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AA父母代种蛋孵化期间失重对孵化效果的影响 被引量：5
1
作者 杨汐静 王洋 刘胜军 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第4期69-70,209,共3页
为了研究肉鸡种蛋孵化过程中失重对孵化效果的影响,试验采用同一鸡场同一天入库的种蛋,按蛋重区间分成10组,每组150枚,孵化时各组保留受精蛋100枚,测定失重率、孵化率、健雏率、初生雏重。结果表明:种蛋的失重总趋势为快—慢—快,初生... 为了研究肉鸡种蛋孵化过程中失重对孵化效果的影响,试验采用同一鸡场同一天入库的种蛋,按蛋重区间分成10组,每组150枚,孵化时各组保留受精蛋100枚,测定失重率、孵化率、健雏率、初生雏重。结果表明:种蛋的失重总趋势为快—慢—快,初生雏重随着蛋重的增加而增加。 展开更多
关键词 父母代 肉鸡 种蛋 失重率 孵化率
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心脏磁共振组织追踪2D与3D应变评估实验性自身免疫性心肌炎模型大鼠的诊断价值及可重复性研究 被引量：3
2
作者 朱静 朱桐 +6 位作者 张钰 陈榆舒 何博 王磊 刘小新 杨汐静 郜发宝 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期471-477,共7页
目的探讨心脏磁共振组织追踪(cardiac magnetic resonance tissue tracking, CMR-TT)二维(two-dimensional, 2D)与三维(three-dimensional, 3D)应变对实验性自身免疫性心肌炎大鼠的诊断价值及其可重复性。方法将20只Lewis大鼠随机等分... 目的探讨心脏磁共振组织追踪(cardiac magnetic resonance tissue tracking, CMR-TT)二维(two-dimensional, 2D)与三维(three-dimensional, 3D)应变对实验性自身免疫性心肌炎大鼠的诊断价值及其可重复性。方法将20只Lewis大鼠随机等分为模型组和对照组,大鼠足垫皮下注射猪心肌肌凝蛋白以制备自身免疫性心肌炎动物模型,在初次注射后第35天进行7.0T CMR电影序列扫描,心脏专用后处理软件分析左心室心功能及整体应变。磁共振扫描完成后处死大鼠,取心肌组织行HE和Masson染色,以病理结果为金标准,通过受试者工作特性(ROC)曲线评价各应变参数的诊断价值,各应变值的重复性检验采用组内相关系数(ICC)、变异系数(CV)、Bland-Altman图分析。结果病理学发现对照组心肌细胞形态结构未见明显异常改变,模型组所有大鼠均感染心肌炎,表现为心肌纤维排列紊乱、变性、坏死、炎细胞浸润、间质纤维化,造模成功。ROC曲线显示2D应变参数诊断心肌炎的价值高于3D应变参数,2D整体环向应变(global circumferential strain, GCS)、2D整体径向应变(global radial strain, GRS)、2D整体纵向应变(global longitudinal strain, GLS)、3D GLS、3D GCS、3D GRS的曲线下面积(AUC)分别为0.96、0.95、0.90、0.87、0.85、0.77;观察者内和观察者间3D应变重复性(ICC在0.421~0.79)均低于2D应变(ICC在0.893~0.986)。结论 CMR-TT 2D应变参数在心肌炎诊断价值以及心肌形变分析中的可行性、可重复性方面均优于3D应变参数。 展开更多
关键词 磁共振组织追踪 实验性自身免疫性心肌炎 2D心肌应变 3D心肌应变
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停乳链球菌GapC_(1-150aa)蛋白单克隆抗体的制备及其线性表位鉴定 被引量：3
3
作者 张丽萌 周雪 +17 位作者 魏玉华 樊自尧 汤炜 代建 杨轩 张建新 杨汐静 刘道龙 王成 王健南 于永忠 吴志军 于立权 孙虎男 马金柱 宋佰芬 朱战波 崔玉东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期875-880,共6页
链球菌GapC蛋白是表达于各种链球菌的膜蛋白，具有良好的免疫原性。为研制预防链球菌感染的表位疫苗和研发以单克隆抗体（MAb）为基础的检测试剂盒，本研究利用表达的停乳链球菌GapC蛋白aa1～aa150片段制备了3株MAbs，并利用噬菌体展示... 链球菌GapC蛋白是表达于各种链球菌的膜蛋白，具有良好的免疫原性。为研制预防链球菌感染的表位疫苗和研发以单克隆抗体（MAb）为基础的检测试剂盒，本研究利用表达的停乳链球菌GapC蛋白aa1～aa150片段制备了3株MAbs，并利用噬菌体展示技术对这3株MAbs的抗原表位进行分析，获得一个线性表位1377HDILDG142。该研究不仅有助于了解链球菌GapC的免疫保护作用机制，也有助于进一步研究表位疫苗和建立检测方法。 展开更多
关键词 停乳链球菌 GAPC 单克隆抗体 B细胞抗原表位
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金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A r10-11截短体蛋白基因片段的原核表达与免疫原性 被引量：2
4
作者 杨汐静 陈晓婷 +2 位作者 刘道龙 杨阳 杨光 《华西医学》 CAS 2018年第12期1519-1525,共7页
目的构建金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin binding protein A,FnBPA)r10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株并研究其免疫原性。方法采用重组聚合酶链反应(ploymerase chain reaction,PCR)技术从金黄色葡萄球菌Newman株全基... 目的构建金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin binding protein A,FnBPA)r10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株并研究其免疫原性。方法采用重组聚合酶链反应(ploymerase chain reaction,PCR)技术从金黄色葡萄球菌Newman株全基因组序列中进行PCR扩增,对扩增产物进行纯化,连接T载体后转入大肠杆菌DH5α中进行克隆,提取重组后的质粒进行双酶切鉴定,并回收目的片段连接到pET-32a质粒中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,采用HIS蛋白纯化柱纯化截短蛋白FnBPAr10-11,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴定,纯化后的FnBPAr10-11用于免疫小鼠[分为无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)组、FnBPA组、FnBPAr10-11组],检测小鼠血清免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)水平、细胞因子水平、免疫保护率。结果 SDS-PAGE分析显示,表达后的蛋白相对分子质量约为33.1×103。FnBPAr10-11组与FnBPA组IgG抗体效价达1∶128 000,与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。FnBPAr10-11组的细胞因子水平与FnBPA组比较差异无统计学意义(P>0.05),与PBS组比较差异有统计学意义(P<0.01)。攻毒试验中FnBPAr10-11组的免疫保护作用在50%以上。结论成功构建了金黄色葡萄球菌Fn BPAr10-11截短体融合蛋白的原核表达菌株,该截短蛋白免疫原性良好。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 纤连蛋白结合蛋白Ar10-11 免疫原性
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金黄色葡萄球菌FnbpA免疫优势片段的构建及免疫保护性研究 被引量：2
5
作者 杨汐静 陈晓婷 +2 位作者 刘道龙 杨阳 杨光 《重庆医学》 CAS 2020年第5期813-818,共6页
目的构建金黄色葡萄球菌FnbpA蛋白免疫优势片段原核表达菌株并研究其重组蛋白免疫原性。方法根据预测确定N区优势片段,通过聚合酶链反应(PCR)法对目的片段进行基因扩增,转入表达载体pET-32a,并导入宿主菌大肠杆菌(E.coli)Rosstta中进行... 目的构建金黄色葡萄球菌FnbpA蛋白免疫优势片段原核表达菌株并研究其重组蛋白免疫原性。方法根据预测确定N区优势片段,通过聚合酶链反应(PCR)法对目的片段进行基因扩增,转入表达载体pET-32a,并导入宿主菌大肠杆菌(E.coli)Rosstta中进行原核表达;将N区优势片段与重复区优势片段通过重叠延伸聚合酶链反应(overlap PCR)融合,原核表达;将蛋白FL纯化,分别免疫Balb/c小鼠,并检测小鼠IgG水平、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、免疫保护率。结果各重组蛋白在E.coli Rosstta中均获得表达,表达后FnbpA 301-430aa、FL蛋白大小分别约39.3×103,49.1×103;抗体水平检测结果表明重组蛋白FL抗体水平接近全蛋白FnbpA,高于FnbpA 301-430aa;重组FL组淋巴细胞分泌IL-4、IFN-γ、IL-17的能力与FnbpA 301-430aa比较差异有统计学意义(P<0.05);攻毒结果表明,全蛋白FnbpA实验组免疫保护性最好,FL实验组保护性效果优于FnbpA 301-430aa。结论成功构建了金黄色葡萄球菌FnbpA免疫优势截短体蛋白的原核表达菌株,重组蛋白FL具有良好的免疫保护性。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 FnbpA 重组蛋白 免疫保护作用
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Red重组介导大肠杆菌外膜蛋白A缺失突变菌株的构建及生物学特性初步研究 被引量：1
6
作者 杨汐静 陈晓婷 +1 位作者 于思淼 刘伟 《华西医学》 CAS 2017年第12期1895-1899,共5页
目的利用Red同源重组的方法构建大肠杆菌外膜蛋白A(outer membrane protein-A,Omp A)基因缺失株,为后续研究奠定一定的基础。方法以已知大肠杆菌Omp A为靶点在其两端设计同源臂引物,以质粒p KD3为模板利用聚合酶链反应(polymerase chain... 目的利用Red同源重组的方法构建大肠杆菌外膜蛋白A(outer membrane protein-A,Omp A)基因缺失株,为后续研究奠定一定的基础。方法以已知大肠杆菌Omp A为靶点在其两端设计同源臂引物,以质粒p KD3为模板利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增出氯霉素筛选标记序列,然后采用Red重组技术利用质粒p KD46诱导表达的重组酶通过电击的方法把外源构建打靶片段导入大肠杆菌,构建大肠杆菌Omp A基因缺失突变株。以菌落PCR方法检测基因大小,以蛋白质印迹法检测蛋白表达情况,以重组菌株培养过程的吸光度(A600)值来反映重组子的生长情况。结果成功构建了大肠杆菌Omp A基因缺失突变株,通过蛋白质印迹法检测和细菌生长曲线测定,发现Omp A基因成功完全丢失,突变株的生长曲线与野生型的差异不显著。结论Omp A基因缺失对大肠杆菌的生长无显著影响,为进一步研究疫苗活载体提供了一定基础。 展开更多
关键词 外膜蛋白A 表面展示系统 基因敲除
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兔糖尿病周围神经病变模型的建立及超声表现
7
作者 黄建波 何英 +3 位作者 王红 向茜 杨汐静 张静漪 《重庆医学》 CAS 2023年第15期2261-2266,共6页
目的探讨兔糖尿病周围神经病变模型的建立方法,并评价超声在兔糖尿病周围神经病变模型中的应用价值。方法将30只雄性新西兰兔随机分为正常对照组(N组,n=6)和造模组(n=24)。造模组按体重65 mg/kg耳缘静脉注射新鲜配制的5%四氧嘧啶,维持... 目的探讨兔糖尿病周围神经病变模型的建立方法,并评价超声在兔糖尿病周围神经病变模型中的应用价值。方法将30只雄性新西兰兔随机分为正常对照组(N组,n=6)和造模组(n=24)。造模组按体重65 mg/kg耳缘静脉注射新鲜配制的5%四氧嘧啶,维持其血糖浓度大于16.0 mmol/L 1周以上,随机等分为糖尿病病程1月组(A组)、2月组(B组)和3月组(C组)。N组注射等量生理盐水。分别于1、2、3个月后,利用超声测量A、B、C及N组兔的坐骨神经横截面面积,分析坐骨神经病变前后的超声表现。记录各组兔坐骨神经的神经传导速度,检测后分批取材行病理染色,观察其病理结构的改变。结果造模组24只四氧嘧啶诱导的兔糖尿病模型中2只死亡,1只血糖低于16.0 mmol/L,其余21只成功建立糖尿病模型,成功率为87.5%。超声测得A、B、C组神经横截面面积平均值分别为(2.30±0.13)、(2.90±0.17)、(3.86±0.47)mm^(2),其中B组、C组显著大于N组的(2.03±0.26)mm^(2)(P<0.01)。在四氧嘧啶诱导3个月后,兔坐骨神经传导速度减低,传导速度为(51.14±0.45)m/s,与N组比较差异有统计学意义(P<0.05);A、B与N组比较,动作电位传导速度差异均无统计学意义(P<0.05)。结论低剂量四氧嘧啶诱导兔糖尿病3个月后,坐骨神经出现神经传导速度降低,成功建立糖尿病周围神经病变模型,且造模成功率较高,死亡率低。超声成像可以定量评估兔糖尿病模型坐骨神经的形态变化,可能对糖尿病周围神经病变的诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 糖尿病模型 四氧嘧啶 周围神经病变 超声诊断 神经传导速度
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应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌GapC1的大肠埃希菌 被引量：1
8
作者 杨汐静 张建新 +8 位作者 陈晓亭 汤炜 于思淼 刘伟 姚笛 吴志军 于立权 朱战波 崔玉东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期239-244,共6页
目的应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌Gap C1-150 aa(Gap C1)的大肠埃希菌,为进一步构建大肠埃希菌表面展示重组菌株奠定基础。方法根据Gen Bank中登录的gap C基因序列(GI:30348860)设计引物,以质粒p KD3、p QE30/lpp-omp A-gap ... 目的应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌Gap C1-150 aa(Gap C1)的大肠埃希菌,为进一步构建大肠埃希菌表面展示重组菌株奠定基础。方法根据Gen Bank中登录的gap C基因序列(GI:30348860)设计引物,以质粒p KD3、p QE30/lpp-omp A-gap C为模板进行PCR扩增、融合,获得融合片段,转化入含p KD46质粒的大肠埃希菌HB101中,利用p KD46编码的RED系统将融合片段重组入基因组中,经氨苄西林(Amp)和氯霉素(Cm)抗性筛选,获得去除p KD46质粒的重组菌(HB101LOG)。对重组菌株进行PCR、Western blot、流式细胞术、荧光显微镜及生物学特性检测。结果 PCR结果显示,重组菌株构建正确;重组大肠埃希菌HB101LOG在菌体表面表达了外源蛋白Gap C1-150 aa;激光共聚焦显微镜观察到HB101LOG可见明显的绿色荧光,HB101未见绿色荧光;重组菌株HB101LOG和HB101的生长曲线符合大肠埃希菌的生长规律。结论应用RED系统成功构建了能展示链球菌Gap C1-150 aa的大肠埃希菌重组菌株。 展开更多
关键词 链球菌 GapC蛋白 大肠埃希菌 RED同源重组
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奶牛布鲁杆菌病的诊断与防治
9
作者 杨彪 杨汐静 侯喜林 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 CAS 2014年第6期91-92,共2页
布鲁杆菌病（简称布病）是由布鲁杆菌引起的一类世界范围内广泛流行的人畜共患性传染病，是世界动物卫生组织（OIE）规定强制报告的疫病，我国将其列为二类动物疫病。牛羊猪均为本病易感动物，是养牛业必须严防死守的重点疫病之一。本... 布鲁杆菌病（简称布病）是由布鲁杆菌引起的一类世界范围内广泛流行的人畜共患性传染病，是世界动物卫生组织（OIE）规定强制报告的疫病，我国将其列为二类动物疫病。牛羊猪均为本病易感动物，是养牛业必须严防死守的重点疫病之一。本病分布很广，不仅威胁人类的健康，而且严重影响畜牧业的发展。 展开更多
关键词 杆菌病 世界动物卫生组织 防治 诊断 奶牛 动物疫病 人畜共患 世界范围
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