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人重组白细胞介素11在毕氏酵母系统中的表达及纯化 被引量:8
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作者 许志祥 +4 位作者 黄伟达 闵太善 谢炜 徐颖 张学光 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期127-131,共5页
目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达人白细胞介素-11( rhIL-11),便于进一步开发。方法 以人工设计合成的 rhIL-11基因,构建表达载体 pPICZα A-IL-11,经线性化后电转化导入毕氏酵母菌株 KM71,甲醇诱导表达,用 EL... 目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达人白细胞介素-11( rhIL-11),便于进一步开发。方法 以人工设计合成的 rhIL-11基因,构建表达载体 pPICZα A-IL-11,经线性化后电转化导入毕氏酵母菌株 KM71,甲醇诱导表达,用 ELISA和 SDS-PAGE检测发酵上清中 IL-11的抗原性和表达量,用 IL-11依赖的 B9-11细胞株分析其生物学活性,采用疏水层析、离子交换和凝胶过滤纯化发酵上清中的 IL-11。 结果 序列分析表明,克隆载体中 IL-11人工基因序列与设计相符;基因工程菌株 KM71-2424在摇瓶培养上清中 IL-11的表达量超过 60 mg/L,生物学活性测定显示其比活性为 5.5× 107 U/mg,而标准品的生物学活性为 2.2× 107 U/mg。经过三步层析纯化得到电泳纯的 rhIL-11蛋白质。结论 成功获得 IL-11人工基因和稳定分泌重组蛋白的基因工程菌株 KM71-2424,该重组蛋白的生物学活性显著高于大肠杆菌表达的标准品,并获得较高纯度的重组蛋白。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-11 毕氏酵母 表达 分离 纯化
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细胞因子与急性辐射损伤的防护和治疗 被引量:6
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作者 张学光 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期397-400,共4页
关键词 急性 辐射损伤 防护 治疗 细胞因子
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Flt3配体联合其他细胞因子对受照射小鼠免疫系统的作用研究 被引量:5
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作者 许志祥 张学光 +6 位作者 徐颖 李颖 丁天 赵仁亮 於葛华 强亦忠 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期86-89,共4页
目的 研究Flt3配体 (FL)在受照射小鼠免疫系统恢复中的作用。方法 采用F 80 0血细胞自动计数仪行外周血细胞计数及白细胞分类计数 ,流式细胞仪分析外周血淋巴细胞表型。结果 照射前应用FL或照射后联合应用FL、IL 11、EPO和G CSF等细... 目的 研究Flt3配体 (FL)在受照射小鼠免疫系统恢复中的作用。方法 采用F 80 0血细胞自动计数仪行外周血细胞计数及白细胞分类计数 ,流式细胞仪分析外周血淋巴细胞表型。结果 照射前应用FL或照射后联合应用FL、IL 11、EPO和G CSF等细胞因子 ,能有效地促进受照小鼠外周血白细胞和淋巴细胞的恢复 ,对CD8+ 细胞的恢复作用尤为明显 ,同时使CD4 + CD8+ 细胞比值较早恢复正常 ,提高受照射小鼠的生存率。结论 FL不但能促进辐射损伤机体造血功能的恢复 ,对免疫系统的恢复亦具有重要的作用。FL单独或与其他细胞因子联合应用 。 展开更多
关键词 FLT3配体 细胞因子 小鼠 免疫系统 作用研究 辐射损伤
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重组人Flt3配体在毕氏酵母中的表达及其对恶性造血细胞的体外作用 被引量:4
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作者 许志祥 徐颖 +5 位作者 李颖 施勤 蒋令瑜 黄伟达 张学光 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期595-599,共5页
目的 用毕氏酵母 (Pichiapastoris)表达人可溶性Flt3配体 (rhFL) ,并观察rhFL对恶性造血细胞增殖的作用 ;探讨地塞米松 (DXM)对Flt3受体 (Flt3R)表达及rhFL介导的恶性造血细胞增殖的影响。方法 人工合成FL基因片段 ,经基因重组技术获... 目的 用毕氏酵母 (Pichiapastoris)表达人可溶性Flt3配体 (rhFL) ,并观察rhFL对恶性造血细胞增殖的作用 ;探讨地塞米松 (DXM)对Flt3受体 (Flt3R)表达及rhFL介导的恶性造血细胞增殖的影响。方法 人工合成FL基因片段 ,经基因重组技术获得重组质粒pPICZα FL ,电转化毕氏酵母 ,筛选分泌rhFL的基因工程菌株。用流式细胞仪测定恶性造血细胞表面Flt3R的表达 ,用MTT法分析rhFL对恶性造血细胞的增殖作用及DXM的影响。结果 经筛选 ,获得稳定分泌rhFL的基因工程菌株 ,表达量达 30mg/L。rhFL在 10~ 10 0ng/ml时 ,刺激Raji和HL 6 0细胞的增殖 ,但对绝大多数的恶性造血细胞无刺激作用 ;18株恶性造血细胞株中 5株细胞表达Flt3R ;对部分病理类型的白血病新鲜标本的研究发现 ,6 0 %患者的外周血或骨髓细胞表达Flt3R ,急性单核细胞白血病及急性淋巴细胞白血病患者Flt3R的阳性率较高 ,但仅有部分患者的白血病细胞在体外对FL的刺激有增殖效应。DXM可抑制rhFL对Raji、HL 6 0细胞及部分新鲜白血病标本的白血病细胞的刺激增殖作用。结论 应用毕氏酵母表达具有生物学活性的rhFL ,rhFL可刺激Raji、HL 6 0和部分白血病患者白血病细胞在体外的增殖。DXM通过降低Flt3R的表达 ,抑制rhFL介导的恶性造血细胞的增殖。 展开更多
关键词 重组人Flt3配体 造血细胞 地塞米松 白血病
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人IL-8酶联免疫测定法在白血病标本检测中的应用 被引量:3
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作者 蒋滢 +4 位作者 张毅 陆宇新 刘继明 学东 张学光 《苏州医学院学报》 1996年第4期778-780,共3页
采用酶标ELISA夹心法,建立了一种简便、灵敏、特异的检测标本中IL-8含量的方法,其检测下限达13.7pg/ml。运用此法检测了20例正常人血浆标本、30例白血病病人血浆标本和11例白血病病人脑脊液标本,发现白血病... 采用酶标ELISA夹心法,建立了一种简便、灵敏、特异的检测标本中IL-8含量的方法,其检测下限达13.7pg/ml。运用此法检测了20例正常人血浆标本、30例白血病病人血浆标本和11例白血病病人脑脊液标本,发现白血病病人标本中IL-8含量明显高于正常人标本(P<0.05),为临床和科研上检测标本中IL-8含量提供了一个手段。 展开更多
关键词 白细胞介素 白血病 ELISA
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重组人Flt3配体对微血管内皮细胞的抗辐射作用研究 被引量:1
6
作者 许志祥 张学光 +4 位作者 强亦忠 徐颖 施勤 丁天 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期286-289,共4页
目的 研究Flt3配体 (FL)对人微血管内皮细胞系细胞 (ECV)的抗辐射作用及其可能的作用机理。方法 用流式细胞仪分析ECV表面Flt3受体的表达 ;用MTT法观察FL对受照射ECV增殖的影响 ;用AnnexinV PI方法测定细胞凋亡 ,用RT PCR方法分析细... 目的 研究Flt3配体 (FL)对人微血管内皮细胞系细胞 (ECV)的抗辐射作用及其可能的作用机理。方法 用流式细胞仪分析ECV表面Flt3受体的表达 ;用MTT法观察FL对受照射ECV增殖的影响 ;用AnnexinV PI方法测定细胞凋亡 ,用RT PCR方法分析细胞凋亡基因bax和Bcl 2的改变。结果 ECV表达Flt3受体 ,FL能激发ECV增殖 ,ECV经 15Gy的照射后 ,FL能有效地拮抗照射对ECV增殖的抑制作用 ;同时照射后ECV的bax基因表达增加 ,bcl 2基因表达轻度降低。FL通过抑制bax基因的表达 ,降低辐射引起的ECV细胞凋亡。结论 FL通过抑制细胞凋亡 ,减轻辐射引起的ECV的损伤 ,可能在辐射损伤患者造血微环境的保护中具有应用价值。 展开更多
关键词 FLT3配体 造血微环境 微血管内皮细胞 抗辐射作用 细胞凋亡 细胞增殖
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内皮抑制素抑制TNFα和IL-8介导的血管内皮细胞增殖及其表面粘附分子的表达 被引量:1
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作者 徐颖 许志祥 +6 位作者 於葛华 张维延 周照华 刘继明 蒋令瑜 张学光 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期45-48,共4页
目的:探讨重组人内皮抑制素对 TNFα和IL-8介导的人血管内皮细胞株(endothelial cell of vessels,ECV)细胞增殖的抑制作用,并观察内皮抑制素对ECV表面粘附分子表达的影响。方法:用MTT法... 目的:探讨重组人内皮抑制素对 TNFα和IL-8介导的人血管内皮细胞株(endothelial cell of vessels,ECV)细胞增殖的抑制作用,并观察内皮抑制素对ECV表面粘附分子表达的影响。方法:用MTT法测定ECV的增殖;用间接免疫荧光法,在流式细胞仪上测定 ECV表面粘附分子的表达。结果:内皮抑制素浓度在 100~10000 ng/ml时,能显著抑制ECV的增殖(P<0.01),并抑制IL-8和TNFα介导的ECV增殖,且呈剂量依赖性关系。内皮抑制素在 100~1000 ng/ml时可抑制内皮细胞表面CD62E、CD40等粘附分子的表达。结论:内皮抑制素不但可抑制血管内皮细胞的增殖,控制肿瘤新生血管的形成,而且可抑制血管内皮细胞表面粘附分子的表达,对肿瘤的转移亦可能起抑制作用。 展开更多
关键词 内皮抑制素 内皮细胞 肿瘤转移 细胞粘附分子 TNFΑ IL-8 细胞增殖
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三株抗rhIL-6单克隆抗体识别表位的鉴定及IL-6的双单克隆抗体夹心RIA检测方法的建立 被引量:1
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作者 李明 张学光 +4 位作者 钱黎 邱玉华 董吉祥 谢炜 《标记免疫分析与临床》 CAS 1994年第4期217-219,238,共4页
采用放射免疫标记抗体竞争结合法,对3株抗rhIL-6单克隆抗体识别的表位进行了鉴定。按识别表位的不同,将3株单克隆抗体分为两组:一组SI8,SI9识别相同或相近的表位,另一组SI7。在表位鉴定的基础上,选择识别不同表... 采用放射免疫标记抗体竞争结合法,对3株抗rhIL-6单克隆抗体识别的表位进行了鉴定。按识别表位的不同,将3株单克隆抗体分为两组:一组SI8,SI9识别相同或相近的表位,另一组SI7。在表位鉴定的基础上,选择识别不同表位的单克隆抗体,由此获得最佳组合,灵敏度为80pg/ml。通过对肾脏病人血清IL-6水平检测,所得结果与以IL-6依赖株B9生物学检测结果一致,且重复性好,特异性强。 展开更多
关键词 白细胞介素6 放射免疫分析 单克隆抗体 RHIL-6
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sCD40L在小鼠急性辐射损伤中的应用研究 被引量:1
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作者 周旋於 +4 位作者 葛华 马银辉 徐颖 强亦忠 张学光 《辐射防护》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期37-41,共5页
CD4 0和 CD4 0 L的相互作用在机体细胞和体液免疫调节及其应答中起重要作用 ,注射可溶性CD4 0 L(s CD4 0 L)可促进骨髓移植小鼠粒细胞和血小板数量的恢复。本实验采用外周血细胞计数、白细胞分类计数、免疫荧光标记和流式细胞技术 ,探讨... CD4 0和 CD4 0 L的相互作用在机体细胞和体液免疫调节及其应答中起重要作用 ,注射可溶性CD4 0 L(s CD4 0 L)可促进骨髓移植小鼠粒细胞和血小板数量的恢复。本实验采用外周血细胞计数、白细胞分类计数、免疫荧光标记和流式细胞技术 ,探讨了 s CD4 0 L对小鼠急性辐射损伤的救治作用。结果显示 ,体内注射 s CD4 0 L以最佳剂量 10 0 μg处理受照小鼠时可明显延长其存活时间 ,并促进 CD8+ T细胞比例和 CD4 + /CD8+ T细胞比值的恢复。说明 s CD4 0 展开更多
关键词 SCD40L 辐射损伤 可溶性CD40配体 免疫系统 治疗 修复作用
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重组人Flt3配体联合其它细胞因子对免疫细胞的体外抗辐射作用研究 被引量:1
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作者 张学光 +4 位作者 许志祥 徐颖 赵仁亮 於葛华 强亦忠 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期424-427,共4页
目的 研究重组人Flt3配体 (rhFL)及其他细胞因子在体外对免疫细胞的抗辐射作用及其可能机理。方法 用流式细胞仪分析照射前后外周血单个核细胞 (PBMC)表型及rhFL对受照射PBMC表型的影响。 [3H] TdR测定细胞的增殖能力。PBMC来源贴壁... 目的 研究重组人Flt3配体 (rhFL)及其他细胞因子在体外对免疫细胞的抗辐射作用及其可能机理。方法 用流式细胞仪分析照射前后外周血单个核细胞 (PBMC)表型及rhFL对受照射PBMC表型的影响。 [3H] TdR测定细胞的增殖能力。PBMC来源贴壁细胞经细胞因子诱导树突状细胞 (DC) ,并观察辐射对诱导DC的影响及rhFL对DC的抗辐射效应 ;用PI AnnexinV、DNALadder分析细胞凋亡。结果 PBMC在体外经 15Gy照射后 ,CD8+ 、CD5 6 + 细胞明显减少 ,照射前细胞培养液中加入 10 0ng mlrhFL ,可促进CD5 6 + 细胞的恢复 ;照射前应用rhFL及照射后联合应用IL 2等细胞因子 ,可促进受照射CD8+ 、CD5 6 + 细胞的恢复 ;rhFL可协同GM CSF、IL 4、TNFα产生DC ,并使DC细胞的数量较常规方法诱导产生的数量增加 6倍 ,而且rhFL对DC分化诱导的辐射抑制作用具有明显的抗性 ;rhFL可抑制照射所致的细胞凋亡。结论 rhFL单独或与其他细胞因子联合应用 ,对人外周血免疫细胞具有明显的抗辐射效应 。 展开更多
关键词 细胞因子 FLT3配体 免疫细胞 辐照 凋亡
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Recombinant human Flt3 ligand exerts both direct and indirect effects on hematopoiesis
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作者 许志祥 徐颖 +3 位作者 施勤 李颖 张学光 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2002年第2期202-205,149,共4页
OBJECTIVE: To investigate the direct effects of the Flt3 ligand (FL) on hematopoiesis, such as the stimulation of the formation of hematopoietic colonies and the proliferation of dendritic cells, as well as the indire... OBJECTIVE: To investigate the direct effects of the Flt3 ligand (FL) on hematopoiesis, such as the stimulation of the formation of hematopoietic colonies and the proliferation of dendritic cells, as well as the indirect stimulation of hematopoiesis, especially via the proliferation of endothelial cells. METHODS: Mononuclear cells from human cord blood were plated in methylcellulose medium containing different cytokines to induce hematopoietic colony formation. Dendritic cells (DCs) were induced from the mononuclear cells with a cytokine cocktail with or without recombinant human soluble FL (rhFL; 100 ng/ml). The Flt3 receptors on the surface of a human microvascular endothelial cell line (ECV) were analyzed by flow cytometry. The proliferation of ECV stimulated by rhFL was measured with the microculture tetrazolium assay. The levels of FL, IL-6, IL-8, G-CSF and GM-CSF in the supernatant of ECV cultures were measured by enzyme linked immunoabsorbent assay (ELISA). RESULTS: rhFL stimulates colony formation from cord blood when used as a sole stimulant. FL in combination with other cytokines increased colony formation significantly. The number of DCs was approximately 2.5 times higher when rhFL was used. rhFL stimulates the proliferation of ECV on which Flt3 receptors are expressed. Furthermore, ECV secretes FL, IL-6, IL-8, G-CSF and GM-CSF, which were augmented by tumor necrosis factor-alpha and rhFL. CONCLUSIONS: rhFL enhances hematopoietic colony formation and DC proliferation from human cord blood cells. FL not only stimulates the proliferation of ECV, but is also secreted by ECV. FL may exert direct and indirect effects on hematopoiesis. 展开更多
关键词 Cell Division Cell Line Dendritic Cells DEXAMETHASONE Dose-Response Relationship Drug Endothelium Vascular Fetal Blood HEMATOPOIESIS Hematopoietic Stem Cells Humans IMMUNOPHENOTYPING Membrane Proteins Recombinant Proteins Research Support Non-U.S. Gov't Tumor Necrosis Factor-alpha
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造血生长因子受体超家族研究进展
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作者 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 1996年第6期248-252,共5页
造血生长因子受体是一组对机体具有重要调节功能的重要分子,近年来对其分子结构的特性和信号转导的机制有了许多新发现,尤其证实一些成员通过共同机制介导信号的转导,这确保了每个细胞因子高度的特异性和生物效应的交叠性。
关键词 造血生长因子 受体 超家族性
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几种溪流蜉蝣稚虫致死溶解氧浓度的初步研究
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作者 吴钿 王建文 《南京师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1991年第3期67-70,共4页
本文通过对南京近郊三个科、四个种蜉蝣稚虫(南京宽基蜉Choroterpesnan jingensis You et al.紫金吉氏蜉Gilliesia zijingensis sp.nov.Gui et Zhang.细蜉蝣Gaenis sp.及扁蜉蝣Heptagenia sp.)致死溶解氧浓度的研究。指出紫金吉氏蜉和... 本文通过对南京近郊三个科、四个种蜉蝣稚虫(南京宽基蜉Choroterpesnan jingensis You et al.紫金吉氏蜉Gilliesia zijingensis sp.nov.Gui et Zhang.细蜉蝣Gaenis sp.及扁蜉蝣Heptagenia sp.)致死溶解氧浓度的研究。指出紫金吉氏蜉和南京宽基蜉、扁蜉蝣分别在不同要求下为良好的污染指示生物。 展开更多
关键词 蜉蝣目 稚虫 致死浓度 溶解氧浓度
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F1t3 RECEPTOR EXPRESSION ON THE SURFACE OF MALIGNANT HEMATOPOIETIC CELLS AND RESPONSES TO F1t3 LIGAND STIMULATION
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作者 许志祥 徐颖 +3 位作者 李彩霞 李颖 张学光 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2000年第4期263-267,共5页
Objective: To investigate the F1t3 receptor expression on the surface of malignant hematopoietic cells, the effect of TNFα and dexamethasone (DXM) on its expression and the responses of those cells to recombinant hum... Objective: To investigate the F1t3 receptor expression on the surface of malignant hematopoietic cells, the effect of TNFα and dexamethasone (DXM) on its expression and the responses of those cells to recombinant human F1t3 ligand (rhFL). Methods: Eighteen malignant hematopoietic cell lines were determined for the F1t3 receptor expression by flow cytometric analysis. The effect of rhFL on the proliferation of malignant hematopoietic cellsin vitro was measured using MTT assay. Results: The expressions of F1t3 receptor on the surface of Raji, Daudi, HL-60, 8266 and XG-6 cells were detected by flow cytometric analysis. Following incubation with 20 ng/ml TNFα for 24h, the number of F1t3 receptor positive cells decreased in Raji and 8266, increased in HL-60 and XG-6, and no difference in Daudi cells. After incubation with 10?6 mol/L DXM for 24h, the number of F1t3 receptor positive cells decreased in all the 5 F1t3 receptor positive cell lines. rhFL stimulated the proliferation of HL-60 and Raji cells. Conclusion: For most of the malignant hematopoietic cells, there was neither the expression of F1t3 receptor nor the response to rhFL. DXM may be useful to reduce the effect of FL on the proliferation of some F1t3 receptor positive malignant hematopoietic cells in vitro andin vivo. 展开更多
关键词 F1t3 receptor Recombinant human F1t3 ligand (rhFL) Malignant hematopoietic cell lines Proliferation Dexamethasone (DXM)
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再生障碍性贫血患者外周血白细胞介素8水平的检测 被引量:2
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作者 唐晓文 张毅 +5 位作者 邵景章 张学光 仇红霞 刘继民 谢炜 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期184-185,共2页
目的:探讨白细胞介素8(IL-8)在再生障碍性贫血(再障)发病机制中的作用及与临床状况间的关系。方法:采用夹心酶联免疫吸附法检测24例再障患者及20名正常人外周血上清中IL-8水平。结果:再障患者IL-8水平显著高于... 目的:探讨白细胞介素8(IL-8)在再生障碍性贫血(再障)发病机制中的作用及与临床状况间的关系。方法:采用夹心酶联免疫吸附法检测24例再障患者及20名正常人外周血上清中IL-8水平。结果:再障患者IL-8水平显著高于正常对照(P<0.05),且重型再障组较慢性再障组显著增高(P<0.05),合并感染的再障患者IL-8含量升高更为显著(P<0.005)。结论:作为细胞趋化因子及造血负性调控因子的IL-8,在再障的病理过程中可能起着一定的作用,并对判断病情的严重程度及感染的存在具有一定的价值。 展开更多
关键词 再生障碍性贫血 外周血 白细胞介素8
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小鼠静脉内注射白细胞介素8对动员骨髓造血干/祖细胞的作用研究 被引量:3
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作者 张毅 +11 位作者 张雁云 刘继明 邱玉华 李新燕 刘蓓岭 谢炜 郑列琳 冯丽瑾 郭玲 学东 强亦忠 张学光 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第12期642-645,共4页
目的:研究重组人白细胞介素8(rhIL8)动员小鼠造血干/祖细胞的生物学效应。方法:将rhIL8单独或联合重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)给BALB/c小鼠静脉内注射,观察BALB/c小鼠外周血单个核细... 目的:研究重组人白细胞介素8(rhIL8)动员小鼠造血干/祖细胞的生物学效应。方法:将rhIL8单独或联合重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)给BALB/c小鼠静脉内注射,观察BALB/c小鼠外周血单个核细胞(PBMNC)的增殖能力;并将PBMNC回输给经致死性照射(7.5Gy60Coγ射线照射)的BALB/c小鼠,观察其造血重建功能。结果:每只小鼠单独注射rhIL830μg15分钟后,外周血中混合细胞集落形成单位(CFUMix)数量达峰值[(194±61)×103/L],比对照组[(7±3)×103/L]明显升高;外周血中ckit+Sca1+细胞为(3186±517)×103/L,亦比对照组[(644±341)×103/L]明显升高;联合注射rhGCSF则可使外周血CFUMix和ckit+Sca1+细胞分别增高至(790±48)×103/L和(10729±2339)×103/L。单独注射rhIL8后动员的PBMNC回输给致死性照射的BALB/c小鼠,其外周血中骨髓造血重建活性(MRA)细胞比对照组明显升高,联合rhGCSF组外周血中MRA细胞数可达(356.3±87.7)×1? 展开更多
关键词 白细胞介素8 G-CSF 造血干细胞 造血干细胞移植
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大肠杆菌表达rhIL—8的纯化和生物学活性鉴定 被引量:1
17
作者 陆宇新 张毅 +2 位作者 刘继民 张学光 《苏州医学院学报》 1996年第6期1011-1013,共3页
高志昕应用钙盐沉淀法将hIL一8重组质粒PHNP101转化感受态大肠杆菌HB101,转化菌经扩增培养,其包涵体及胞浆内均发现有重组蛋日的表达(约10:1)。表达蛋白经初步分离,肝素柱、离子交换柱和凝胶柱进一步纯化,获... 高志昕应用钙盐沉淀法将hIL一8重组质粒PHNP101转化感受态大肠杆菌HB101,转化菌经扩增培养,其包涵体及胞浆内均发现有重组蛋日的表达(约10:1)。表达蛋白经初步分离,肝素柱、离子交换柱和凝胶柱进一步纯化,获得了高纯度的rhIL—8(>95%)。纯化的中IL—8在新西兰免体内白细胞动员试验中显示了较高的生物学活性硕士研究生*导师脉采血,计数其外周血白细胞总数。对照组静脉注射等体积灭菌生理盐木,并于相同的时间点干血检查。2结果2.1重组质拉pHNP101转化HB101细菌:转化菌可在含100mg/L氨苄青霉素的琼脂平板上生长并形成定落.空日质粒转化细菌则不能生长。2.2纯化rhIL——8的SDS—PAGE:成熟hIL——8是一低分子蛋曰,分子量约为10ku.初步分离的rhIL——8经纯化后其纯度逐步提高(>95%),于电泳图谱上10ku处显示单一条带(附图)。2.3纯化rhIL——8的ELISA检测;hIL——8ELISA检测结果显示上述纯化后的蛋白为特异性rhIL——8,其含量约为25mg/L。2.4rhIL——8快速募集白细胞进人外周血循环:在静注,rhIL——8(10μg/kg)5min后。 展开更多
关键词 人白细胞介素8 大肠杆菌 纯化 生物学活性
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