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快速高通量测定三角褐指藻油脂含量 被引量：4
1
作者 曹素娟 柳科欢 +3 位作者 任玲萱 侯兴国 卿人韦 兰利琼 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1331-1336,共6页
为了实现三角褐指藻细胞内油脂含量的快速高通量测定,探索了尼罗红荧光染色法检测其油脂含量的检测条件.采用96孔板并配合酶标仪考察三角褐指藻的预处理液的种类及其用量、染色液尼罗红的用量、染色温度、染色时间以及细胞浓度对荧光强... 为了实现三角褐指藻细胞内油脂含量的快速高通量测定,探索了尼罗红荧光染色法检测其油脂含量的检测条件.采用96孔板并配合酶标仪考察三角褐指藻的预处理液的种类及其用量、染色液尼罗红的用量、染色温度、染色时间以及细胞浓度对荧光强度的影响,确立最优染色条件,并研究荧光强度与油脂含量之间的对应关系.结果表明,TritonX-100终浓度为0.05%时,通透效果最佳,每100μL藻悬液中加3μL尼罗红染液(0.1mg/mL),温度40℃,时间10min,细胞浓度低于3×106个/mL时,荧光强度(y)与油脂含量(x)之间呈现良好的线性关系:y=927.37x+15.913,R2=0.9247.方法优化后,90min即内可完成对96个样品的处理及分析,极大提高了分析的通量. 展开更多
关键词 三角褐指藻 高通量 油脂含量 尼罗红 荧光染色
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雨生红球藻培养基筛选及诱导条件优化 被引量：3
2
作者 柳科欢 白欢 +2 位作者 马力 兰利琼 卿人韦 《安徽农业科学》 CAS 2018年第27期13-16,共4页
[目的]筛选出利于实验室来源的雨生红球藻营养生长的培养基,优化雨生红球藻内虾青素的积累条件。[方法]选用7种培养基对4株雨生红球藻分别进行培养,筛选出最适于4种藻株营养生长的培养基。探究雨生红球藻在光胁迫、高盐、缺氮3种条件下... [目的]筛选出利于实验室来源的雨生红球藻营养生长的培养基,优化雨生红球藻内虾青素的积累条件。[方法]选用7种培养基对4株雨生红球藻分别进行培养,筛选出最适于4种藻株营养生长的培养基。探究雨生红球藻在光胁迫、高盐、缺氮3种条件下诱导虾青素积累情况。[结果]4个不同雨生红球藻藻株在配方A培养基中的生物量比其他6种试验培养基的生物量高1.65~7.30倍;在优势培养基配方A中,HP3的生物量最大,可达7.13×106个/m L; HP3在缺氮的胁迫条件下,虾青素产量最高,可达21.05 mg/L,比光诱导获得的最佳虾青素产量高1.07倍,比高盐获得的最佳虾青素产量高1.64倍。[结论]该研究中最适于试验藻株营养生长的培养基是配方A,当胁迫条件为缺氮10%时虾青素积累量最大。 展开更多
关键词 雨生红球藻 虾青素 培养基筛选 胁迫条件
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缺氮胁迫下雨生红球藻虾青素积累过程中的基因组MSAP分析 被引量：3
3
作者 张克亚 卿人韦 +3 位作者 柳科欢 刘倩倩 侯兴国 兰利琼 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1155-1163,共9页
虾青素具有多种生物学活性,雨生红球藻为天然虾青素的最佳来源,缺氮胁迫会导致雨生红球藻积累虾青素。为了解缺氮条件下雨生红球藻虾青素积累的分子机制,该研究通过对雨生红球藻进行缺氮胁迫,结合MSAP法,研究了雨生红球藻在缺氮胁迫下... 虾青素具有多种生物学活性,雨生红球藻为天然虾青素的最佳来源,缺氮胁迫会导致雨生红球藻积累虾青素。为了解缺氮条件下雨生红球藻虾青素积累的分子机制,该研究通过对雨生红球藻进行缺氮胁迫,结合MSAP法,研究了雨生红球藻在缺氮胁迫下虾青素积累过程中基因组甲基化水平的变化,结果表明:缺氮胁迫0~72 h期间,雨生红球藻生长速度减慢,而虾青素积累主要发生在缺氮处理12~24 h期间,随后积累速度减慢。同时,对缺氮胁迫0、24、72 h的雨生红球藻基因组DNA进行甲基化敏感扩增多态性分析,共得到了291个甲基化多态性位点,其中发生甲基化变化的位点在0~24 h和24~72 h分别占总位点的29.90%和53.95%。在缺氮胁迫24 h处DNA半甲基化率最大(为12.71%),全甲基化率最低(为26.80%);缺氮胁迫72 h处DNA全甲基化率最高(为28.52%),半甲基化率最低(为1.72%)。这表明DNA甲基化调节方式的改变是虾青素积累过程中的一种重要调控模式。 展开更多
关键词 藻类学 缺氮胁迫 雨生红球藻 虾青素 甲基化变化
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一株轮藻新特征及其分类地位 被引量：1
4
作者 陈孔翔 兰利琼 +3 位作者 柳科欢 张志霞 曹素娟 卿人韦 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1107-1112,共6页
本研究基于在四川雅安采集到的一株特殊轮藻,形态学观察显示其茎与小枝无皮层,小枝分叉,冠细胞两层——这些是丽藻族种类所具有的特征.然而,其节部小枝基部具有乳突状托叶——这是丽藻族种类所不具备的特征.本研究显示,乳突状托叶无论... 本研究基于在四川雅安采集到的一株特殊轮藻,形态学观察显示其茎与小枝无皮层,小枝分叉,冠细胞两层——这些是丽藻族种类所具有的特征.然而,其节部小枝基部具有乳突状托叶——这是丽藻族种类所不具备的特征.本研究显示,乳突状托叶无论在野外采集植株的直接观察中,还是在实验室稳定培养、继代培养植株的观察中均能稳定表达.18SrDNA与rbcL基因联合分子系统发育分析显示:新特征轮藻与丽藻属其它种类聚在一起且成为单独的一支.形态学与分子系统发育学研究结果均说明新特征轮藻与丽藻族有密切的亲缘关系,可以归入丽藻属,但托叶不再仅仅是轮藻族独有的特征,部分丽藻族的种类也拥有这一特征. 展开更多
关键词 轮藻 新特征 18SrDNA RBCL 分类系统
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金黄色葡萄球菌双组分系统反应调节蛋白AgrA的原核表达、纯化及活性鉴定 被引量：2
5
作者 张旭宁 权春善 +3 位作者 廖颖玲 柳科欢 熊文 范圣第 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期32-40,共9页
AgrA作为金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统(two-component signal transduction system,TCST)的反应调节因子,能调控细菌毒力因子的表达,在金黄色葡萄球菌致病过程中起着重要的作用。采用无限制克隆法构建AgrA表达载体,在AgrA蛋白的C... AgrA作为金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统(two-component signal transduction system,TCST)的反应调节因子,能调控细菌毒力因子的表达,在金黄色葡萄球菌致病过程中起着重要的作用。采用无限制克隆法构建AgrA表达载体,在AgrA蛋白的C端融合绿色荧光蛋白(GFP)标签,通过实时监测GFP的荧光强度来快速检测重组蛋白的表达水平。首先利用单因素实验,筛选出宿主菌株BL21-(DE3)-PlysS;其次,结合Box-Behnken试验设计,筛选出最优蛋白质表达条件:诱导时间为22h、转速为222r/min、诱导剂浓度为0.5mmol/L,AgrA产量达到5.56mg/L。最后,基于AgrA蛋白LytTR区域的非放射性凝胶阻滞实验(non-radioactive electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证了AgrA的生物活性。提出了反应调节蛋白AgrA在大肠杆菌高效可溶性表达的策略,为双组分信号转导系统的体外研究奠定基础,也为其他反应调节蛋白的可溶性表达与分离纯化提供了一个可行借鉴。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 AgrA GFP 响应面分析 EMSA
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