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布雷菲德菌素A诱导人肝癌细胞凋亡的体外研究
1
作者 高文婷 李明虹 +4 位作者 李丹 刘艳飞 李星道 刘希冲 白剑英 《毒理学杂志》 CAS 2023年第5期398-402,408,共6页
目的探讨布雷菲德菌素A(Brefeldin A,BFA)对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的影响。方法用完全培养基(阴性对照组)、0.1%DMSO、0.25 mg/L BFA、1 mg/L衣霉素(Tunicamycin,TM)和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM处理HepG2细胞24 h,MTT法测定细胞活性,... 目的探讨布雷菲德菌素A(Brefeldin A,BFA)对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的影响。方法用完全培养基(阴性对照组)、0.1%DMSO、0.25 mg/L BFA、1 mg/L衣霉素(Tunicamycin,TM)和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM处理HepG2细胞24 h,MTT法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞各组凋亡率,吖啶橙检测试剂盒(AO荧光染色试剂)检测细胞凋亡小体,Western blot法检测细胞内凋亡相关蛋白的表达水平,qRT-PCR法检测细胞内凋亡相关基因的表达。结果形态学观察发现,与阴性对照组相比,0.25 mg/L BFA组细胞明显变得稀疏。细胞活性实验发现0.25 mg/L BFA组,0.25 mg/L BFA与1 mg/L TM联合处理组细胞存活率均明显降低(F=59.766,P<0.05)。流式细胞仪分析发现,0.25 mg/L BFA组,0.25 mg/L BFA与1 mg/L TM联合处理组细胞早期凋亡率明显升高(F=20.738,P<0.05)。AO凋亡小体检测发现,0.25 mg/L BFA组和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM联合组人肝癌细胞HepG2细胞内出现核固缩现象。从蛋白水平来看,与对照组相比,0.25 mg/L BFA组和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM联合组硬酯酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)蛋白表达明显减少,甚至无法检出,聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶-1(poly-ADP-ribose polymerase-1,PARP-1)、半胱氨酸蛋白酶12(cysteine aspartic acid specific protease-12,Caspase-12)蛋白表达升高,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3)活性形式cleaved Caspase-3被检出。基因检测结果显示,与对照组相比,0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM联合组SCD1 mRNA表达水平升高(F=19.229,P<0.05);0.25 mg/L BFA组和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM联合组PARP-1、Caspase-12和Caspase-3 mRNA表达水平均明显升高(F=627.475,F=68.640,F=238.742,P<0.05)。结论0.25 mg/L BFA可抑制SCD1蛋白表达,且促进人肝癌细胞凋亡,1 mg/L TM可增强其凋亡诱导作用。 展开更多
关键词 布雷菲德菌素A 肝癌细胞 硬脂酰辅酶A去饱和酶1 细胞凋亡 半胱氨酸蛋白酶12
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MEHP对正常肝细胞脂肪酸分解代谢相关基因的影响
2
作者 李肖 李星道 +3 位作者 李明虹 陈阳 高文婷 白剑英 《山西医科大学学报》 CAS 2023年第12期1572-1576,共5页
目的 探讨邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯(mono-(2-ethylhexyl) phthalate,MEHP)对正常肝细胞HL-7702脂肪酸分解代谢相关基因的影响。方法 将HL-7702细胞分别暴露于不同浓度MEHP(0,0.01,1,10,100μmol/L)和油酸(1 mmol/L OA)24 h以及48 h,... 目的 探讨邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯(mono-(2-ethylhexyl) phthalate,MEHP)对正常肝细胞HL-7702脂肪酸分解代谢相关基因的影响。方法 将HL-7702细胞分别暴露于不同浓度MEHP(0,0.01,1,10,100μmol/L)和油酸(1 mmol/L OA)24 h以及48 h,未暴露MEHP的细胞作为阴性对照组,用MTT实验检测细胞活性,qRT-PCR法检测染毒后细胞内miRNA-34a的转录水平和细胞内脂肪酸分解代谢相关基因(SIRT1、PPARα和CPT1A)表达的转录水平。结果 与阴性对照组相比,油酸组染毒24 h细胞存活率降低(P<0.05),不同浓度MEHP组染毒24 h和48 h细胞存活率没有明显改变(P>0.05)。与阴性对照组相比,染毒24 h,10,100μmol/LMEHP组和油酸组miRNA-34a表达水平明显降低(P<0.05);染毒48 h,0.01μmol/L MEHP组miRNA-34a表达水平明显升高(P<0.05)。与阴性对照组相比,0.01,1,10,100μmol/L MEHP组和油酸组细胞内SIRT1、PPARα和CPT1A mRNA表达水平均无明显变化。结论 不同浓度MEHP均未对肝细胞的细胞活性产生影响,MEHP可降低miRNA-34a表达水平,但是并不能引起脂肪酸分解代谢相关基因mRNA水平改变。 展开更多
关键词 邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯 HL-7702细胞 非酒精性脂肪肝 脂肪酸代谢 基因转录
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亚硫酸钠暴露对人正常肝细胞自噬的影响及其作用机制
3
作者 李明虹 杨舒筠 +5 位作者 李丹 李星道 刘希冲 高文婷 姬晓彤 白剑英 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期401-408,共8页
目的探讨亚硫酸钠(Na_(2)SO_(3))暴露对人正常肝细胞自噬的影响及其作用机制。方法人正常肝细胞HL-7702分别暴露于含10%胎牛血清的DMEM培养基(阴性对照组)、0.2%DMSO(溶剂对照组)、Na_(2)SO_(3)暴露组(0.1、1、2.5、5 mmol/L)和20 mmol/... 目的探讨亚硫酸钠(Na_(2)SO_(3))暴露对人正常肝细胞自噬的影响及其作用机制。方法人正常肝细胞HL-7702分别暴露于含10%胎牛血清的DMEM培养基(阴性对照组)、0.2%DMSO(溶剂对照组)、Na_(2)SO_(3)暴露组(0.1、1、2.5、5 mmol/L)和20 mmol/L CCl_(4)(阳性对照组)2 h、48 h。采用CCK-8法检测不同浓度Na_(2)SO_(3)暴露2 h、48 h后各组细胞存活率;免疫荧光法检测Na_(2)SO_(3)各浓度暴露组2 h、48 h自噬相关蛋白LC3B表达水平;Western blotting检测Na_(2)SO_(3)各浓度暴露组2 h、48 h自噬相关蛋白LC3B、p62和AMPK,细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达水平;荧光素酶化学发光法测定HL-7702细胞内Na_(2)SO_(3)各浓度暴露组2 h、48 h ATP含量。结果与阴性对照组比较,1、2.5、5 mmol/L Na_(2)SO_(3)暴露组2 h、48 h细胞存活率随Na_(2)SO_(3)浓度的升高而降低(P<0.05);阳性对照组细胞存活率也明显下降(P<0.05)。与阴性对照组比较,2.5 mmol/L、5 mmol/L Na_(2)SO_(3)暴露组和阳性对照组在48 h时,HL-7702细胞中LC3B免疫荧光强度明显减弱。与阴性对照组比较,HL-7702细胞中LC3B-Ⅱ、p62蛋白在48 h 5 mmol/L Na_(2)SO_(3)暴露组表达显著降低(P<0.05);活化的caspase-3蛋白在48 h 1、2.5、5 mmol/L Na_(2)SO_(3)暴露组表达升高(P<0.05)。与阴性对照组比较,暴露2 h、48 h时0.1、1、2.5、5 mmol/L Na_(2)SO_(3)暴露组HL-7702细胞中ATP含量显著升高(P<0.05)。结论高浓度Na_(2)SO_(3)(5 mmol/L)可能抑制人正常肝细胞自噬而致细胞损伤,其机制可能是通过降低LC3B和p62蛋白表达来实现的。 展开更多
关键词 亚硫酸钠暴露 人正常肝细胞 自噬 影响 作用机制
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布雷菲德菌素A对HepG2细胞自噬的诱导作用
4
作者 李丹 李明虹 +4 位作者 李星道 刘希冲 高文婷 余红梅 白剑英 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期3345-3352,共8页
为探讨新型抗癌药物布雷菲德菌素A(BFA)诱导肝癌细胞发生自噬性死亡的作用机制,以HepG2细胞作为研究对象,将细胞分成阴性对照组、不同浓度BFA组和阳性对照组(雷帕霉素),采用MTT法测定HepG2细胞活性;采用免疫荧光法检测细胞内自噬标志蛋... 为探讨新型抗癌药物布雷菲德菌素A(BFA)诱导肝癌细胞发生自噬性死亡的作用机制,以HepG2细胞作为研究对象,将细胞分成阴性对照组、不同浓度BFA组和阳性对照组(雷帕霉素),采用MTT法测定HepG2细胞活性;采用免疫荧光法检测细胞内自噬标志蛋白LC3的表达和细胞核形态学改变;采用Western Blot法检测细胞内激活转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、聚(腺苷二磷酸-核糖)多聚酶(PARP)、增殖细胞核抗原(PCNA)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬相关蛋白5(Atg5)、自噬相关蛋白6(Atg6/Beclin-1)的表达水平.结果表明,BFA可引起HepG2细胞内自噬特征蛋白LC3-Ⅱ、Atg5、Beclin-1的蛋白表达水平明显增加;同时引起HepG2细胞活性降低、细胞数量减少、细胞核固缩和变形.说明BFA可能引起HepG2细胞发生自噬性细胞死亡.进一步探讨自噬诱导途径发现,BFA引起HepG2细胞内ATF4、CHOP的蛋白表达水平增加.BFA可能通过诱导ATF4和CHOP的过表达引起HepG2细胞发生自噬性细胞死亡. 展开更多
关键词 布雷菲德菌素A HEPG2细胞 激活转录因子4 C/EBP同源蛋白 自噬性细胞死亡
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甲醛对HepG2细胞内胆固醇外排相关基因表达的影响
5
作者 高文婷 姜雪霞 +5 位作者 谭清 刘希冲 李明虹 李星道 郭戍辰 白剑英 《山西医科大学学报》 CAS 2022年第3期327-331,共5页
目的 观察甲醛染毒对人肝癌细胞(HepG2)内胆固醇外排相关基因表达的影响。方法 分别以0,0.02,0.10,0.50 mmol/L甲醛处理HepG2 24,48 h,用MTT法检测细胞活性;分别以0,0.05,0.10,0.20 mmol/L甲醛处理HepG2 24,48 h,用qRT-PCR法检测细胞内... 目的 观察甲醛染毒对人肝癌细胞(HepG2)内胆固醇外排相关基因表达的影响。方法 分别以0,0.02,0.10,0.50 mmol/L甲醛处理HepG2 24,48 h,用MTT法检测细胞活性;分别以0,0.05,0.10,0.20 mmol/L甲醛处理HepG2 24,48 h,用qRT-PCR法检测细胞内胆固醇外排相关基因三磷酸腺苷结合盒A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒G1(ABCG1)、三磷酸腺苷结合盒G5(ATP-binding cassette transporter G5,ABCG5)、三磷酸腺苷结合盒G8(ABCG8)mRNA的表达水平。结果 与阴性对照相比,0.50 mmol/L甲醛染毒24,48 h均可明显降低HepG2细胞活性(P<0.05)。与阴性对照相比,0.20 mmol/L甲醛染毒24,48 h均使ABCA1 mRNA表达水平增加(P<0.05);0.05,0.10,0.20 mmol/L甲醛染毒24 h或0.20 mmol/L甲醛染毒48 h均使ABCG1 mRNA表达水平增加(P<0.05);0.20 mmol/L甲醛染毒24,48 h均使ABCG5 mRNA表达水平增加(P<0.05);0.20 mmol/L甲醛染毒24 h,或0.10,0.20 mmol/L甲醛染毒48 h均使ABCG8 mRNA表达水平增加(P<0.05)。结论 甲醛处理后HepG2细胞内胆固醇外排相关ABCA1、ABCG1、ABCG5、ABCG8 mRNA的表达增加,甲醛未抑制HepG2细胞内胆固醇外排,因此胆固醇外排减少不是甲醛引起肝脏损伤的原因。 展开更多
关键词 甲醛 HEPG2细胞 胆固醇代谢 ABC运转蛋白
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