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基于CRISPR/cas9系统高效编辑小鼠Galt基因 被引量:3
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作者 岳鹏鹏 +3 位作者 于鸿浩 付灿 王小燕 高进涛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期235-242,共8页
GALT基因突变是人类I型半乳糖血症的主要病因。拟通过CRISPR/cas9系统打靶小鼠Galt基因以模拟人GALT基因突变,从而为建立精准模拟I型半乳糖血症的动物模型奠定基础。首先分析了我国I型半乳糖血症GALT基因的致病突变位点,并将其定位在小... GALT基因突变是人类I型半乳糖血症的主要病因。拟通过CRISPR/cas9系统打靶小鼠Galt基因以模拟人GALT基因突变,从而为建立精准模拟I型半乳糖血症的动物模型奠定基础。首先分析了我国I型半乳糖血症GALT基因的致病突变位点,并将其定位在小鼠Glat基因上,作为小鼠Galt基因的拟突变位点,然后根据拟突变位点区域的序列设计了sgRNA导向序列,构建sgRNA表达质粒,将其与cas9表达质粒共转染小鼠3T3细胞,通过嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选阳性转染细胞,提取阳性细胞基因组DNA,PCR扩增打靶位点的DNA片段,通过TA克隆测序鉴定基因编辑情况并分析编辑效率。结果表明,3个sgRNA导向序列均可以通过CRISPR/Cas9系统高效编辑小鼠Galt基因,编辑效率为100%。 展开更多
关键词 sgRNA CRISPR/Cas9系统 GALT 基因编辑 半乳糖血症
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靶向小鼠Idua基因的CRISPR/Cas9系统构建及打靶效率分析 被引量:2
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作者 于鸿浩 +1 位作者 付灿 岳鹏鹏 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期1400-1409,共10页
黏多糖贮积症(mucopolysaccharidosis,MPS)是一种遗传代谢病。人IDUA基因编码的α-L-艾杜糖苷酶(α-L-iduronidase,IDUA)功能异常是导致Ⅰ型MPS的主要病因。本研究拟构建特异性靶向小鼠Idua基因的CRISPR/Cas9编辑系统,用以模拟人IDUA基... 黏多糖贮积症(mucopolysaccharidosis,MPS)是一种遗传代谢病。人IDUA基因编码的α-L-艾杜糖苷酶(α-L-iduronidase,IDUA)功能异常是导致Ⅰ型MPS的主要病因。本研究拟构建特异性靶向小鼠Idua基因的CRISPR/Cas9编辑系统,用以模拟人IDUA基因突变,为建立精准模拟Ⅰ型MPS的细胞模型和动物模型提供高效基因编辑系统。本研究筛查了人类IDUA基因的致病突变,并将候选突变位点定位于小鼠Idua基因上,作为拟突变位点。然后通过sgRNA的设计、表达质粒构建、转染、药物筛选、TA克隆测序等步骤证明了设计的sgRNA具有高效的打靶效力。本研究结果对深入研究MPS的致病机制和探讨MPS的治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 Idua CRISPR/Cas9 打靶效率 黏多糖贮积症
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基于CRISPR的单细胞转录组测序技术研究进展
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作者 黄行许 乔云波 《生命的化学》 CAS 2022年第1期1-11,共11页
基于CRISPR的单细胞转录组测序技术是将单细胞转录组测序技术与CRISPR集中筛选技术结合,用于研究传统技术无法完成的细胞异质性、细胞谱系追踪、细胞互作及空间位置、药物作用靶点预测和鉴定等。本文简单比较了六种最常用的单细胞转录... 基于CRISPR的单细胞转录组测序技术是将单细胞转录组测序技术与CRISPR集中筛选技术结合,用于研究传统技术无法完成的细胞异质性、细胞谱系追踪、细胞互作及空间位置、药物作用靶点预测和鉴定等。本文简单比较了六种最常用的单细胞转录组测序技术,重点介绍了五种基于CRISPR的单细胞转录组测序技术及应用研究,并对其推广应用所面临的挑战作出了分析,旨在为单细胞转录组测序技术的应用及创新提供参考。 展开更多
关键词 单细胞转录组测序技术 Perturb-Seq CRISP-Seq CROP-Seq Mosaic-Seq Direct capture Perturb-Seq
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