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NMM抗肿瘤DNA疫苗原液大肠杆菌菌体蛋白质残留量检测方法的建立与验证 被引量：1
1
作者 郭润姿 伊君梅 +4 位作者 孙澳 田园 车亦伟 邱创钧 王宇 《中国医药科学》 2023年第9期85-89,共5页
目的建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白质残留量的双抗体夹心ELISA试验方法。方法使用双抗体夹心ELISA试验方法检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白残留量,采用四参数logstic曲线进行回归分析,并对该方法... 目的建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白质残留量的双抗体夹心ELISA试验方法。方法使用双抗体夹心ELISA试验方法检测NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌菌体蛋白残留量,采用四参数logstic曲线进行回归分析,并对该方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证通过对5批样品进行检测。结果采用双抗体夹心ELISA试验方法进行大肠杆菌蛋白质残留量检测时,DNA疫苗原液无需进行稀释。NMM抗肿瘤DNA疫苗原液对大肠杆菌菌体蛋白质的检测无干扰及抑制作用,方法的专属性良好;本法检测限为0.41 ng/ml;定量限为0.98 ng/ml;该方法测定宿主菌蛋白质残留量在0~100 ng/ml范围内线性良好,R^(2)≥0.9999;本方法重复性试验中宿主菌蛋白质含量RSD值均低于15%,中间精密度实验中样品吸光值RSD值低于10%,精密度结果良好。在检测线性范围内加入高、中、低3种浓度的大肠杆菌菌体蛋白,回收率均值为100.35%(n=9,RSD=3.58%);本方法检测实验条件发生微小变动时(不同人员、不同批次试剂盒),对测定结果的影响在可接受范围内。应用该方法对5批NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中大肠杆菌蛋白质残留量进行检测,大肠杆菌菌体蛋白残留量均在1 ng/mg左右,远低于相关指导原则中规定的不高于1μg/mg的质量标准。结论该方法可用于NMM抗肿瘤DNA疫苗原液中宿主菌蛋白质含量的检测。 展开更多
关键词 抗肿瘤DNA疫苗 重组生物制品 双抗原夹心ELISA法 大肠杆菌菌体蛋白残留 质量控制
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NMM肿瘤DNA疫苗乙二胺四乙酸二钠残留量高效液相色谱检测方法的建立及验证
2
作者 孙澳 郭润姿 +7 位作者 田园 伊君梅 柯尊阳 宋卫卫 邱创钧 李忠明 王宇 于继云 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期855-861,共7页
目的 建立NMM肿瘤DNA疫苗原液中乙二胺四乙酸二钠(ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt,EDTA-2Na)残留量高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测方法,并进行验证,用于DNA疫苗质量控制。方法 将NMM肿... 目的 建立NMM肿瘤DNA疫苗原液中乙二胺四乙酸二钠(ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt,EDTA-2Na)残留量高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)检测方法,并进行验证,用于DNA疫苗质量控制。方法 将NMM肿瘤DNA疫苗原液与硫酸铜络合后,建立EDTA-2Na残留量HPLC检测方法:色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为水-10%四丁基氢氧化铵-乙腈溶液(74.5∶0.5∶25);检测波长为254 nm;流速为0.8 mL/min;柱温为20℃;进样量为20μL。对方法的专属性、线性范围、检测限及定量限、溶液稳定性、耐用性、准确度、精密度进行验证。用建立的方法对多批次DNA疫苗原液中EDTA-2Na残留量进行检测。结果EDTA-2Na对照品及加入EDTA-2Na的DNA疫苗原液与硫酸铜反应后,在5.3 min附近出现吸收峰,而DNA疫苗原液与硫酸铜反应后未见吸收峰;对照品在4~400μg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,R^(2)=0.999 9;该方法检测限为10 ng/mL,定量限为40 ng/mL;对照品及供试品溶液放置12 h,溶液稳定性良好;方法检测条件发生微小变动时(不同流动相比例、不同流速、不同柱温),对检测结果的影响在可接受范围内;低、中、高浓度加标样品EDTA-2Na回收率均值为101.38%,RSD为0.39%;0.1 mg/mL对照品溶液连续进样6次,峰面积RSD为0.04%,6份供试品溶液均未检出EDTA-2Na,含EDTA-2Na的供试品溶液峰面积RSD为0.02%,中间精密度良好。多批次DNA疫苗原液均未检测出EDTA-2Na残留。结论 建立的方法操作简便,准确可靠,专属性强,可用于DNA疫苗原液中EDTA-2Na残留量检测。 展开更多
关键词 DNA疫苗 肿瘤 高效液相色谱法 EDTA-2Na残留量 质量控制
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新型冠状病毒疫苗的序贯免疫接种 被引量：2
3
作者 宋卫卫 徐强 +3 位作者 柯尊阳 邱创钧 李忠明 王宇 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期456-463,共8页
序贯免疫接种是在当前COVID-19疫情严重时期,解决疫苗短缺、应对新型冠状病毒突变、提高疫苗效力的特殊手段之一。本文以世界卫生组织授权的新型冠状病毒疫苗(新冠疫苗)为主,就目前采用灭活疫苗初次免疫+重组蛋白疫苗/载体疫苗/mRNA疫... 序贯免疫接种是在当前COVID-19疫情严重时期,解决疫苗短缺、应对新型冠状病毒突变、提高疫苗效力的特殊手段之一。本文以世界卫生组织授权的新型冠状病毒疫苗(新冠疫苗)为主,就目前采用灭活疫苗初次免疫+重组蛋白疫苗/载体疫苗/mRNA疫苗加强免疫、载体疫苗初次免疫+mRNA疫苗加强免疫,以及不同剂型的mRNA疫苗互为初次和加强免疫的5种新冠疫苗序贯免疫接种方式的研究和临床试验进行综述。多项研究结果表明,异源序贯接种策略安全有效,接种者获得的免疫原性和有效性超出其中任何一种疫苗的同源接种,且在对抗新型冠状病毒变异株方面也有一定的效力。 展开更多
关键词 新型冠状病毒疫苗 序贯免疫 免疫原性 效力 突变株
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b型流感嗜血杆菌多糖与肺炎球菌表面黏附素A结合疫苗的免疫原性及预防急性中耳炎效果的实验研究
4
作者 陈泽宇 徐江红 +2 位作者 郭蓉 邱创钧 陈兵 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2018年第4期245-249,共5页
目的利用肺炎球菌表面黏附素A(PsaA)为蛋白载体研制b型流感嗜血杆菌(Hib)多糖与蛋白的结合疫苗,并研究其在幼龄大鼠体内的免疫原性以及对肺炎球菌导致的急性中耳炎(AOM)的免疫保护作用。方法运用酰胺缩合法将PsaA与Hib荚膜多糖偶联结合... 目的利用肺炎球菌表面黏附素A(PsaA)为蛋白载体研制b型流感嗜血杆菌(Hib)多糖与蛋白的结合疫苗,并研究其在幼龄大鼠体内的免疫原性以及对肺炎球菌导致的急性中耳炎(AOM)的免疫保护作用。方法运用酰胺缩合法将PsaA与Hib荚膜多糖偶联结合制备多糖蛋白结合疫苗。选取30只约3周龄无特定病原体(SPF)雌性SD大鼠,体重88~102 g,随机分成实验组和对照组,每组15只。对幼龄SD大鼠进行疫苗接种,实验组接种Hib-PsaA疫苗,对照组接种磷酸盐缓冲液(PBS)。每2周接种1次,3次接种后检测动物血清相关抗体免疫球蛋白G(IgG)水平。然后对实验组及对照组大鼠分别以肺炎球菌经鼓膜穿刺注入中耳以诱发AOM,观察2组大鼠发生AOM的炎症反应情况。结果运用酰胺缩合法将Psa A与Hib多糖偶联结合,结合物的洗脱峰明显前移,表明细菌多糖与载体蛋白结合成功。接种该结合疫苗的实验组幼龄大鼠产生的抗Psa A抗体Ig G的几何平均滴度(GMT)为11 138,抗Hib抗体Ig G的GMT为7 017,而对照组抗PsaA抗体IgG的GMT与抗Hib抗体Ig G的GMT分别为729和348。实验组2种抗体Ig G均明显高于对照组(P<0.001)。肺炎球菌攻击后组织病理学检查发现,实验组大鼠在细菌攻击后第3天和第7天中耳炎症反应明显轻于对照组,显示Hib-Psa A结合疫苗对肺炎球菌诱发的大鼠AOM有免疫保护作用。结论运用酰胺缩合法可成功将PsaA蛋白与Hib多糖偶联结合,所制备的多糖蛋白结合疫苗在幼龄大鼠体内可诱导分别针对Psa A和Hib多糖的有效免疫应答反应,并且可有效预防肺炎球菌导致的大鼠AOM。 展开更多
关键词 结合疫苗 肺炎球菌表面黏附素A B型流感嗜血杆菌 急性中耳炎 免疫原性
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