1株非洲猪瘟病毒自然变异毒株的鉴定 被引量：32

1

作者 张艳艳 张静远 +12 位作者 杨金金 杨金梅 韩桪 米立娟 张菲 齐宇 张守峰 王颖 周鑫韬 岳慧贤 王述超 陈腾 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期199-207,共9页

非洲猪瘟(ASF)于2018年传入我国后已流行了2年有余,我国非洲猪瘟病毒(ASFV)毒株未曾出现较大变异。最近,针对我国ASF疫情放缓以及感染猪出现的低死亡率现象,我们在ASFV生态学研究中,从主动监测的样品中分离到1株源自湖北某地的ASFV自然... 非洲猪瘟(ASF)于2018年传入我国后已流行了2年有余,我国非洲猪瘟病毒(ASFV)毒株未曾出现较大变异。最近,针对我国ASF疫情放缓以及感染猪出现的低死亡率现象,我们在ASFV生态学研究中,从主动监测的样品中分离到1株源自湖北某地的ASFV自然变异株。经基因组测序发现,其EP402R基因(CD2v)和上游相邻的EP153R基因(8CR)出现部分缺失,共计1252 bp,导致病毒血吸附特性丧失;在多处基因编码区和基因间隔区出现独有的碱基突变、缺失或插入,与国内已经发表的10个ASFV毒株完全不同,这些变化导致病毒蛋白氨基酸组成的改变和功能丧失;在基因组3′末端出现503 bp串联重复的核酸片段插入,该片段与国外毒株基因组末端部分序列有高达96%的同源性。该变异株不含任何已知标记基因,说明我国的ASFV已经出现了自然变异株,可能和目前呈现的亚急性型流行的ASF有关。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 自然变异株 亚急性型非洲猪瘟

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非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性 被引量：30

2

作者 张艳艳 陈腾 +35 位作者 张静远 齐宇 缪发明 薄宗义 王立冬 郭晓宇 周鑫韬 杨金梅 王晓虎 高玉龙 汪春雨 鲍晨沂 米立娟 孙雪霏 冯娜 杨金金 王承宇 万忠海 李记平 孟轲音 田多 李楠 王述超 王颖 张菲 张锦霞 蒋依倩 刘晔 张守峰 张中洋 钱莺娟 朱鸿飞 高玉伟 陈鸿军 李金祥 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1421-1427,共7页

以我国首例非洲猪瘟疫情中分离的流行毒株(SY18)为亲本株构建了多基因家族(MGF)基因和CD2v基因缺失的非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗候选株,针对基因缺失株的安全性和免疫保护效果进行了特性研究。结果显示,MGF和CD2v双基因缺失株(ASFV SY18... 以我国首例非洲猪瘟疫情中分离的流行毒株(SY18)为亲本株构建了多基因家族(MGF)基因和CD2v基因缺失的非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗候选株,针对基因缺失株的安全性和免疫保护效果进行了特性研究。结果显示,MGF和CD2v双基因缺失株(ASFV SY18ΔMGF/ΔCD2v)对猪安全,接种猪能够100%抵抗亲本强毒株SY18株的攻击,对照猪全部死亡;说明该毒株可作为非洲猪瘟疫苗候选株。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 基因缺失 MGF基因 CD2v基因 疫苗候选株 安全性 免疫保护

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FAVN与RFFIT在动物和人狂犬病中和抗体检测中的比较 被引量：12

3

作者 张守峰 张菲 +3 位作者 刘晔 王颖 米立娟 扈荣良 《国际检验医学杂志》 CAS 2015年第9期1161-1163,共3页

目的比较荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和快速荧光灶抑制试验(RFFIT)两项技术用于动物和人血清狂犬病中和抗体检测的差异。方法以FAVN和RFFIT两种方法分别对60份动物及人血清进行狂犬病中和抗体的平行定量检测,应用配对定量资料的t检验对... 目的比较荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和快速荧光灶抑制试验(RFFIT)两项技术用于动物和人血清狂犬病中和抗体检测的差异。方法以FAVN和RFFIT两种方法分别对60份动物及人血清进行狂犬病中和抗体的平行定量检测,应用配对定量资料的t检验对所得数据进行统计学分析。结果以0.5IU/mL的国际推荐标准,对同一样品经FAVN和RFFIT两种方法测定的中和抗体效价进行定性判定,二者对全部60份样品的检测符合率为96.67%(58/60)。统计学分析显示,两种检测方法对总体样品及不同动物样品的定量检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 FAVN和RFFIT可通用于动物和人血清的狂犬病中和抗体检测。 展开更多

关键词 狂犬病 中和抗体 荧光抗体病毒中和试验 快速荧光灶抵制试验 比较

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小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达、纯化及其抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量：7

4

作者 王东方 刘晔 +2 位作者 米立娟 张守峰 扈荣良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第8期838-842,846,共6页

目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits of ruminants virus,PPRV)N蛋白,纯化后建立其抗体间接ELISA检测方法。方法人工合成PPRV N蛋白基因序列,并构建重组质粒pSumo-mut-N,转化至大肠埃希菌Arctic Express中,IPTG诱导表达,并对I... 目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits of ruminants virus,PPRV)N蛋白,纯化后建立其抗体间接ELISA检测方法。方法人工合成PPRV N蛋白基因序列,并构建重组质粒pSumo-mut-N,转化至大肠埃希菌Arctic Express中,IPTG诱导表达,并对IPTG浓度和诱导时间进行优化。表达的融合蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,以其作为包被抗原建立PPRV抗体间接ELISA检测方法,对临床样本进行检测。结果重组表达质粒pSumo-mut-N经双酶切和测序证明构建正确。N蛋白最佳诱导表达条件为0.5 mmol/L IPTG于11℃诱导10 h。表达的重组蛋白相对分子质量约71 900,纯化后纯度在80%以上,浓度可达120μg/ml,与PPRV阳性抗体具有良好的反应原性。基于N蛋白建立的PPRV抗体间接ELISA方法样品检测结果与已知血清之间的符合率为100%。结论原核表达并纯化了PPRV N蛋白,建立的基于N蛋白的PPRV抗体ELISA检测方法为PPRV抗体间接ELISA检测试剂盒的研制和应用奠定了基础,对于流行病学免疫监测及控制PPRV的流行具有重要意义。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 N蛋白 原核表达 抗体检测 酶联免疫吸附测定

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冀、京、吉犬群犬腺病毒中和抗体调查 被引量：6

5

作者 钱方 张守峰 +6 位作者 王述超 刘晔 赵敬慧 米立娟 张菲 王颖 扈荣良 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期155-157,共3页

目的为表达狂犬病病毒糖蛋白的犬2型腺病毒(CAV-2)重组狂犬病口服疫苗的投放工作提供流行病学依据。方法通过病毒中和试验对随机采自河北省,北京市,吉林省等地的387份犬血清进行犬腺病毒中和抗体检测,以确定犬群腺病毒感染率。结果河北... 目的为表达狂犬病病毒糖蛋白的犬2型腺病毒(CAV-2)重组狂犬病口服疫苗的投放工作提供流行病学依据。方法通过病毒中和试验对随机采自河北省,北京市,吉林省等地的387份犬血清进行犬腺病毒中和抗体检测,以确定犬群腺病毒感染率。结果河北、吉林农村流浪犬或家养犬腺病毒中和抗体阳性率较低,阳性率为16%(30/192),而北京市犬腺病毒中和抗体阳性率高达69%(135/195),说明城乡犬只犬腺病毒中和抗体存在明显差异。结论农村流浪犬或家养犬腺病毒中和抗体阳性率较低,适用于CAV-2及其重组疫苗首次免疫、尤其是口服免疫。 展开更多

关键词 狂犬病 犬腺病毒 中和抗体 口服免疫

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7例激光心肌血管重建术的护理配合 被引量：6

6

作者 郑惠俊 宋玲 米立娟 《中华护理杂志》 CSCD 北大核心 1998年第1期9-11,共3页

自１９９７年７月３～５日，为７例晚期重症冠心病患者施行了激光心肌血管重建术获得成功。重点报告手术室护士对病人的心理护理、术前准备、术中配合，并根据本组病例的特点，阐述了给予病人情感支持及医护密切配合的重要性，介绍了激... 自１９９７年７月３～５日，为７例晚期重症冠心病患者施行了激光心肌血管重建术获得成功。重点报告手术室护士对病人的心理护理、术前准备、术中配合，并根据本组病例的特点，阐述了给予病人情感支持及医护密切配合的重要性，介绍了激光心肌血管重建术的发展前景，提出护理人员的工作目标。 展开更多

关键词 冠心病 护理 心肌血管重建 激光疗法

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我国蓝思白2号猪抗非洲猪瘟特性鉴定 被引量：7

7

作者 陈腾 陈其美 +21 位作者 葛蕾 刘泽云 周鑫韬 齐宇 缪发明 吴添文 王龙 杨金金 高玉伟 杨金梅 岳慧贤 王立冬 韩桪 温兴钰 王洋 米立娟 蒋依倩 张守峰 李奎 蔡雪辉 葛长利 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期665-672,共8页

选取山东蓝思种业股份有限公司选育并初步认定的"非洲猪瘟抗性猪"蓝思白2号(LS-2)猪,通过实验室非洲猪瘟病毒(ASFV)强毒攻击试验,分析其抗感染应答特征。结果表明,LS-2猪对口服感染106.0TCID50ASFV SY18株具有明显抗性:6头LS-... 选取山东蓝思种业股份有限公司选育并初步认定的"非洲猪瘟抗性猪"蓝思白2号(LS-2)猪,通过实验室非洲猪瘟病毒(ASFV)强毒攻击试验,分析其抗感染应答特征。结果表明,LS-2猪对口服感染106.0TCID50ASFV SY18株具有明显抗性:6头LS-2猪中5头健活,仅在血液中出现间歇、短暂和低水平的病毒血症,并呈现较低程度的发热,随后恢复正常,从12 d开始出现针对病毒结构蛋白p54抗体,之后抗体水平持续升高;1头延迟发病死亡。而普通家猪于感染后3 d开始出现持续发热症状和病毒血症,10 d内全部死亡,期间p54抗体水平一直处于阴性或极低水平。抗性猪和普通家猪炎性因子的检测结果显示,主要抗炎因子如TGF-β2在LS-2抗性猪未感染前处于较低水平,感染后表现轻微(约1.5~2.0倍)升高,而在普通家猪未感染前处于高水平,感染后则表现为显著下降;在感染后6 d(潜伏后期),抗性猪主要促炎因子TNF-α出现轻微(约1.5~2.0倍)升高,而普通家猪则呈现数十至数百倍的显著增高。至试验结束时,LS-2猪临床表现正常,剖检未见内脏器官外观异常,实时PCR于肺、心、骨髓、胸腺等可检出ASFV核酸,但病毒分离结果呈阴性。组织切片染色显示,LS-2猪脾脏和肾脏结构正常,仅肺脏中肺泡呈现轻微融合、扩张。以上结果表明,和普通家猪相比,LS-2猪对ASFV人工感染具有明显抗性,该类型猪具有重大推广意义。 展开更多

关键词 蓝思白2号猪 非洲猪瘟 抗性 鉴定 p54抗体

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狂犬病病毒BD-06株基质蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备 被引量：5

8

作者 赵雪超 张学炜 +3 位作者 张守峰 刘晔 米立娟 扈荣良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期36-39,共4页

本研究旨在获得抗狂犬病病毒M蛋白的多克隆抗体,为进一步研究M蛋白功能提供材料。本试验以狂犬病病毒BD06毒株为模板克隆M基因序列,将其克隆至原核表达载体pET28a;经酶切和测序鉴定,M蛋白基因序列已正确插入表达载体pET28a;以表达载体pE... 本研究旨在获得抗狂犬病病毒M蛋白的多克隆抗体,为进一步研究M蛋白功能提供材料。本试验以狂犬病病毒BD06毒株为模板克隆M基因序列,将其克隆至原核表达载体pET28a;经酶切和测序鉴定,M蛋白基因序列已正确插入表达载体pET28a;以表达载体pET28a-M转化E.coli Rosetta株,并以0.5mmol/L IPTG诱导,结果表达出27ku左右的M蛋白;将诱导表达的蛋白质回收纯化,以纯化的M蛋白多次免疫兔子制备多克隆抗体;Western blotting分析和间接免疫荧光分析结果表明,制得的抗体与病毒能够反应,运用制得的多克隆抗体定位了基质蛋白在感染狂犬病病毒的BHK-21细胞中的位置。结果表明成功制得了抗狂犬病病毒M蛋白的多克隆抗体,为研究狂犬病病毒M蛋白功能奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 M蛋白 原核表达 多克隆抗体

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猪繁殖与呼吸综合征病毒直接免疫荧光检测方法的建立 被引量：4

9

作者 米立娟 吕宗吉 +4 位作者 马春全 顾万军 张守峰 刘晔 扈荣良 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第1期42-47,共6页

为了建立一种快速、准确的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)直接免疫荧光检测方法,对前期制备的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒核蛋白单克隆抗体进行亲和层析法纯化,经异硫氰酸荧光素标记... 为了建立一种快速、准确的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)直接免疫荧光检测方法,对前期制备的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒核蛋白单克隆抗体进行亲和层析法纯化,经异硫氰酸荧光素标记;通过对荧光染色的固定试剂、固定时间、染色时间和荧光抗体工作浓度的测定,确定荧光抗体染色法在PRRSV感染细胞和病料中的最佳工作条件。利用荧光抗体染色法对本实验室收集的62份病料进行检测,同时以RT-PCR进行验证,确定荧光染色法的检测符合率。结果显示,FITC标记的荧光抗体检测细胞培养物最佳工作条件:80%丙酮4℃固定20 min,荧光抗体按1:400稀释,感作时间为1 h;检测组织病料最佳工作条件:病料组织进行涂片后,用80%丙酮4℃固定30 min,荧光抗体按1:200稀释,感作时间为2 h;病料组织荧光检测与RT-PCR的检测一致率为74.2%。本研究建立的快速、准确的猪繁殖与呼吸综合征病毒直接免疫荧光检测方法为今后该疾病诊断奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 单克隆抗体 免疫荧光 检测

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狂犬病抗血清在小鼠体内抗感染保护效果评价 被引量：1

10

作者 张静远 陈腾 +4 位作者 刘晔 米立娟 张菲 张守峰 扈荣良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第5期486-489,共4页

目的探讨被动免疫的狂犬病抗血清和免疫球蛋白(Ig G)对小鼠的攻毒保护作用及其可能的作用机制。方法单独使用Ig G,按照125、250、1 000 IU/kg体重的剂量,分别在攻击致死剂量的强毒前后注射平均体重(20±1)g的昆明小鼠,观察14 d(脑... 目的探讨被动免疫的狂犬病抗血清和免疫球蛋白(Ig G)对小鼠的攻毒保护作用及其可能的作用机制。方法单独使用Ig G,按照125、250、1 000 IU/kg体重的剂量,分别在攻击致死剂量的强毒前后注射平均体重(20±1)g的昆明小鼠,观察14 d(脑内攻毒)或28 d(外周攻毒)后,记录小鼠发病及死亡情况,计算存活率。同时以类似的方法使用不同效价的抗血清进行试验。结果在攻毒前先注射Ig G或抗血清的条件下,小鼠的存活率与被动免疫的Ig G剂量呈正比,当Ig G剂量达1 000 IU/kg时,小鼠可得到完全保护;在脑内攻毒后注射Ig G或抗血清的条件下,无论被动免疫的Ig G剂量高低,均不能提供任何保护;但在外周攻毒3 d后注射Ig G,高剂量的Ig G可提供部分保护。结论血脑屏障可能允许部分Ig G进入脑内,并在脑内病毒感染早期阻断病毒复制,但病毒在脑内开始复制后,给予任何剂量的Ig G均不能对病毒感染提供保护。 展开更多

关键词 狂犬病抗血清 剂量 病毒攻击 小鼠

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犬细小病毒VP2蛋白重组人5型腺病毒的构建 被引量：1

11

作者 杨洋 宫婷 +6 位作者 米立娟 赵敬慧 陈奇 钱方 刘晔 张守峰 扈荣良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第5期599-602,共4页

目的构建犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)VP2蛋白重组人5型腺病毒。方法将从CPV中PCR扩增的VP2基因克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA中,经酶切及测序鉴定,将构建正确的重组穿梭质粒pacAd5-cVP2与骨架质粒pacAd5 9.2-100经PacⅠ酶切线性... 目的构建犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)VP2蛋白重组人5型腺病毒。方法将从CPV中PCR扩增的VP2基因克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA中,经酶切及测序鉴定,将构建正确的重组穿梭质粒pacAd5-cVP2与骨架质粒pacAd5 9.2-100经PacⅠ酶切线性化,共转染293AD细胞,进行同源重组,包装出重组腺病毒rAd5v-cVP2,按Karber法计算重组腺病毒的病毒滴度(TCID50)。电镜下观察重组腺病毒的形态;RT-PCR及Western blot法检测CPV VP2基因mRNA的转录及蛋白的表达水平。结果重组穿梭质粒pacAd5-cVP2经酶切及测序证明构建正确;包装出的重组腺病毒rAd5v-cVP2的病毒滴度可稳定在108.25TCID50/ml;电镜下观察可见典型的腺病毒外型特征;重组腺病毒感染的293AD细胞可检测到VP2基因的转录和表达。结论已成功构建了CPV VP2蛋白重组人5型腺病毒。 展开更多

关键词 细小病毒 犬 VP2基因 腺病毒 人

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狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备

12

作者 米立娟 王永志 +2 位作者 刘晔 张守峰 扈荣良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期35-38,共4页

用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋... 用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blotting分析和直接免疫荧光检测结果显示,获得一株针对狂犬病病毒糖蛋白构象表位的单抗6F12和一株针对糖蛋白线性表位的单抗1B12。小鼠中和试验结果显示,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均具有狂犬病病毒中和活性。结果表明,获得了两株针对狂犬病病毒G蛋白不同抗原表位的中和活性单克隆抗体,为狂犬病病毒特性研究和检测奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 中和抗体 单克隆抗体

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12例心肌梗死后左室假性室壁瘤的手术配合

13

作者 王桂卿 刘志英 +1 位作者 米立娟 郭佳 《中华现代护理杂志》 2010年第12期1422-1424,共3页

目的总结12例心肌梗死后左室假性室壁瘤（left ventficular pseudo-aneurysms，LVPA）手术的配合及护理体会。方法本组分别通过对LVPA部位、形态、合并畸形的不同特点分别采用直接缝闭法、补片修补法、三明治夹层缝合法进行手术治疗，... 目的总结12例心肌梗死后左室假性室壁瘤（left ventficular pseudo-aneurysms，LVPA）手术的配合及护理体会。方法本组分别通过对LVPA部位、形态、合并畸形的不同特点分别采用直接缝闭法、补片修补法、三明治夹层缝合法进行手术治疗，在修补合并畸形的同时，进行冠状动脉搭桥术。结果通过术前细致的准备、术中密切的配合，12例手术均顺利完成，效果满意。结论体外循环手术需要参与手术人员的共同配合。因此，手术前手术护士应和医生、麻醉师做好沟通，以达到配合默契，器械护士要熟悉手术步骤，术中思想高度集中，密切注意手术的进程，传递器械力求稳、准、轻、快，尽可能缩短体外循环的时间，保证手术的顺利进行。 展开更多

关键词 心肌梗死 左室假性室壁瘤 术中护理

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椎管内麻醉下行心脏不停跳冠状动脉旁路移植术的护理配合

14

作者 王静 许宁 米立娟 《中华护理杂志》 CSCD 北大核心 2010年第11期1024-1025,共2页

总结了7例椎管内麻醉下行心脏不停跳冠状动脉旁路移植术的护理配合要点。术中积极配合,维持胸廓连续性,防止损伤膈神经分支等,避免一切可能增加患者呼吸阻力的行为,减少心肌应激性,增加心肌供血。7例手术均顺利完成,效果满意。

关键词 冠状动脉旁路移植术 非体外循环 麻醉 传导 手术中护理

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狂犬病病毒磷蛋白单抗的制备与应用

15

作者 米立娟 张守峰 +2 位作者 刘晔 王述超 扈荣良 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第1期25-29,共5页

以灭活的狂犬病病毒CVS株细胞毒免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA法和Western-blot筛选获得针对磷蛋白的单克隆抗体4株:1C9、4B10、2G12、4G5,其中1C9针对氨基端保守表位。以亲和层析法纯化1C9单抗腹水,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体。以... 以灭活的狂犬病病毒CVS株细胞毒免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA法和Western-blot筛选获得针对磷蛋白的单克隆抗体4株:1C9、4B10、2G12、4G5,其中1C9针对氨基端保守表位。以亲和层析法纯化1C9单抗腹水,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体。以1C9磷蛋白荧光抗体与本实验室研制的狂犬病核蛋白免疫荧光抗原检测试剂盒,对本实验室收集的501份疑似狂犬病鼬獾、蝙蝠、犬和黄鼬的脑组织样品进行直接免疫荧光平行检测。结果显示,两种检测手段对基因1型狂犬病毒的检出结果完全一致,而蝙蝠源Irkut病毒仅能以磷蛋白单抗1C9检出。本研究成功获得了与我国现有不同基因型狂犬病毒良好反应的抗狂犬病磷蛋白单抗,并应用于狂犬病的直接免疫荧光检测,为狂犬病诊断提供了敏感性和可靠性良好的诊断试剂。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 磷蛋白单克隆抗体 荧光抗体

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猪繁殖与呼吸综合征病毒核蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定 被引量：5

16

作者 米立娟 吕宗吉 +3 位作者 张守峰 刘晔 王永志 扈荣良 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期661-666,共6页

克隆了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CC-11株的N基因全序列,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化E.coliRosetta株后经0.5 mmol/L IPTG诱导,获得了高水平表达。对表达的N蛋白进行纯化,以50μgN蛋白免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取小鼠脾细... 克隆了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CC-11株的N基因全序列,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化E.coliRosetta株后经0.5 mmol/L IPTG诱导,获得了高水平表达。对表达的N蛋白进行纯化,以50μgN蛋白免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA筛选,获得9B12、7C2、7C6共3株稳定分泌抗PRRSV-N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,亚型鉴定结果分别为IgG2b、IgG1、IgG1亚型。通过Western blot分析和间接免疫荧光测定表明,3株单抗对PRRSV CC-11株、CH-1R和JXA1-R细胞毒以及4份临床疑似病料均发生特异性反应。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白 单克隆抗体

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