乙烯生物合成途径中的两个关键酶基因的研究进展 被引量：23

1

作者 王爱勤 王自章 +2 位作者 杨丽涛 韦宇拓 李杨瑞 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2004年第2期164-169,共6页

本文对植物激素乙烯生物合成途径中的两个关键酶基因即ACC合成酶基因(ACS)和ACC氧化酶基因(ACO)的克隆研究现状、表达及反馈调节等方面进行了评述。

关键词 乙烯 ACC合成酶 ACC氧化酶 基因克隆 反馈调节

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植物耐旱的分子基础及植物耐旱基因工程的研究进展 被引量：9

2

作者 张树珍 王自章 《生命科学研究》 CAS CSCD 2001年第z1期134-140,共7页

对植物耐旱的分子基础。

关键词 耐旱分子基础 干旱诱导基因 表达 抗旱基因工程

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草坪草狗牙根中抗逆基因BeDREB的克隆及功能鉴定 被引量：23

3

作者 谢永丽 王自章 +1 位作者 刘强 张淑平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期521-527,共7页

DREB(dehydrationresponsiveelementbindingprotein)蛋白是一类在植物中所特有的,能与DRE(dehydrationresponsiveelement)顺式作用元件特异性结合的转录因子,调控与干旱、高盐以及低温等逆境胁迫应答有关基因的表达.根据狗牙根近缘植物... DREB(dehydrationresponsiveelementbindingprotein)蛋白是一类在植物中所特有的,能与DRE(dehydrationresponsiveelement)顺式作用元件特异性结合的转录因子,调控与干旱、高盐以及低温等逆境胁迫应答有关基因的表达.根据狗牙根近缘植物的DREB转录因子的AP2EREBP保守结构域的基因序列,通过RTPCR和RACE的方法分别从冷诱导和盐诱导的狗牙根cDNA中扩增到了2个似DREB基因,分别命名为BeDREB1和BeDREB2,并已提交NCBIGenBank,其登录号分别为AY462117和AY462118.这两个基因的编码框均为753个碱基,编码251个氨基酸,具有DREB转录因子的典型特征.两种逆境胁迫下扩增的基因序列同源性很高,达到了97.8%.利用酵母单杂交真核转录激活的方法进行了功能鉴定,证明BeDREB1和BeDREB2蛋白均可以与DRE顺式作用元件结合,激活下游报告基因HIS3的表达.RTPCR结果显示,BeDREB1基因受冷胁迫诱导表达,而BeDREB2受盐胁迫的诱导表达,且随着诱导时间的不同,表达量也在发生变化.上述结果表明,从狗牙根中克隆到的BeDREB1和BeDREB2基因属于DREB转录因子家族的新成员,在狗牙根中分别与冷胁迫和盐胁迫的信号转导有关. 展开更多

关键词 狗牙根 BeDREB转录因子 DRE元件 分子克隆 转录激活

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甘蔗ACC氧化酶基因片段的克隆与序列分析 被引量：13

4

作者 王自章 李杨瑞 +2 位作者 张树珍 林俊芳 郭丽琼 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期62-69,共8页

1 -氨基环丙烷 - 1-羧酸 (ACC)氧化酶是植物乙烯合成的一个关键酶 ,乙烯作为一种内源激素 ,对植物生长、老熟过程有多方面的调节作用。根据报道的各种植物ACC氧化酶氨基酸序列上前后两个保守区设计两个简并引物 ,以甘蔗总DNA为模板 ,通... 1 -氨基环丙烷 - 1-羧酸 (ACC)氧化酶是植物乙烯合成的一个关键酶 ,乙烯作为一种内源激素 ,对植物生长、老熟过程有多方面的调节作用。根据报道的各种植物ACC氧化酶氨基酸序列上前后两个保守区设计两个简并引物 ,以甘蔗总DNA为模板 ,通过PCR扩增到一个 940bp的基因片段。将片段序列在NCBI的BLAST软件上进行同源性搜寻 ,显示的 63个序列全部是ACC氧化酶基因 ,因而认为克隆到的片段就是甘蔗ACC氧化酶基因的一个成员。经对不同植物来源的ACC氧化酶基因家族进行比较分析 ,去除一个 10 3bp的“内含子”后 ,推导的氨基酸序列为 2 79个残基 ,占推测全长氨基酸残基总数的 86%左右。经同源性分析 ,序列与毛竹和水稻ACC氧化酶的同源率达到 86%。系统进化分析表明 ,该序列最先与水稻、其次和香蕉的ACC氧化酶聚类 ,然后再与双子叶植物的ACC氧化酶聚类 ,符合按形态特征分类的血缘关系。基因的获得对下一步了解乙烯的合成表达与甘蔗生长。 展开更多

关键词 甘蔗 ACC氧化酶基因片段 克隆 序列分析

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T-DNA转移研究进展 被引量：6

5

作者 王自章 张树珍 李杨瑞 《生命科学研究》 CAS CSCD 2001年第z1期120-124,共5页

植物遗传转化技术近年在农作物性状改良、植物生物反应器利用以及基因功能鉴定等方面得到了广泛的应用 .T -DNA转移是植物细胞农杆菌介导遗传转化整合和表达外源基因的基础 .农杆菌Ti质粒vir基因编码蛋白、农杆菌一些染色体基因编码蛋... 植物遗传转化技术近年在农作物性状改良、植物生物反应器利用以及基因功能鉴定等方面得到了广泛的应用 .T -DNA转移是植物细胞农杆菌介导遗传转化整合和表达外源基因的基础 .农杆菌Ti质粒vir基因编码蛋白、农杆菌一些染色体基因编码蛋白及植物细胞一些基因编码蛋白或因子均参与T DNA转移 .转移过程包括农杆菌对植物细胞的识别、附着 ,细菌对植物信号物质的感受 ,细菌vir基因的诱导表达 ,T复合体的形成 ,跨膜运输 ,进核运输和整合等一序列过程 .植物细胞因子与农杆菌T DNA转移相关蛋白的相互作用最近被认为在T 展开更多

关键词 T-DNA转移 农杆菌 宿主植物因子

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甘蔗乙烯合成酶基因家族三个成员的克隆与序列分析 被引量：9

6

作者 王爱勤 杨丽涛 +3 位作者 王自章 韦宇拓 何龙飞 李杨瑞 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期485-492,共8页

ACC(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid)合成酶是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。根据已克隆的植物ACS(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacidsynthase)基因同源序列,设计简并引物,以甘蔗叶片总DNA为模板,通过PCR扩增,得到3... ACC(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid)合成酶是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。根据已克隆的植物ACS(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacidsynthase)基因同源序列,设计简并引物,以甘蔗叶片总DNA为模板,通过PCR扩增,得到3条特异性强的扩增片段:Sc-ACS1为1041bp、Sc-ACS2为1345bp和Sc-ACS3为1707bp。将序列在GenBank核酸数据库进行同源性搜索,结果表明,3个片段均为ACS基因,推导编码的蛋白质序列分别包含326、242和310个氨基酸。其中,Sc-ACS1和Sc-ACS3同源性最高,核苷酸序列和蛋白质氨基酸序列分别有98%和96%同源,与禾本科植物玉米ZmACS6、水稻OS-ACS2、毛竹等ACS基因家族也有很高的同源性,核苷酸序列同源性为88%-98%,蛋白质氨基酸序列同源性为73%-81%。甘蔗Sc-ACS2与水稻OS-ACS5在核苷酸和氨基酸序列上分别有91%和79%同源性,但与甘蔗Sc-ACS1和Sc-ACS3基因成员之间,氨基酸同源性分别只有45%和49%。系统进化分析表明,Sc-ACS1和Sc-ACS3基因与玉米ZmACS6基因亲缘关系最近,而Sc-ACS2基因与水稻OS-ACS5基因亲缘关系最近。Southern杂交表明三基因在基因组中确实存在而且是多拷贝基因。三个片段已在GenBank数据库中注册,注册号分别为AY620985、AY620986和AY788919。 展开更多

关键词 甘蔗 ACC合成酶 基因家族 克隆

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甘蔗ACC氧化酶全长cDNA的克隆及序列分析 被引量：4

7

作者 王爱勤 杨丽涛 +3 位作者 王自章 韦宇拓 何龙飞 李杨瑞 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期194-199,共6页

ACC氧化酶是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。根据报道的植物ACC氧化酶基因序列设计特异引物，从甘蔗cDNA文库中克隆到-ACC氧化酶基因片段，命名为GZ-AC0，该基因长792bp，与甘蔗基因组文库中克隆的ACO基因片段仅18个碱基之差。根... ACC氧化酶是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。根据报道的植物ACC氧化酶基因序列设计特异引物，从甘蔗cDNA文库中克隆到-ACC氧化酶基因片段，命名为GZ-AC0，该基因长792bp，与甘蔗基因组文库中克隆的ACO基因片段仅18个碱基之差。根据该cDNA片段序列，设计两对末端扩增的特异引物，利用RACE-PCR技术，获得GZ-ACO片段的5’端和3’端序列。用VectorNTI7．0软件对三个序列进行拼接和分析，结果得到全长的甘蔗GZ-ACO氧化酶基因。GZ-ACO cDNA核苷酸序列长1307bp，具有一个972bp完整的读码框，启动子ATG位于126bp，终止子TAA位于1097bp，推导编码323个氨基酸。系统进化分析表明，GZ-ACO基因氨基酸序列与其它植物已报道的ACC氧化酶基因具有65％～86％的同源率，且与单子叶禾本科植物首先聚类，其次与单子叶芭蕉科、兰科植物聚类，最后与双子叶植物聚类，与植物形态的系统进化结果一致。该基因已在DDBJ／EMBL／GenBank基因数据库注册，注册号为AY521566。 展开更多

关键词 ACC氧化酶 CDNA克隆 甘蔗 基因

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花生中DREB类转录因子PNDREB1的克隆及鉴定 被引量：9

8

作者 张梅 刘炜 +1 位作者 毕玉平 王自章 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1973-1980,共8页

脱水响应元件结合因子(DREB)是一类对多个抗逆相关基因表达起调控作用的植物特有的转录因子,在植物抗逆能力综合改良方面具有重要作用。本研究通过筛选花生未成熟种子的cDNA文库,分离到一个DREB类基因——PNDREB1(FM955398)。该基因序... 脱水响应元件结合因子(DREB)是一类对多个抗逆相关基因表达起调控作用的植物特有的转录因子,在植物抗逆能力综合改良方面具有重要作用。本研究通过筛选花生未成熟种子的cDNA文库,分离到一个DREB类基因——PNDREB1(FM955398)。该基因序列长度为687bp,推测编码蛋白含有229个氨基酸残基,相对分子量为24.7kD,理论等电点为5.97,与其他物种中该类转录因子序列同源性较高。利用酵母单杂交系统,对花生PNDREB1与DRE元件的特异识别和结合能力及其C-末端转录激活活性进行检测,显示,转入含有该基因及阳性对照基因的载体均可使酵母菌株正常生长,且具有显色反应,而转入空载体的酵母菌株不能生长,证明基因PNDREB1中的AP2结构域具有和DRE元件特异性结合的能力;同时,只有转入含有该基因C-末端片段及阳性对照基因的载体可使酵母菌株正常生长,并具有显色反应,而转入空载体的酵母菌株不能生长,说明其C-末端片段具有转录激活活性,该基因为DREB类转录因子。基因表达模式分析显示,PNDREB1为组成型表达,且被低温强烈、迅速诱导表达,并对干旱胁迫也有一定程度的响应,但对高盐和ABA处理没有响应。 展开更多

关键词 花生 DREB类转录因子 PNDREB1 酵母单杂交 表达模式 低温 干旱

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DREB——一类应答植物非生物逆境胁迫的转录因子 被引量：7

9

作者 谢永丽 王自章 张淑平 《青海大学学报（自然科学版）》 2006年第2期54-58,共5页

文中对DREB类转录因子的结构特征、功能,靶元件的作用模式,基因的调控表达及最新研究进展进行了综述。

关键词 DREB转录因子 DRE元件 抗逆性

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环境胁迫和激素诱导甘蔗ACC合成酶基因家族三个成员的表达 被引量：7

10

作者 王爱勤 杨丽涛 +3 位作者 王自章 韦宇拓 何龙飞 李杨瑞 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期734-737,共4页

ACC合成酶(ACS)是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。在克隆到甘蔗ACC合成酶基因家族3个成员Sc-ACS1、Sc-ACS2和Sc-ACS3的基础上,分别以它们作为探针,检测了激素诱导和环境胁迫对甘蔗苗期该3成员表达的影响。结果表明,乙烯利诱导Sc-A... ACC合成酶(ACS)是高等植物乙烯生物合成途径中的限速酶。在克隆到甘蔗ACC合成酶基因家族3个成员Sc-ACS1、Sc-ACS2和Sc-ACS3的基础上,分别以它们作为探针,检测了激素诱导和环境胁迫对甘蔗苗期该3成员表达的影响。结果表明,乙烯利诱导Sc-ACS1在叶中表达,在根中不表达;Sc-ACS2在根、叶中表达;Sc-ACS3主要在根部表达,在叶中不表达。在甘蔗叶片中,Sc-ACS1对冷胁迫、暗培养和LiCl胁迫均有应答,并受植物生长激素IAA诱导而表达;Sc-ACS2无论是在生长激素诱导还是环境胁迫下,其mRNA均维持较低水平。 展开更多

关键词 甘蔗 ACC合成酶 基因家族 表达

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甘蔗基因组DNA提取方法的比较 被引量：5

11

作者 王爱勤 杨丽涛 +3 位作者 王自章 韦宇拓 何龙飞 李杨瑞 《中国糖料》 2004年第3期1-4,共4页

采用2×CTAB法和两种改进的SDS法分别从甘蔗不同的器官中提取DNA。通过对所提取的DNA浓度和纯度进行方差分析,并将所提取的DNA进行基因克隆和多态性扩增(RAPD),得到了较清晰的扩增图谱,克隆出目的基因片段,证明改进的SDSⅡ法是一种... 采用2×CTAB法和两种改进的SDS法分别从甘蔗不同的器官中提取DNA。通过对所提取的DNA浓度和纯度进行方差分析,并将所提取的DNA进行基因克隆和多态性扩增(RAPD),得到了较清晰的扩增图谱,克隆出目的基因片段,证明改进的SDSⅡ法是一种高质量去除多糖、色素和蛋白质等杂质的有效方法,所提取的DNA适合于甘蔗各分子生物学研究。 展开更多

关键词 甘蔗 CTAB SDS KAPD

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草坪草狗牙根中cyclinD基因片段的分离 被引量：2

12

作者 谢永丽 王自章 《青海大学学报（自然科学版）》 2006年第5期30-33,共4页

采用RT-PCR和RACE方法,从草坪草狗牙根中分离到cyclinD基因片段。该片段长1 268 bp,编码区768 bp,编码256个氨基酸残基。

关键词 狗牙根 细胞周期 基因克隆 CYCLIND

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大肠杆菌海藻糖磷酸合酶基因的克隆 被引量：1

13

作者 王自章 张树珍 李杨瑞 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2002年第2期98-100,共3页

根据报道的大肠杆菌 (Escherichia coli)海藻糖 6磷酸合酶基因 (ots A) ,设计引物 ,通过 PCR技术从大肠杆菌 XLI菌株的总 DNA中扩增到一个 1 .4kb的片段。经克隆、测序分析 ,该片段长 1 42 5 bp并含一完整的开放读框 (ORF)。在核苷酸水... 根据报道的大肠杆菌 (Escherichia coli)海藻糖 6磷酸合酶基因 (ots A) ,设计引物 ,通过 PCR技术从大肠杆菌 XLI菌株的总 DNA中扩增到一个 1 .4kb的片段。经克隆、测序分析 ,该片段长 1 42 5 bp并含一完整的开放读框 (ORF)。在核苷酸水平上 ,该 ORF与已报道的 ots A基因具有 99.86%的同源性。在氨基酸水平上 ,其推断性的编码产物蛋白与 Ots A具有 1 0 0 展开更多

关键词 大肠杆菌 海藻糖-6-磷酸合酶基因 克隆

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蔗田立体种养结构对甘蔗叶片光合色素的影响

14

作者 徐建云 周生茂 +4 位作者 韦善清 斑美玲 王自章 莫良玉 何华颖 《甘蔗糖业》 1998年第2期8-12,共5页

蔗田设计成甘蔗、大豆、塘角鱼立体种养结构对甘蔗（＋1）叶片光合色素含量有显著影响；叶绿素a和b、叶绿青a＋b和类胡萝卜素含量处理高于对照；花青素比对照低；立体种养结构能延长和保持叶绿素a在后期的作用，从而提高了甘蔗光合强度... 蔗田设计成甘蔗、大豆、塘角鱼立体种养结构对甘蔗（＋1）叶片光合色素含量有显著影响；叶绿素a和b、叶绿青a＋b和类胡萝卜素含量处理高于对照；花青素比对照低；立体种养结构能延长和保持叶绿素a在后期的作用，从而提高了甘蔗光合强度，增加了产量和糖分。 展开更多

关键词 甘蔗 立体种养结构 光合色素 叶片

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甘蔗根癌农杆菌介导转化海藻糖合酶基因获得抗渗透胁迫能力增强植株 被引量：42

15

作者 王自章 张树珍 +1 位作者 杨本鹏 李杨瑞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-146,共7页

由双拷贝CaMV35S启动子驱动担子菌灰树花 (Grifolafrondosa)的海藻糖合酶基因 (TSase)构建植物表达载体 pBBBT ,通过三亲交配法将 pBBBT导入根癌农杆菌EHA10 5菌株 ,经根癌农杆菌介导转化甘蔗 (Saccha rumhybrid)栽培品种 ,以增强甘蔗... 由双拷贝CaMV35S启动子驱动担子菌灰树花 (Grifolafrondosa)的海藻糖合酶基因 (TSase)构建植物表达载体 pBBBT ,通过三亲交配法将 pBBBT导入根癌农杆菌EHA10 5菌株 ,经根癌农杆菌介导转化甘蔗 (Saccha rumhybrid)栽培品种 ,以增强甘蔗的抗旱能力。结果表明 ,甘蔗胚性愈伤组织对EHA10 5菌株敏感 ,甘蔗外植体开始大量形成胚性愈伤组织时是感染的适宜时期 ,用膦丝菌素 (PPT)筛选 ,抗性植株发生频率平均为 4 .5 %。经PCR及dot Southern检测证明 ,TSase已经整合到甘蔗基因组中。部分转化植株根叶畸形、株型异常、生长缓慢。移栽到含PEG80 0 0 17.4 % (w/v)的MS培养基后 。 展开更多

关键词 甘蔗 根癌 农杆菌介导转化 海藻糖合酶基因 抗渗透胁迫能力 增强植株

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