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视网膜神经节细胞体外培养、纯化及生物学特性研究 被引量：31
1
作者 吴永青 葛坚 +3 位作者 邱鹏新 李艳艳 林明楷 郭彦 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期190-193,10,共5页
目的建立体外视网膜神经节细胞（ｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｓ，ＲＧＣｓ）培养和纯化模型。方法出生后１～３天ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ（ＳＤ）乳鼠，ＲＧＣｓ在ｂａｓａｌｍｅｄｉｕｍｅａｇｌｅ（ＢＭＥ）培养基中... 目的建立体外视网膜神经节细胞（ｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｓ，ＲＧＣｓ）培养和纯化模型。方法出生后１～３天ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ（ＳＤ）乳鼠，ＲＧＣｓ在ｂａｓａｌｍｅｄｉｕｍｅａｇｌｅ（ＢＭＥ）培养基中培养，相差显微镜下观察细胞生长规律。羊抗鼠单克隆抗体ＦＩＴＣＴｈｙ１．１鉴定ＲＧＣｓ，并通过Ｔｈｙ１．１单抗进行ＲＧＣｓ的分离纯化。四唑盐（ｍｏｎｏｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ，ＭＴＴ）微量比色法检测细胞活性。结果较高的细胞接种密度或加入顶盖提取液（ｔｅｃｔａｌｅｘｔｒａｃｔ，Ｔｅ）均有利于混合培养的ＲＧＣｓ生长存活。ＭＴＴ检测法显示加Ｔｅ培养的实验组其吸光度（Ａ）值较对照组增加了３倍；在ＲＧＣｓ培养２天时，按细胞接种密度为１×１０３个／ｍｍ２的培养组较５００个／ｍｍ２的培养组，有突起的细胞数多３倍以上。ＲＧＣｓ经Ｔｈｙ１．１单抗纯化，其纯化率约达９５％。在无神经营养因子的条件下，纯化培养的ＲＧＣｓ于４８ｈ后很少存活。而混合培养的ＲＧＣｓ存活时间可持续２或３周。结论在一定条件下的ＲＧＣｓ能够于体外培养存活，其生长存活能力依赖于靶组织及其它视网膜细胞的营养作用。采用Ｔｈｙ１．１单克隆抗体纯化的方法可? 展开更多
关键词 视网膜 神经节细胞 RGCS 细胞培养 青光眼
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黑海参多糖对β-淀粉样蛋白诱导的皮质神经元凋亡的保护作用 被引量：26
2
作者 邱鹏新 黎明涛 +3 位作者 唐孝礼 苏兴文 林穗珍 颜光美 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期271-274,共4页
体外培养大鼠皮质神经元 ,用β-淀粉样蛋白 (β- AP)诱导皮质神经元凋亡。黑海参多糖使皮质神经元存活率增加 ,使神经元的 DNA电泳图谱不出现“梯子状”,使神经元的流式细胞仪分析图上不出现凋亡峰 ,表明黑海参多糖对 β- AP诱导的皮质... 体外培养大鼠皮质神经元 ,用β-淀粉样蛋白 (β- AP)诱导皮质神经元凋亡。黑海参多糖使皮质神经元存活率增加 ,使神经元的 DNA电泳图谱不出现“梯子状”,使神经元的流式细胞仪分析图上不出现凋亡峰 ,表明黑海参多糖对 β- AP诱导的皮质神经元凋亡具有保护作用。 展开更多
关键词 黑海参多糖 Β-淀粉样蛋白 皮质神经元凋亡 AD
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IGF-1经PI3K/Akt依赖性途径保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡 被引量：15
3
作者 赵灵芝 银巍 +4 位作者 苏兴文 肖茹 曹林 邱鹏新 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期53-57,共5页
目的　观察胰岛素样生长因子 1 (insulin likegrowfactor 1, IGF 1)对苯妥英(100μmol·L-1 )处理的大鼠小脑颗粒神经元 (cerebellargranularneurons, CGNs)存活率的影响,并探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法　体外培养 8的小脑颗... 目的　观察胰岛素样生长因子 1 (insulin likegrowfactor 1, IGF 1)对苯妥英(100μmol·L-1 )处理的大鼠小脑颗粒神经元 (cerebellargranularneurons, CGNs)存活率的影响,并探讨其与PI3K/Akt通路的关系。方法　体外培养 8的小脑颗粒神经元,同时给予 100μmol·L-1苯妥英和μmol·L-1 IGF 1, 48h后行凋亡分析,观察IGF 1对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元的保护作用;采用PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002(50μmol·L-1 )预先与小脑颗粒神经元孵育 30min,再加 1μmol·L-1 IGF 1和 100μmol·L-1苯妥英共孵育 48h,测定神经元存活率,观察IGF 1与PI3KAkt通路的关系;Westernblot法检测苯妥因处理不同时间小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平及总Akt的表达量,并观察IGF 1对磷酸化Akt水平的影响,进一步探讨IGF 1的作用是否经PI3K/Akt通路。结果　①1μmol·L-1 IGF 1可明显抑制 100μmol·L-1苯妥英引起的小脑颗粒神经元的凋亡明显提高小脑颗粒神经元的存活率,使其凋亡特征消失。②PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002可取消IGF 1的保护作用。③苯妥英使小脑颗粒神经元内磷酸化Akt水平明显降低,但不影响总Akt表达量。④IGF 1可明显恢复被苯妥英抑制的磷酸化Akt的水平。结论　IGF 1保护苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子1 苯妥因 PI3K/AKT通路 小脑颗粒神经元 凋亡
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黑海参酸性粘多糖的分离纯化 被引量：17
4
作者 唐孝礼 邱鹏新 +2 位作者 黎明涛 苏兴文 颜光美 《中药材》 CAS CSCD 1999年第5期223-225,共3页
采用酶法和碱法消化、醋酸钾和乙醇分级沉淀,从新鲜黑海参体壁中分离得到酸性粘多糖,分子量为10253Da,经琼脂糖电泳证实为纯一成分,多糖组成中氨基半乳糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖、硫酸基含量分别为16.12％、17.88％、11.66％、23.52％。
关键词 黑海参 酸性粘多糖 分离 纯化 理化性质
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咖啡因对谷氨酸诱导神经元凋亡的保护作用 被引量：11
5
作者 苏兴文 皮荣标 +5 位作者 林穗珍 邱鹏新 唐孝礼 万翔 黎明涛 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期509-512,共4页
目的　研究咖啡因对谷氨酸诱导的神经元凋亡是否具有保护作用，并对其机制进行探讨。方法　采用ＤＮＡ凝胶电泳分析及Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８核染色方法进行凋亡分析；使用荧光指示试剂Ｆｕｒａ２检测单细胞内游离钙浓度变化。结果... 目的　研究咖啡因对谷氨酸诱导的神经元凋亡是否具有保护作用，并对其机制进行探讨。方法　采用ＤＮＡ凝胶电泳分析及Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８核染色方法进行凋亡分析；使用荧光指示试剂Ｆｕｒａ２检测单细胞内游离钙浓度变化。结果　谷氨酸可诱导小脑颗粒神经元凋亡，咖啡因能拮抗谷氨酸的这一效应，其ＩＣ５０为５－０ｍｍｏｌ·Ｌ－１。咖啡因的这一保护作用不能被ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ模拟，也不能被ＲｐｃＡＭＰ阻断。此外，内质网Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体阻断剂ｄａｎｔｒｏｌｅｎｅ也不能取消咖啡因的保护作用，咖啡因不影响谷氨酸诱导的钙超载。结论　咖啡因对谷氨酸诱导的神经元凋亡具有保护作用，这一保护作用与咖啡因升高细胞内ｃＡＭＰ和Ｃａ２＋水平的药理作用无关。 展开更多
关键词 咖啡因 谷氨酸 神经元 凋亡
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步长脑心通含药血清抗缺氧诱导的皮质神经元凋亡的实验研究 被引量：17
6
作者 周国钰 胡学强 +2 位作者 陈晓红 苏兴文 邱鹏新 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期835-838,共4页
目的运用中药血清药理学方法研究步长脑心通抗缺氧诱导的原代皮质神经元凋亡的作用。方法培养出生24h内SD乳鼠大脑皮质神经元,第7天以不同浓度步长脑心通含药血清处理后制造缺氧模型,定性定量检测细胞凋亡:MTT法观察神经元活力;Hoechst3... 目的运用中药血清药理学方法研究步长脑心通抗缺氧诱导的原代皮质神经元凋亡的作用。方法培养出生24h内SD乳鼠大脑皮质神经元,第7天以不同浓度步长脑心通含药血清处理后制造缺氧模型,定性定量检测细胞凋亡:MTT法观察神经元活力;Hoechst33258染色分析细胞核形态的变化;琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂,进一步验证和检测细胞凋亡。结果步长脑心通含药血清处理后缺氧神经元活力增加,缺氧所致神经元凋亡明显减少。结论步长脑心通对缺氧引起的皮质神经元凋亡有抑制作用。 展开更多
关键词 步长脑心通 神经保护 凋亡 中药血清药理学 皮质神经元
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复方丹参注射液抗脂多糖诱导的兔弥漫性血管内凝血 被引量：13
7
作者 林熙 祈洁珍 +1 位作者 邱鹏新 陈家树 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期464-468,共5页
目的:研究复方丹参注射液对脂多糖(LPS)诱导的兔弥漫性血管内凝血(DIC)的作用。方法:用LPS诱导兔DIC模型。凝固法测定纤维蛋白原含量,全自动凝血分析仪检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原含量;全自动血细胞... 目的:研究复方丹参注射液对脂多糖(LPS)诱导的兔弥漫性血管内凝血(DIC)的作用。方法:用LPS诱导兔DIC模型。凝固法测定纤维蛋白原含量,全自动凝血分析仪检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和纤维蛋白原含量;全自动血细胞分析仪进行血小板计数;全自动血浆分析仪测定谷丙转氨酶(ALT)以及血尿素氮(BUN);发色底物法测定蛋白C及抗凝血酶Ⅲ的活性。观察复方丹参注射液对LPS诱导的兔DIC的拮抗作用。结果:兔耳缘静脉持续滴注LPS,观察到:APTT和PT显著延长;血小板计数和纤维蛋白原含量明显减少;ALT和BUN显著升高;蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的活性明显降低。给予复方丹参注射液后,APTT和PT的延长明显缩短;血小板计数和纤维蛋白原的含量均明显恢复;ALT和BUN显著下降;蛋白C及抗凝血酶Ⅲ的活性显著改善。结论:复方丹参注射液对LPS诱导的兔DIC有良好的拮抗作用。 展开更多
关键词 复方丹参注射液 肝素 脂多糖类 纤维蛋白原 血小板
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YZ-2蛋白的生物信息学分析及其多克隆抗体制备 被引量：10
8
作者 臧林泉 邱鹏新 +1 位作者 肖茹 颜光美 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期205-207,共3页
目的:生物信息学分析与脑缺氧密切相关的新蛋白质YZ-2,以及制备其多克隆抗体。方法:根据生物信息学分析预测出YZ-2蛋白质的二级结构、亲水性、抗原性等理化特性,以这些分析预测为依据,经过同源性检索后设计出一段由22个氨基酸组成的多肽... 目的:生物信息学分析与脑缺氧密切相关的新蛋白质YZ-2,以及制备其多克隆抗体。方法:根据生物信息学分析预测出YZ-2蛋白质的二级结构、亲水性、抗原性等理化特性,以这些分析预测为依据,经过同源性检索后设计出一段由22个氨基酸组成的多肽,免疫家兔得到多克隆抗体,并用ELISA、Westernblot等方法鉴定其特异性和滴度。结果:①成功分析预测其抗原性和亲水性;②制备了抗YZ-2蛋白多克隆抗体;③以此多克隆抗体经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹,检测YZ-2蛋白的表达,证实此抗体效价较高、特异性强。结论:利用生物信息学较好地预测出YZ-2的亲水性和抗原性,并成功制备了其较高特异性的多克隆抗体。 展开更多
关键词 YZ-2 多克隆抗体 生物信息学
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一种神经元体外缺氧诱导凋亡模型的建立 被引量：6
9
作者 臧林泉 苏兴文 +2 位作者 邱鹏新 伍宇平 颜光美 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1244-1245,1248,共3页
目的:在不改变细胞生长环境条件下,建立一种体外培养大鼠皮层神经元缺氧诱导细胞凋亡模型。方法:取新生鼠培养第8d的皮层神经元,采用不改变原培养基成分,将细胞置于缺氧环境(密闭容器内,抽取成真空并维持30min,然后充95%N2、5%CO2)中分... 目的:在不改变细胞生长环境条件下,建立一种体外培养大鼠皮层神经元缺氧诱导细胞凋亡模型。方法:取新生鼠培养第8d的皮层神经元,采用不改变原培养基成分,将细胞置于缺氧环境(密闭容器内,抽取成真空并维持30min,然后充95%N2、5%CO2)中分别培养0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0和24h后,于不同时间取出,Hochest33258神经元核染色观察凋亡小体及凋亡细胞核,抽提DNA琼脂糖电泳检测DNA梯形条带,以明确导致皮层神经元凋亡的缺氧时间。结果和结论:缺氧0.5h后即可见DNA梯形条带形成,缺氧1h后即可见神经元细胞核固缩、细胞核凋亡小体形成。在不改变细胞培养基及其它成分的条件下,平均缺氧1h即可诱导体外培养的神经元细胞凋亡,成功地建立起一种体外培养大鼠皮层神经元缺氧诱导神经元凋亡模型,而且重复性好,可以作为体外缺氧/缺血诱导神经元凋亡的良好平台。 展开更多
关键词 神经元 缺氧 细胞凋亡 模型 动物
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藻酸双酯钠对蜂毒肽诱导的皮质神经元凋亡的保护作用 被引量：6
10
作者 唐孝礼 邱鹏新 +3 位作者 黎明涛 苏兴文 林穗珍 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期407-410,共4页
目的　研究藻酸双酯钠（ＰＳＳ） 对蜂毒肽（ｍａｓｔｏｐａｒａｎ）诱导的皮质神经元凋亡是否具有保护作用。方法　体外培养大鼠皮质神经元，定性定量检测细胞凋亡：①用ＦＤＡ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ） 染色... 目的　研究藻酸双酯钠（ＰＳＳ） 对蜂毒肽（ｍａｓｔｏｐａｒａｎ）诱导的皮质神经元凋亡是否具有保护作用。方法　体外培养大鼠皮质神经元，定性定量检测细胞凋亡：①用ＦＤＡ（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ） 染色检测细胞存活率，用Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ 染色，分析细胞核的形态变化；②琼脂糖凝胶电泳分析ＤＮＡ 断裂；③流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果　ＰＳＳ使皮质神经元存活率增加，使ｍａｓｔｏｐａｒａｎ 引起的细胞核固缩、凝聚和断裂现象消失；ｍａｓｔｏｐａｒａｎ 使神经元的ＤＮＡ电泳图谱出现明显的“梯子状”，而ＰＳＳ使此现象消失；ｍａｓｔｏｐａｒａｎ使神经元的流式细胞仪分析图上出现明显的凋亡峰，ＰＳＳ可使此凋亡峰消失。 展开更多
关键词 藻酸双酯钠 蜂毒肽 皮质神经元 细胞凋亡
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血栓通注射液对LPS诱导的兔弥散性血管内凝血的拮抗作用 被引量：8
11
作者 黄振华 朱玮玮 +4 位作者 林熙 祁洁珍 邱鹏新 陈家树 陈琪 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期682-687,共6页
目的:研究血栓通注射液对脂多糖(LPS)诱导的兔弥散性血管内凝血(DIC)的影响。方法:对兔耳缘静脉持续滴注LPS以建立兔DIC模型,记录各组动物在24 h后的生存率;全自动血浆分析仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血尿素氮(BUN);用全自动凝血分... 目的:研究血栓通注射液对脂多糖(LPS)诱导的兔弥散性血管内凝血(DIC)的影响。方法:对兔耳缘静脉持续滴注LPS以建立兔DIC模型,记录各组动物在24 h后的生存率;全自动血浆分析仪测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和血尿素氮(BUN);用全自动凝血分析仪检测活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT);用凝固法测定纤维蛋白原含量;全自动血细胞分析仪进行血小板计数;发色底物法测定蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的活性;ELISA法检测血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果:持续从兔耳缘静脉滴注LPS后,DIC模型组动物大量死亡,ALT和BUN显著升高,APTT和PT显著延长,蛋白C和抗凝血酶Ⅲ的活性明显降低,血小板计数明显减少,血浆中TNF-α的含量显著升高。注射血栓通注射液后,动物的死亡率明显下降,ALT和BUN明显下降,APTT和PT明显缩短,血小板计数明显上升,纤维蛋白原含量显著提高,蛋白C和抗凝血酶Ⅲ活性明显提升;血浆TNF-α的含量明显降低。结论:血栓通注射液对LPS所诱导的兔DIC有良好的拮抗作用。 展开更多
关键词 血栓通注射液 脂多糖类 弥散性血管内凝血 肿瘤坏死因子
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高钾可诱导培养的小脑颗粒神经元凋亡 被引量：5
12
作者 李文明 苏兴文 +1 位作者 邱鹏新 颜光美 《中国神经科学杂志》 CSCD 2001年第1期88-92,100,共6页
采用四唑盐比色、琼脂糖凝胶电泳、乙二酸荧光素染色和Hoechst332 58染色等方法研究高钾对原代培养的大鼠小脑颗粒神经元的毒性作用及其机制。结果发现 :①高钾诱导神经元死亡呈剂量 ( 50～ 10 0mmol/L)和时间依赖性 ;②神经元死亡呈现... 采用四唑盐比色、琼脂糖凝胶电泳、乙二酸荧光素染色和Hoechst332 58染色等方法研究高钾对原代培养的大鼠小脑颗粒神经元的毒性作用及其机制。结果发现 :①高钾诱导神经元死亡呈剂量 ( 50～ 10 0mmol/L)和时间依赖性 ;②神经元死亡呈现明显的凋亡特征 :胞体缩小 ,染色质浓缩 ,DNA“梯形”条带形成和蛋白质合成抑制剂 (cycloheximide ,1.0mg/L)可阻断其毒性等 ;③MK 80 1( 2 μmol/L)、尼莫地平 ( 10 μmol/L)、硫酸镁 ( 2 0mmol/L)可阻断高钾的大部分毒性作用。结果提示 展开更多
关键词 高钾 谷氨酸 细胞凋亡 小脑颗粒神经元 大鼠
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建立荷人结肠癌裸鼠移植瘤模型及MRI成像检查 被引量：7
13
作者 冯仕庭 孙灿辉 +6 位作者 蔡华崧 周健 谭国胜 邱鹏新 张健 李子平 孟悛非 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第20期3696-3700,共5页
背景:肿瘤移植瘤动物模型是探索和模拟肿瘤在人体内生物学行为的一种较为理想的方法,但应用MRI对模型进行评价的研究较少。目的:应用人结肠癌LoVo细胞接种裸鼠,鼠间移植传代,建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,并应用MRI进行初步评价。方法:... 背景:肿瘤移植瘤动物模型是探索和模拟肿瘤在人体内生物学行为的一种较为理想的方法,但应用MRI对模型进行评价的研究较少。目的:应用人结肠癌LoVo细胞接种裸鼠,鼠间移植传代,建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,并应用MRI进行初步评价。方法:采用细胞移植和瘤块移植两种方法建立裸鼠移植瘤模型,观察移植瘤大体形态和组织病理学改变,测定宿主血液中的癌胚抗原值,应用免疫组化法观察肿瘤细胞中癌胚抗原的的分布,对6只裸鼠移植瘤模型进行MRI成像检查,并测量肿瘤、肝脏、肌肉组织的T1WI和T2WI的信噪比和三者的T1,T2值。结果与结论:移植瘤的形态和功能特性与原发肿瘤基本相似,移植瘤的移植成功率为100%;6只裸鼠模型的MRI测量结果显示,其肿瘤、肝脏、肌肉的T1WI平均信噪比分别为26.19,22.71,26.62;T2WI平均信噪比分别为9.42,7.66,8.59;平均T1值分别为1039.22,907.63,1611.51ms;平均T2值分别为109.95,37.31,64.35ms。结果证实荷人结肠癌裸鼠模型的MRI成像图像清楚,组织分辨率高,测定组织的T1值和T2值可作为定量指标进行分析。 展开更多
关键词 肿瘤移植 裸鼠 结肠肿瘤 MRI 动物模型
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咖啡因对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及机制 被引量：6
14
作者 赵灵芝 苏兴文 +4 位作者 银巍 江伟健 黄亦俊 邱鹏新 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1370-1374,共5页
目的　观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法　体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·... 目的　观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法　体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·L-1苯妥英和 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因 ,4 8h后行凋亡分析 ;采用dantrolene(2 0 μmol·L-1)、2APB (5 0 μmol·L-1)、nifedipine(10 0 μmol·L-1)和nimodipine(10 0 μmol·L-1)、MK80 1(4μmol·L-1)、KN93(1μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)分别预先孵育 30min ,再与10mmol·L-1咖啡因和 10 0 μmol·L-1苯妥英共孵育 4 8h ,测定CGNs存活率 ,观察咖啡因的作用与 [Ca2 + ]i 的关系 ;Westernblot法检测咖啡因对磷酸化c Jun和磷酸化ERK水平的影响。结果　① 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡 ,显著提高CGNs存活率 ;②dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK80 1和PD980 5 9均不能取消 10mmol·L-1咖啡因对 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用。③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c Jun磷酸化水平的升高 ,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性。结论　一定浓度的咖啡因可保护苯? 展开更多
关键词 咖啡因 苯妥因 小脑颗粒神经元 凋亡 胞外信号反应激酶(ERK) C-JUN
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基因bcl-2对神经元生物活性的保护作用(英文) 被引量：6
15
作者 吴永青 刘彦文 +2 位作者 邱鹏新 张清秀 葛坚 《中国临床康复》 CSCD 2003年第22期3071-3073,共3页
目的研究基因bcl-2对神经元的生物活性作用,为神经系统疾病的保护治疗提供有效的途径。方法构建真核表达载体pcDNA3-bcl-2,采用脂质体介导将重组质粒导入PC12细胞,WesternBlot检测外源基因表达;10,50和100μmol/L顺铂处理转染重组质粒... 目的研究基因bcl-2对神经元的生物活性作用,为神经系统疾病的保护治疗提供有效的途径。方法构建真核表达载体pcDNA3-bcl-2,采用脂质体介导将重组质粒导入PC12细胞,WesternBlot检测外源基因表达;10,50和100μmol/L顺铂处理转染重组质粒的实验A组细胞,同样条件处理转染空质粒的对照B组细胞,72h后比较两者存活的细胞数;流式细胞仪检测分析两者的细胞周期指数。结果成功构建了真核表达载体pcDNA3-bcl-2,并用脂质体介导的方法获得了稳定表达Bcl-2的细胞克隆;10,50和100μmol/L顺铂处理后,实验A组存活的细胞数分别为276±13,185±11和108±10,而对照B组中存活的细胞数分别为100±9,12±3和2±2,两者相比差异有显著性意义;流式细胞仪检测显示,实验A组S期细胞所占百分比为8.81%比对照B组25.79%明显减少(χ2=22.53,P<0.01)。结论bcl-2能够拮抗顺铂对神经元的损害作用,促进神经细胞存活,其神经保护作用机制可能通过调控细胞周期来完成。 展开更多
关键词 bcl-2 神经元 生物活性 神经保护 神经系统疾病 基因表达 流式细胞仪
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地塞米松诱导牛眼小梁细胞凋亡的研究 被引量：7
16
作者 古亚娟 曾淑君 +2 位作者 邱鹏新 彭大伟 颜光美 《中华眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期302-304,I004,共4页
目的　探讨地塞米松诱导牛眼小梁细胞凋亡的机制。方法　采取体外组织块培养法 ,培养新生牛眼小梁细胞。将 1～ 5 0 0mg/L地塞米松加入融合的第 3～ 5代小梁细胞培养液中 ,作用1～ 14d ,用相差显微镜、荧光显微镜、透射电子显微镜、DNA... 目的　探讨地塞米松诱导牛眼小梁细胞凋亡的机制。方法　采取体外组织块培养法 ,培养新生牛眼小梁细胞。将 1～ 5 0 0mg/L地塞米松加入融合的第 3～ 5代小梁细胞培养液中 ,作用1～ 14d ,用相差显微镜、荧光显微镜、透射电子显微镜、DNA电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果　 12 5～ 5 0 0mg/L地塞米松作用 1～ 14d ,小梁细胞凋亡呈浓度时间依赖性。凋亡的小梁细胞经Hoechst 332 5 8染色 ,于荧光显微镜下观察 ,细胞核呈致密浓染的颗粒块状荧光 ;透射电镜下可见小梁细胞染色质固缩 ,并有凋亡小体 ,细胞器基本完好 ;DNA电泳呈梯状条带 ;流式细胞仪检测到亚二倍体峰。结论　地塞米松可诱导体外培养的小梁细胞凋亡 ,可能是激素性青光眼的发病机制之一。 展开更多
关键词 细胞培养 地塞米松 青光眼 小梁细胞 细胞凋亡 GIG 糖皮质激素 诱发
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3β,5α,6β-三羟基胆甾烷诱导恶性胶质瘤细胞的凋亡 被引量：6
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作者 谢珊珊 朱文博 +6 位作者 颜敏 林园 张海鹏 邱鹏新 苏兴文 颜光美 胡海燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期647-653,共7页
目的:研究3β,5α,6β-三羟基胆甾烷(Triol)诱导恶性胶质瘤细胞凋亡的作用及其机制。方法:以不同浓度的Triol作用于C6细胞和A172细胞不同时间。采用MTT法检测细胞存活率,Hoechst 33342染色和TUNEL法检测细胞凋亡,试剂盒检测caspase活性... 目的:研究3β,5α,6β-三羟基胆甾烷(Triol)诱导恶性胶质瘤细胞凋亡的作用及其机制。方法:以不同浓度的Triol作用于C6细胞和A172细胞不同时间。采用MTT法检测细胞存活率,Hoechst 33342染色和TUNEL法检测细胞凋亡,试剂盒检测caspase活性变化,蛋白免疫印记方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2家族蛋白的变化。结果:Triol可呈剂量和时间依赖性降低C6细胞和A172细胞的存活率;Triol处理细胞48 h,C6细胞和A172细胞的IC50值分别为(17.8±0.6)μmol/L和(20.6±0.2)μmol/L。Hoechst 33342染色、TUNEL检测和凋亡执行酶caspase-3活性检测结果显示,给药组中2种细胞都出现明显凋亡核象、TUNEL阳性细胞数增多和caspase-3的激活。Triol作用于C6细胞12 h、24 h和48 h后,在凋亡外通路中激活的caspase-8和在凋亡内通路中激活的caspase-9活性均随时间升高,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表达量随时间降低,而促凋亡蛋白Bak的表达量随时间升高。结论:Triol通过激活内、外凋亡通路引起恶性胶质瘤细胞的凋亡,且Bcl-2家族蛋白在此过程中起重要的调控作用。 展开更多
关键词 3β 5α 6β-三羟基胆甾烷 神经胶质瘤 细胞凋亡 BCL-2家族蛋白
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米诺环素抑制MPP^+诱导的PC12细胞凋亡和线粒体功能损伤 被引量：6
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作者 乐亮 李晶洁 +5 位作者 黎仕锋 朱文博 束敏峰 苏兴文 邱鹏新 颜光美 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期895-899,共5页
目的:探讨米诺环素(minocycline)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞凋亡和线粒体功能损伤的保护作用。方法:将MPP+加入体外培养的的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元凋亡模型,实验过程中用minocycline进行预处理,四甲基偶氮唑... 目的:探讨米诺环素(minocycline)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞凋亡和线粒体功能损伤的保护作用。方法:将MPP+加入体外培养的的PC12细胞中,建立多巴胺能神经元凋亡模型,实验过程中用minocycline进行预处理,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞存活率,Hoechst染色检测细胞凋亡,DCFH-DA检测ROS聚集,JC-1检测细胞线粒体膜电位变化。结果:0.5 mmol/L MPP+处理PC12细胞24 h,能明显抑制细胞生长(抑制率80.8%),诱导细胞发生凋亡(凋亡率5.22%),同时ROS浓度提高230.0%,线粒体膜去极化(绿/红荧光强度比为11.95)。而加入10μmol/L minocycline预处理30 min可明显升高MPP+处理的PC12细胞活性,细胞凋亡率明显降低(P<0.01),ROS浓度明显下降,绿/红荧光强度比也明显降低(P<0.01)。结论:Minocycline抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡部分通过对抗其线粒体功能而发挥作用。 展开更多
关键词 米诺环素 PC12细胞 线粒体功能损伤 1-甲基-4-苯基吡啶离子
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热刺激预处理对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用 被引量：5
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作者 陈丽君 苏兴文 +3 位作者 邱鹏新 蔡翔 郑素秋 颜光美 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第1期14-16,26,共4页
【目的】热刺激预处理诱导热休克蛋白表达 ,观察它对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用。【方法】热刺激处理诱导热休克蛋白产生 ,复极化诱导体外培养的小脑颗粒神经元凋亡 ,FDA荧光染色计算细胞存活率 ,相差显微镜分析... 【目的】热刺激预处理诱导热休克蛋白表达 ,观察它对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用。【方法】热刺激处理诱导热休克蛋白产生 ,复极化诱导体外培养的小脑颗粒神经元凋亡 ,FDA荧光染色计算细胞存活率 ,相差显微镜分析细胞形态 ,Hoechst332 5 8染色分析核形态 ,琼脂糖凝胶电泳分析DNA片段 ,Westernblotting检测HSP70 表达。【结果】小脑颗粒神经元在去极化条件 (2 5mmol/LKCl)下生长良好 ,复极化 (5mmol/LKCl )后 2 0h ,相差显微镜下神经元胞体缩小 ,突起断裂。Hoechst 332 5 8染色见核固缩和凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡的典型生化特征—DNA梯状条带。预先对小脑颗粒神经元进行热刺激处理 (4 4℃ )不同时间 (6 0min ,90min)再复极化 ,神经元凋亡数明显减少 ,且随热处理时间延长 ,保护作用增强。Westernblotting结果 :随热刺激 (4 4℃ )处理时间延长 ,HSP70 表达量逐渐增加。【结论】热刺激预处理对复极化诱导的小脑颗粒神经元凋亡具有保护作用。这一保护作用可能涉及HSP70 。 展开更多
关键词 热休克蛋白质类 小脑颗粒神经元 凋亡 热刺激预处理 复极化诱导
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荧光差异显示PCR克隆大鼠脑缺血相关基因KIAA0280 被引量：5
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作者 臧林泉 银巍 +3 位作者 皮荣标 邱鹏新 苏兴文 颜光美 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期97-101,共5页
【目的】研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异,克隆出与脑缺血相关的基因。【方法】应用荧光差异显示PCR(FDDPCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段,经反向Northernb... 【目的】研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异,克隆出与脑缺血相关的基因。【方法】应用荧光差异显示PCR(FDDPCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段,经反向Northernblot杂交,将杂交阳性的片段且经RT-PCR反复验证,选取差异明显的片段进行克隆测序;经生物信息学分析处理,选取同源性低的EST片段R6,利用cDNA5'端快速扩增PCR(5'RACE法)进行基因全长的克隆。【结果】利用5'RACE法成功地克隆EST片段R6至编码区,扩增并获取全长4821bp及完整的可读框(ORF),RT-PCR及Northernblot印迹结果证实了克隆的结果,同源性分析发现该基因ORF与人大脑中已知的KIAA0280基因高度同源,同源性96%,编码166个氨基酸,为结构及功能未明确蛋白质,该基因定位于大鼠第11号染色体长臂(11q.13)。【结论】应用荧光差异显示PCR成功地自大鼠体内克隆到与人KIAA0280相似的基因,其在大鼠急性局灶性脑缺血中明显上调,该蛋白质结构及功能均未见报道及研究,其显著地差异表达提示其在脑缺血病理过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 荧光差异显示PCR 克隆 大鼠 脑缺血 KIAA0280基因 生物信息学 动物模型 分子机制
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