基于CFSE染色的小鼠淋巴细胞体内示踪方法的建立 被引量：3

1

作者 汤永永 唐颖 +7 位作者 张玉华 段文元 赵敬湘 魏广智 张秀媛 李鹏飞 穆思媛 王字玲 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期850-853,共4页

目的确定CFSE标记小鼠淋巴细胞的条件,建立简单快速、稳定可行的淋巴细胞体内示踪方法。方法利用流式细胞术分别检测不同浓度CFSE、不同悬浮溶液(1640培养基、PBS溶液)对小鼠淋巴细胞标记效果的影响,确定合适的标记条件;输注同品系CFSE... 目的确定CFSE标记小鼠淋巴细胞的条件,建立简单快速、稳定可行的淋巴细胞体内示踪方法。方法利用流式细胞术分别检测不同浓度CFSE、不同悬浮溶液(1640培养基、PBS溶液)对小鼠淋巴细胞标记效果的影响,确定合适的标记条件;输注同品系CFSE标记的小鼠淋巴细胞,于不同时间点检测受鼠主要脏器内CFSE+细胞在淋巴细胞中的比例,并确定供鼠细胞的注射剂量;按照合适的注射剂量分别在注射后不同时间点测定供鼠细胞在受鼠体内的分布,考察本方法的稳定性及阳性信号的持续时间。结果 PBS组CFSE+细胞平均荧光强度分别为596、793、1123、1596、1737,明显高于1640培养基组(P<0.05);1640培养基组CFSE+细胞死亡率分别为8.7%、8.4%、8.6%、9.0%(P>0.05),而PBS组CFSE+细胞死亡率随着CFSE终浓度的上升而增加(P<0.05);按照不同剂量输注同品系淋巴细胞24h后,在受鼠各组织中检测到CFSE+细胞;每只小鼠尾静脉注射5×106个CFSE+淋巴细胞后,到d63仍可在组织中检测到阳性信号细胞。结论以PBS作为孵育液、CFSE终浓度选择10μmol/L对小鼠淋巴细胞标记、注射剂量为细胞5×106个/只,可使CFSE+细胞信号在同系小鼠体内持续2个月。 展开更多

关键词 CFSE 淋巴细胞 流式细胞术 细胞标记

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人脐带间充质干细胞修复大鼠放射复合皮肤损伤及其体外致瘤性 被引量：3

2

作者 苏仲奕 杨在亮 +5 位作者 汤永永 扈江伟 盛宏霞 徐曼 张斌 陈虎 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第37期5993-5997,共5页

背景:许多学者已经通过实验证实了间充质干细胞对于放射损伤具有明显的修复作用。目的:初步研究人脐带间充质干细胞促进放射复合皮肤损伤修复的机制及其体外是否具有致瘤性。方法:取SD大鼠15只,随机分3组(n=5),用直线加速器产生的β射线... 背景:许多学者已经通过实验证实了间充质干细胞对于放射损伤具有明显的修复作用。目的:初步研究人脐带间充质干细胞促进放射复合皮肤损伤修复的机制及其体外是否具有致瘤性。方法:取SD大鼠15只,随机分3组(n=5),用直线加速器产生的β射线(40 Gy)照射大鼠右臀部2.5 cm×2.0 cm的区域,内做一直径约1.5 cm的圆形伤口。在制作大鼠损伤模型后12 h,分别经尾静脉注入5.0×106,1.0×107和2.0×107个人脐带间充质干细胞,腹腔注入荧光素(20 mg/kg),使用IVIS活体成像系统示踪人脐带间充质干细胞在大鼠体内分布。用软琼脂克隆形成实验观察人脐带间充质干细胞形成集落的能力。结果与结论:活体成像实验表明,人脐带间充质干细胞经尾静脉注射后主要在肺脏中积聚。注射2.0×107个人脐带间充质干细胞组大鼠损伤部位出现了细胞积聚;而注射5.0×106个和1.0×107个人脐带间充质干细胞组大鼠损伤部位始终未见荧光信号。体外软琼脂克隆形成实验表明,人脐带间充质干细胞组在软琼脂上均未形成集落,而hela细胞阳性对照组可见明显集落形成。以上结果表明人脐带间充质干细胞可以通过局部迁移促进放射复合皮肤损伤修复,体外实验显示其在短期内不具有致瘤性。 展开更多

关键词 干细胞 移植 放射复合皮肤损伤 人脐带间充质干细胞 活体成像 体外致瘤性

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舒尼替尼抑制小鼠骨髓来源树突状细胞表面PD-L1和PD-L2的表达 被引量：2

3

作者 赵飞龙 麦海星 +4 位作者 董金凯 李学超 汤永永 陈立军 张斌 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期10-13,共4页

目的观察小鼠髓源性树突状细胞(DC)在舒尼替尼刺激下,其表面程序性死亡分子1配体1(PD-L1)和PD-L2的表达变化。方法取小鼠骨髓细胞,对照组加入二甲基亚砜,实验组分别加入(100、200、300)ng/m L舒尼替尼,刺激48 h,用流式细胞术检测DC表面P... 目的观察小鼠髓源性树突状细胞(DC)在舒尼替尼刺激下,其表面程序性死亡分子1配体1(PD-L1)和PD-L2的表达变化。方法取小鼠骨髓细胞,对照组加入二甲基亚砜,实验组分别加入(100、200、300)ng/m L舒尼替尼,刺激48 h,用流式细胞术检测DC表面PD-L1和PD-L2的表达水平。结果与对照组相比,实验组中成熟DC(m DC)和总DC(包括m DC和im DC)表面PD-L1的表达水平显著降低;表达PD-L1的未成熟DC(im DC)、m DC和DC百分比均显著降低,表达PD-L2的m DC百分比显著降低;表达PD-L2的DC百分比在100 ng/m L、300 ng/m L舒尼替尼组中显著降低。结论舒尼替尼可显著降低小鼠DC表面PD-L1、PD-L2的表达。 展开更多

关键词 舒尼替尼 树突状细胞 程序性死亡分子1配体1 程序性死亡分子1配体2 肾细胞癌

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MMP-2-PEX原核表达纯化及其对黑色素瘤细胞与内皮细胞黏附的影响

4

作者 宋直钰 赵敬湘 +3 位作者 魏广智 张磊 汤永永 王字玲 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2010年第6期528-531,539,共5页

目的探讨原核表达的人源基质金属蛋白酶2的C端结构域(MMP-2-PEX)对黑色素瘤细胞A375与内皮细胞黏附的影响。方法利用RT-PCR方法从人成纤维肉瘤细胞HT1080中克隆MMP-2 C端结构域,构建原核表达载体pET-His-PEX;转化大肠杆菌BL21(DE3),IPT... 目的探讨原核表达的人源基质金属蛋白酶2的C端结构域(MMP-2-PEX)对黑色素瘤细胞A375与内皮细胞黏附的影响。方法利用RT-PCR方法从人成纤维肉瘤细胞HT1080中克隆MMP-2 C端结构域,构建原核表达载体pET-His-PEX;转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;盐酸胍裂解包涵体,经镍琼脂糖凝胶柱纯化,透析复性后获得MMP-2-PEX蛋白,随后对其进行Western印迹和质谱鉴定。采用明胶酶谱法检测MMP-2-PEX的活性;采用平行板流动小室系统检测在流动状态下MMP-2-PEX对A375细胞与脐静脉内皮细胞HUVEC黏附的影响,通过小鼠实验性肺转移模型检测MMP-2-PEX对A375细胞在小鼠肺内癌栓形成的影响。结果 Western印迹和质谱鉴定原核表达的MMP-2-PEX蛋白正确,明胶酶谱检测MMP-2-PEX能够明显抑制MMP-2的活性。表达的MMP-2-PEX蛋白能够在流动状态下抑制A375细胞与HUVEC细胞的黏附,其黏附抑制率与MMP-2-PEX蛋白浓度增加成正相关,MMP-2-PEX浓度为12.5,25和50μg/ml时抑制率分别为32.5%,41.4%和53.9%。用MMP-2-PEX处理后,A375细胞在小鼠肺内癌栓的形成与对照组相比降低了26.4%。结论原核表达的人MMP-2-PEX在体外流动状态下可抑制A375细胞与内皮细胞的黏附,并抑制A375细胞在小鼠肺内癌栓的形成。 展开更多

关键词 基质金属蛋白酶2 黑色素瘤 血红素结合蛋白样结构域 细胞黏附 内皮细胞

原文传递

人脐带间充质干细胞对血液恶性肿瘤细胞增殖的影响 被引量：4

5

作者 庞一琳 汤永永 +5 位作者 李倩 谢婧 臧学峰 刘婷婷 张斌 陈虎 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期714-718,722,共6页

目的探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)体外对白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤8种血液肿瘤细胞株增殖的影响。方法用羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记肿瘤细胞,UC-MSCs与肿瘤细胞以不同比例体外共培养作为实验组,以肿瘤细胞单独... 目的探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)体外对白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤8种血液肿瘤细胞株增殖的影响。方法用羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记肿瘤细胞,UC-MSCs与肿瘤细胞以不同比例体外共培养作为实验组,以肿瘤细胞单独培养作为对照组,流式细胞仪检测3 d后肿瘤细胞的平均荧光强度及分裂的代次。结果 UC-MSCs对HL60、THP1、K562、RPMI8226细胞增殖起抑制作用;对Raji及NCIH929细胞增殖起促进作用;对Jurkat细胞仅在1∶1时起促进作用;而对于U937细胞,在UC-MSCs与U937比例为2∶1时起抑制作用,1∶4及1∶16时起促进作用,1∶1时无明显影响。结论UC-MSCs对不同血液肿瘤细胞株增殖的作用不同。对4株白血病细胞系无明显的促进作用,对淋巴瘤细胞株及多发性骨髓瘤细胞株具有促进和抑制的双向作用,U937细胞株可能是进一步研究这种对立现象的良好模型。 展开更多

关键词 间充质干细胞 血液肿瘤 细胞增殖

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体外连续传代培养脐带间充质干细胞染色体核型的稳定性 被引量：3

6

作者 王军 徐曼 +7 位作者 盛宏霞 孔维霞 扈江伟 廖丽 汤永永 宁红梅 张斌 陈虎 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期599-602,共4页

目的分析不同代次人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)的染色体核型,初步评价UC-MSCs在体外连续传代培养过程中染色体结构的稳定性。方法采用胶原酶消化法分离UC-MSCs,贴壁培养传代,通过细胞形态、免疫... 目的分析不同代次人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)的染色体核型,初步评价UC-MSCs在体外连续传代培养过程中染色体结构的稳定性。方法采用胶原酶消化法分离UC-MSCs,贴壁培养传代,通过细胞形态、免疫表型及多向分化潜能等生物学特性进行鉴定,利用G显带分析第3、5、7代细胞的染色体核型。结果染色体核型分析显示,第3、5、7代UC-MSCs为正常二倍体核型,G显带未见染色体结构异常。UC-MSCs呈成纤维样形态生长,高表达CD73、CD90、CD105,不表达CD34、CD45、CD40、CD80、CD86、CD154、HLA-DR;在特定的体外诱导条件下可以向骨、脂肪、软骨分化。结论 UC-MSCs在体外连续传代培养7代以内染色体结构稳定,为临床应用UC-MSCs的安全性提供了遗传学方面的实验依据。 展开更多

关键词 间充质干细胞 脐带 核型 细胞增殖 连续传代

原文传递

脐带全层源间充质干细胞分离培养及向成软骨细胞分化的实验研究 被引量：1

7

作者 扈江伟 张颢 +6 位作者 徐曼 汤永永 王军 盛红霞 杨在亮 张斌 陈虎 《创伤外科杂志》 2012年第6期531-534,共4页

目的从人脐带全层中分离培养间充质干细胞(MSCs),并进行成软骨诱导分化,为组织工程软骨和软骨损伤后修复提供种子细胞。方法采用胶原酶消化法从脐带全层中分离培养间充质干细胞,显微镜下观察细胞形态,细胞计数法绘制细胞生长曲线,采用... 目的从人脐带全层中分离培养间充质干细胞(MSCs),并进行成软骨诱导分化,为组织工程软骨和软骨损伤后修复提供种子细胞。方法采用胶原酶消化法从脐带全层中分离培养间充质干细胞,显微镜下观察细胞形态,细胞计数法绘制细胞生长曲线,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞表型,采用微团细胞培养在软骨诱导液中向软骨细胞分化,阿尔辛蓝及甲苯胺蓝染色检测细胞分化情况,RT-PCR法检测诱导后细胞表达聚集蛋白聚糖(ACAN)基因情况。结果人脐带全层来源的MSCs呈成纤维样形态漩涡状贴壁生长,细胞高表达HLA-I类分子、CD73、CD90、CD166及CD105,不表达CD34、CD45、CD14、CD31、CD80、CD86及HLA-DR。细胞诱导分化21d后,阿尔辛兰及甲苯胺蓝染色阳性;RT-PCR检测诱导后的细胞表达ACAN,而对照组无表达。结论人脐带全层为成体MSCs提供一种新而方便的来源,人脐带间充质干细胞(hucMSCs)体外培养能够向软骨细胞分化。 展开更多

关键词 脐带 间充质干细胞 成软骨细胞

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低温冻存对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响

8

作者 王军 孔维霞 +7 位作者 徐曼 盛宏霞 扈江伟 廖丽 汤永永 宁红梅 张斌 陈虎 《军医进修学院学报》 CAS 2012年第11期1152-1155,1188,共5页

目的比较人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)冻存前与复苏后的生物学特性,为规模化储备UC-MSCs提供试验支持。方法采用胶原酶消化法从脐带中分离UC-MSCs,贴壁培养传代,将第3代UC-MSCs利用程控降... 目的比较人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)冻存前与复苏后的生物学特性,为规模化储备UC-MSCs提供试验支持。方法采用胶原酶消化法从脐带中分离UC-MSCs,贴壁培养传代,将第3代UC-MSCs利用程控降温仪冷冻,置于-196℃液氮中冻存6个月后复苏,比较冻存前和复苏后UC-MSCs的细胞形态、生长曲线、免疫表型及多向分化潜能等生物学特性。结果复苏后UC-MSCs仍呈成纤维样形态生长,生长曲线与冻存前相似;免疫表型仍高表达CD73、CD90、CD105,不表达CD34、CD45、CD40、CD80、CD86、CD154、HLA-DR;在特定的体外诱导条件下,仍可以向骨、脂肪、软骨分化。结论冻存复苏后UC-MSCs的生物学特性仍保持稳定。 展开更多

关键词 间充质干细胞 脐带 冻存 生物学特性

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淋巴细胞输注体内示踪方法研究

9

作者 汤永永 段文元 +2 位作者 赵敬湘 魏广智 王字玲 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期89-89,共1页

关键词 细胞输注 示踪 CFSE 细胞死亡率 标记细胞 小鼠淋巴细胞 荧光强度 孵育液 阳性信号 流式细胞术

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血小板输注对肿瘤生长及免疫调节作用

10

作者 赵敬湘 宋直鈺 +2 位作者 魏广智 汤永永 王字玲 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期92-92,共1页

关键词 血小板输注 免疫调节作用 小鼠黑色素瘤 小鼠肺 细胞亚群 肺转移 尾静脉 流式细胞术 瘤细胞 免疫细胞

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NKG2D配体Rae-1在失血性休克和输血后表达的变化

11

作者 魏广智 尤国兴 +3 位作者 罗丹 汤永永 赵敬湘 王字玲 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期106-106,共1页

关键词 失血性休克 NKG2D Rae-1 缺血再灌注损伤 大鼠 肾组织损伤 免疫调节 天然免疫反应 粒细胞浸润 抑制作用

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