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江西省猪链球菌临床分离株毒力基因检测及药物敏感性分析 被引量：6
1
作者 洪家兵 陶政 +2 位作者 黄奕雯 王萍 张学良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第9期27-31,共5页
为了解江西地区猪链球菌耐药性及毒力基因的情况,本试验对2014-2016年江西地区不同规模化猪场疑似猪链球菌病的病例中,分离得到的62株猪链球菌,通过PCR和K-B纸片法对其毒力基因及药物敏感性进行检测。毒力基因检测结果显示,100%的毒株... 为了解江西地区猪链球菌耐药性及毒力基因的情况,本试验对2014-2016年江西地区不同规模化猪场疑似猪链球菌病的病例中,分离得到的62株猪链球菌,通过PCR和K-B纸片法对其毒力基因及药物敏感性进行检测。毒力基因检测结果显示,100%的毒株含谷氨酸脱氢酶(gdh)、75. 8%的毒株含溶菌酶释放蛋白(mrp)、58. 1%的毒株含纤连蛋白和纤连蛋白原结合蛋白(fbps)、54. 8%的毒株含毒力相关序列(orf2)、53. 2%的毒株含胞外蛋白因子(epf)、22. 3%的毒株含溶血素(sly)。药物敏感性试验结果显示,对四环素、红霉素、强力霉素耐药严重,分别占96. 78%、80. 64%、80. 64%;对头孢唑啉、头孢噻污、阿莫西林敏感度较高,分别占85. 49%、87. 1%、82. 26%。 展开更多
关键词 猪链球菌 PCR K-B纸片法 毒力基因 药敏试验
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抗牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白中和活性单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：2
2
作者 洪家兵 刘文晓 +1 位作者 王萍 李永清 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1514-1519,共6页
为了制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白的单克隆抗体,本研究用纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,然后以纯化的昆虫细胞表达的gD蛋白作为ELISA包被抗原筛选杂交瘤细胞株。结果获得3株能够稳定分泌抗gD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B4、3E8... 为了制备牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gD蛋白的单克隆抗体,本研究用纯化的IBRV免疫BALB/c小鼠,然后以纯化的昆虫细胞表达的gD蛋白作为ELISA包被抗原筛选杂交瘤细胞株。结果获得3株能够稳定分泌抗gD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B4、3E8和4F12。采用夹心ELISA鉴定单克隆抗体的Ig亚类,结果显示,1B4、3E8为IgG2b,4F12为IgG1。免疫印迹试验与间接免疫荧光试验表明,3株单克隆抗体均能与IBRV发生特异性反应。微量中和试验结果显示,1B4和3E8单克隆抗体具有中和IBRV的活性,中和效价均为1∶320。本研究成功制备了具备中和作用的抗牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白单克隆抗体,为建立特异性的IBRV诊断方法及致病机理的研究提供了工具。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白 单克隆抗体
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猪圆环病毒3型Cap蛋白原核表达及ELISA方法建立
3
作者 李群辉 吴雨 +4 位作者 代锐 林丽苗 赵海参 洪家兵 王连想 《上海畜牧兽医通讯》 2024年第6期12-19,共8页
本研究通过设计同源重组引物扩增cap基因,并重组到pET-28a原核表达载体中;阳性质粒经IPTG诱导表达,表达蛋白经纯化后,获得截短的带有His标签的PCV3 Cap蛋白;以Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3抗体间接ELISA检测方法;对ELISA检测方法的抗... 本研究通过设计同源重组引物扩增cap基因,并重组到pET-28a原核表达载体中;阳性质粒经IPTG诱导表达,表达蛋白经纯化后,获得截短的带有His标签的PCV3 Cap蛋白;以Cap蛋白作为包被抗原,建立PCV3抗体间接ELISA检测方法;对ELISA检测方法的抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释倍数、二抗稀释度、二抗稀释度、包被条件、封闭条件、血清反应时间、二抗反应时间、显色时间等进行优化,确定临界值(血清D_(450)≥0.239时,PCV3阳性;血清D_(450)≤0.213时,PCV3阴性;0.213<血清D_(450)<0.239时,可疑),优化的ELISA检测方法具有较好的特异性和较高的重复性。这为PCV3抗体的临床检测以及后续疫苗研究提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 CAP蛋白 原核表达 ELISA
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鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白在昆虫细胞-杆状病毒表达系统中的分泌表达及免疫原性分析 被引量：1
4
作者 洪家兵 王萍 +3 位作者 王晓玥 于非可 刘文晓 李永清 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第12期14-17,23,I0002,共6页
根据杆状病毒表达系统的密码子偏好性,对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)VP 2基因序列进行密码子优化,然后合成序列。优化后的序列被定向克隆至转移载体pFast Bac^(TM)1,转化DH10Bac^(TM)感受态细胞获取重组杆状病毒穿梭质粒,转染昆虫细胞SF9... 根据杆状病毒表达系统的密码子偏好性,对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)VP 2基因序列进行密码子优化,然后合成序列。优化后的序列被定向克隆至转移载体pFast Bac^(TM)1,转化DH10Bac^(TM)感受态细胞获取重组杆状病毒穿梭质粒,转染昆虫细胞SF9,获得P0代重组杆状病毒。间接免疫荧光鉴定和Western blot分析结果显示,病毒reBac-VP2感染昆虫细胞后,能够在昆虫细胞的上清中稳定表达VP2蛋白,而且能够与IBDV的抗体发生特异性结合,具有良好的免疫原性。本试验成功构建了能够分泌表达VP2蛋白的重组杆状病毒,为IBDV诊断试剂及亚单位疫苗研发提供了工具。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 杆状病毒 蜂毒肽 VP2蛋白
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