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超速离心法与QIAGEN膜亲和柱法提取前列腺癌细胞培养上清外泌体的方法学比较 被引量：6
1
作者 范维肖 刁艳君 +1 位作者 马越云 郝晓柯 《现代检验医学杂志》 CAS 2019年第3期6-9,共4页
目的对超速离心法与QIAGEN膜亲和柱法提取前列腺癌细胞上清外泌体优缺点进行比较,为外泌体相关基础实验研究及临床检测提供方法学参考。方法收集前列腺癌细胞上清分别用两种方法提取外泌体,进行电镜鉴定、BCA定量测定蛋白浓度、Western ... 目的对超速离心法与QIAGEN膜亲和柱法提取前列腺癌细胞上清外泌体优缺点进行比较,为外泌体相关基础实验研究及临床检测提供方法学参考。方法收集前列腺癌细胞上清分别用两种方法提取外泌体,进行电镜鉴定、BCA定量测定蛋白浓度、Western blot检测标志蛋白以及Zetaview颗粒粒径、浓度及电势分析,比较两种方法提取外泌体的优缺点。结果电镜下两种方法均可观察到具有膜结构的典型的类似于茶托状结构的外泌体,但膜亲和柱法提取外泌体背景中有类似蛋白聚合物等杂质的存在,超离背景纯净,每个视野下的外泌体数量要明显多于QIAGEN膜亲和柱法;Western blot测定标志蛋白,根据BCA定量同等上样量超速离心法可观察到明显的β-actin,ALIX,CD63以及EGFR条带,而QIAGEN膜亲和柱法仅可观察到β-actin,ALIX以及EGFR条带,但均较超速离心法条带弱;Zetaview粒径分析,超速离心法粒径分布峰值为116 nm,膜亲和柱法提取外泌体分布峰值为122 nm,均符合外泌体的粒径分布范围;电势分析两者均为负值,符合外泌体的电势分布;而颗粒数与蛋白浓度比值超速离心法提取外泌体要高于QIAGEN膜亲和柱法(t=13.47,P<0.01)。结论超速离心法与膜亲和柱法均可以从细胞上清中提取外泌体,超速离心法步骤繁琐,时间较长,但外泌体纯度高,杂质少,BCA蛋白定量与实际所含外泌体蛋白量基本一致;QIAGEN膜亲和柱法方法简单,可快速从细胞上清中提取到外泌体,但纯度不及超速离心法,BCA蛋白定量比实际所含外泌体蛋白量要高,超速离心法适用于外泌体的各方面研究,而QIAGEN膜亲和柱法由于有杂蛋白的污染,因此更适用于外泌体核酸分析相关研究。 展开更多
关键词 前列腺癌 外泌体 超速离心法 膜亲和柱法
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区域医学检验中心在提升基层医疗机构临床微生物检测水平中的作用 被引量：4
2
作者 范维肖 曾宪飞 +1 位作者 郝晓柯 徐修礼 《检验医学》 CAS 2022年第12期1122-1124,共3页
临床微生物学是诊治感染性疾病的关键学科,由于学科复杂性和医院感染控制专业技术人员缺乏,一直是基层医疗机构的短板。近年来,医疗卫生行政管理部门不断推动区域医学检验中心的建设,以此来推动分级诊疗,促进基层医疗机构检验水平的提高... 临床微生物学是诊治感染性疾病的关键学科,由于学科复杂性和医院感染控制专业技术人员缺乏,一直是基层医疗机构的短板。近年来,医疗卫生行政管理部门不断推动区域医学检验中心的建设,以此来推动分级诊疗,促进基层医疗机构检验水平的提高,提高检验同质化水平。区域医学检验中心可以集中优势资源建设强大的临床微生物检测中心,以支撑基层医疗机构的院内感染控制工作。文章对区域医学检验中心在提升基层医疗机构临床微生物检测水平的作用进行概述。 展开更多
关键词 区域医学检验中心 临床微生物学 感染防控
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前列腺癌LNCaP-AI+F细胞外泌体促进基质细胞WPMY-1功能活化 被引量：4
3
作者 范维肖 雷琳 +5 位作者 李蕊 刁艳君 常亮 杨柳 马越云 郝晓柯 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期293-298,共6页
目的:探讨前列腺癌外泌体对基质细胞WPMY-1迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:超速离心法提取前列腺癌LNCaP-AI+F细胞上清中的外泌体,电镜观察外泌体的典型形态结构,Zetaview检测外泌体的粒径分布,Wb鉴定外泌体标志蛋白及其他相... 目的:探讨前列腺癌外泌体对基质细胞WPMY-1迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:超速离心法提取前列腺癌LNCaP-AI+F细胞上清中的外泌体,电镜观察外泌体的典型形态结构,Zetaview检测外泌体的粒径分布,Wb鉴定外泌体标志蛋白及其他相关蛋白。将WPMY-1细胞与前列腺癌外泌体(40μg/ml)共孵育后,激光共聚焦显微镜观察WPMY-1细胞对PKH67标记的外泌体的摄取情况,Transwell实验检测WPMY-1细胞迁移和侵袭能力,qPCR检测IL-8、PDGFB和MMP9等三种肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)分子表达水平,Wb检测EGFR和ERK1/2蛋白磷酸化水平。结果:电镜下可观察到典型茶托状外泌体结构,外泌体粒径分布集中在100 nm左右,其标志蛋白CD63和ALIX的表达证实了所提取颗粒为外泌体。此外,外泌体还表达EGFR、HER2和SRC等三种与前列腺癌进展相关的蛋白。WPMY-1细胞与外泌体共孵育后,共聚焦显微镜下可看到该细胞摄取大量外泌体,明显促进WPMY-1细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.01);与对照组比较,外泌体(40μg/ml)处理后WPMY-1 IL-8、PDGFB及MMP9表达水平增高(P<0.05或P<0.01);且外泌体促进了WPMY-1细胞EGFR和ERK1/2的磷酸化(P<0.01)。结论:前列腺癌细胞可通过外泌体作用于基质细胞WPMY-1,使其高表达多种CAF相关分子,促进EGFR和ERK1/2的磷酸化,增强其迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 前列腺癌 LNCap-AI+F细胞 外泌体 迁移 侵袭 WPMY-1细胞 肿瘤相关成纤维细胞
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细胞外囊泡在肿瘤诊断中的应用 被引量：3
4
作者 刁艳君 范维肖 郝晓柯 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期255-259,共5页
细胞外囊泡(EV)具有分布广泛,内容丰富,全面参与调控重要的细胞生理活动等特点。作为肿瘤诊断的新技术,EV的天然优势包括保护其内容物,易于从各种体液中获取,有望真正无创以及高度组织源性等。为了适用于临床检测,诸多EV分离技术如微流... 细胞外囊泡(EV)具有分布广泛,内容丰富,全面参与调控重要的细胞生理活动等特点。作为肿瘤诊断的新技术,EV的天然优势包括保护其内容物,易于从各种体液中获取,有望真正无创以及高度组织源性等。为了适用于临床检测,诸多EV分离技术如微流控、免疫芯片、纳米流式、声学捕获等技术不断被开发。目前已有EV肿瘤诊断产品已走向临床,但是由于其检测方法和检测平台的差异,目前其临床应用仍然存在技术难点。随着临床证据的不断积累和适用于临床的诊断方法的持续完善,基于EV的液体活检最终能真正走入临床、应用于临床。 展开更多
关键词 细胞外囊泡 肿瘤诊断 分离技术
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细胞外囊泡DNA在肿瘤诊断中具有重要应用前景 被引量：1
5
作者 刁艳君 范维肖 +2 位作者 杨柳 刘家云 郝晓柯 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期367-371,共5页
细胞外囊泡(EV)作为一种新型的细胞间信号传导载体,几乎参与了肿瘤发生、发展、转移、耐药等各个环节。因此,EV已成为癌症诊断和抗癌治疗生物标志物的理想候选者和研究热点。但EV肿瘤标志物研究前期主要集中于RNA和蛋白质,少部分关注脂... 细胞外囊泡(EV)作为一种新型的细胞间信号传导载体,几乎参与了肿瘤发生、发展、转移、耐药等各个环节。因此,EV已成为癌症诊断和抗癌治疗生物标志物的理想候选者和研究热点。但EV肿瘤标志物研究前期主要集中于RNA和蛋白质,少部分关注脂质,其DNA成分的相关研究较少。近年来EV DNA的肿瘤诊断价值才逐渐受到关注。对EV DNA生物学特性以及功能的研究有望为肿瘤诊断提供新方向。 展开更多
关键词 细胞外囊泡 脱氧核糖核酸 生物学特性 肿瘤诊断
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从GC的角度看性能优化
6
作者 范维肖 《程序员》 2008年第10期106-108,共3页
本文揭示了一些基于.Net应用程序在Windows系统上进行性能调优与GC相关的内容。
关键词 性能优化 WINDOWS系统 GC 性能调优 应用程序 .NET
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