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非洲猪瘟病毒免疫学及疫苗研究进展 被引量:39
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作者 张洪亮 金铭 +4 位作者 赵越 王凤雪 马晶 永俊 单虎 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期533-541,共9页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种动物烈性传染病,发病率和死亡率高,是世界动物卫生组织(OIE)规定的强制报告疫病,我国将其列为一类动物疫病。由于缺乏临床可用的疫苗等... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种动物烈性传染病,发病率和死亡率高,是世界动物卫生组织(OIE)规定的强制报告疫病,我国将其列为一类动物疫病。由于缺乏临床可用的疫苗等预防手段,该病在非洲、东欧、北高加索、俄罗斯等范围内蔓延,并于2018年8月传入我国,对我国养猪业造成了重大经济损失。本文总结了ASFV免疫学和疫苗研究的现状,阐述了其病毒结构与蛋白功能、感染与免疫机制,分别介绍了ASFV灭活疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗的研究进展,以期对非洲猪瘟疫苗的开发起到借鉴作用。 展开更多
关键词 非洲猪瘟(ASF) 非洲猪瘟病毒(ASFV) 免疫学 疫苗
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猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染对仔猪致病性的评估 被引量:24
2
作者 永俊 吴国军 +4 位作者 蔡雪辉 刘永刚 王洪峰 姜成刚 尹训南 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期336-340,393,共6页
本研究通过猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)强毒共感染3周龄健康仔猪来评价其致病性。试验动物随机分为3组,空白对照组(n=3头),PRRSV... 本研究通过猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)强毒共感染3周龄健康仔猪来评价其致病性。试验动物随机分为3组,空白对照组(n=3头),PRRSV单独感染组(n=3头),PCV2和PRRSV共感染组(n=6头),从而比较相互之间的差异。通过临床症状、病理学变化、病原学和血清学检查,对二者混合感染仔猪的致病性进行了研究。结果表明PCV2和PRRSV共同感染能引起仔猪断奶后多系统消耗性综合征,表现为淋巴组织肿大、出血,肉芽肿性炎症,坏死性肝炎,仔猪消瘦、生长缓慢等特征性病变;混合感染能加重PRRSV对仔猪引起的间质性肺炎的严重程度。混合感染可以出现支气管肺炎和明显的肝病变,淋巴结多呈界限明显的块状出血等典型病变。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征 混合感染 致病性
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猪繁殖-呼吸综合征活疫苗对仔猪的安全性试验 被引量:17
3
作者 王洪峰 蔡雪辉 +5 位作者 刘永刚 李艳华 柴文君 永俊 尹训南 褚桂芳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期341-343,346,共4页
本试验用猪繁殖-呼吸综合征(PRRS)活疫苗和国内分离的PRRS强毒CH-1a株接种PRRS阴性的断奶仔猪,分别在接种后的3、7、14d各剖杀1头,取各脏器分别做冰冻切片和病理切片观察。用间接免疫荧光法检测各脏器PRRS病毒的分布。结果表明,PRRS活... 本试验用猪繁殖-呼吸综合征(PRRS)活疫苗和国内分离的PRRS强毒CH-1a株接种PRRS阴性的断奶仔猪,分别在接种后的3、7、14d各剖杀1头,取各脏器分别做冰冻切片和病理切片观察。用间接免疫荧光法检测各脏器PRRS病毒的分布。结果表明,PRRS活疫苗在免疫初期,抗原主要分布在脾脏、淋巴结,其次是肾脏和肺脏,少见于肝脏和心脏,第14d时在脾、淋巴结和肾脏有一定量的抗原,而肺脏相比则数量很少,肝脏和心脏未检到PRRS病毒抗原的存在,表明接种PRRS活疫苗随着时间的推移抗原分布呈下降趋势。而强毒抗原分布以脾脏最多,依次是肾脏、肺脏、淋巴结、肝脏、心脏,接种后第14d仍能在各脏器检到PRRS病毒抗原。病理组织学检测结果表明,活疫苗产生以下颌淋巴结、脾脏增生为特征的免疫应答,组织损伤轻微,对肺的病变较少,且仔猪生长良好。强毒则引起以大面积的肺泡隔增宽为特点的间质性肺炎和微循环障碍的病理变化,淋巴小结、脾脏滤泡发生崩解与周围界限不清,个别淋巴细胞核浓缩,组织损伤严重。本试验表明弱毒疫苗对仔猪是安全的。 展开更多
关键词 猪繁殖-呼吸综合征 活疫苗 安全性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染的流行病学调查 被引量:17
4
作者 刘杏 王凤雪 +1 位作者 永俊 武华 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期456-459,共4页
为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)在我国猪场混合感染的发病情况,根据Gen Bank中PRRSV ORF5及PCV2 ORF1基因序列设计合成引物,建立了分别用于检测PRRSV、PCV2的RT-PCR及PCR方法,对2013—2015年采自吉林、辽宁... 为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)在我国猪场混合感染的发病情况,根据Gen Bank中PRRSV ORF5及PCV2 ORF1基因序列设计合成引物,建立了分别用于检测PRRSV、PCV2的RT-PCR及PCR方法,对2013—2015年采自吉林、辽宁、黑龙江、山西、山东、广东6省192份样品进行检测。结果发现:PRRSV感染率为22.9%,PCV2感染率为64.3%,28份样品为混合感染阳性,阳性率达14.58%。猪群中PRRSV和PCV2的感染比较普遍,混合感染率也较高,加重了疫病防控的难度。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒2型 流行病学调查 混合感染
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牛病毒性呼吸道疾病诊断技术研究进展 被引量:16
5
作者 李鹏 张淑琴 +1 位作者 永俊 高维凡 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第4期90-93,共4页
近些年来,我国牛呼吸道疾病病原不断增加,牛呼吸道疾病已经发展成为多种病原混合感染的牛呼吸道综合征,其中有多种病毒、细菌及支原体参与疾病的发生。论文讨论了牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎、牛副流感、牛呼吸道合胞体病等牛主要... 近些年来,我国牛呼吸道疾病病原不断增加,牛呼吸道疾病已经发展成为多种病原混合感染的牛呼吸道综合征,其中有多种病毒、细菌及支原体参与疾病的发生。论文讨论了牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎、牛副流感、牛呼吸道合胞体病等牛主要病毒性呼吸道疾病的实验室诊断技术。分别从单一传染病的病原学、血清学、分子生物学方面讨论主要的实验室诊断技术,又从多病原混合感染的方面介绍了当前主要的多重诊断技术,为牛呼吸道疾病的防控提供参考。 展开更多
关键词 病毒 牛呼吸道疾病 诊断技术
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJ株的分离与鉴定 被引量:14
6
作者 冷雪 永俊 +2 位作者 齐巧玲 李真光 武华 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期862-865,共4页
从某猪场发生高热死亡的仔猪病料中分离到1株病毒,该病毒在Marc-145细胞上增殖致细胞病变。经RT—PCR检测证明该分离株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。该毒株回归易感动物可产生明显的临床症状,并引起死亡,将其命名为PRRS... 从某猪场发生高热死亡的仔猪病料中分离到1株病毒,该病毒在Marc-145细胞上增殖致细胞病变。经RT—PCR检测证明该分离株为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。该毒株回归易感动物可产生明显的临床症状,并引起死亡,将其命名为PRRSV TJ毒株。对其Nsp2序列进行扩增测序,结果表明:与美洲标准毒株VR-2332相比,TJ株Nsp2序列缺失第481位和第532~560位氨基酸,二者核苷酸同源性为83.7%,其编码的氨基酸同源性为77.9%。本试验结果表明,该分离株为发生了变异的PRILSV,对猪具有高致病性。 展开更多
关键词 PRRS 分离 鉴定 致病性
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NM1株全基因测序及致病性分析 被引量:14
7
作者 冷雪 李真光 +3 位作者 王凤雪 永俊 夏铭崎 武华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1752-1757,1762,共7页
从内蒙古自治区暴发猪"高热病"的猪场分离出1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenicporcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV),命名为NMl株。根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病... 从内蒙古自治区暴发猪"高热病"的猪场分离出1株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenicporcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV),命名为NMl株。根据GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全基因序列设计引物进行RT-PCR扩增和序列测定,结果表明HP-PRRSV NMl株基因组全长15 356 bp(包括PolyA尾)。分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株(VR-2332)和欧洲型标准株(LV)全基因核苷酸同源性分别为89.4%和61.9%,说明NMl属于美洲型毒株。与VR-2332相比,NMl株非结果蛋白(nsp2)第481位和第533~561位氨基酸存在缺失,该毒株属于PRRSV变异株。动物接种试验结果表明,该毒株对猪具有高致病性。 展开更多
关键词 HP—PRRSV 全基因组 非结构蛋白 缺失
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牛副流感病毒3型RT-LAMP检测方法的建立及应用 被引量:11
8
作者 师新川 永俊 +6 位作者 王凤雪 胡嘉欣 杨博超 王炜 宋妮 程世鹏 武华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第11期31-34,共4页
本试验根据GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)基因序列,利用在线软件Primer Explorer V4Software和Primer Premier 5.0,针对BPIV-3 NP基因序列的保守区设计并筛选了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP)引物,建立BPIV-3特异性... 本试验根据GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)基因序列,利用在线软件Primer Explorer V4Software和Primer Premier 5.0,针对BPIV-3 NP基因序列的保守区设计并筛选了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP)引物,建立BPIV-3特异性检测的RT-LAMP方法。在Bst DNA聚合酶作用下,63℃恒温反应1h即可完成扩增过程,扩增产物通过浑浊度比较、凝胶电泳和肉眼可视化进行判定。结果表明,该方法比RT-PCR敏感度更高,最低检出量可达0.069fg/μL。该方法可用于牛副流感病毒3型的实验室检测和临床初步诊断。 展开更多
关键词 牛副流感病毒3型 N基因 反转录-环介导等温扩增
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水貂肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定 被引量:10
9
作者 杨艳玲 陈峙峰 +1 位作者 王成福 永俊 《特产研究》 2012年第4期10-12,共3页
本研究从临床上水貂肺出血死亡的病例中分离到1株优势菌,通过细菌常规鉴定方法对该菌进行了形态特征、生化特性和16SrRNA测序等试验,并对该菌株进行了耐药分析和人工感染试验。结果显示,该菌是1株肺炎克雷伯氏菌,具有高度的耐药性,并且... 本研究从临床上水貂肺出血死亡的病例中分离到1株优势菌,通过细菌常规鉴定方法对该菌进行了形态特征、生化特性和16SrRNA测序等试验,并对该菌株进行了耐药分析和人工感染试验。结果显示,该菌是1株肺炎克雷伯氏菌,具有高度的耐药性,并且能致小鼠死亡。由此推断,该菌是致水貂死亡的主要致病菌。 展开更多
关键词 水貂 肺炎克雷伯氏菌 分离鉴定
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水貂绿脓杆菌分离鉴定及药物敏感性分析 被引量:10
10
作者 孙娜 陈强 +3 位作者 永俊 杨勇 汪孟航 程世鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2788-2793,共6页
本试验旨在通过对山东某水貂养殖场送检的5只具有典型出血性肺炎症状的病死水貂进行细菌分离鉴定及耐药情况分析,为临床用药和治疗提供依据和参考。通过细菌分离纯化、生化鉴定和PCR方法对分离菌株进行鉴定,采用K-B药敏法检测分离菌株... 本试验旨在通过对山东某水貂养殖场送检的5只具有典型出血性肺炎症状的病死水貂进行细菌分离鉴定及耐药情况分析,为临床用药和治疗提供依据和参考。通过细菌分离纯化、生化鉴定和PCR方法对分离菌株进行鉴定,采用K-B药敏法检测分离菌株对常用药物的敏感性,并通过PCR方法检测分离菌株耐药基因的携带情况。经鉴定共分离得到5株绿脓杆菌,药物敏感性试验结果显示,5株绿脓杆菌对氟喹诺酮类药物、第3代和第4代头孢类药物较敏感,对氨基糖苷类、四环素、氯霉素、青霉素类、第1代和第2代头孢类药物耐药。耐药基因检测结果显示,5株绿脓杆菌共检测出6种耐药基因aadA1、aac(3’)-Ⅱc、aac(6’)-Ⅰb、tetA、tetK、cat2。且每株分离菌均检测出3种以上耐药基因。结果表明,分离的5株菌株均为绿脓杆菌,主要引起水貂出血性肺炎。分离菌株耐药性较严重,主要表现为多重耐药现象。菌株携带的耐药基因呈多样性,可引起菌株对相应药物产生耐药现象。 展开更多
关键词 水貂 绿脓杆菌 出血性肺炎 药物敏感性
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犬瘟热病毒RT-LAMP检测方法的建立及初步应用 被引量:10
11
作者 胡嘉欣 永俊 +4 位作者 霍志云 师新川 杨博超 武华 高维凡 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期45-49,共5页
环介导等温基因扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种特异、灵敏、快速的检测方法。为提高犬瘟热病毒(CDV)检测效率、降低检测成本,针对犬瘟热病毒N基因保守区的8个位点设计了6条引物进行RT-LAMP一步法扩增。... 环介导等温基因扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种特异、灵敏、快速的检测方法。为提高犬瘟热病毒(CDV)检测效率、降低检测成本,针对犬瘟热病毒N基因保守区的8个位点设计了6条引物进行RT-LAMP一步法扩增。对反应体系及条件优化,检测特异性、敏感性,扩增产物通过凝胶电泳、显色反应和浑浊度比较进行判定。试验结果表明,该方法特异性强、敏感度高,操作简便、快速、便于观察,适用于门诊和现场检测。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 环介导等温基因扩增技术 N基因
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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染和复制机制及其毒力研究进展 被引量:9
12
作者 刘杏 王凤雪 永俊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期585-592,共8页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)能引起母猪繁殖障碍及仔猪和育成猪呼吸道症状。本文总结国内外猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染和复制机制研究进展,介绍了影响PRRSV毒力的因素... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)能引起母猪繁殖障碍及仔猪和育成猪呼吸道症状。本文总结国内外猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染和复制机制研究进展,介绍了影响PRRSV毒力的因素及这方面的研究进展,为疫苗研究提供新的方向。猪繁殖与呼吸综合征病毒感染和复制机制及其毒力的基础研究为控制和消灭猪繁殖与呼吸综合征提供参考。 展开更多
关键词 感染 复制 病毒毒力
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高致病性PRRSV TJ株和致弱毒TJM株Nsp2测序及结构分析 被引量:8
13
作者 王凤雪 永俊 +3 位作者 刘准 冷雪 李真光 武华 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期86-90,共5页
参照GenBank中PRRSV VR-2332株全序列设计特异性引物,扩增高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Por-cine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)TJ株和其致弱毒株TJM株非结构蛋白2(Nonstructure pro-tein 2,Nsp2)编码区,经过... 参照GenBank中PRRSV VR-2332株全序列设计特异性引物,扩增高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Por-cine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)TJ株和其致弱毒株TJM株非结构蛋白2(Nonstructure pro-tein 2,Nsp2)编码区,经过基因的扩增、连接、转化、筛选阳性克隆进行核苷酸测序.结果表明,PRRSV TJ株Nsp2长2 850 bp,TJM株Nsp2长2 490 bp.通过序列比较分析,发现Nsp2编码区序列保守性差,TJ株和TJM株Nsp2与VR-2332核苷酸序列的同源性分别为83.6%和82.9%,运用RNAdraw软件对Nsp2编码区RNA的2级结构预测分析表明,分离的高致病性强毒株TJ株和细胞致弱毒株TJM株与经典毒株VR-2332有较大不同,PRRSVNsp2的1级序列的变化导致RNA的2级结构发生构象变化,推测这可能是3个PRRSV毒株致病力不同的原因之一. 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非编码区 序列分析
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犬瘟热病毒感染机制及其诊断方法研究进展 被引量:8
14
作者 王西西 王凤雪 +1 位作者 程世鹏 永俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期757-763,共7页
本综述介绍了犬瘟热病毒的6种结构蛋白N、P、L、F、H和M蛋白在病毒入侵宿主和宿主细胞内繁殖的功能;简要描述了犬瘟热病毒入侵动物机体感染传播的机制,其中细胞受体SLAM和PVRL4解释病毒的趋向性;介绍了临床诊断、试验动物法、血清学方... 本综述介绍了犬瘟热病毒的6种结构蛋白N、P、L、F、H和M蛋白在病毒入侵宿主和宿主细胞内繁殖的功能;简要描述了犬瘟热病毒入侵动物机体感染传播的机制,其中细胞受体SLAM和PVRL4解释病毒的趋向性;介绍了临床诊断、试验动物法、血清学方法和核酸诊断等鉴别诊断犬瘟热的方法及其优缺点。通过系统了解犬瘟热病毒的感染途径及其诊断方法,有助于发现控制犬瘟热病毒传播的新方法。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 结构蛋白 感染机制 诊断
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狂犬病病毒糖蛋白生物学功能研究进展 被引量:7
15
作者 汪孟航 朱洪伟 +2 位作者 何民辉 永俊 程世鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3349-3355,共7页
狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)感染中枢神经系统引起的致死性人畜共患传染病。RABV糖蛋白存在于病毒表面,它既是病毒的主要保护性抗原,诱导体液免疫产生中和抗体和刺激T细胞产生细胞免疫,又是病毒与细胞受体结合的结构,在病... 狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)感染中枢神经系统引起的致死性人畜共患传染病。RABV糖蛋白存在于病毒表面,它既是病毒的主要保护性抗原,诱导体液免疫产生中和抗体和刺激T细胞产生细胞免疫,又是病毒与细胞受体结合的结构,在病毒致病性和嗜神经性中发挥重要作用,与病毒毒力直接相关。作者归纳总结国内外RABV糖蛋白结构与功能研究进展,并对糖蛋白中和抗体的检测与评价进行阐述。将为进一步揭示RABV糖蛋白生物学功能奠定基础,为糖蛋白中和抗体的诊断提供理论参考,为控制和消灭狂犬病做出相应贡献。 展开更多
关键词 狂犬病 糖蛋白 中和抗体
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基于CRISPR-Cas12a核酸检测研究进展
16
作者 刘晓婷 李鹏 +4 位作者 左柯铭 陈萌萌 王亚新 王凤雪 永俊 《动物医学进展》 北大核心 2024年第8期94-98,共5页
由病毒、细菌、真菌、寄生虫和其他病原微生物引起的疾病对人类健康构成极大威胁,如果能在疾病早期检测出来,就能够对传染性疾病起到关键的预防作用。近些年来,CRISPR-Cas系统在检测病原方面已被广泛应用,其中CRISPR-Cas12a弥补了Cas9... 由病毒、细菌、真菌、寄生虫和其他病原微生物引起的疾病对人类健康构成极大威胁,如果能在疾病早期检测出来,就能够对传染性疾病起到关键的预防作用。近些年来,CRISPR-Cas系统在检测病原方面已被广泛应用,其中CRISPR-Cas12a弥补了Cas9的不能多点编辑的缺陷和Cas12a靶向DNA的特性,成为了热门的核酸检测工具。论文综述了Cas12a与Cas9的不同之处、Cas12a的发现、CRISPR-Cas12a的信号检测平台以及目前使用的检测方法。 展开更多
关键词 CRISPR-Cas12a 核酸检测 病毒
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鸽圆环病毒Cap基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用
17
作者 韩晓语 杨俊杰 +4 位作者 赵洪哲 郭昊 王亚新 永俊 王凤雪 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期95-101,共7页
为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Cap保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件... 为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Cap保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件下,所建立的PiCV荧光定量PCR方法在1×10^(2)~1×10^(7) copies/μL标准品范围内具有良好的线性相关性,线性相关系数为0.9846;敏感性试验结果显示,该方法最低可检测到1×10^(2) copies/μL标准品,是常规PCR检测方法的100倍;特异性试验结果显示,该方法与其他常见的鸽病病原不发生交叉反应;重复性评价结果显示,批内与批间的变异系数均小于2%;所建立PiCV荧光定量PCR方法对临床病死鸽肝脏样品检测结果显示,PiCV阳性率达75.7%,高于常规PCR方法的检测阳性率(54.1%),说明该方法具有良好的适用性。可应用于对PiCV的快速检测,为PiCV的及时防控提供有力技术支持。 展开更多
关键词 Cap基因 鸽圆环病毒 实时定量PCR
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PRRSV GP4蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备
18
作者 郭昊 乌东高娃 +4 位作者 赵洪哲 刘春羽 侯丽娜 王凤雪 永俊 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期150-156,共7页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)给养猪业带来巨大经济损失,尽快建立该病毒的快速诊断方法尤为重要。PRRSV ORF4基因编码的结构蛋白GP4为病毒感染所必须。本研究为制备GP4单克隆抗体,选取ORF4优势序列优化合成,连入pET-32a原核表达载体,... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)给养猪业带来巨大经济损失,尽快建立该病毒的快速诊断方法尤为重要。PRRSV ORF4基因编码的结构蛋白GP4为病毒感染所必须。本研究为制备GP4单克隆抗体,选取ORF4优势序列优化合成,连入pET-32a原核表达载体,构建重组质粒pET-32a-ORF4;经双酶切验证后,转化至BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并纯化;经SDS-PAGE及Westernblot鉴定成功后免疫小鼠,制备筛选单克隆抗体,对制备的单克隆抗体进行验证。结果表明,GP4蛋白以可溶形式表达,大小为30 kDa;纯化蛋白免疫小鼠后,共筛选4株IgG亚型阳性杂交瘤细胞株;所制备单克隆抗体可与抗原特异性结合。本研究为PRRSV诊断方法的建立及后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP4蛋白 原核表达 单克隆抗体
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胞内劳森菌PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:5
19
作者 孙娜 刘杏 +3 位作者 陈强 刘莹 永俊 程世鹏 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期36-39,共4页
为建立一种用于检测胞内劳森菌的检测方法,本试验根据GenBank中公布的胞内劳森菌16SrRNA设计引物建立PCR诊断方法。结果显示:获得了大小为481bp的PCR产物,核苷酸序列同源性分析结果均为99%以上;特异性试验表明该方法对大肠杆菌、沙门菌... 为建立一种用于检测胞内劳森菌的检测方法,本试验根据GenBank中公布的胞内劳森菌16SrRNA设计引物建立PCR诊断方法。结果显示:获得了大小为481bp的PCR产物,核苷酸序列同源性分析结果均为99%以上;特异性试验表明该方法对大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、猪流行性腹泻病毒和金黄色葡萄球菌均为扩增阴性;敏感性试验表明该方法的最低检出量为32.8μg/L;对20份临床样品阳性检出率为15%。结果表明:该方法具有较好的特异性和敏感性,适用于临床检测胞内劳森菌。 展开更多
关键词 胞内劳森菌 PCR 检测
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Ⅱ型牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定 被引量:5
20
作者 范峻豪 赵洪哲 +3 位作者 王昊 张静 王凤雪 永俊 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第1期45-49,共5页
为了解内蒙古呼和浩特部分地区牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况,本研究采用RTPCR技术从采集自内蒙古某屠宰场的32份牛肺脏样品中检测出两株BVDV,命名为BVDV-HT1704、BVDV-HT1723株。通过在MDBK细胞上传... 为了解内蒙古呼和浩特部分地区牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况,本研究采用RTPCR技术从采集自内蒙古某屠宰场的32份牛肺脏样品中检测出两株BVDV,命名为BVDV-HT1704、BVDV-HT1723株。通过在MDBK细胞上传代、免疫荧光试验、5’-UTR基因序列测定及分子进化分析对检测出BVDV阳性的肺脏组织进行鉴定。结果显示:在MDBK细胞中盲传10代后没有病变产生;经IFA检测,在病毒感染的细胞浆内产生特异性荧光;序列同源性和系统进化分析表明该毒株属于BVDV-Ⅱa型,且两株分离株属于单一的分支。本研究首次在我国正常牛肺脏组织中分离到BVDV,为了解BVDV在内蒙古自治区的流行情况及地理分布提供依据,并为相关疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 RT-PCR 分离 鉴定
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