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基于单个外周血浆细胞技术筛选MRSA人源性单克隆抗体的实验研究 被引量:2
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作者 宋振 王孝丽 +5 位作者 敬海明 张怡 刘圆圆 廖化 曾浩 邹全明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期254-261,共8页
目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)人源性单克隆抗体筛选方法。方法从52份重组MRSA多价亚单位疫苗的Ⅰ期临床研究受试者血液样本中筛选出抗体滴度高的血样,利用流式细胞术分选其外周... 目的建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(meticillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)人源性单克隆抗体筛选方法。方法从52份重组MRSA多价亚单位疫苗的Ⅰ期临床研究受试者血液样本中筛选出抗体滴度高的血样,利用流式细胞术分选其外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中浆细胞,以mRNA为模板PCR扩增抗体重链、轻链可变区基因,通过重叠延伸PCR分别将将抗体重链、轻链可变区基因与CMV启动子、人恒定区及多聚A尾连接,构建成单克隆抗体线性表达载体,PEI瞬时转染293T细胞进行抗体表达。结果流式细胞术分选出1 120个浆细胞,筛选出了39个针对MRSA 5种保护性抗原α-溶血素(Hla)、铁离子表面决定蛋白B(Isd B)、金葡菌蛋白A(SpA 5)、肠毒素B(SEB)及锰离子结合蛋白C(Mnt C)的人源性单克隆抗体,ELISA结果显示抗体能与抗原蛋白结合。结论通过单个外周血浆细胞技术,成功筛选出了能够与抗原结合的MRSA人源性单克隆抗体,为研究MRSA治疗性人源性抗体奠定了良好基础。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 治疗性 人源性单克隆抗体 筛选与鉴定
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基于单个B淋巴细胞扩增技术筛选马传染性贫血病毒的囊膜蛋白单克隆抗体
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作者 张佳琦 王亚玉 +3 位作者 郭兴 林跃智 廖化 王晓钧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期307-313,共7页
马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗... 马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用。为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用密码子优化后的Gp90基因构建了重组质粒pcDNA3.1-s-gp90-His,按常规方法将该重组质粒免疫小鼠6次后分离脾细胞,利用荧光激活细胞分选(FACS)技术分离免疫小鼠脾细胞中可识别Gp90的单个B淋巴细胞,结果显示,本研究从2×10^(8)个小鼠脾细胞中获得890个识别Gp90的单个B淋巴细胞。通过特异性引物以单个B淋巴细胞的基因组cDNA为模板扩增抗体重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)的可变区基因,利用重叠延伸PCR方法分别将重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)可变区基因克隆至pcDNA3.1中,测序鉴定结果显示分别正确构建了27对匹配的pcDNA3.1-VH和pcDNA3.1-VL表达质粒,将这27对匹配的表达质粒分别按照pcDNA3.1-VH:pcDNA3.1-VL=1:1的比例共转染至HEK293F细胞,收获细胞上清,经Protein A纯化获得Gp90 MAb。通过ELISA和western blot两种方法对纯化的Gp90 MAb进行鉴定,结果显示获得了27株可匹配的抗体基因对,经表达后有4株MAb可与Gp90蛋白结合,且可以识别Gp90蛋白的天然构象。本研究首次采用单个B淋巴细胞扩增技术对Gp90 MAb进行了筛选,获得的Gp90 MAb为Env蛋白检测方法的研究提供了物质基础,同时为深入研究Env蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 囊膜蛋白 单个B淋巴细胞扩增 单克隆抗体
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基于单个B细胞抗体基因扩增技术筛选马IgG1单克隆抗体
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作者 陈阳 刘彤 +4 位作者 张佳琦 廖化 林跃智 王晓钧 王亚玉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期17-23,共7页
在马的免疫学研究领域中,由于目前市场上缺乏商业化的马IgG单克隆抗体,使得对马的B细胞研究受到很大阻碍,IgG是B细胞受体(BCR)的重要构成成分,与B细胞分化成熟相关。为了获得马IgG特异性单克隆抗体,利用单个B细胞扩增技术进行抗体筛选... 在马的免疫学研究领域中,由于目前市场上缺乏商业化的马IgG单克隆抗体,使得对马的B细胞研究受到很大阻碍,IgG是B细胞受体(BCR)的重要构成成分,与B细胞分化成熟相关。为了获得马IgG特异性单克隆抗体,利用单个B细胞扩增技术进行抗体筛选。首先,将马IgG蛋白(EqIgG1-C)密码子优化后合成到真核表达载体pcDNA3.4上,纯化出抗原蛋白。随后,使用蛋白质免疫小鼠,分离脾细胞后利用流式细胞术分离特异性单个B细胞,扩增出抗体重链和轻链的可变区基因,用overlapping PCR方法扩增出线性化的完整抗体,并进行鉴定。结果从80个B细胞中获得了27株特异性重组单克隆抗体,并挑选出3株线性结合活性最强的抗体基因构建到表达载体上,共转染Expi293F^(TM)细胞后表达纯化,经过ELISA和Western blot验证,显示获得的抗体可以和EqIgG1-C蛋白有良好的结合作用。使用该方法可以省时高效的获得特异性抗体,为马的免疫学研究提供了重要研究工具,为鼠单克隆抗体筛选提供了技术拓展。 展开更多
关键词 马IgG 单个B细胞PCR 抗体筛选技术 单克隆抗体
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VIRUSES OF CLASSICAL AND MILD FORMS OF HEMORRHAGIC FEVER WITH RENAL SYNDROME (HFRS) ISOLATED IN CHINA HAVING BUNYAVIRUSLIKE MORPHOLOGY 被引量:1
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作者 洪涛 夏诗茂 +4 位作者 宋干 廖化 赵同兴 周静仪 杭长寿 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1983年第4期561-563,共3页
Hemorrhagic fever with renal syndrome is a severe human illness, which threatens a large portion of the world’s population. However, little, if any, is known about the morphology and, especially, about the morphogene... Hemorrhagic fever with renal syndrome is a severe human illness, which threatens a large portion of the world’s population. However, little, if any, is known about the morphology and, especially, about the morphogenesis of its causative virus. 展开更多
关键词 illness portion granulo originally IMMATURE HORSE SUGGESTION Serum IRREGULAR 二甲
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应用酶联免疫吸附试验检查流行性出血热抗原和抗体及其抗原性分析
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作者 廖化 宋干 +6 位作者 杭长寿 傅建林 赵君能 苏涛 张全福 邱惠玲 高广忠 《中华传染病杂志》 CAS 1985年第2期110-113,122,共5页
近年来,国内外先后分离到流行性出血热(EHF)病毒[1~3].间接免疫荧光抗体技术(IFAT)作为EHF病毒抗原和抗体的检测指标,具有简便可靠和敏感的特点.但由于需要昂贵的荧光显微镜,对抗原不能定量以及不能检查可溶性抗原,其应用受到一定限制.... 近年来,国内外先后分离到流行性出血热(EHF)病毒[1~3].间接免疫荧光抗体技术(IFAT)作为EHF病毒抗原和抗体的检测指标,具有简便可靠和敏感的特点.但由于需要昂贵的荧光显微镜,对抗原不能定量以及不能检查可溶性抗原,其应用受到一定限制.1981年苏联[4]和1982年美国[5]报道将酶联免疫吸附试验(ELlSA)用于检查肾病综合征出血热(HFRS)血清抗体和野鼠肺HFRS抗原.到目前为止,国内尚未见ELISA法应用于EHF抗原和抗体检测的报道.我们对ELISA在EHF抗原和抗体及其抗原性分析中的应用做了初步研究,现将方法和结果报告如下. 展开更多
关键词 应用 酶联免疫吸附试验 检查 流行性出血热 抗原性 间接免疫荧光抗体技术 荧光显微镜 可溶性抗原 合征出血热 血清抗体 抗体检测 检测指标 国内 病毒抗原 苏联 鼠肺 肾病 美国 方法 定量
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黑线姬鼠流行性出血热病毒自然感染率的血清流行病学分析
6
作者 傅建林 廖化 +7 位作者 杭长寿 高广忠 张全福 邱惠玲 宋干 陈尚智 赵长生 陈义华 《中国公共卫生学报》 1984年第1期18-20,共3页
流行性出血热(EHF)是由黑线姬鼠等鼠类携带传播的一种自然疫源性疾病。在黑线姬鼠为其主要宿主的流行地区,该鼠鼠群中 EHF病毒的自然感染率与该病在人群中的流行有密切关系。
关键词 自然感染率 黑线姬鼠 血清流行病学 自然疫源性疾病 间接免疫荧光法 总感染率 抗体滴度 荧光抗体 流行病学调查 主要宿主
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肾综合征出血热病毒抗原性的单克隆抗体分析(I)
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作者 邢峥 宋干 +4 位作者 杭长寿 Sugiyama K 陈伯权 廖化 傅建林 《中国医学科学院学报》 CAS 1987年第4期277-281,共5页
将我国HFRS各疫区不同宿主(包括家兔、家猫)分离的病毒,苏联棕背(鼠平)分离株,北美草原田鼠分离株和日本HFRS病毒代表株,经HFRS病毒Hantaan-76-118株、SR-11株和A_9株、R_22株多种McAb分析,可分为五型:姬鼠型、大鼠型、棕背(鼠平)型、... 将我国HFRS各疫区不同宿主(包括家兔、家猫)分离的病毒,苏联棕背(鼠平)分离株,北美草原田鼠分离株和日本HFRS病毒代表株,经HFRS病毒Hantaan-76-118株、SR-11株和A_9株、R_22株多种McAb分析,可分为五型:姬鼠型、大鼠型、棕背(鼠平)型、田鼠型和未定型,后者以从湖南疫区病人分离的H_79。株为代表。根据型特异性McAb的比较分析,姬鼠属和大鼠属来源的极少数毒株的抗原性与宿主来源不相一致。 展开更多
关键词 肾综合征出血热病毒 单克隆抗体 抗原性分析
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与流行性出血热有关动物血清中IgG之间的抗原关系及其应用
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作者 傅建林 宋干 +4 位作者 蔡增林 刘为民 廖化 苏涛 杭长寿 《中国公共卫生学报》 1986年第3期44-46,共3页
目前进行流行性出血热(EHF)宿主动物血清流行病学调查,多采用双层间接免疫荧光法,但此法需制备相应的动物 IgG 的抗血清为中间抗体。EHF 流行病学调查涉及的动物种类较多,分别制备各种动物IgG 的抗血清困难较大。本文研究了与流行性出... 目前进行流行性出血热(EHF)宿主动物血清流行病学调查,多采用双层间接免疫荧光法,但此法需制备相应的动物 IgG 的抗血清为中间抗体。EHF 流行病学调查涉及的动物种类较多,分别制备各种动物IgG 的抗血清困难较大。本文研究了与流行性出血热有关的多种动物血清 IgG 之间的交叉抗原关系。 展开更多
关键词 IGG 动物血清 间接免疫荧光法 宿主动物 流行病学调查 抗体滴度 沙鼠 动物种类 抗体含量 倍比稀释
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力场/溶剂水模型对EGFRvⅢ抗原-MR1(scFv)抗体复合物的MM-PBSA计算精度的影响与实验验证
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作者 任家毅 杨志伟 +8 位作者 郑念珏 李军旗 杨春龙 林淑健 杨冰 黄俊卿 廖化 袁晓辉 欧仕益 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2070-2076,共7页
以表皮生长因子Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)抗原多肽与其抗体(MR1)及其人源化突变体的复合物结构为出发点,采用分子动力学中的6种常用力场及3种常用溶剂水模型,分别对上述抗原-抗体复合物进行100ns的分子动力学模拟与分子力学和连续介质模型计... 以表皮生长因子Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)抗原多肽与其抗体(MR1)及其人源化突变体的复合物结构为出发点,采用分子动力学中的6种常用力场及3种常用溶剂水模型,分别对上述抗原-抗体复合物进行100ns的分子动力学模拟与分子力学和连续介质模型计算自由能(MM-PBSA),并在实验上利用等温滴定量热(ITC)仪测定了抗原和抗体相互作用的热力学参数.通过在结构变化、能量变化及野生型与突变体比较等几个方面进行综合分析,给出了最佳的计算模型.对不同力场及水模型计算精度等相关问题进行了探讨. 展开更多
关键词 单链抗体 分子动力学模拟 分子力学和连续介质模型的自由能计算 等温滴定量热 均方根偏差
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流行性出血热(EHF)病毒单克隆抗体在轻型出血热宿主动物调查研究上的应用(简报)
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作者 傅建林 廖化 +7 位作者 张全福 杭长寿 邱惠玲 宋干 徐涌耀 王花珍 李自钊 夏占国 《中国公共卫生学报》 1984年第1期21-21,共1页
为了了解新研制的流行性出血热(EHF)单克隆抗体在该病流行病学方面的应用价值,我们采用25号McAb EHF
关键词 EHF 单克隆抗体 宿主动物 直接免疫荧光法 结合物 河南省新安县 异硫氰酸荧光素 流行病学方面 恢复期血清 间接免疫荧光法
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