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酵母单杂交体系——一种研究DNA-蛋白质相互作用的有效方法 被引量:15
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作者 方福德 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期388-391,共4页
酵母单杂交体系是借鉴酵母双杂交体系的基本原理 ,通过观察酵母细胞内报告基因的表达状况 ,研究DNA-蛋白质之间的相互作用。通过筛选 DNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列 ,而无需分离、纯化蛋白 ,从而克服了体内研究的... 酵母单杂交体系是借鉴酵母双杂交体系的基本原理 ,通过观察酵母细胞内报告基因的表达状况 ,研究DNA-蛋白质之间的相互作用。通过筛选 DNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列 ,而无需分离、纯化蛋白 ,从而克服了体内研究的局限性。目前酵母单杂交体系已被广泛应用于寻找与目的 DNA片段相互作用的蛋白质分子 ,该体系是一种用于研究 DNA-蛋白质之间的相互作用的有效方法。本文就酵母单杂交体系的原理、具体实现方法、在研究 DNA结合蛋白质中的应用及其优缺点等方面作一简要介绍。 展开更多
关键词 酵母单杂交体系 DNA-蛋白质 相互作用
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应用酵母单杂交体系筛选与大鼠谷胱甘肽S-转移酶P增强子GPEⅠ相互作用的转录激活因子 被引量:4
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作者 左瑾 +1 位作者 刘东远 方福德 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期317-321,共5页
目的 探讨谷胱甘肽 S-转移酶 (GST- P)基因表达调控机制的多样性及其与化学致癌的关系 ,筛选与大鼠 GST- P增强子元件 GPE 相互作用的调控因子。方法 采用酵母单杂交体系筛选与 GPE 核心序列相互作用的转录激活因子 ,应用 DNA序列测... 目的 探讨谷胱甘肽 S-转移酶 (GST- P)基因表达调控机制的多样性及其与化学致癌的关系 ,筛选与大鼠 GST- P增强子元件 GPE 相互作用的调控因子。方法 采用酵母单杂交体系筛选与 GPE 核心序列相互作用的转录激活因子 ,应用 DNA序列测定及计算机分析等手段对所测的 DNA序列进行分析。结果 共获得两个阳性克隆 p YGPE1和 p YGPE2。 DNA测序分析表明 :p YGPE1的插入片段与大鼠原癌基因 c- jun c DNA具有 99%的同源性 ,其编码的氨基酸序列与大鼠 c- Jun蛋白具有 10 0 %的同源性。 p YGPE2的插入片段与大鼠线粒体腺苷酸转位酶 c DNA具有 99%的同源性 ,其编码的氨基酸序列与大鼠腺苷酸转位酶具有 10 0 %的同源性。结论 大鼠 c- Jun蛋白和线粒体腺苷酸转位酶在酵母细胞内与大鼠 GST- P增强子 GPE 核心序列结合 ,可能是作用于 GPE 的反式作用因子。 展开更多
关键词 酵母单杂交体系 谷胱甘肽S-转移酶 增强子GPE
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大鼠谷胱甘肽S-转移酶P1基因增强子及其反式作用因子的研究 被引量:2
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作者 刘东远 方福德 《自然科学进展(国家重点实验室通讯)》 2000年第3期235-239,共5页
探讨大鼠谷胱甘肽S-转移酶P1基因上游增强子元件及作用于其上特异性结合蛋白与该基因在癌细胞中高表达的关系,用荧光素酶报告系统在HeLa及CBRH7919细胞中确定了增强子元件Ⅰ(GPEⅠ)及增强子元件Ⅱ(GPEⅡ)的活性,并将GPEⅡ的增强子活性... 探讨大鼠谷胱甘肽S-转移酶P1基因上游增强子元件及作用于其上特异性结合蛋白与该基因在癌细胞中高表达的关系,用荧光素酶报告系统在HeLa及CBRH7919细胞中确定了增强子元件Ⅰ(GPEⅠ)及增强子元件Ⅱ(GPEⅡ)的活性,并将GPEⅡ的增强子活性部位定位于其上游84bp的GPEⅡ-1区域内。分析对比不同细胞中结合于GPEⅠ核心序列(cGPEⅠ)、GPEⅡ-1上特异性核结合蛋白,发现HeLa,CBRH7919细胞中存在的cGPEⅠ特异性结合蛋白及GPEⅡ-1特异性的64ku结合蛋白在正常大鼠肝细胞中则不存在。因此,上述反式作用因子可能与GPEⅠ,GPEⅡ的增强子活性及该基因在癌细胞中高表达密切相关。 展开更多
关键词 增强子 癌细胞 反式作用因子 表达 rGSTP1基因
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谷胱甘肽S-转移酶Pi基因与肿瘤 被引量:2
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作者 《基础医学与临床》 CSCD 1999年第1期15-19,共5页
谷胱甘肽S-转移酶Pi基因与肿瘤廖名湘(医学分子生物学国家重点实验室。北京100005)谷胱甘肽S-转移酶(GlutathioneS-transferase,GST)家族是一个属于Ⅱ相代谢解毒酶的同工酶大家族。根据这... 谷胱甘肽S-转移酶Pi基因与肿瘤廖名湘(医学分子生物学国家重点实验室。北京100005)谷胱甘肽S-转移酶(GlutathioneS-transferase,GST)家族是一个属于Ⅱ相代谢解毒酶的同工酶大家族。根据这些同工酶N-末端氨基酸的同源性,作... 展开更多
关键词 GST Pi基因 肿瘤
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3种化学诱导物对大鼠GST-P基因表达的影响及机理 被引量:1
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作者 刘东远 +2 位作者 左瑾 张红云 方福德 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第23期2550-2554,共5页
大鼠谷胱甘肽S_转移酶P(GST_P)基因可被多种化学致癌物诱导表达 .采用基因诱导实验、共转染报告质粒瞬时表达实验、凝胶阻滞实验和分子杂交实验探讨了 3种化学物诱导GST_P基因表达的机理 .结果表明 ,佛波酯 (TPA)、甲基丙烯酸环氧丙酯 (... 大鼠谷胱甘肽S_转移酶P(GST_P)基因可被多种化学致癌物诱导表达 .采用基因诱导实验、共转染报告质粒瞬时表达实验、凝胶阻滞实验和分子杂交实验探讨了 3种化学物诱导GST_P基因表达的机理 .结果表明 ,佛波酯 (TPA)、甲基丙烯酸环氧丙酯 (GMA)和H2 O2 对GST_P基因表达的影响及其机理不甚相同 :TPA和GMA主要通过激活AP_1或相应转录因子与GPEⅠ增强子元件相作用而促进GST_P表达 ,H2 O2 展开更多
关键词 癌变 GST-P基因 基因表达调控 化学诱导物
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Effect of trans-acting factor on rat glutathione S-transferase P1 gene transcription regulation in tumor cells
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作者 刘东远 +1 位作者 左瑾 方福德 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2002年第1期103-106,152,共4页
Objective To investigate the effect of trans-acting factor(s) on rat glutathione S-transferase P1 gene (rGSTP1) transcription regulation in tumor cells.Methods The binding of trans-acting factor(s) to two enhancers... Objective To investigate the effect of trans-acting factor(s) on rat glutathione S-transferase P1 gene (rGSTP1) transcription regulation in tumor cells.Methods The binding of trans-acting factor(s) to two enhancers of the rGSTP1 gene, glutathione S-transferase P enhancer Ⅰ (GPEI) and glutathione S-transferase P enhancer Ⅱ-1 (GPEⅡ-1), was identified by an electrophoretic mobility shift assay (EMSA). The molecular weight of trans-acting factor was measured in a UV cross-linking experiment. Results Trans-acting factor interacting with the core sequence of GPEI (cGPEI) were found in human cervical adenocarcinoma cell line (HeLa) and rat hepatoma cell line (CBRH7919). These proteins were not expressed in normal rat liver. Although specific binding proteins that bound to GPEⅡ-1 were detected in all three cell types, a 64 kDa binding protein that exists in HeLa and CBRH7919 cells was absent in normal rat liver. Conclusion cGPEI, GPEII specific binding proteins expressed in HeLa and CBRH7919 cells may play an important role in the high transcriptional level of the rGSTP1 gene in tumor cells. 展开更多
关键词 gene regulation · glutathione S-transferase P1 · trans-acting factor
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