多西他赛诱导的多倍体肿瘤细胞在肿瘤复发中的作用 被引量：8

1

作者 王丽丽 赵松 +4 位作者 欧阳明玥 谢晓冬 邢思宁 刘硕 于卉影 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2020年第6期340-345,共6页

目的研究多西他赛诱导的多倍体肿瘤细胞迁移、上皮间质转化特性及免疫细胞对其杀伤作用,以探讨多倍体肿瘤细胞在肿瘤复发中的潜在作用。方法使用1μmol/L多西他赛处理人非小细胞肺癌A549细胞24 h后收集的细胞为Doc 1 d组,撤除药物,细胞... 目的研究多西他赛诱导的多倍体肿瘤细胞迁移、上皮间质转化特性及免疫细胞对其杀伤作用,以探讨多倍体肿瘤细胞在肿瘤复发中的潜在作用。方法使用1μmol/L多西他赛处理人非小细胞肺癌A549细胞24 h后收集的细胞为Doc 1 d组,撤除药物,细胞继续在新鲜的完全培养基中培养至第3天或第5天后收集的细胞分别为Doc 3 d组和Doc 5 d组,以DMSO处理A549细胞24 h作为对照组。采用免疫荧光染色法检测细胞形态,流式细胞术检测细胞倍性,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blotting检测细胞上皮间质转化相关蛋白的表达,乳酸脱氢酶释放法评估细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞的杀伤活性。结果与对照组相比,Doc 1 d组、Doc 3 d组、Doc 5 d组细胞多数发生凋亡,少数存活的细胞体积明显增大,且细胞核呈多核状态。对照组、Doc 1 d组、Doc 3 d组、Doc 5 d组多倍体细胞亚群(DNA含量>4N)比例分别为(1.93±0.55)%、(22.97±2.37)%、(51.30±12.51)%、(67.87±8.31)%,4组间差异具有统计学意义(F=26.521,P<0.001),Doc 1 d组、Doc 3 d组、Doc 5 d组多倍体细胞亚群比例均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(均P<0.001),且随着撤药时间的延长,Doc 3 d组、Doc 5 d组多倍体细胞亚群比例明显高于Doc 1 d组,差异均具有统计学意义(P=0.009;P=0.004)。对照组细胞在培养24 h、48 h后,伤口愈合率均达100%;Doc 3 d组在培养24 h、48 h后,伤口愈合率分别为(39.10±2.12)%、(46.13±5.32)%,差异无统计学意义(t=2.126,P=0.051);与对照组24 h、48 h相比,Doc 3 d组细胞迁移能力明显降低,差异均具有统计学意义(t=49.756,P<0.001;t=30.825,P<0.001)。与对照组相比,Doc 1 d组、Doc 3 d组和Doc 5 d组细胞中E-cadherin蛋白表达逐渐下调,Vimentin蛋白表达逐渐上调,Snail蛋白、N-cadherin蛋白表达均未发生明显改变。CIK细胞对对照组、Doc 3 d组、Doc 5 d组细胞的杀伤效率分别为(27.27±1.91)%、(17.87±2.35)%、(9.47±0.51 展开更多

关键词 癌 非小细胞肺 多倍体肿瘤细胞 多西他赛 上皮间质转化

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间充质干细胞对肿瘤发生发展影响研究现状 被引量：7

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作者 邢思宁 陈伟 于卉影 《临床军医杂志》 CAS 2020年第8期980-982,共3页

间充质干细胞是一种多功能干细胞,具有自我更新和多向分化能力,在再生医学领域具有广泛的应用前景。间充质干细胞不仅可以从骨髓中分离获得,也可以从脐血、脐带、胎盘、脂肪及肌肉等组织获得,并可以分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞... 间充质干细胞是一种多功能干细胞,具有自我更新和多向分化能力,在再生医学领域具有广泛的应用前景。间充质干细胞不仅可以从骨髓中分离获得,也可以从脐血、脐带、胎盘、脂肪及肌肉等组织获得,并可以分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等多种细胞[1]。间充质干细胞还具有向肿瘤迁移的特性,并且可能不受肿瘤类型、机体免疫状态及注射方式的影响。另外,间充质干细胞还具有免疫调节功能。 展开更多

关键词 间充质干细胞 趋向性 肿瘤微环境 肿瘤相关间充质干细胞 肿瘤

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人脐带间充质干细胞及其条件培养液对非小细胞肺癌多倍体A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响 被引量：5

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作者 欧阳明玥 王丽丽 +3 位作者 邢思宁 赵松 刘硕 于卉影 《肿瘤研究与临床》 CAS 2022年第1期8-14,共7页

目的探讨人脐带间充质干细胞(hUC‑MSC)及其条件培养液对人非小细胞肺癌多倍体A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法取对数生长期的A549细胞,采用1μmol/L多西他赛诱导24 h后,更换为含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液继续培养3 d,建立多倍... 目的探讨人脐带间充质干细胞(hUC‑MSC)及其条件培养液对人非小细胞肺癌多倍体A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法取对数生长期的A549细胞,采用1μmol/L多西他赛诱导24 h后,更换为含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液继续培养3 d,建立多倍体A549细胞模型。分离与培养hUC‑MSC,制备hUC‑MSC条件培养液。正常培养的多倍体A549细胞作为对照组;条件培养液培养的多倍体A549细胞为条件培养液组;hUC‑MSC与多倍体A549细胞共培养,细胞总数比分别为2∶1(MSC 1组)和5∶1(MSC 2组)。各组细胞继续培养48 h或72 h。流式细胞术检测多倍体A549细胞增殖和凋亡情况,Transwell实验检测细胞迁移能力,蛋白质印迹法检测迁移和凋亡相关蛋白的表达情况。结果成功建立多倍体A549细胞模型,分离培养出hUC‑MSC。流式细胞术检测细胞增殖结果示,培养48 h时对照组、条件培养液组、MSC 1组、MSC 2组平均荧光强度分别为1695±305、2020±85、1259±35、1356±33,差异有统计学意义(F=14.00,P<0.05);72 h时分别为1052±77、1309±24、864±201、1103±237,差异无统计学意义(F=3.90,P>0.05)。Transwell实验结果显示,培养48 h时对照组、条件培养液组、MSC 1组、MSC 2组迁移细胞数分别为(52±9)个、(57±12)个、(68±8)个、(75±11)个,差异有统计学意义(F=32.16,P<0.05);各实验组迁移细胞数均高于对照组(均P<0.05)。对照组、条件培养液组、MSC 1组、MSC 2组凋亡细胞比例分别为(15.53±4.27)%、(13.77±1.75)%、(3.60±0.50)%、(2.33±0.06)%,差异有统计学意义(F=182.36,P<0.05);条件培养液组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);MSC 1组和MSC 2组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,与对照组比较,条件培养液组、MSC 1组和MSC 2组中迁移相关蛋白基质金属蛋白酶9(MMP‑9)表达上调,促凋亡蛋白bax表达下调,抗凋亡蛋白bcl‑xL表达上调。结论hUC� 展开更多

关键词 间质干细胞 培养液 条件性 癌 非小细胞肺 细胞增殖 细胞凋亡

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液态模锻双金属复合锤头模具设计

4

作者 邢思宁 《铸造设备与工艺》 2024年第1期18-22,共5页

为了提高破碎机双金属复合锤头的综合性能,延长其使用寿命,本文提出了采用液态模锻工艺生产双金属复合锤头的方案,并进行了相应的模具设计。模具采用直立位直接加压液锻成型,可替换模芯,垂直分模,下缸上行顶出的方案。

关键词 液态模锻 模具设计 双金属锤头 可逆锤击式破碎机

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常用虫类药治疗糖尿病的研究 被引量：4

5

作者 刘影哲 刘冰冰 +4 位作者 张洋 邢思宁 曹钰昉 夏兆晨 潘祥宾 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1901-1907,共7页

虫类药是我国传统医学中不可或缺的一类中药,取其走窜之性临床多用于治疗沉疴顽疾,如风湿性、肿瘤性、骨性等疾病。近些年诸多医者逐渐将虫类药运用到糖尿病(diabetes mellitus, DM)及其并发症的临床治疗中且疗效显著。本文对近些年来... 虫类药是我国传统医学中不可或缺的一类中药,取其走窜之性临床多用于治疗沉疴顽疾,如风湿性、肿瘤性、骨性等疾病。近些年诸多医者逐渐将虫类药运用到糖尿病(diabetes mellitus, DM)及其并发症的临床治疗中且疗效显著。本文对近些年来常用虫类药治疗糖尿病及其并发症的现代药理学作用及其临床应用研究进行总结,发现常用虫类药在治疗糖尿病方面具有降血糖、调血脂、抗血栓、抗氧化应激、调控炎性因子等作用,并在DM、糖尿病性心脏病、糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)、糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy, DPN)、糖尿病足(diabetic foot, DF)等并发症的临床治疗中广泛应用且疗效显著。基于以上总结以期为虫类中药资源的进一步开发应用、药理作用的深入研究以及糖尿病临床应用提供参考。 展开更多

关键词 虫类中药 糖尿病 药理作用 临床应用 述评

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核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)介导SP600125诱导的巨核细胞白血病细胞系多倍体化依赖于细胞分化程度 被引量：3

6

作者 王丽丽 杨金刚 +5 位作者 李长岭 邢思宁 于颖 刘硕 赵松 马东初 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1336-1341,共6页

目的探讨核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)在不同分化程度巨核细胞白血病细胞系多倍体化中的调控作用。方法采用c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125诱导Dami、Meg-01和HEL细胞多倍体化,使用蛋白激酶A抑制剂H-89阻断SP600125药物作用,流式细... 目的探讨核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)在不同分化程度巨核细胞白血病细胞系多倍体化中的调控作用。方法采用c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125诱导Dami、Meg-01和HEL细胞多倍体化,使用蛋白激酶A抑制剂H-89阻断SP600125药物作用,流式细胞术分析表型(CD41a、CD42a和CD42b)和DNA倍性,Western blot法检测S6K1相关蛋白的表达及磷酸化修饰位点的变化。结果 SP600125诱导多倍体化和真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)磷酸化。然而,SP600125诱导多倍体化的程度不同,对Dami细胞作用最强、HEL细胞次之、Meg-01细胞最弱。而且SP600125上调Dami细胞的S6K1Thr421/Ser424磷酸化并下调Thr389磷酸化,仅上调HEL细胞的Thr389磷酸化,对Meg-01细胞的S6K1无影响。虽然H-89下调SP600125诱导的3种细胞系中4E-BP1磷酸化,但只部分阻断Dami细胞多倍体化及下调S6K1 Thr421/Ser424磷酸化和上调Thr389磷酸化。尽管H-89上调Meg-01细胞和HEL细胞的S6K1 Thr389磷酸化,但其对Thr421/Ser424磷酸化无影响,而且也不能阻断两者的多倍体化。表型分析显示3种细胞系处于不同的分化水平,即Dami细胞最高、HEL细胞次之、Meg-01细胞最低。结论SP600125诱导巨核细胞白血病细胞系的多倍体化依赖于不同分化程度的细胞系内S6K1对SP600125诱导磷酸化修饰的应答。 展开更多

关键词 核糖体蛋白S6激酶1(S6K1) 巨核细胞 多倍体化

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中医治疗Graves眼病的临床研究进展 被引量：3

7

作者 刘影哲 宋路遥 +2 位作者 邢思宁 曹钰昉 潘祥宾 《中医药学报》 CAS 2022年第6期112-115,共4页

Graves眼病是一种与甲状腺疾病相关的自身免疫性疾病。检索近年中国知网和PubMed数据库中治疗Graves眼病的临床研究文献,发现中医疗法不仅能够有效减轻患者眼球突出、眼内胀痛、眼睑水肿等症状,还具有不良反应少、有效率高、安全性评价... Graves眼病是一种与甲状腺疾病相关的自身免疫性疾病。检索近年中国知网和PubMed数据库中治疗Graves眼病的临床研究文献,发现中医疗法不仅能够有效减轻患者眼球突出、眼内胀痛、眼睑水肿等症状,还具有不良反应少、有效率高、安全性评价好等优势。本文通过对中药治疗活动期、非活动期Graves眼病,以及单纯针刺、针刺联合刺络放血、穴位按摩、中西药物、电针等疗法的临床研究进行归纳整理,旨在为临床治疗提供思路及有益的参考,并针对目前研究现状及存在的问题提出了新的研究方向与建议。 展开更多

关键词 GRAVES眼病 中药 针刺 研究进展

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细胞融合在多倍体肿瘤巨细胞形成中的作用

8

作者 邢思宁 杨紫恩 +1 位作者 王丽丽 于卉影 《中国临床实用医学》 2023年第1期1-4,共4页

多倍体肿瘤巨细胞(polyploid giant cancer cell,PGCC)是指具有多个细胞核或单个巨核内含多组染色体的肿瘤细胞。与常规二倍体细胞相比,PGCC的大小可达常规二倍体细胞的10~20倍,具有四倍体或更高的DNA含量。PGCC的形成机制可能与创伤修... 多倍体肿瘤巨细胞(polyploid giant cancer cell,PGCC)是指具有多个细胞核或单个巨核内含多组染色体的肿瘤细胞。与常规二倍体细胞相比,PGCC的大小可达常规二倍体细胞的10~20倍,具有四倍体或更高的DNA含量。PGCC的形成机制可能与创伤修复和组织再生有相似之处。 展开更多

关键词 二倍体细胞 创伤修复 组织再生 细胞融合 DNA含量 多倍体 巨细胞 肿瘤

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罗米地辛对肺癌多倍体肿瘤巨细胞生物学行为的影响

9

作者 杨紫恩 邢思宁 +3 位作者 王丽丽 刘硕 孙凌燕 于卉影 《中国临床实用医学》 2023年第1期12-17,共6页

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂罗米地辛对肺癌多倍体肿瘤巨细胞(PGCC)生物学行为的影响。方法人非小细胞肺癌细胞系NCI-H1299购自中国科学院上海细胞库。用100 nmol/L多西他赛处理NCI-H1299细胞24 h,建立肺癌PGCC模型,作为PGCC组;用10... 目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂罗米地辛对肺癌多倍体肿瘤巨细胞(PGCC)生物学行为的影响。方法人非小细胞肺癌细胞系NCI-H1299购自中国科学院上海细胞库。用100 nmol/L多西他赛处理NCI-H1299细胞24 h,建立肺癌PGCC模型,作为PGCC组;用100 nmol/L罗米地辛处理PGCC组细胞48 h,记为PGCC+罗米地辛组;将二甲基亚砜(DMSO)处理组细胞记为DMSO组。采用流式细胞术检测细胞DNA含量;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移能力;流式细胞术检测线粒体膜电位;Western blot检测细胞中存活素蛋白(Survivin)、骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物蛋白(c-Myc)、波形蛋白(Vimentin)、B细胞淋巴瘤/白血病-x基因长片段蛋白(Bcl-xl)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果流式细胞术检测细胞DNA含量结果显示,PGCC组PGCC亚群(DNA含量>4 N)百分比[(60.53±9.92)%]明显高于DMSO组[(2.08±0.62)%],差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8检测结果表明,随着罗米地辛药物浓度逐渐增加,其对细胞抑制率也逐渐增高,同时,罗米地辛处理肺癌PGCC 48 h对细胞抑制率高于24 h,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell检测结果显示,PGCC+罗米地辛组细胞迁移数[(13±1)个]明显少于PGCC组[(51±2)个];FACScantoⅡ流式细胞仪检测样本结果显示,PGCC+罗米地辛组的红色荧光/绿色荧光比值(2.31±0.10)明显低于PGCC组(4.55±0.52);Westernblot检测结果显示,与PGCC组相比,PGCC+罗米地辛组中Survivin、c-Myc、Vimentin和Bcl-xl表达水平明显下调,Bax表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论罗米地辛能够抑制肺癌PGCC增殖和迁移能力,并促进肺癌PGCC凋亡。 展开更多

关键词 肺癌 多倍体肿瘤巨细胞 罗米地辛

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乙醛脱氢酶1酶活性对多西他赛诱导的多倍体肿瘤巨细胞血管生成和迁移影响

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作者 马诗涵 王丽丽 +5 位作者 杨紫恩 欧阳明玥 赵松 邢思宁 刘硕 于卉影 《中国临床实用医学》 2023年第1期18-24,共7页

目的探究乙醛脱氢酶1(ALDH1)酶活性变化对肺癌多倍体肿瘤巨细胞(PGCC)血管生成和迁移的影响。方法常规培养的非小细胞肺癌细胞(A549、H1299细胞)为常规组,10 mmol/L的4-(N,N二乙基)氨基苯甲醛(DEAB)处理细胞12 h,撤除药物后在完全培养... 目的探究乙醛脱氢酶1(ALDH1)酶活性变化对肺癌多倍体肿瘤巨细胞(PGCC)血管生成和迁移的影响。方法常规培养的非小细胞肺癌细胞(A549、H1299细胞)为常规组,10 mmol/L的4-(N,N二乙基)氨基苯甲醛(DEAB)处理细胞12 h,撤除药物后在完全培养基中继续培养细胞至第3天为DEAB组;1 mmol/L多西他赛处理细胞24 h,撤除药物后在完全培养基中培养至第3天为多西他赛组;10 mmol/L的DEAB预处理细胞12 h后,1 mmol/L多西他赛处理24 h,撤除药物后在完全培养基中培养至第3天为多西他赛+DEAB组。流式细胞术检测细胞DNA含量;乙醛脱氢酶(ALDH)测定试剂盒测定ALDH1活性;细胞划痕实验检测迁移能力;血管生成拟态(VM)实验和小管形成实验检测血管生成能力;蛋白印迹法(WB)检测细胞中N-cadherin、Vimentin、血管内皮生长因子(VEGF)A抗体和VE-cadherin蛋白表达水平。结果多西他赛组A549细胞、H1299细胞PGCC亚群比例高于常规组;多西他赛组A549细胞、H1299细胞ALDH1酶活性高于常规组;多西他赛+DEAB组A549细胞、H1299细胞ALDH1酶活性低于多西他赛组;差异均有统计学意义(P<0.05)。多西他赛+DEAB组A549细胞、H1299细胞的细胞迁移率低于多西他赛组,差异有统计学意义(P<0.05)。多西他赛+DEAB组A549细胞分支点数量和小管总长度降低,差异有统计学意义(P<0.05)。多西他赛组A549细胞、H1299细胞N-cadherin、Vimentin的表达高于常规组;多西他赛+DEAB组A549细胞、H1299细胞N-cadherin、Vimentin的表达低于多西他赛组,差异有统计学意义(P<0.05)。HUVEC(多西他赛+DEAB组A549细胞条件培养基处理)形成的小管分支点数量和总长度均低于HUVEC(多西他赛组A549细胞条件培养基处理);HUVEC(多西他赛+DEAB组H1299细胞条件培养基处理)形成的小管分支点数量和总长度均低于HUVEC(多西他赛组H1299细胞条件培养基处理),差异有统计学意义(P<0.05)。多西他赛组A549细胞VE-cadherin、VEGFA抗体� 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 多倍体肿瘤巨细胞 乙醛脱氢酶1 血管形成 迁移

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二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞增殖的抑制作用及其机制 被引量：2

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作者 李长岭 蔺迪 +4 位作者 邢思宁 赵松 陈惠鹏 周凡 马东初 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期534-538,共5页

目的:研究二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞生长的影响,初步探讨二甲双胍抑制Dami细胞增殖的分子机制。方法:将培养的Dami细胞分为空白对照组,1、2、4、8、16和32mmol·L-1二甲双胍处理组;MTT法检测不同浓度二甲双胍作用后D... 目的:研究二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞生长的影响,初步探讨二甲双胍抑制Dami细胞增殖的分子机制。方法:将培养的Dami细胞分为空白对照组,1、2、4、8、16和32mmol·L-1二甲双胍处理组;MTT法检测不同浓度二甲双胍作用后Dami细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹分析Cdc2和Cyclin B1蛋白的表达以及Cdc2蛋白的磷酸化修饰。结果:MTT检测,与空白对照组比较,32mmol·L-1二甲双胍处理组0、24、48、72和96h Dami细胞增殖抑制率明显升高[(35.1±2.3)%、(49.7±5.1)%、(78.8±0.9)%、(79.1±3.0)%和(85.2±3.2)%](P<0.01);在二甲双胍处理72h后,1、2、4、8、16和32 mmol·L-1处理组Dami细胞增殖抑制率分别为(33.8±1.3)%、(51.9±2.2)%、(59.4±1.6)%、(65.5±2.0)%、(75.5±0.9%)和(79.1±3.0)%,二甲双胍对Dami细胞的增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测,与空白对照组比较,1、2和4mmol·L-1二甲双胍处理组G2/M期细胞比例从(26.0±0.5)%升高至(38.5±1.5)%、(48.4±1.1)%和(58.2±2.7)%,4mmol·L-1二甲双胍处理组G2/M期细胞比例明显高于对照组(P<0.01)。免疫印迹分析,与空白对照组比较,4mmol·L-1二甲双胍处理组Cdc2和Cyclin B1的表达水平明显下降,Cdc2在Try15位点磷酸化明显上调,而在Thr161位点的磷酸化明显下调。结论:二甲双胍能抑制Dami细胞增殖并诱导其发生G2/M期阻滞,其机制可能与Cdc2/Cyclin B1复合物的活化受到抑制有关。 展开更多

关键词 二甲双胍 白血病 原始巨核细胞 急性 细胞周期 Dami细胞

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S6K1 C端自抑制假底物结构域磷酸化与Akt去磷酸化协同调节SP600125诱导巨核细胞系多倍体化 被引量：2

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作者 张路遥 王丽丽 +5 位作者 杨金刚 邢思宁 赵松 于颖 谢晓冬 马东初 《生物技术通讯》 CAS 2017年第3期233-241,共9页

目的:探讨JNK抑制剂SP600125诱导巨核细胞白血病系多倍体化的调控机制。方法:用SP600125和3种抑制剂(PD184352、U0126和LY294002)处理Dami和CMK细胞,用点突变技术对核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)C端自抑制假底物结构域和疏水基序突变构建的S... 目的:探讨JNK抑制剂SP600125诱导巨核细胞白血病系多倍体化的调控机制。方法:用SP600125和3种抑制剂(PD184352、U0126和LY294002)处理Dami和CMK细胞,用点突变技术对核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)C端自抑制假底物结构域和疏水基序突变构建的S6K1质粒转染细胞,流式细胞术分析细胞的DNA倍性,Western印迹检测S6K1、MAPK和Akt蛋白的表达及磷酸化修饰位点的变化。结果:当单独使用3种抑制剂时,对Dami和CMK细胞的倍性无影响。当SP600125与3种抑制剂联合时,尽管PD184352下调了p44/42 MAPK在Thr202/Tyr204位点的磷酸化,但其并不抑制SP600125诱导的Dami和CMK细胞的多倍体化;相反,U0126抑制SP600125诱导的Dami和CMK细胞的多倍体化,但并不下调p44/42 MAPK的磷酸化;而LY294002增加Akt的磷酸化,并阻断SP600125诱导的Dami和CMK细胞的多倍体化。这3种抑制剂均在SP600125诱导的多倍体Dami和CMK细胞中部分抑制S6K1的Thr421/Ser424磷酸化,但并不增加S6K1的Thr389磷酸化。转染S6K1突变质粒的Dami细胞,并没有对SP600125诱导的多倍体化产生影响,同时,无论是模拟磷酸化或去磷酸化的Thr389突变均对SP600125诱导的多倍体化无影响,且未显现出与LY294002的协同作用。C端自抑制假底物结构域突变质粒(S6K1-D3E)可以进一步阻断SP600125诱导的已经被LY294002部分阻断的Dami细胞多倍体化。结论:S6K1的C端自抑制假底物结构域磷酸化与Akt去磷酸化协同调节SP600125诱导巨核细胞白血病系的多倍体化。 展开更多

关键词 核糖体蛋白S6激酶1(S6K1) AKT 巨核细胞 多倍体化

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自噬和衰老在放射诱导的多倍体宫颈癌细胞中的作用 被引量：2

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作者 孟繁杰 阎英 +4 位作者 熊婵 王丽丽 赵松 邢思宁 于卉影 《肿瘤预防与治疗》 2022年第6期493-499,共7页

目的:探讨自噬和衰老在放射诱导的多倍体宫颈癌细胞中的作用。方法:用7 Gy剂量的X射线处理Hela细胞,在第3天、5天、7天、11天和19天观察细胞形态,流式细胞术观察倍性变化,β-半乳糖苷酶试剂盒检测细胞衰老情况,Western blot检测自噬和... 目的:探讨自噬和衰老在放射诱导的多倍体宫颈癌细胞中的作用。方法:用7 Gy剂量的X射线处理Hela细胞,在第3天、5天、7天、11天和19天观察细胞形态,流式细胞术观察倍性变化,β-半乳糖苷酶试剂盒检测细胞衰老情况,Western blot检测自噬和衰老相关蛋白表达。通过GEPIA工具对PLK1在宫颈癌组织的表达差异进行分析。结果:7 Gy处理后Hela细胞出现多倍体化并体积增大,细胞发生衰老和自噬。Day 3组、Day 5组、Day 7组和Day 11组多倍体细胞(>4N)比例高于对照组细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。Day 3组、Day 5组和Day 7组细胞发生衰老。Day 3组、Day 5组和Day 7组的DNA损伤修复蛋白PARP、DNA合成相关蛋白E2F-1、E2F-2表达下调;DNA损伤应答相关蛋白PLK1表达上调;自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I比值升高;自噬特异性底物蛋白P62表达下调。Day 19组P62表达下调。与正常组织相比,PLK1在宫颈癌组织中表达增高。结论:衰老和自噬现象可能有助于放射诱导的宫颈癌细胞形成并维持多倍体,并帮助损伤的多倍体细胞进行自我修复。 展开更多

关键词 衰老 多倍体 自噬 HELA细胞

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蛋白激酶A抑制剂H-89通过调节核糖体蛋白S6激酶1的磷酸化阻断SP600125诱导的CMK细胞多倍体化 被引量：1

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作者 赵松 杨金刚 +5 位作者 李长岭 邢思宁 于颖 刘硕 蒲菲菲 马东初 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1321-1326,共6页

目的研究核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)翻译后修饰在巨核细胞倍体化调控方面的作用。方法 c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89单独或联合处理CMK原始巨核细胞白血病细胞。碘化丙啶(PI)染色,结合流式细胞术检测... 目的研究核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)翻译后修饰在巨核细胞倍体化调控方面的作用。方法 c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89单独或联合处理CMK原始巨核细胞白血病细胞。碘化丙啶(PI)染色,结合流式细胞术检测DNA的相对量,从而进行DNA倍体分析;Western blot法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)下游靶分子S6K1表达和磷酸化修饰(Thr389和Thr421/Ser424)的变化。使用分子对接和激酶活性检测分析H-89与S6K1结合的关系以及对激酶活性的影响。结果 SP600125以时间和剂量依赖的方式诱导CMK细胞多倍体化,同时,上调S6K1的Thr421/Ser424磷酸化和下调Thr389的磷酸化。H-89不但部分阻断SP600125诱导CMK细胞多倍体化,而且下调S6K1的Thr421/Ser424磷酸化和上调Thr389磷酸化。分子对接和激酶活性分析发现H-89通过占据ATP结合位点,抑制S6K1活性。值得注意的是,H-89和SP600125均抑制PKA的活性,而且两者联合进一步抑制了PKA的活性,表明H-89阻断SP600125诱导CMK多倍体化与其对PKA的作用无关,而与S6K1磷酸化修饰状态的改变有关。结论 H-89通过调节S6K1磷酸化阻断SP600125诱导CMK细胞多倍体化。 展开更多

关键词 核糖体蛋白S6激酶1(S6K1) 巨核细胞 多倍体化

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放射治疗诱导的多倍体肿瘤细胞在三阴性乳腺癌复发中作用的研究 被引量：1

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作者 熊婵 阎英 +4 位作者 孟繁杰 赵松 刘硕 邢思宁 于卉影 《中国临床实用医学》 2022年第2期10-16,共7页

目的分析放射治疗诱导的多倍体肿瘤细胞在三阴性乳腺癌(TNBC)复发中的潜在作用。方法将培养的人TNBC细胞系MDA-MB-231分为3组。在6MV-X射线模式下对其中两组的MDA-MB-231细胞分别给予7 Gy、14 Gy的放射剂量, 继续孵育3 d后, 收集的细胞... 目的分析放射治疗诱导的多倍体肿瘤细胞在三阴性乳腺癌(TNBC)复发中的潜在作用。方法将培养的人TNBC细胞系MDA-MB-231分为3组。在6MV-X射线模式下对其中两组的MDA-MB-231细胞分别给予7 Gy、14 Gy的放射剂量, 继续孵育3 d后, 收集的细胞分别为7 Gy组和14 Gy组, 未经放射处理的细胞作为对照组。镜下观察细胞的形态变化, 流式细胞术鉴定细胞DNA倍性, 二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测细胞增殖, Annexin-V/碘化丙啶染液(PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡, Transwell试验检测细胞迁移及侵袭的能力。Western blot检测细胞性骨髓细胞瘤病病毒癌基因(C-myc)、大分子B淋巴细胞瘤蛋白(Bcl-xl)、髓细胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、存活素、β-连环素、波形蛋白的表达水平。结果 7 Gy组和14 Gy组细胞体积明显增大, 多倍体细胞亚群(DNA含量>4 N)比例均明显高于对照组, 且随着放射剂量的增加, 14 Gy组多倍体细胞亚群比例显著高于7 Gy组, 差异均具有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比, 14 Gy组多倍体MDA-MB-231细胞增殖受到抑制(P<0.05)。7 Gy组和14 Gy组多倍体MDA-MB-231细胞总凋亡及晚期凋亡均较对照组显著减少, 差异有统计学意义(P<0.05)。7 Gy组和14 Gy组多倍体MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力明显下降, 14 Gy组多倍体MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力弱于7 Gy组, 差异有统计学意义(P<0.05)。放射诱导的多倍体MDA-MB-231细胞Bcl-xl、Mcl-1和存活素的表达上调, C-myc、β-连环素和波形蛋白表达下调, 差异有统计学意义(P<0.05)。结论放射诱导的多倍体MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力降低, 但多倍体肿瘤细胞的凋亡率降低、抗凋亡相关蛋白表达上调。这些特性提示多倍体肿瘤细胞是三阴性乳腺癌放射治疗后复发的潜在危险因素。 展开更多

关键词 多倍体MDA-MB-231细胞 增殖 凋亡 迁移 侵袭

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间充质干细胞条件培养基增强肺癌多倍体肿瘤巨细胞化学治疗药物敏感性的研究 被引量：1

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作者 王丽丽 邢思宁 +5 位作者 杨紫恩 欧阳明玥 赵松 刘硕 孙凌燕 于卉影 《中国临床实用医学》 2022年第2期17-22,共6页

目的探讨间充质干细胞条件培养基(MSCs-CM)对肺癌多倍体肿瘤巨细胞(PGCC)化学治疗药物敏感性的影响。方法使用1 μmol/L多西他赛处理A549细胞24 h(多西他赛A组), 撤除药物后继续在完全培养基中培养至第3天(多西他赛B组), 建立肺癌PGCC模... 目的探讨间充质干细胞条件培养基(MSCs-CM)对肺癌多倍体肿瘤巨细胞(PGCC)化学治疗药物敏感性的影响。方法使用1 μmol/L多西他赛处理A549细胞24 h(多西他赛A组), 撤除药物后继续在完全培养基中培养至第3天(多西他赛B组), 建立肺癌PGCC模型, 使用MSCs-CM培养PGCC 48 h(PGCC+MSCs-CM组), 以正常培养的A549细胞(A549组)或PGCC(PGCC组)作为对照, 流式细胞术检测细胞DNA含量, 细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测A549细胞和PGCC对不同浓度多西他赛和顺铂的敏感性以及MSCs-CM对PGCC耐药性的影响, Western blot法检测相关蛋白表达。结果多西他赛B组细胞体积明显增大, 细胞核呈多核状态, PGCC亚群(DNA含量>4 N)比例均明显高于DMSO组和多西他赛A组(P<0.05), 成功建立肺癌PGCC模型, 将多西他赛B组作为PGCC细胞。CCK-8检测结果显示, 多西他赛对A549细胞和PGCC的IC50值分别为(0.20±0.04)μmol/L和(11.15±2.47)μmol/L, 差异有统计学意义(P<0.05), 顺铂对A549细胞和PGCC的IC50值分别为(14.87±3.72)μmol/L和(30.03±4.59)μmol/L, 差异有统计学意义(P<0.05), PGCC对多西他赛和顺铂的耐药指数分别为55.75倍和2.02倍。与PGCC组相比, PGCC+MSCs-CM+多西他赛组吸光度值明显下降(P<0.05), 且明显低于PGCC+多西他赛组和PGCC+MSCs-CM组(P<0.05)。与PGCC组相比, PGCC+MSCs-CM+顺铂组吸光度值明显下降(P<0.05), 且明显低于PGCC+顺铂组和PGCC+MSCs-CM组(P<0.05)。Western blot检测结果显示, 与A549组相比, PGCC组自噬微管相关蛋白轻链3A/B(LC3A/B)-Ⅰ/LC3A/B-Ⅱ、B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)、多药耐药性相关蛋白1(MPR1)表达明显上调(P<0.05), 兔抗人选择性自噬接头蛋白1(SQSTM1/P62)、BCL-2相关X蛋白(BAX)表达明显下调(P<0.05);与PGCC组相比, PGCC+MSCs-CM组LC3A/B-Ⅰ/LC3A/B-Ⅱ、BCL-2、MRP1表达明显下调(P<0.05), SQSTM1/P62、BAX表达明显上调(P<0.05), 且MRP1表达水平显著低于A549组(P<0.05)。结论肺癌PGCC对化学治疗药物的耐药性 展开更多

关键词 间充质干细胞 肺癌 多倍体巨癌细胞 化学治疗药物敏感性

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间充质干细胞条件培养基对多西紫杉醇诱导多倍体肺癌细胞衰老表型的研究 被引量：1

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作者 赵松 王丽丽 +2 位作者 欧阳明玥 邢思宁 于卉影 《中国临床实用医学》 2022年第2期23-30,共8页

目的探讨间充质干细胞条件培养基对多西紫杉醇(Doc)诱导的多倍体肺癌细胞衰老表型的影响。方法人非小细胞肺癌1 299细胞株细胞分为3组, 常规组、Doc(24 h)组和Doc(24 h)+3 d组。常规组为二甲基亚砜处理细胞24 h;Doc(24 h)组为100 nmol/L... 目的探讨间充质干细胞条件培养基对多西紫杉醇(Doc)诱导的多倍体肺癌细胞衰老表型的影响。方法人非小细胞肺癌1 299细胞株细胞分为3组, 常规组、Doc(24 h)组和Doc(24 h)+3 d组。常规组为二甲基亚砜处理细胞24 h;Doc(24 h)组为100 nmol/L的Doc处理细胞24 h;Doc(24 h)+3 d组为100 nmol/L的Doc处理细胞24 h, 更换新鲜的含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基, 继续培养3 d。Doc(24 h)+3 d组细胞分为2组, Doc组和Doc+CM组。Doc组为含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养4 d;Doc+CM组为含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和hUC-MSC-CM(1∶1)的混合培养基中培养4 d。Hoechst 33342染色观察细胞核形态, 流式细胞术分析细胞DNA含量、线粒体膜电位及DNA损伤应答信号分子磷酸化组蛋白H2A.X(γ-H2A.X)的表达, 衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测β-半乳糖苷酶活性, 实时定量聚合酶链式反应(RTQ-PCR)检测衰老相关的炎性细胞因子白细胞介素6(IL-6)与白细胞介素8(IL-8)的信使核糖核酸(mRNA)表达水平。结果 Doc(24 h)组和Doc(24 h)+3 d组细胞核体积增大、DNA含量增加, 常规组、Doc(24 h)组和Doc(24 h)+3 d组多倍体细胞百分比分别为(12.27±3.29)%、(27.13±6.02)%和(43.60±4.26)%, Doc(24 h)组和Doc(24 h)+3 d组细胞百分比明显高于常规组, 差异有统计学意义(F=33.91, P=0.001)。常规组、Doc(24 h)组与Doc(24 h)+3 d组细胞密度分别为(8.18±0.54)×10^(4)/cm^(2)、(3.78±0.54)×10^(4)/cm^(2)及(0.75±0.08)×10^(4)/cm^(2), Doc(24 h)组与Doc(24 h)+3 d组细胞密度显著低于常规组, 差异有统计学意义(F=212.55, P=0.001)。常规组细胞β-半乳糖苷酶无活性, 细胞染色阴性, Doc(24 h)组与Doc(24 h)+3 d组中观察到有呈蓝色的阳性染色细胞, β-半乳糖苷酶活性增强。流式细胞术分析线粒体膜电位, 常规组、Doc组与Doc+CM组的JC-1单体百分比分别为(1.7±1.2)%、(48.2±12.9)%及(46.6±12.0)%, Doc组与Doc+CM组低电势细胞百分比明显高于常规组, 展开更多

关键词 间充质干细胞条件培养基 线粒体膜电位 DNA损伤应答 炎性细胞因子 多倍体肿瘤细胞

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多烯紫杉醇诱导的卵巢癌SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖、迁移和凋亡的特性研究 被引量：2

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作者 欧阳明玥 王丽丽 +2 位作者 赵松 邢思宁 于卉影 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第16期2759-2764,共6页

目的:探讨多烯紫杉醇(Docetaxel,Doc)诱导的卵巢癌SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖、迁移和凋亡的特性。方法:0.8μmol/L Doc处理SK-OV-3细胞16 h,更换为完全培养液继续培养细胞至第3天和第5天。免疫荧光染色法观察细胞形态和增殖,流式细... 目的:探讨多烯紫杉醇(Docetaxel,Doc)诱导的卵巢癌SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖、迁移和凋亡的特性。方法:0.8μmol/L Doc处理SK-OV-3细胞16 h,更换为完全培养液继续培养细胞至第3天和第5天。免疫荧光染色法观察细胞形态和增殖,流式细胞术检测细胞倍性、周期和凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果:Doc处理后SK-OV-3细胞体积变大,细胞核增多,细胞增殖能力降低。Doc(3 day)组和Doc(5 day)组多倍体细胞(>4 N)百分比高于对照组(P<0.01)。Doc诱导Doc(16 h)组发生细胞周期阻滞。Doc(5 day)组细胞迁移能力低于对照组(P<0.01)。Doc(3 day)组和Doc(5 day)组早期凋亡细胞百分比高于对照组(P<0.05)。Doc(16 h)组、Doc(3 day)组和Doc(5 day)组促凋亡蛋白表达逐渐上调,抗凋亡蛋白表达下调。结论:Doc诱导卵巢癌SK-OV-3细胞形成多倍体肿瘤巨细胞,SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖和迁移能力降低,早期凋亡增加,这为探索多倍体肿瘤巨细胞特性提供了研究基础。 展开更多

关键词 多烯紫杉醇 多倍体肿瘤巨细胞 SK-OV-3 凋亡

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对中国房地产企业税收筹划的探讨

19

作者 邢思宁 《经济视野》 2012年第11期232-232,234,共2页

从税负情况来看，我国的房地产行业税负较重，本文就对当前我国房地产企业的经营情况及涉及税种进行分析，然后从基本税种出发，对当前我国房地产企业税收筹划方法进行探讨。

关键词 房地产企业 税收筹划 税种 方法

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对中国房地产企业税收筹划的探讨

20

作者 邢思宁 《经济视野》 2013年第7期-,共2页

从税负情况来看,我国的房地产行业税负较重,本文就对当前我国房地产企业的经营情况及涉及税种进行分析,然后从基本税种出发,对当前我国房地产企业税收筹划方法进行探讨.

关键词 房地产企业 税收筹划 税种 方法

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