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酒精性肝纤维化核因子κB信号通路与性别的差异
1
作者 洪晓敏 李三强 +4 位作者 崔钦奕 郑润月 杨孟利 罗仁利 李前辉 《解剖学报》 CAS CSCD 2024年第1期55-61,共7页
目的探讨酒精性肝纤维化的核因子(NF)-κB信号通路与性别差异的关系。方法将7~8周龄的C57BL/6 N小鼠随机分为:雄性正常组、雄性模型组,雌性正常组和雌性模型组各20只。正常组采用对照液体饲料喂养8周,模型组采用酒精液体饲料喂养8周,联... 目的探讨酒精性肝纤维化的核因子(NF)-κB信号通路与性别差异的关系。方法将7~8周龄的C57BL/6 N小鼠随机分为:雄性正常组、雄性模型组,雌性正常组和雌性模型组各20只。正常组采用对照液体饲料喂养8周,模型组采用酒精液体饲料喂养8周,联合31.5%乙醇灌胃(每周两次,5 g/kg)建立酒精性肝纤维化模型。8周末处死小鼠,检测各组小鼠血清学谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)的活性,雌二醇(E2)和睾酮(T)的水平,天狼星红染色检测各组小鼠纤维化情况,HE染色观察肝组织病理学变化,免疫组织化学法检测NF-κB-P65和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性面积率,免疫印迹法检测Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、磷酸化核因子κB-P65(p-NF-κB-P65)、核因子κB抑制因子α(IκBα)、磷酸化核因子κB抑制因子α(p-IκBα)的表达水平。结果雄性模型组ALT,AST酶活性和T的水平升高,E2的水平降低,胶原纤维增加,HE染色坏死积分升高,NF-κB-P65和α-SMA的阳性面积率增加,collagenⅠ,TNF-α、p-NF-κB-P65、p-IκBα的表达增加,IκBα的表达降低。结论酒精更容易导致雄性小鼠肝纤维化,这可能与加强IκBα磷酸化释放NF-κB,促使磷酸化NF-κB-p65增多,进一步激活NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 酒精性肝纤维化 NF-ΚB信号通路 性别差异 免疫印迹法 小鼠
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解整合素-金属蛋白酶8对急性酒精性肝损伤小鼠中肝细胞增殖与凋亡的调控作用
2
作者 崔钦奕 杨孟利 +3 位作者 李三强 齐婧含 冯家阳 张凯杰 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2024年第8期1005-1009,共5页
目的 探讨解整合素-金属蛋白酶8(A disintegrin and metalloprotease 8,ADAM8)对急性酒精性肝损伤小鼠中肝细胞增殖与凋亡的影响。方法 选择6~8周龄的KM小鼠30只,随机分为5组:正常对照组(n=6)、模型组(n=6)、ADAM8-sgRNA1组(n=6)、ADAM8... 目的 探讨解整合素-金属蛋白酶8(A disintegrin and metalloprotease 8,ADAM8)对急性酒精性肝损伤小鼠中肝细胞增殖与凋亡的影响。方法 选择6~8周龄的KM小鼠30只,随机分为5组:正常对照组(n=6)、模型组(n=6)、ADAM8-sgRNA1组(n=6)、ADAM8-sgRNA2组(n=6)、ADAM8-sgRNA3组(n=6)。正常对照组小鼠不做任何处理,质粒组小鼠分别尾静脉注射3种质粒,模型组小鼠尾静脉注射等量生理盐水;将模型组和质粒组小鼠常规喂养3 d,通过一次经口灌胃50%酒精14 mL/kg诱导小鼠急性肝损伤。检测各组小鼠AST、ALT水平,HE染色观察其病理学变化,PAS染色观察肝组织糖原变化;Western blotting检测ADAM8、TNF-α、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、BCL2关联X蛋白(BCL2-associated X protein, Bax)的表达水平。结果 与模型组相比,ADAM8-sgRNA2组ADAM8的表达水平明显降低(P<0.05);与正常对照组相比,模型组PCNA的表达水平明显降低(P<0.001),TNF-α、Bax的表达水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,ADAM8-sgRNA2组PCNA表达水平显著升高(P<0.001),TNF-α、Bax表达水平显著下降(P<0.01)。与正常对照组相比,模型组AST、ALT指标显著升高(P<0.05);与模型组相比,ADAM8-sgRNA2组AST、ALT指标显著下降(P<0.05)。HE染色和PAS染色结果显示:与正常对照组相比,模型组肝损伤明显,坏死积分显著升高(P<0.05),糖原含量显著减少(P<0.001);与模型组相比,ADAM8-sgRNA2组坏死积分明显降低(P<0.05),ADAM8-sgRNA2组糖原含量明显上升(P<0.001)。结论 ADAM8过表达可抑制急性酒精性肝损伤小鼠中肝细胞的增殖并促进肝细胞的凋亡。 展开更多
关键词 急性酒精性肝损伤 解整合素-金属蛋白酶8 CRISPR/Cas9 增殖 凋亡
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ADAM8的表达对急性酒精性肝损伤小鼠的影响
3
作者 杨孟利 李三强 +5 位作者 张凯杰 崔钦奕 冯家阳 李依林 李昊远 齐婧含 《天津医药》 CAS 2024年第4期346-350,共5页
目的 探究CRISPR/Cas9技术靶向抑制去整合素-金属蛋白酶8(ADAM8)在小鼠急性酒精性肝损伤中的作用及分子机制。方法 18只6~8周龄健康雌性昆明小鼠根据随机数字表法分为正常组、酒精组和质粒组,每组6只。正常组不做处理,质粒组采用水流动... 目的 探究CRISPR/Cas9技术靶向抑制去整合素-金属蛋白酶8(ADAM8)在小鼠急性酒精性肝损伤中的作用及分子机制。方法 18只6~8周龄健康雌性昆明小鼠根据随机数字表法分为正常组、酒精组和质粒组,每组6只。正常组不做处理,质粒组采用水流动力学注射法尾静脉注射利用CRISPR/Cas9技术抑制ADAM8基因的三合一重组质粒ADAM8-sgRNA3(3 g/kg),酒精组尾静脉注射等量生理盐水。酒精组和质粒组采用50%(V/V)分析纯乙醇一次性灌胃(14 mL/kg)诱导急性肝损伤。禁食16 h后进行眼球取血,检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性;苏木素-伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色检测肝脏损伤和糖原变化情况;蛋白免疫印迹法检测肝组织中ADAM8、细胞色素CYP450 2E1(CYP2E1)、热休克蛋白70(HSP70)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关因子的表达。结果 与正常组相比,酒精组ALT和AST升高,肝损伤评分增加,糖原含量减少,ADAM8、CYP2E1、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化的p38(p-p38)MAPK以及磷酸化的c-Jun氨基未端激酶(p-c-Jun)的表达升高,而HSP70的表达降低(P<0.05)。与酒精组相比,质粒组ALT和AST降低,肝损伤评分降低(P<0.05),糖原含量增多;ADAM8、CYP2E1、p-ERK1/2、p-p38 MAPK以及p-c-Jun的表达降低,HSP70的表达增加(P<0.05)。结论 利用CRISPR/Cas9技术靶向抑制ADAM8的表达,可以通过MAPK信号通路改善小鼠急性酒精性肝损伤。 展开更多
关键词 ADAM蛋白质类 急性酒精性肝损伤 丝裂原激活蛋白激酶类 CRISPR/Cas9
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情景教学法融入幼儿阅读教育的探索研究
4
作者 杨孟利 《中华少年》 2018年第9期92-93,共2页
情景教学方法是一种适用于幼儿阅读教育的科学教学方法,有利于激发幼儿阅读兴趣,培养幼儿阅读思维。本文首先对情景教学方法在幼儿阅读教育中的适用性进行分析,并对幼儿阅读教育存在的现状问题进行探讨,在此基础上,提出几点基于情景教... 情景教学方法是一种适用于幼儿阅读教育的科学教学方法,有利于激发幼儿阅读兴趣,培养幼儿阅读思维。本文首先对情景教学方法在幼儿阅读教育中的适用性进行分析,并对幼儿阅读教育存在的现状问题进行探讨,在此基础上,提出几点基于情景教学法构建幼儿阅读教育模式的对策,以期提高幼儿阅读教育成效。 展开更多
关键词 情景教学法 幼儿阅读教育 教育模式构建
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把握好科学探究版块的复习
5
作者 杨孟利 《数理化学习》 2013年第1期37-38,共2页
随着课改的深入，以实验为基础的物理学科，注定了命题必需围绕实验探究这一根本主题．新课程标准下“实验与探究”题型的特点：以科学探究为主线，突出对“过程与方法”的考查；以科学探究为背景，强调对应用能力的考查；是否能把物理... 随着课改的深入，以实验为基础的物理学科，注定了命题必需围绕实验探究这一根本主题．新课程标准下“实验与探究”题型的特点：以科学探究为主线，突出对“过程与方法”的考查；以科学探究为背景，强调对应用能力的考查；是否能把物理概念和规律同具体的生活情境有机地联系起来是题目的难点．历年中考与平时的大小考试中，学生失分最多的往往是实验探究题．原因是多方面的：实验目的不明确，实验原理不明白， 展开更多
关键词 科学探究 实验探究 复习 版块 新课程标准 物理学科 应用能力 物理概念
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小白菊内酯、含笑内酯、(+)-Ainsliadimer A和大黄素对活化后肝星状细胞增殖能力的影响 被引量：3
6
作者 张兵兵 李三强 +6 位作者 王子仪 苏梦尧 洪晓敏 罗仁利 杨孟利 郑润月 王磊娜 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2023年第1期65-70,共6页
目的探讨小白菊内酯、含笑内酯、(+)-Ainsliadimer A和大黄素对活化后肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)增殖能力的影响。方法将大鼠HSC-T6细胞用含酒精的培养基诱导48 h使其活化;然后配置小白菊内酯、含笑内酯、(+)-Ainsliadime... 目的探讨小白菊内酯、含笑内酯、(+)-Ainsliadimer A和大黄素对活化后肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)增殖能力的影响。方法将大鼠HSC-T6细胞用含酒精的培养基诱导48 h使其活化;然后配置小白菊内酯、含笑内酯、(+)-Ainsliadimer A和大黄素不同浓度梯度含10%血清的DMEM培养基,分别培养活化后的HSC-T6,观察HSC-T6细胞的形态,以MTT法观察细胞增殖能力的变化。结果MTT结果显示,与对照组相比,小白菊内酯、含笑内酯、(+)-Ainsliadimer A和大黄素均可抑制活化后HSC的增殖(P<0.05),且抑制率呈浓度依赖关系。其中,(+)-Ainsliadimer A抑制细胞增殖的能力最强。结论小白菊内酯、含笑内酯、(+)-Ainsliadimer A和大黄素可能通过抑制活化的HSC增殖有效逆转酒精诱导的肝纤维化。 展开更多
关键词 小白菊内酯 含笑内酯 (+)-Ainsliadimer A 大黄素 肝星状细胞
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白细胞介素-6/信号传导与转录激活因子3信号通路在乙醇性肝纤维化性别差异中的作用研究 被引量：3
7
作者 洪晓敏 李三强 +6 位作者 王子怡 李前辉 程维刚 罗仁利 杨孟利 冯淑雅 吴俊菲 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1456-1460,共5页
目的研究白细胞介素-6/信号传导与转录激活因子3(IL-6/STAT3)信号通路在乙醇性肝纤维化性别差异中的作用。方法选择7~8周龄的C57BL/6N雌鼠和雄鼠各50只进行随机分为雌性对照组、雌性模型组、雄性对照组和雄性模型组,每组各25只。对照组... 目的研究白细胞介素-6/信号传导与转录激活因子3(IL-6/STAT3)信号通路在乙醇性肝纤维化性别差异中的作用。方法选择7~8周龄的C57BL/6N雌鼠和雄鼠各50只进行随机分为雌性对照组、雌性模型组、雄性对照组和雄性模型组,每组各25只。对照组用TP4030C Lieber-DeCarli液体饲料喂养8周,模型组用TP4030A Lieber-DeCarli液体饲料喂养8周,并且联合31.5%乙醇灌胃,剂量为5 g·kg^(-1),每周2次。用试剂盒检测各组小鼠的血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)酶活性和雌二醇(E_(2))、睾酮(T)浓度的变化,用天狼星红染色检测各组小鼠纤维化情况,用蛋白质印迹法检测IL-6/STAT3通路相关蛋白的表达水平。结果雌性对照组、雌性模型组、雄性对照组和雄性模型组的GPT酶活性分别为(8.46±3.30)、(49.65±17.35)、(9.96±3.29)和(82.44±10.76)U·L^(-1),GOT酶活性分别为(28.05±6.28)、(62.15±12.12)、(26.94±3.89)和(105.70±13.43)U·L^(-1),E2分别为(89.49±22.35)、(37.12±9.34)、(14.49±4.95)和(7.31±2.47)pg·mL^(-1),T分别为(3.55±2.33)、(0.75±0.30)、(106.10±22.52)和(47.60±7.86)ng·mL^(-1),胶原纤维光密度值分别为68.87±5.75、191.30±7.72、78.07±12.00和246.70±9.29,α-平滑肌肌动蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、1.36±0.26、1.18±0.13和1.61±0.17,IL-6蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、1.93±0.54、1.34±0.14和4.13±0.83,IL-6受体(IL-6R)蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、2.17±0.51、1.39±0.45和2.58±0.61,磷酸化STAT3蛋白相对表达水平分别为1.00±0.00、2.94±0.14、1.34±0.18和3.60±0.88。对照组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);雄性模型组的上述指标与雌性模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论在小鼠乙醇性肝纤维化中,与雌性小鼠相比,雄性小鼠肝中IL-6的水平显著升高,IL-6与可溶性受体IL-6R形成复合物,胞内STAT3聚集和磷酸化增多,进一步激活IL-6/STAT 展开更多
关键词 乙醇性肝纤维化 性别差异 性激素 α-平滑肌肌动蛋白 白细胞介素-6/信号传导与转录激活因子3信号通路
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抑制解整合素金属蛋白酶8表达对酒精性肝纤维化小鼠炎症损伤的机制
8
作者 杨孟利 李三强 +3 位作者 张凯杰 冯家阳 李昊远 许畅 《解剖学报》 CAS CSCD 2024年第6期746-752,共7页
目的探讨抑制解整合素金属蛋白酶8(ADAM8)的表达对酒精性肝纤维化小鼠炎症损伤的机制。方法C57BL/6N雄性小鼠随机分为对照组、酒精组和质粒组,每组各10只。酒精组和质粒组日常喂养酒精液体饲料,并灌胃31.5%乙醇(5 g/kg,2次/周),对照组... 目的探讨抑制解整合素金属蛋白酶8(ADAM8)的表达对酒精性肝纤维化小鼠炎症损伤的机制。方法C57BL/6N雄性小鼠随机分为对照组、酒精组和质粒组,每组各10只。酒精组和质粒组日常喂养酒精液体饲料,并灌胃31.5%乙醇(5 g/kg,2次/周),对照组喂养对照液体饲料,并灌胃等量生理盐水;质粒组小鼠尾静脉注入抑制ADAM8基因的有效质粒ADAM8-小向导RNA3(sgRNA3)(2 g/kg,2次/周),酒精组尾静脉注射等量生理盐水,持续诱导8周进行小鼠酒精性肝纤维化模型制作。眼球取血后处死小鼠并分离肝脏,天狼星红和HE染色检测肝纤维化和损伤情况;免疫组织化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)与ADAM8的表达;Real-time PCR法检测ADAM8 mRNA的表达;Western blotting检测ADAM8、转化生长因子β1(TGF-β1)、p-p38 MAPK及热休克蛋白27(HSP27)的表达;生化法检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活性;ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)与白细胞介素1(IL-1)浓度。结果酒精组胶原纤维容积分数和肝损伤积分增加,α-SMA和collagen-Ⅰ的阳性面积率升高;ADAM8 mRNA和ADAM8蛋白的表达增加,其阳性面积率升高;AST、ALT、TNF-α和IL-1水平升高;TGF-β1、p-p38MAPK及HSP27的蛋白表达增加。质粒组胶原纤维容积分数和肝损伤积分减少,α-SMA和collagenⅠ的阳性面积率降低;ADAM8 mRNA和ADAM8蛋白的表达减少,其阳性面积率降低;AST、ALT、TNF-α和IL-1水平降低;TGF-β1、p-p38MAPK及HSP27的蛋白表达减少。结论下调ADAM8的表达可以通过抑制TGF-β1/p38MAPK信号通路减轻炎症损伤,从而改善小鼠酒精性肝纤维化。 展开更多
关键词 解整合素金属蛋白酶8 酒精性肝纤维化 炎症 损伤 转化生长因子β1/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路 免疫印迹法 小鼠
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