因子受体4下调抑制乳腺癌转移的研究 被引量:9
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作者 张霖 史玉荣 +3 位作者 杨毅 牛瑞芳 姚智 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1401-1403,共3页
目的采用RNA干扰(RNAi)技术封闭乳腺癌细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因,观察封闭效果及癌细胞的体外侵袭能力的变化及转移相关基因的变化。方法设计3段siRNA,分别构建pSilencer封闭载体,转染高表达CXCR4基因的乳腺癌细胞系T47D,通过流式... 目的采用RNA干扰(RNAi)技术封闭乳腺癌细胞趋化因子受体4(CXCR4)基因,观察封闭效果及癌细胞的体外侵袭能力的变化及转移相关基因的变化。方法设计3段siRNA,分别构建pSilencer封闭载体,转染高表达CXCR4基因的乳腺癌细胞系T47D,通过流式细胞术及定量聚合酶链反应(PCR)的方法分别从蛋白水平和转录水平检测CXCR4表达率的改变;采用Matri- gel对转染后乳腺癌细胞体外侵袭能力的变化进行检测,应用定量PCR分析其他转移相关基因的变化。结果3组转染CXCR4-siRNA细胞定量PCR检测CXCR4抑制率分别为95.67%、85.94%、98.25%。流式细胞仪检测CXCR4表达率分别为4.95%、11.10%、5.53%,与转染Control-siRNA细胞比较差异有统计学意义(P<0.01)。3组封闭细胞的侵袭指数分别为0.037、0.290和0.188。封闭细胞E-钙黏蛋白(E-cad)表达有增加趋势,胰岛素样生长因子结合蛋白-5(IGFBP-5)表达有下降的趋势。结论CXCR4在乳腺癌转移中具有重要作用,mRNA具有强大的基因敲除能力,为肿瘤转移的基因治疗奠定实验基础。 展开更多
关键词 乳腺癌 趋化因子受体 小干扰RNA 转移
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血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤的生物学效应 被引量:8
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作者 王晶 黄纯 +4 位作者 战忠利 孙慧 杨毅 李凯 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期266-269,共4页
目的探讨血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤生长及新生血管形成的影响。方法在荷瘤裸鼠皮下注射不同剂量的血管内皮抑制素,观察注射后肿瘤体积的变化;应用免疫组化SABC法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、生存素(survivin)... 目的探讨血管内皮抑制素对Calu-6裸鼠移植瘤生长及新生血管形成的影响。方法在荷瘤裸鼠皮下注射不同剂量的血管内皮抑制素,观察注射后肿瘤体积的变化;应用免疫组化SABC法检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、生存素(survivin)和环氧化酶-2(COX-2)蛋白的表达以及微血管密度(MVD)的变化;流式细胞术检测循环血管内皮细胞(CECs)的含量;应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)和实时定量PCR检测外周血中CDl46和CDl05mRNA的表达。结果经血管内皮抑制素治疗后,荷瘤鼠肿瘤体积明显减小;肿瘤组织中VEGF、survivin和COX-2蛋白的表达以及MVD均下降,且各治疗组与阳性对照组间的差异均有统计学意义(均P〈0.05);外周血中CECs、CDl46和CDl05mRNA的含量均明显下降;活化CECs的含量与肿瘤组织中survivin和VEGF的表达以及MVD的变化均呈正相关。结论血管内皮抑制素可通过下调移植瘤中VEGF、survivin和COX-2蛋白的表达以及减少MVD抑制肿瘤生长;活化CECs将可能作为理想的预测抗血管形成治疗预后的标记物应用于临床。 展开更多
关键词 血管内皮抑制素 循环血管内皮细胞 生存素 血管内皮生长因子 微血管 密度
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流式细胞仪检测甘草多糖对小鼠S-180肉瘤的凋亡诱导作用 被引量:8
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作者 史玉荣 +2 位作者 杨毅 牛瑞芳 宋飞 《现代仪器》 2005年第4期30-32,36,共4页
随着单克隆抗体及标记技术的发展,流式细胞术(FlowCytometry,FCM)检测细胞凋亡技术已广为使用,为探讨中药甘草多糖抑瘤作用及其机制,本文应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,结果表明甘草多糖抑制肿瘤生长可能与诱导细胞凋亡有关。
关键词 流式细胞术 甘草多糖 S-180肉瘤 凋亡 细胞凋亡 诱导作用 流式细胞仪 检测 肉瘤 小鼠
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干扰素及三氧化二砷诱导淋巴瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究 被引量:5
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作者 梁彦 +3 位作者 李凯 牛瑞芳 李兰芳 邱立华 《肿瘤防治杂志》 2002年第2期127-130,共4页
目的 :分析梯度浓度的干扰素 (IFN α)及三氧化二砷 (As2 O3 )对EB病毒感染的Burkitt淋巴瘤Raji细胞株和EB病毒阴性Burkitt淋巴瘤Daudi细胞株直接作用。方法 :以MTT法测定梯度浓度的IFN α/As2 O3 对淋巴瘤细胞株增殖作用的影响 ,以膜... 目的 :分析梯度浓度的干扰素 (IFN α)及三氧化二砷 (As2 O3 )对EB病毒感染的Burkitt淋巴瘤Raji细胞株和EB病毒阴性Burkitt淋巴瘤Daudi细胞株直接作用。方法 :以MTT法测定梯度浓度的IFN α/As2 O3 对淋巴瘤细胞株增殖作用的影响 ,以膜联蛋白V(Annexin V)法、DNA末端标记法、流式细胞术 ,电镜观察测定IFN α对Raji、Daudi细胞株增殖周期的影响及凋亡诱导作用。结果 :低浓度IFN α对Raji、Daudi细胞增殖无明显抑制作用 ,高浓度IFN α(10 0 0 0U/mL)可显著抑制 2种细胞增殖 ,且有时间相关性。IFN α作用细胞 2 4~ 4 8h ,G0 /G1期细胞显著增多 ,S期细胞减少 ,72~ 96h细胞凋亡细胞明显增多 ,IFN α和As2 O3 有显著协同作用 ,EB病毒感染的Raji细胞对IFN α/As2 O3 的敏感性强于Daudi细胞。结论 :IFN α/As2 O3 可抑制淋巴瘤细胞增殖 ,使细胞阻滞在G0 /G1期 ,进一步诱导凋亡坏死 ,IFN α/As2 O3 作用有显著时间 ,剂量依赖性 ,对EB病毒感染的Raji细胞作用强于Daudi细胞。 展开更多
关键词 干扰素类 药理学 淋巴细胞 砷剂 氧化物 细胞周期
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肝细胞癌在血中微小转移的检测 被引量:8
15
作者 牛瑞芳 杨毅 +2 位作者 郝继辉 黄建英 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期543-545,共3页
目的 肝细胞癌患者术后复发常是术前不能检出微转移灶或术中瘤细胞释放入血之故。建立早期检出肝细胞癌 (HCC)血中微小转移的方法并评价其临床意义。方法 采用巢式RT PCR检测肝细胞特异白蛋白 (ALB)mRNA和甲胎蛋白 (AFP)mRNA在HCC患... 目的 肝细胞癌患者术后复发常是术前不能检出微转移灶或术中瘤细胞释放入血之故。建立早期检出肝细胞癌 (HCC)血中微小转移的方法并评价其临床意义。方法 采用巢式RT PCR检测肝细胞特异白蛋白 (ALB)mRNA和甲胎蛋白 (AFP)mRNA在HCC患者外周血有核细胞成分及组织标本中的表达情况。并以肝癌细胞系HepG2 、SMMC772 1,乳腺癌细胞MCF 7作为阳性、阴性对照。结果 在肝组织 ,无论是癌、癌旁还是正常组织 ,ALBmRNA的表达均为阳性 (8/8) ;而AFPmRNA在癌组织7/8例表达 ,癌旁 5 /8例表达。外周血表达的情况为 :同一组标本ALBmRNA的阳性率为 75 .6 % (34 /4 5 ,P <0 .0 1) ,AFPmRNA的阳性率为 5 7.8% (2 6 /4 5 ,P <0 .0 1)。在有肝外转移和无肝外转移分组中 ,ALBmRNA和AFPmRNA的表达分别为 10 0 .0 % ,5 4.2 %和 90 .5 % ,2 9.2 %。结论 在HCC患者外周血有核细胞成分中检测ALBmRNA和AFPmRNA的表达 ,是预测转移、复发的简捷手段 ,若ALB与AFP二者联合使用 。 展开更多
关键词 肝细胞癌 血中微小转移 白蛋白MRNA 甲胎蛋白MRNA RT-PCR 临床意义
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炎性指标对非小细胞肺癌PD-1抗体疗效预测及预后评估的初步探讨 被引量:9
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作者 张翠翠 +1 位作者 臧凤琳 陈鹏 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期547-552,共6页
目的:探索全身免疫炎症指数(systemic immune inflammation index,SII)等炎性指标在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者程序性死亡受体1(programmed cell death-1,PD-1)抗体治疗中的疗效预测及预后价值。方法:回顾性分... 目的:探索全身免疫炎症指数(systemic immune inflammation index,SII)等炎性指标在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者程序性死亡受体1(programmed cell death-1,PD-1)抗体治疗中的疗效预测及预后价值。方法:回顾性分析2018年1月至2020年10月在天津医科大学肿瘤医院接受PD-1抗体治疗的64例Ⅲb~Ⅳ期NSCLC患者的血液学及临床资料。单因素方差分析比较治疗前、取得最佳疗效时以及疾病进展时不同时间各炎性指标的差异;通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)确定炎性指标的最佳临界值;通过χ2检验和Kaplan-Meier生存曲线分析各指标与患者生存的相关性。结果:NSCLC患者的炎性指标在取得最佳疗效时均较基线明显下降,而在疾病进展时再次升高。SII、粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)、单核细胞/淋巴细胞比值(monocyte-to-lymphocyte ratio,MLR)、血小板/淋巴细胞比值(platelet-to-lymphocyte ratio,PLR)的最佳临界值分别为822.39、4.20、269.85和0.58;血清中炎症相关因子γ-谷氨酰转肽酶(γ-GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、纤维蛋白原(Fbg)、D-二聚体(D-dimer)的最佳临界值分别为55.00 U/L、255.00 U/L、3.94 g/L和1513.19 ng/mL。高SII、PLR、LDH、Fbg和D-dimer预示NSCLC患者较差的无进展生存期(progressionfree survival,PFS)(P<0.05)。多因素分析结果显示,基线LDH是PFS的独立风险因素(P=0.016)。结论:在晚期NSCLC中,患者基线炎性指标高提示PD-1抗体疗效相对较差,动态监测炎性指标可以预测PD-1抗体治疗效果,并对患者预后具有一定的提示意义。 展开更多
关键词 炎性指标 免疫治疗 非小细胞肺癌 预后
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热疗对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响 被引量:5
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作者 史玉荣 李丰彤 +3 位作者 于满 牛瑞芳 杨毅 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期496-498,共3页
目的:观察不同加温温度对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法:人宫颈癌Hela细胞株常规方法培养,采用水浴加热法(温度为41℃、42.5℃、43.5℃、)对细胞进行加温处理,处理后继续培养24h。用流式细胞仪检测细胞凋亡,单细胞凝胶电泳(singlece... 目的:观察不同加温温度对人宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法:人宫颈癌Hela细胞株常规方法培养,采用水浴加热法(温度为41℃、42.5℃、43.5℃、)对细胞进行加温处理,处理后继续培养24h。用流式细胞仪检测细胞凋亡,单细胞凝胶电泳(singlecellgelelectrophoresis,SCGE)法检测DNA受损状态。结果:随着温度的增加细胞凋亡率增加,42.5℃、43.5℃加温1h后细胞凋亡率最高分别为30.7%和34.6,坏死细胞分别为13.2%和29.6%。单细胞凝胶电泳发现42.5℃加温1h后40.0%的细胞有DNA损伤,43.5℃加温1h后80.0%以上的细胞DNA损伤,而41℃加温处理1h后仅有20.0%细胞DNA受损。结论:单独加温处理1h可诱导细胞凋亡,并导致细胞DNA损伤。 展开更多
关键词 宫颈癌 HELA细胞 热疗 细胞凋亡 细胞培养 DNA损伤
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siRNA逆转乳腺癌细胞系MCF-7/ADR耐药 被引量:6
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作者 李臣宾 张峰 +3 位作者 史玉荣 杨毅 牛瑞芳 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1605-1610,共6页
背景与目的:肿瘤的多药耐药性常导致乳腺癌化疗失败,多药耐药基因1(multidrugresistance1,mdr1)编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)过度表达是重要的耐药机制。本研究拟探讨siRNA抑制耐药乳腺癌细胞系MCF-7/ADRmdr1基因表达的可行性... 背景与目的:肿瘤的多药耐药性常导致乳腺癌化疗失败,多药耐药基因1(multidrugresistance1,mdr1)编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)过度表达是重要的耐药机制。本研究拟探讨siRNA抑制耐药乳腺癌细胞系MCF-7/ADRmdr1基因表达的可行性。方法:选择耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADR及其敏感细胞系MCF-7作为研究对象。将预先设计的siRNA包装入质粒载体,然后转化质粒到大肠杆菌中,经过克隆、扩增、纯化后转染到MCF-7/ADR细胞中,潮霉素筛选,流式细胞仪检测P-gp的表达率,实时定量PCR检测mdr1基因的表达率,并对转染后的细胞作阿霉素耐药实验。结果:流式细胞仪检测结果显示,MCF-7/ADR细胞经特异性siRNA作用后,P-gp的表达率由99.8%下降到12.3%。实时相对定量PCR检测结果显示,MCF-7/ADR细胞经特异性siRNA作用后其Ct值由25.22增加到30.64。阿霉素耐药实验显示,转染siRNA的MCF-7/ADR细胞IC50为0.51μmol/L,而未转染组的IC50为17.88μmol/L。结论:siRNA能引发人乳腺癌多耐药细胞系MCF-7/ADR内mdr1基因沉默,从而为siRNA作为一种可能的治疗手段提供了理论依据。 展开更多
关键词 小干扰RNA 短发卡RNA 多药耐药基因 基因沉默
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FLIP干扰性小RNA促进大肠癌细胞的凋亡 被引量:5
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作者 孙保存 臧凤琳 +3 位作者 牛瑞芳 赵秀兰 张诗武 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第13期1519-1523,共5页
目的:研究对应FLIP基因的siRNA片段对大肠癌细胞株HT-29凋亡的影响,明确FLIP在Fas介导的凋亡途径中的作用. 方法:体外培养大肠癌细胞HT-29,通过电穿孔技术将特异性siRNA片段转染入细胞,半定量RT-PCR 法判断干扰前后FLIP mRNA水平的变化... 目的:研究对应FLIP基因的siRNA片段对大肠癌细胞株HT-29凋亡的影响,明确FLIP在Fas介导的凋亡途径中的作用. 方法:体外培养大肠癌细胞HT-29,通过电穿孔技术将特异性siRNA片段转染入细胞,半定量RT-PCR 法判断干扰前后FLIP mRNA水平的变化,分析RNA 干扰的特异性、时效性,并比较对应不同位点的两个siRNA片段对FLIP的干扰效果.经凋亡诱导型抗体激活后,以Annexin V染色法及DNA降解片段检测分析干扰前后HT-29细胞对Fas介导的凋亡敏感性的改变. 结果:特异性siRNA片段能有效降低FLIP mRNA水平,最大干扰效率达65.02%,明显高于作为对照的非相关片段;干扰作用于转染后24 h即可出现,48 h达高峰,72 h稍有降低;对应不同位点的两个siRNA片段对FLIP均可产生干扰作用,彼此间差别不大.在诱导型抗体的刺激下,与未转染细胞相比,转染siRNA 的HT-29细胞中凋亡细胞所占比例明显增加. 结论:特异性siRNA片段可显著降低FLIP基因mRNA 的表达水平,并提高HT-29细胞对Fas介导的凋亡敏感性.以FLIP为靶点的RNA干扰技术可望成为大肠癌基因治疗的新方法. 展开更多
关键词 FLIP 干扰性小RNA 大肠癌细胞株HT-29 HT-29细胞 半定量RT-PCR法 RNA片段 mRNA水平 FAS介导 Annexin DNA降解片段 RNA干扰技术 凋亡敏感性 基因mRNA 干扰作用 电穿孔技术 siRNA 癌基因治疗 特异性 体外培养 凋亡途径 抗体激活
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基于3D细胞培养系统的肺癌类干细胞的分离和鉴定 被引量:6
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作者 刘芃芃 于文文 +6 位作者 程亚楠 韩雷 陈永孜 李慧 任秀宝 于津浦 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第16期1013-1016,共4页
目的:本研究建立三维细胞培养方法(3D)以分离和鉴定肺癌类干细胞,并与二维细胞培养方法(2D)比较,初步探讨该方法在评价肺癌体外增殖、凋亡、侵袭和药物反应性方面的应用。方法:将人肺腺癌细胞系A549以1×104个/孔的细胞与RPMI1640... 目的:本研究建立三维细胞培养方法(3D)以分离和鉴定肺癌类干细胞,并与二维细胞培养方法(2D)比较,初步探讨该方法在评价肺癌体外增殖、凋亡、侵袭和药物反应性方面的应用。方法:将人肺腺癌细胞系A549以1×104个/孔的细胞与RPMI1640和伊格尔基础培养基(basal medium of eagle,BME)制成细胞悬液,培养7 d,收集细胞采用流式细胞仪进行类干细胞表型检测,以及体外成球、耐药性、体内成瘤等干细胞功能鉴定,并将3D与2D细胞培养的A549细胞进行比较。结果:细胞表型检测证明3D系统培养的A549细胞中CD44和CD326阳性比例升高,CD24阳性比例下降,细胞体外成球率显著升高(28.50%±1.17%vs.8.67%±0.80%,P<0.01)对顺铂耐药性显著提高。加药后48 h为58.17%±2.19%vs.33.27%±5.76%(P<0.01),加药后72 h为41.70%±5.81%vs.27.30%±4.25%(P<0.01),体内成瘤时间显著缩短[(20.75±0.85)d vs.(60.25±1.49)d,P<0.01]。结论:3D培养的肺癌细胞中获得更高比例的类干细胞样细胞,具有体内成瘤快、体外成克隆团率高、耐药性提高的特征。 展开更多
关键词 肺癌 3D细胞培养 肿瘤干细胞
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