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电力用户侧大数据分析与并行负荷预测 被引量：269
1
作者 王德文 孙志伟 《中国电机工程学报》 EI CSCD 北大核心 2015年第3期527-537,共11页
随着智能电网、通信网络技术和传感器技术的发展,电力用户侧数据呈指数级增长、复杂程度增大,逐步构成了用户侧大数据。传统的数据分析模式已无法满足需求,迫切需要解决电力用户侧的大数据在分析与处理方面的难题。该文分析电力用户大... 随着智能电网、通信网络技术和传感器技术的发展,电力用户侧数据呈指数级增长、复杂程度增大,逐步构成了用户侧大数据。传统的数据分析模式已无法满足需求,迫切需要解决电力用户侧的大数据在分析与处理方面的难题。该文分析电力用户大数据的来源,针对电力用户侧大数据的数据量大、种类繁多与速度快等特点,指出电力用户侧的大数据在数据存储、可用性、处理等方面面临的挑战。结合云计算技术提出一种电力用户侧大数据分析处理平台,将智能电表、SCADA系统和各种传感器中采集的数据整合,并利用并行化计算模型Map Reduce与内存并行化计算框架Spark对电力用户侧的大数据进行分析。提出基于随机森林算法的并行负荷预测方法,将随机森林算法进行并行化,对历史负荷、温度、风速等数据进行并行化分析,缩短负荷预测时间和提高随机森林算法对大数据的处理能力。设计并实现基于Hadoop的电力用户侧大数据并行负荷预测原型系统,包括数据集群的管理、数据管理、预测分类算法库等功能。采用不同大小的数据集对并行化随机森林算法进行负荷预测实验,实验结果表明,并行化随机森林算法的预测精度明显高于决策树的预测精度,且在不同数据集上预测精度普遍高于决策树的预测精度,能够较好的对大数据进行分析处理。 展开更多
关键词 大数据 电力用户侧 负荷预测 并行处理 云计算
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对媒介融合下新闻实务类课程整合的研究 被引量：107
2
作者 王婷婷 孙志伟 《新闻界》 CSSCI 北大核心 2011年第8期147-149,共3页
近年来,随着传播技术不断进步,媒介融合的趋势日渐明显,新闻教学改革的步伐逐渐加快。如何进行新闻实务类课程整合,提高新闻学专业学生的新闻理论水平和实践能力,培养具有综合素质的新闻人具有重要理论和实际意义。
关键词 媒介融合 新闻实务 课程整合
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理工类专业课程开展课程思政建设的关键问题与解决路径 被引量：93
3
作者 孙志伟 《思想政治课研究》 2019年第1期93-97,共5页
课程思政作为当前高校思想政治与课程建设工作的新理念新模式,是新时代高校思政教育值得高度关注的理论和实践问题。现今不少高校课程思政的短板和难点仍多集中于理工类课程方面,解决理工类特别是工科类专业在课程思政建设中的实际操作... 课程思政作为当前高校思想政治与课程建设工作的新理念新模式,是新时代高校思政教育值得高度关注的理论和实践问题。现今不少高校课程思政的短板和难点仍多集中于理工类课程方面,解决理工类特别是工科类专业在课程思政建设中的实际操作问题显得迫在眉睫。本文以上海高校工科类课程为切入点,由理工专业的课程属性出发,剖析该类专业在课程思政建设中面临的关键问题并据此提出相应的解决路径。 展开更多
关键词 理工类专业课程 思想政治教育 价值属性 关键问题 路径思考
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天麻素在神经系统的药理作用研究概况 被引量：51
4
作者 李红月 孙志伟 王淑琴 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1047-1050,共4页
天麻素是中药天麻中的主要活性成分之一,由于药理作用广泛,毒副作用小,受到人们的广泛关注。近年来,国内外多项研究证明,天麻素可以减轻脑缺血再灌注损伤、改善帕金森病与老年性痴呆症病情、抑制神经性疼痛,还能对其他神经系统疾病起到... 天麻素是中药天麻中的主要活性成分之一,由于药理作用广泛,毒副作用小,受到人们的广泛关注。近年来,国内外多项研究证明,天麻素可以减轻脑缺血再灌注损伤、改善帕金森病与老年性痴呆症病情、抑制神经性疼痛,还能对其他神经系统疾病起到一定的防治作用。因此,本文对天麻素在神经系统的药理作用及作用机制做了详细阐述,并对其开发、利用提供思路和理论依据。 展开更多
关键词 天麻素 脑缺血再灌注 帕金森病 老年性痴呆 神经性疼痛
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中国结直肠癌患者966例中KRAS和BRAF基因突变分析 被引量：50
5
作者 高静 孙志伟 +1 位作者 李艳艳 沈琳 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期579-583,共5页
目的检测中国结直肠癌患者中KRAS和BRAF基因突变率，分析KRAS和BRAF基因突变与患者临床病理特征的相关性。方法收集2008年12月至2012年1月于北京大学肿瘤医院就诊的966例结直肠癌患者的肿瘤组织，运用直接测序法检测组织标本中KRAS基因... 目的检测中国结直肠癌患者中KRAS和BRAF基因突变率，分析KRAS和BRAF基因突变与患者临床病理特征的相关性。方法收集2008年12月至2012年1月于北京大学肿瘤医院就诊的966例结直肠癌患者的肿瘤组织，运用直接测序法检测组织标本中KRAS基因外显子2第12、13位密码子以及BRAF基因外显子15的突变状态，分析基因突变与临床病理特征的相关性。结果中国结直肠癌患者中KRAS与BRAF基因突变率分别为38．8％（375／966）与4．4％（40／915），BRAF基因在KRAS野生型患者中的突变率为7．4％（40／540），且KRAS与BRAF基因突变为排他性。KRAS基因突变类型共有8种，以G12D、G12V与G13D最常见；BRAF基因突变类型共有3种，以V600E最常见。KRAS基因在女性、肿瘤分化程度较好及原发部位为有半结肠的患者中突变率明显升高（P值均〈0．05），且在≥65岁的患者中的突变率高于65岁以下患者（P=0．05）；而BRAF基因在肿瘤分化程度较差及原发部位为右半结肠的患者中突变率较高（P值均〈0．05）。KRAS和BRAF基因突变与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均无明显相关性（P值均〉0．05）。结论中国结直肠癌患者中，KRAS基因突变与性别、年龄、肿瘤分化程度及原发部位相关，而BRAF基因突变仅与肿瘤分化程度及原发部位有关；KRAS和BRAF基因突变与患者预后的相关性有待继续研究。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 DNA突变分析 聚合酶链反应 序列分析
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砂含泥量对掺聚羧酸高性能减水剂混凝土的技术经济指标影响 被引量：44
6
作者 孔凡敏 孙晓明 +1 位作者 杨励刚 孙志伟 《混凝土》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期95-96,112,共3页
针对北京市场上的砂石质量现状,时有含泥量较高的砂进入搅拌站被应用于生产。对使用聚羧酸高性能减水剂生产的混凝土质量和性能影响更大。因此,对于搅拌站常用强度等级混凝土,通过选取3种不同含泥量的砂子对混凝土进行新拌性能和强度的... 针对北京市场上的砂石质量现状,时有含泥量较高的砂进入搅拌站被应用于生产。对使用聚羧酸高性能减水剂生产的混凝土质量和性能影响更大。因此,对于搅拌站常用强度等级混凝土,通过选取3种不同含泥量的砂子对混凝土进行新拌性能和强度的试验,以验证砂含泥量对掺聚羧酸高效减水剂混凝土性能的影响,并通过采取技术措施和调整配合比满足要求后,对配合比的经济指标分析。结果表明较高的砂含泥量使掺聚羧酸高性能减水剂的混凝土性能下降明显,对混凝土的质量和成本造成巨大影响。由此得出结论:搅拌站应挑选优质砂以满足混凝土质量要求。当生产高强混凝土时,如含泥量超标,则必须停产。使用含泥量高的砂即使经过调整可以生产较低强度等级混凝土,但由于生产成本增加较大,经济效益很差。不如适当提高砂的采购价格,采购质量较好砂子,既能保证质量,经济上也较为合理。试验仅验证了砂含泥量对混凝土和易性和28d强度的影响,目的主要是为指导生产中原材料和混凝土的质量控制。砂中含泥量对混凝土长期性能和耐久性能的影响还需做进一步研究。 展开更多
关键词 砂含泥量 混凝土和易性 强度 配合比比调整 成本分析
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不同猕猴桃品种对溃疡病抗性的评价 被引量：42
7
作者 石志军 张慧琴 +4 位作者 肖金平 杨鲁琼 孙志伟 谢鸣 马远 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期752-759,共8页
离体条件下,通过不同致病力溃疡病病菌、接种浓度、培养湿度、接种方式条件下接种红阳猕猴桃枝条,探讨不同条件下溃疡病病原菌对猕猴桃枝条的侵染效果。在此基础上,通过对24个猕猴桃品种(系)枝条人工接种溃疡病病原菌,评价不同猕猴桃品... 离体条件下,通过不同致病力溃疡病病菌、接种浓度、培养湿度、接种方式条件下接种红阳猕猴桃枝条,探讨不同条件下溃疡病病原菌对猕猴桃枝条的侵染效果。在此基础上,通过对24个猕猴桃品种(系)枝条人工接种溃疡病病原菌,评价不同猕猴桃品种对溃疡病的抗性。结果表明:强致病力病菌、高浓度、高湿度、枝条创伤面积都能显著影响猕猴桃枝条的病情指数;不同猕猴桃品种对溃疡病的抗性存在显著差异,24个猕猴桃品种(系)枝条中,华特和徐香表现为高抗;迷你华特、金魁、绿肉优系(G-HZ201201)和毛雄表现为抗病;红阳、黄肉优系11-7、大红、早鲜、早艳和黄肉优系Y-HZ201201表现为高感。通过对华特、布鲁诺和红阳3个品种猕猴桃盆栽苗接种溃疡病病原菌,并测定接种植株与对照植株的相关生理参数,评价不同猕猴桃品种对溃疡病的抗性及其相关生理参数与抗溃疡病的关系。结果表明,3个品种盆栽苗的抗性评价等级与离体枝条接种基本一致。不同抗性猕猴桃品种酶活性与其病情指数呈线性关系,健康植株韧皮部中CAT酶活性与病情指数的相关性最高(r=0.999*),叶片中的CAT酶活性次之(r=0.994*),健康植株韧皮部和叶片中POD酶活性与病情指数的相关性分别为r=0.979和r=0.969,SOD酶活性分别为r=0.924和r=0.938。可溶性糖、可溶性淀粉、可溶性蛋白含量与病情指数也表现为线性关系,可溶性蛋白含量与病情指数相关性最高,在健康植株韧皮部和叶片的相关性分别为r=-0.972和r=-0.962,可溶性糖含量与病情指数的相关性分别为r=0.934和r=0.940。综上所述,不同猕猴桃品种对溃疡病的抗性存在显著性差异,CAT、POD、SOD酶活性和可溶性蛋白、可溶性糖含量可以作为鉴定猕猴桃抗溃疡病的生理指标。 展开更多
关键词 猕猴桃 溃疡病 抗病性
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虚拟现实技术下的学习空间扩展研究 被引量：41
8
作者 孙志伟 李小平 +2 位作者 张琳 姜丽萍 毛旭 《电化教育研究》 CSSCI 北大核心 2019年第7期76-83,共8页
为促进虚拟现实技术在教育中的应用,文章在分析“学习空间建设和虚拟现实技术教育应用”的基础上,系统梳理了学习空间建设和发展的基础及历程,聚焦虚拟现实技术在学习空间上的体现方式、功能作用和建设路径,利用构想性、沉浸性、交互性... 为促进虚拟现实技术在教育中的应用,文章在分析“学习空间建设和虚拟现实技术教育应用”的基础上,系统梳理了学习空间建设和发展的基础及历程,聚焦虚拟现实技术在学习空间上的体现方式、功能作用和建设路径,利用构想性、沉浸性、交互性等特性扩展学习空间。从课堂空间、泛在空间、网络空间与虚拟现实技术整合的角度提出虚实结合的学习空间连续体,认为虚拟现实技术扩展学习空间的关键路径是技术与现实空间的叠加,是丰富学习环境和信息呈现形式。虚拟现实学习空间可以提升教学活动的真实性,促进情境性混合教育生态的构建。 展开更多
关键词 虚拟现实 学习空间 学习环境 建设路径
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利用Red重组系统对大肠杆菌ClpP基因的敲除 被引量：29
9
作者 白光兴 孙志伟 +1 位作者 黄莺 俞炜源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期35-38,共4页
利用含有质粒pKD4 6的菌株BW2 5 113,在阿拉伯糖诱导后 ,表达λ噬菌体的 3个重组蛋白 ,宿主菌就具有了同源重组的能力 .设计的引物 5′端有 5 0bp的拟敲除基因的同源臂 ,3′端为扩增引物 ,以pKD3为模板 ,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性... 利用含有质粒pKD4 6的菌株BW2 5 113,在阿拉伯糖诱导后 ,表达λ噬菌体的 3个重组蛋白 ,宿主菌就具有了同源重组的能力 .设计的引物 5′端有 5 0bp的拟敲除基因的同源臂 ,3′端为扩增引物 ,以pKD3为模板 ,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因 ,将此线性片段电转入具重组功能的感受态细胞 ,利用氯霉素平板就可以筛选到阳性转化体 .再利用表达Flp重组酶的质粒pCP2 0 ,可将FRT位点之间的氯霉素抗性基因删除 .利用该重组系统 ,构建了ClpP蛋白酶缺失的大肠杆菌工程菌株 ,可望在减少外源蛋白的降解方面发挥一定的作用 . 展开更多
关键词 CLPP FLP重组酶 FRT位点 Red重组酶
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煤炭企业物流的特点与物流合理化 被引量：21
10
作者 孙志伟 《物流技术》 2001年第5期3-4,共2页
关键词 煤炭企业 物流活动 物流管理 物流合理化 物流成本核算
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研究生课程思政的核心要素与实践逻辑 被引量：33
11
作者 曹镇玺 孙志伟 《学位与研究生教育》 CSSCI 北大核心 2022年第6期54-60,共7页
加强研究生课程思政体系建设是高校落实立德树人根本任务的应有之义,是实现全员全程全方位育人的必然要求。当前研究生课程思政的建设实践已经从探索阶段向突破阶段过渡,亟待建立符合研究生教育特点的课程思政体系。研究生课程思政具有... 加强研究生课程思政体系建设是高校落实立德树人根本任务的应有之义,是实现全员全程全方位育人的必然要求。当前研究生课程思政的建设实践已经从探索阶段向突破阶段过渡,亟待建立符合研究生教育特点的课程思政体系。研究生课程思政具有教育对象的复杂性、教学方式的专业性、培养目标的多元性等特点,核心要素是三全育人、内容建设、隐性教育、时代特征。在梳理总结研究生课程思政与教学要素相互关系的基础上,构建了研究生课程思政育人的实践逻辑。 展开更多
关键词 课程思政 核心要素 教学要素 实践逻辑
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我国铝土矿资源开发利用现状、问题与对策 被引量：23
12
作者 孙志伟 鹿爱莉 《中国矿业》 北大核心 2008年第5期13-15,共3页
近年来,由于我国铝行业的迅猛发展,对铝土矿资源的消耗逐年增加,铝土矿资源开发面临着乱采滥挖、矿山企业与地方各级管理部门矛盾突出、矿山企业征地困难、氧化铝企业资源保障程度不足等一系列问题。本文针对这些问题提出了相应的对策建... 近年来,由于我国铝行业的迅猛发展,对铝土矿资源的消耗逐年增加,铝土矿资源开发面临着乱采滥挖、矿山企业与地方各级管理部门矛盾突出、矿山企业征地困难、氧化铝企业资源保障程度不足等一系列问题。本文针对这些问题提出了相应的对策建议,为我国铝土矿资源开发的健康有序发展提供决策参考。 展开更多
关键词 铝土矿 资源开发 问题 对策
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构建我国公共卫生法律体系框架的探讨 被引量：20
13
作者 石东风 万兵华 +9 位作者 叶琳 王伟 刘雅文 马萱钺 栗学军 曹锦丹 王丽伟 金明华 邹爱军 孙志伟 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期80-81,共2页
关键词 公共卫生 法律体系 卫生政策 健康促进法
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阿片类依赖者脱毒后复吸情况及复吸原因的流行病学调查 被引量：26
14
作者 铁恩贵 曾恒 +5 位作者 金俊 徐本树 孙志伟 王艳芬 陈君 张玉香 《中国药物依赖性杂志》 CAS CSCD 1999年第4期305-309,共5页
目的··:了解阿片类依赖者脱毒后的复吸情况及原因,以提高戒毒操守率。方法··:采用《16项复吸原因调查问卷》调查285例阿片类依赖者脱毒后复吸的情况。结果··:在285例被调查者中,282例在脱毒后1年内就复吸... 目的··:了解阿片类依赖者脱毒后的复吸情况及原因,以提高戒毒操守率。方法··:采用《16项复吸原因调查问卷》调查285例阿片类依赖者脱毒后复吸的情况。结果··:在285例被调查者中,282例在脱毒后1年内就复吸,仅3例没有再吸食毒品(戒毒时间超过1年),1年内复吸率高达98.9%。复吸原因:稽延性戒断症状是产生复吸的主要身体原因(占60%);为了解除心情烦恼(占65%),打发无聊时间(占56%),再吸“最后一次”(占58%),是产生复吸的主要心理原因;戒毒后回归旧环境,触景生情(占53%),受毒友的影响(占60%)开始复吸,是产生复吸的主要社会原因;另外,吸毒者戒毒信心不足(占40%),使不少吸毒者不能保持操守。身体、心理、社会3因子对复吸的影响差异显著(F=6.36,P<0.01),经配对相关t检验,身体、心理因子对复吸的影响起决定作用。结论··:选用合适的戒毒药品和在身体脱毒后进行心理康复是降低复吸率的必要手段。另外,政府的政策是控制吸毒的重要保证。 展开更多
关键词 复吸率 戒断综合征 复吸原因 流行病学 阿片依赖
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浅析我国矿产资源综合利用 被引量：29
15
作者 崔振民 吴伟宏 +1 位作者 姜琳 孙志伟 《中国矿业》 北大核心 2013年第2期40-43,共4页
矿产资源综合利用对于提高资源利用效率,加快经济发展方式转变,增强可持续发展能力都具有重要意义。本文首先从共伴生、低品位、矿山固体废弃物、再生金属、矿产资源综合利用专项等五个方面总结了我国矿产资源综合利用的总体情况。然后... 矿产资源综合利用对于提高资源利用效率,加快经济发展方式转变,增强可持续发展能力都具有重要意义。本文首先从共伴生、低品位、矿山固体废弃物、再生金属、矿产资源综合利用专项等五个方面总结了我国矿产资源综合利用的总体情况。然后,从资源管理、科研技术、政策法规、专项组织实施等四个方面分析了存在的主要问题。最后,提出了我国矿产资源综合利用的总体思路和九条具体措施,为我国矿产资源综合利用政策制定提供参考。 展开更多
关键词 矿产资源 综合利用 可持续发展
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肠内营养支持治疗减轻晚期食管癌患者化疗不良反应 被引量：30
16
作者 孙志伟 贾军 +4 位作者 杨颖 刘传玲 肖艳洁 余靖 张晓东 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期261-268,共8页
目的:评估肠内营养支持治疗对晚期食管癌患者一线化疗疗效及不良反应的影响。方法:回顾性收集2014年7月至2016年12月于北京大学肿瘤医院接受一线化疗的118例不可手术切除的局部进展期或转移性食管癌患者资料,将患者分为两组,营养支持组... 目的:评估肠内营养支持治疗对晚期食管癌患者一线化疗疗效及不良反应的影响。方法:回顾性收集2014年7月至2016年12月于北京大学肿瘤医院接受一线化疗的118例不可手术切除的局部进展期或转移性食管癌患者资料,将患者分为两组,营养支持组(化疗同时予肠内营养支持)和对照组(单纯化疗)。比较两组患者化疗前后各营养指标[KPS功能状态评分(Karnofsky performance status)、体质量、体重指数(body mass index,BMI)、血红蛋白、淋巴细胞数、总蛋白、白蛋白、甘油三酯、总胆固醇]的变化及化疗疗效、化疗不良反应的差异。结果:(1)对照组化疗后,患者体质量、BMI和血红蛋白水平均明显下降(P<0.001);营养支持组患者化疗后,患者体质量和BMI并无明显变化,仅血红蛋白有明显下降;两组患者化疗前后其他营养指标差异均无统计学意义。(2)与对照组相比,营养支持组化疗后3级以上血液学毒性发生率显著降低(15.4%vs.42.1%,P=0.004),3级以上非血液学毒性发生率也有所降低但两组差异无统计学意义(0 vs.9.2%,P=0.123)。Logistic回归多因素分析显示,营养治疗是食管癌患者化疗后发生3级以上血液学毒性的独立影响因素(P=0.008,RR=6.048,95%CI:1.589~23.027)。(3)两组患者化疗疗效差异无统计学意义。结论:晚期食管癌患者在化疗同时予肠内营养支持治疗可改善患者营养状态,减轻化疗毒性和不良反应。 展开更多
关键词 食管肿瘤 化疗 肠内营养支持
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渤海湾中化学需氧量(COD)扩散、降解过程研究 被引量：21
17
作者 王泽良 陶建华 +1 位作者 季民 孙志伟 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期27-31,共5页
对渤海湾中水质因子化学需氧量 (COD) 的随流输移扩散和生物化学过程进行了研究。在对有机污染物的生化降解过程进行试验研究的基础上，建立了模拟浅水、缓坡海湾有机物 (COD) 迁移转化规律的水质模型，并应用实测资料结果对水质模型进... 对渤海湾中水质因子化学需氧量 (COD) 的随流输移扩散和生物化学过程进行了研究。在对有机污染物的生化降解过程进行试验研究的基础上，建立了模拟浅水、缓坡海湾有机物 (COD) 迁移转化规律的水质模型，并应用实测资料结果对水质模型进行了验证。 展开更多
关键词 渤海湾 COD 降解过程
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会泽麒麟厂铅锌矿床隐伏矿体的发现及其预测的基础与方法 被引量：20
18
作者 孙志伟 《云南地质》 1998年第2期159-167,共9页
会泽麒麟厂铅锌矿床隐伏矿体的发现及其预测的基础与方法孙志伟收稿日期：１９９７－０７－１８（云南冶金集团总公司会泽铅锌矿）会泽铅锌矿位于云南省会泽县者海镇，是一个具有开采历史悠久的老矿山，早在东汉时期就开始开采、冶炼。... 会泽麒麟厂铅锌矿床隐伏矿体的发现及其预测的基础与方法孙志伟收稿日期：１９９７－０７－１８（云南冶金集团总公司会泽铅锌矿）会泽铅锌矿位于云南省会泽县者海镇，是一个具有开采历史悠久的老矿山，早在东汉时期就开始开采、冶炼。解放后自１９５１年建矿以来，经过十... 展开更多
关键词 铅锌矿床 隐伏矿体 预测法 成矿预测
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五子衍宗丸药理作用及其临床研究进展 被引量：26
19
作者 孙志伟 李玉洲 张长城 《亚太传统医药》 2010年第12期179-181,共3页
五子衍宗丸由五味子、枸杞子、菟丝子、覆盆子、车前子五味药组成,为补肾生精的代表药。就五子衍宗丸的药理作用及其机理、主要临床应用等进行综述,并探讨其临床应用的药理基础。
关键词 五子衍宗丸 药理基础 补肾生精
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流行性乙型脑炎病毒(JEV)全长感染性克隆的制备及恢复病毒的获得 被引量：20
20
作者 黄莺 贾丽丽 +3 位作者 孙志伟 王志伟 俞炜源 俞永新 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期313-319,共7页
根据JEV病毒减毒株SA14-14-2基因组序列,设计覆盖全长的4对重叠引物,以提取的活疫苗病毒RNA为模板,RT-PCR扩增出4个片段,并克隆到质粒载体中,进一步构建两个半端分子克隆,然后将全长cDNA序列克隆到一个新改造的低拷贝质粒载体pBR-kpn中... 根据JEV病毒减毒株SA14-14-2基因组序列,设计覆盖全长的4对重叠引物,以提取的活疫苗病毒RNA为模板,RT-PCR扩增出4个片段,并克隆到质粒载体中,进一步构建两个半端分子克隆,然后将全长cDNA序列克隆到一个新改造的低拷贝质粒载体pBR-kpn中,构建我国流行性乙型脑炎病毒(JEV)基因组全长cDNA克隆。经过体外转录后得到的转录子转染BHK-21细胞,重新获得JEV的恢复病毒,通过生物学特性、分子生物学水平、蛋白水平等几个方面对恢复病毒进行鉴定。结果获得了稳定的全长cDNA克隆,转录子转染BHK-21细胞后,第4天开始出现细胞病变(CPE),第6～7天时CPE为 ,经过Vero细胞进一步放大培养后,间接免疫荧光实验和RT-PCR实验均为阳性。证实了构建的JEV的全长cDNA克隆有感染性,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 感染性克隆 恢复病毒 质粒载体
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