利用磁珠法对甘蓝、白菜、芥菜、洋葱、黄瓜、番茄、辣椒等7种形状、大小不同的蔬菜单粒种子和幼苗进行DNA提取,采用内参基因Actin进行实时荧光定量PCR评价DNA质量,利用KASP(kompetitive allele specific PCR)标记检验DNA质量是否达到K...利用磁珠法对甘蓝、白菜、芥菜、洋葱、黄瓜、番茄、辣椒等7种形状、大小不同的蔬菜单粒种子和幼苗进行DNA提取,采用内参基因Actin进行实时荧光定量PCR评价DNA质量,利用KASP(kompetitive allele specific PCR)标记检验DNA质量是否达到KASP检测要求。结果显示,单粒种子磁珠法提取的各蔬菜DNA平均Ct值均处于19~24范围内。KASP检测进一步证实种子提取DNA的质量达到KASP标记分型的要求。综上所述,本研究建立了一种简单、经济、实用性强的单粒种子DNA提取方法,该方法对不同大小的蔬菜种子具有较好的稳定性,且大幅缩短了获得基因型数据的时间。展开更多
【目的】开发可在白菜中高效鉴定根肿病抗病基因的KASP(Kompetitive Allele Specific PCR)标记,并利用这些标记研究大量白菜资源材料中抗病基因分布规律。【方法】根据已克隆白菜抗根肿病基因信息,使用Primer3与DNAMAN开发KASP标记。利...【目的】开发可在白菜中高效鉴定根肿病抗病基因的KASP(Kompetitive Allele Specific PCR)标记,并利用这些标记研究大量白菜资源材料中抗病基因分布规律。【方法】根据已克隆白菜抗根肿病基因信息,使用Primer3与DNAMAN开发KASP标记。利用代表性的62份白菜材料组成测试群体筛选标记,获得高可靠性标记,对862份白菜资源进行抗病基因型鉴定。【结果】从4个已克隆的抗根肿病基因(CRa、CRb、CRd、Crr1a)内开发并筛选出6个基因特异性KASP标记。白菜资源中鉴定出105份含有抗病基因型材料,其中芜菁与油用白菜占70.48%;CRa分布最广,占所有抗病材料的58.09%;含有2个或2个以上抗病基因的材料16份。【结论】获得6个稳定可靠的抗根肿病基因特异性KASP标记。CRa分布最广,筛选出同时携带多个抗根肿病基因的资源材料。展开更多
文摘利用磁珠法对甘蓝、白菜、芥菜、洋葱、黄瓜、番茄、辣椒等7种形状、大小不同的蔬菜单粒种子和幼苗进行DNA提取,采用内参基因Actin进行实时荧光定量PCR评价DNA质量,利用KASP(kompetitive allele specific PCR)标记检验DNA质量是否达到KASP检测要求。结果显示,单粒种子磁珠法提取的各蔬菜DNA平均Ct值均处于19~24范围内。KASP检测进一步证实种子提取DNA的质量达到KASP标记分型的要求。综上所述,本研究建立了一种简单、经济、实用性强的单粒种子DNA提取方法,该方法对不同大小的蔬菜种子具有较好的稳定性,且大幅缩短了获得基因型数据的时间。
文摘【目的】开发可在白菜中高效鉴定根肿病抗病基因的KASP(Kompetitive Allele Specific PCR)标记,并利用这些标记研究大量白菜资源材料中抗病基因分布规律。【方法】根据已克隆白菜抗根肿病基因信息,使用Primer3与DNAMAN开发KASP标记。利用代表性的62份白菜材料组成测试群体筛选标记,获得高可靠性标记,对862份白菜资源进行抗病基因型鉴定。【结果】从4个已克隆的抗根肿病基因(CRa、CRb、CRd、Crr1a)内开发并筛选出6个基因特异性KASP标记。白菜资源中鉴定出105份含有抗病基因型材料,其中芜菁与油用白菜占70.48%;CRa分布最广,占所有抗病材料的58.09%;含有2个或2个以上抗病基因的材料16份。【结论】获得6个稳定可靠的抗根肿病基因特异性KASP标记。CRa分布最广,筛选出同时携带多个抗根肿病基因的资源材料。
