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雨生红球藻钙依赖蛋白激酶(CDPK)家族鉴定与表达分析 被引量：1
1
作者 李亚男 张豪杰 +7 位作者 梁梦静 罗涛 李旺宁 张春辉 季春丽 李润植 薛金爱 崔红利 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期300-312,共13页
【目的】钙依赖蛋白激酶(CDPK或CPK)广泛参与植物生长发育和环境胁迫响应。为探究CDPK基因在雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)生长发育及虾青素积累中的功能,对HpCDPK基因家族进行鉴定和表达分析。【方法】利用生物信息学方法鉴定... 【目的】钙依赖蛋白激酶(CDPK或CPK)广泛参与植物生长发育和环境胁迫响应。为探究CDPK基因在雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)生长发育及虾青素积累中的功能,对HpCDPK基因家族进行鉴定和表达分析。【方法】利用生物信息学方法鉴定雨生红球藻HpCDPK基因家族成员,分析其编码蛋白的理化特性、系统进化、保守基序和功能结构域,以及缺氮等胁迫条件下HpCDPK成员基因的表达谱。【结果】结果表明,共鉴定7个HpCDPK基因家族成员,所有HpCDPK蛋白都含有典型EF-hand基序和蛋白激酶结构域。系统发育分析表明,这些HpCDPK与来自莱茵衣藻的CrCDPK聚为一类,与高等植物拟南芥的AtCDPK分开,暗示在进化过程中发生了种属特异性的基因复制事件。转录组数据分析表明,HpCDPK基因表达受到多种胁迫诱导,其中HpCDPK7基因转录水平在缺氮条件下上调最为明显。此外,HpCDPK与类胡萝卜素合成相关基因的表达相关性分析结果显示,HpCDPK与多个类胡萝卜素合成相关基因表达密切关联,特别是HpCDPK2与虾青素合成关键基因(BKT和BCH)的表达显著正相关(P<0.05)。【结论】本研究鉴定了7个HpCDPK基因,HpCDPK7基因在缺氮条件下的表达上调最为明显,HpCDPK2可能在类胡萝卜素及虾青素合成积累中发挥重要调控作用。研究结果为后续深入解析HpCDPK介导雨生红球藻胁迫响应和类胡萝卜素合成积累的功能及分子机制提供参考依据。 展开更多
关键词 雨生红球藻 钙依赖性蛋白激酶 序列分析 表达模式 非生物逆境
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莱茵衣藻蓝光受体植物类型隐花色素CRY突变体的表型鉴定 被引量：2
2
作者 李旺宁 张豪杰 +7 位作者 李亚男 梁梦静 季春丽 张春辉 李润植 崔玉琳 秦松 崔红利 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期243-253,共11页
以莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)野生株(CC5325)和植物类型CRY突变株(crcry)为研究对象,探究其在正常光照CK(Control)与蓝光BL(Blue light)培养条件下的表型差异。PCR检测表明,crcry突变株在编码区插入含有巴龙霉素抗性基因AphV... 以莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)野生株(CC5325)和植物类型CRY突变株(crcry)为研究对象,探究其在正常光照CK(Control)与蓝光BL(Blue light)培养条件下的表型差异。PCR检测表明,crcry突变株在编码区插入含有巴龙霉素抗性基因AphVIII的表达盒。以巴龙霉素为筛选条件的平板和液体培养体系进一步验证,crcry突变株中插入了AphVIII抗性基因并成功表达。表型鉴定表明,在CK培养条件下,野生株CC5325和突变株crcry在生长、色素、光合及油脂合成等方面没有显著差异;但是在BL条件下,突变株crcry的生长受到明显抑制,藻液颜色变黄;单位细胞叶绿素a、叶绿素b及总色素含量显著下降,相反,总类胡萝卜素含量明显增高;光合系统受到严重抑制,以及总脂含量显著降低。植物类型cry参与莱茵衣藻蓝光响应过程。 展开更多
关键词 莱茵衣藻 隐花色素 蓝光 突变株 表型鉴定
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雨生红球藻蓝光受体向光素(PHOT)互作蛋白鉴定及烟草异源表达的生理效应 被引量：1
3
作者 李旺宁 李亚男 +7 位作者 梁梦静 张春辉 季春丽 李润植 崔玉琳 秦松 薛金爱 崔红利 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1300-1310,共11页
向光素(PHOT)是植物和绿藻特有的蓝光受体,鉴定PHOT的互作蛋白及探究其功能为阐明PHOT介导的信号途径与生理功能奠定基础。本研究采用酵母双杂交技术从雨生红球藻cDNA文库中筛选HaePHOT的候选互作蛋白,共获得23个阳性克隆,其中4个克隆... 向光素(PHOT)是植物和绿藻特有的蓝光受体,鉴定PHOT的互作蛋白及探究其功能为阐明PHOT介导的信号途径与生理功能奠定基础。本研究采用酵母双杂交技术从雨生红球藻cDNA文库中筛选HaePHOT的候选互作蛋白,共获得23个阳性克隆,其中4个克隆注释为DnaJ。利用RNA-Seq数据,对雨生红球藻中HaePHOT与DnaJ的表达模式进行相关性分析,发现二者呈很强的正相关;进一步分析HaePHOT或DnaJ与虾青素合成及积累的关键基因(PSY、PDS、LYCB、BKT、BCH、CYP97B、KAS、FAD)表达量的相关性,发现HaePHOT及DnaJ分别与LYCB、BKT、BCH、CYP97B呈正相关,而与PSY、PDS、KAS、FAD呈负相关。瞬时转化烟草结果显示,在正常光(白光)下,野生烟草和过表达HaePHOT的烟草植株叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素差异不显著;但蓝光下差异显著,且转基因烟草色素含量较高。qRT-PCR结果显示叶绿素a加氧酶(CAO)、原叶绿素酸酯氧化还原酶(POR)、八氢番茄红素合酶(PSY)、八氢番茄红素脱氢酶(PDS)和番茄红素β-环化酶(LYCB)编码基因在蓝光照射及转基因烟草中的表达显著提高,均与叶绿素和类胡萝卜素含量的变化趋势一致。这些发现为后续解析HaePHOT及其互作蛋白介导的调控机制提供了理论基础。 展开更多
关键词 雨生红球藻(Haematococcus pluvialis) 向光素(PHOT) 互作蛋白 烟草异源表达 生理效应
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α-酮戊二酸及其钠盐对雨生红球藻生长和虾青素积累的促进作用
4
作者 张豪杰 李旺宁 +7 位作者 梁梦静 李亚男 张春辉 季春丽 李润植 崔玉琳 秦松 崔红利 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期139-148,共10页
雨生红球藻是已知虾青素(astaxanthin, AST)含量最高的生物,是理想的细胞制备工厂。尽管研究表明添加α-酮戊二酸(OG,α-oxoglutarate)能有效促进混养条件下雨生红球藻AST积累,但在自养条件下是否也有类似效果不清楚。研究以自养雨生红... 雨生红球藻是已知虾青素(astaxanthin, AST)含量最高的生物,是理想的细胞制备工厂。尽管研究表明添加α-酮戊二酸(OG,α-oxoglutarate)能有效促进混养条件下雨生红球藻AST积累,但在自养条件下是否也有类似效果不清楚。研究以自养雨生红球藻为对象,在正常(CK)、高光(HL)、缺氮(DN)和高光-缺氮双重逆境(HL-DN)下从细胞生长和AST积累两方面评估OG及其钠盐(OG-2Na)的促进作用。结果显示,添加OG或OG-2Na显著缓解HL、DN和HL-DN胁迫对细胞生长的抑制作用,培养至6 d的生物量分别为0.58、0.53和0.38 g/L,约是未添加组的2.0倍。添加OG或OG-2Na显著促进AST积累。培养至6 d,在HL、DN和HL-DN下, AST含量分别达到13.62、19.51和28.29 mg/g,是未添加组的2.39、1.16和1.35倍。同时在胁迫条件下,添加OG或OG-2Na有效提高单位细胞中AST含量。针对OG和OG-2Na添加,最大单位细胞AST含量分别出现在HL和HL-DN条件下,达到53.72和60.58 pg/cell,是对照的3.09和2.83倍。在CK下,添加10.0 mg/L的OG或OG-2Na,其AST含量显著高于单独的胁迫条件。上述结果证实OG或OG-2Na不但可减少HL、DN和HL-DN胁迫对红球藻细胞生长的抑制、显著提高其AST含量,是一种在提高AST产量的有效途径。 展开更多
关键词 雨生红球藻 Α-酮戊二酸 生长 虾青素积累 促进作用
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莱茵衣藻丝/苏氨酸蛋白激酶突变株蓝光响应的表征
5
作者 李旺宁 梁梦静 +7 位作者 杨泽 李亚男 张春辉 季春丽 李润植 秦松 薛金爱 崔红利 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期4563-4579,共17页
为研究莱茵衣藻丝/苏氨酸蛋白激酶(silk/threonine protein kinase,STK)介导藻细胞蓝光响应的分子机制,本文对蓝光胁迫下莱茵衣藻STK突变株系crstk11(AphvIII盒反向插入stk11基因编码区)进行表型鉴定及转录组分析。表型鉴定显示,正常光... 为研究莱茵衣藻丝/苏氨酸蛋白激酶(silk/threonine protein kinase,STK)介导藻细胞蓝光响应的分子机制,本文对蓝光胁迫下莱茵衣藻STK突变株系crstk11(AphvIII盒反向插入stk11基因编码区)进行表型鉴定及转录组分析。表型鉴定显示,正常光(白光)下,野生型株CC5325与突变株crstk11的生长和色素含量差异较小;蓝光抑制了crstk11藻细胞生长和叶绿素合成,但显著促进类胡萝卜素积累。转录组分析显示,蓝光处理4 d,突变株(STK4)vs.野生型(wild type,WT4)共检测到差异表达基因(differential expression genes,DEGs)860条(559个上调,301个下调)。高蓝光处理8 d,STK8 vs.WT8共获得1088个DEGs(468个上调,620个下调)。KEGG富集分析发现,与CC5325相比,crstk11蓝光响应基因主要参与胞内光合作用催化活性、碳代谢和色素合成等。其中,上调基因包括psaA、psaB和psaC,psbA、psbB、psbC、psbD、psbH和psbL,petA、petB和petD,以及编码ATP合成酶α、β和c亚基的基因。下调基因有petF和petJ等。研究揭示了莱茵衣藻蛋白激酶CrSTK11可能通过介导光合作用、色素合成和碳代谢参与藻细胞蓝光响应,这为深入解析藻类光胁迫抗性机制提供了新知识。 展开更多
关键词 莱茵衣藻 丝/苏氨酸蛋白激酶 蓝光胁迫 转录组分析 差异表达基因
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凸形底盲孔车削加工方法研究
6
作者 陈登峰 李旺宁 李钊 《海峡科技与产业》 2018年第9期21-22,共2页
随着机械加工技术的快速发展,航空企业对零件结构提出了更多需求,尤其是异型孔的加工技术和质量要求也越来越严格。异型盲孔是异型孔加工中最为复杂的组成部分,属于半封闭式切削加工工艺的一种,倘若孔底结构为凸字形,则会进一步压缩机... 随着机械加工技术的快速发展,航空企业对零件结构提出了更多需求,尤其是异型孔的加工技术和质量要求也越来越严格。异型盲孔是异型孔加工中最为复杂的组成部分,属于半封闭式切削加工工艺的一种,倘若孔底结构为凸字形,则会进一步压缩机械加工空间,条件更为恶劣,难度不言而喻。 展开更多
关键词 机械加工 异型孔 盲孔 半封闭式 切削凸字形
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农村初中生思想品德教育存在的问题与对策
7
作者 李旺宁 《新一代（理论版）》 2021年第2期74-74,共1页
新课标改革是针对原有课程,为应对快速发展的社会节奏以及跟上时代发展的脚步,对于原有课程,在不改变它的教育本质的前提下,对于教学模式,教育理念,教育要求等进行的改革,主要是为了培养出符合新时代要求的人才。在新课标改革逐渐深入... 新课标改革是针对原有课程,为应对快速发展的社会节奏以及跟上时代发展的脚步,对于原有课程,在不改变它的教育本质的前提下,对于教学模式,教育理念,教育要求等进行的改革,主要是为了培养出符合新时代要求的人才。在新课标改革逐渐深入的现在,对初中生的思想品德教育显得非常重要与关键。本文主要探讨在新课标的改革背景下,教师如何在互联网时代对初中学生的思想品德进行教育,培养好初中生的正确行为习惯与风气,打造好一个积极向上、充满正能量的价值观。 展开更多
关键词 教学思考 农村初中学生 思想品德教育
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