肿瘤治疗性DNA疫苗pSFVK1-NMM由于采用了基于塞姆利基森林病毒(semliki for estvirus,SFV)的复制子系统,使得其大小超过15 kb,所以需要对该疫苗生产用菌株进行筛选后才能建立三级种子库。本研究首先对不同构型的pSFVK1-NMM质粒进行了电...肿瘤治疗性DNA疫苗pSFVK1-NMM由于采用了基于塞姆利基森林病毒(semliki for estvirus,SFV)的复制子系统,使得其大小超过15 kb,所以需要对该疫苗生产用菌株进行筛选后才能建立三级种子库。本研究首先对不同构型的pSFVK1-NMM质粒进行了电泳分析,对该质粒的超螺旋构型、线性构型、开环构型和碱变性构型的电泳特征进行了描述。然后分别在37,34,30℃培养温度下对比该质粒结构稳定性的差异,发现30℃能提供该质粒稳定的复制环境,为工程菌合适的培养温度,同时也对因高温培养所产生的截短型DNA进行了电泳分析。最后通过30℃条件下的传代培养对21株含有质粒的重组大肠杆菌进行筛选,比较第5,10,15,20代的质粒电泳结果,获得1株能够稳定培养20代的菌株作为生产用工程菌,后续可用于三级种子库的建立。展开更多
文摘肿瘤治疗性DNA疫苗pSFVK1-NMM由于采用了基于塞姆利基森林病毒(semliki for estvirus,SFV)的复制子系统,使得其大小超过15 kb,所以需要对该疫苗生产用菌株进行筛选后才能建立三级种子库。本研究首先对不同构型的pSFVK1-NMM质粒进行了电泳分析,对该质粒的超螺旋构型、线性构型、开环构型和碱变性构型的电泳特征进行了描述。然后分别在37,34,30℃培养温度下对比该质粒结构稳定性的差异,发现30℃能提供该质粒稳定的复制环境,为工程菌合适的培养温度,同时也对因高温培养所产生的截短型DNA进行了电泳分析。最后通过30℃条件下的传代培养对21株含有质粒的重组大肠杆菌进行筛选,比较第5,10,15,20代的质粒电泳结果,获得1株能够稳定培养20代的菌株作为生产用工程菌,后续可用于三级种子库的建立。
