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题名蚊细胞融合病毒研究进展
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作者
郝嘉男
秦成峰
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机构
安徽医科大学
军事科学院
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出处
《新发传染病电子杂志》
2018年第2期88-90,共3页
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基金
国家自然科学基金(81522025,81661148054)
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文摘
细胞融合病毒最早由Stollar和Thomas和在埃及伊蚊细胞系(源自Peleg的蚊子胚胎)当中发现^[1]。他们将埃及伊蚊细胞的培养液低速离心,然后在上清液加入未稀释的白纹伊蚊单层细胞液。在室温孵育60分钟后,去除残留白纹伊蚊细胞液,培养液继续在28℃环境下用MM培养基培养。当细胞融合已经变得充分(约72小时后),低速离心培养液,获得的上清液即为细胞融合病毒的病毒液。通过梯度沉降速率实验对比Sindbis病毒^[2]发现,细胞融合病毒类似B类披膜病毒。经过脱氧胆酸盐和乙醚处理的细胞融合病毒在感染白纹伊蚊细胞后的细胞病变效应消失,提示细胞融合病毒具有包膜必需的脂类物质。在细胞融合病毒感染白纹伊蚊细胞后60小时,可以观察到明显的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),到76小时后90%以上的细胞出现CPE。通过观察细胞融合病毒的生长曲线,发现其在12小时之内有一段潜伏期类似B类披膜病毒,而通过电镜观察到病毒颗粒大小约为50nm,与B类披膜病毒类似^[3]。
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关键词
Sindbis病毒
细胞融合
蚊子
细胞病变效应
白纹伊蚊
Thomas
effect
埃及伊蚊
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分类号
R373
[医药卫生—病原生物学]
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题名细胞融合病毒全长cDNA克隆的构建与鉴定
被引量：1
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作者
郝嘉男
李晓峰
徐炎鹏
刘忠钰
秦成峰
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机构
安徽医科大学
军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所
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出处
《军事医学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期199-203,共5页
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基金
国家自然科学基金资助项目(31770995)
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文摘
目的分析细胞融合病毒基因组同源性,构建细胞融合病毒全长cDNA克隆,为进一步构建该病毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法通过DNAstar和Mega7.0构建了细胞融合病毒的系统发生树,对其基因和氨基酸序列同源性进行分析比对。选取细胞融合病毒Galveston株的全基因序列,通过体外基因合成的手段获得覆盖病毒全基因的3个DNA片段,并分别克隆至p BR002载体。利用限制性内切酶和T4连接酶将分片段基因组连入pACNR载体,最终获得含有pACNR的细胞融合病毒Galveston全长cDNA克隆。根据Galveston病毒株基因组序列和pBR002载体的序列,利用DNAstar及Oligo6软件设计5对引物,用来对其连接处进行测序及鉴定。结果与结论构建了细胞融合病毒系统发生树,明确了其进化地位和其他黄病毒的同源性关系。构建出细胞融合病毒Galveston株全长cDNA克隆,经过酶切鉴定和序列测定表明所获得cDNA克隆为该病毒的全长序列。
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关键词
黄病毒
细胞融合病毒
基因合成
全长CDNA克隆
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Keywords
flavivims
cell fusing agent virus
gene synthesis
genomic full-length cDNA clone
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分类号
R373.9
[医药卫生—病原生物学]
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