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同时检测血清中多种抗体的蛋白质微阵列研究 被引量：7
1
作者 丁亚平 陈立炎 +7 位作者 张文 曹恒杰 倪世明 周枚芬 梁好 凌志光 耿永尧 王升启 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期640-644,共5页
建立一种用蛋白质微阵列法可同时检测血清中艾滋病毒 (HIV) ,丙型肝炎病毒 (HCV)和梅毒螺旋体(TP)抗体的方法 .将基因工程HIV、HCV和TP 3种融合抗原共价结合于固相载体玻片上 ,制成蛋白质微阵列 ,血清样本经稀释、加样、孵育、洗涤后 ,... 建立一种用蛋白质微阵列法可同时检测血清中艾滋病毒 (HIV) ,丙型肝炎病毒 (HCV)和梅毒螺旋体(TP)抗体的方法 .将基因工程HIV、HCV和TP 3种融合抗原共价结合于固相载体玻片上 ,制成蛋白质微阵列 ,血清样本经稀释、加样、孵育、洗涤后 ,加上Cy3荧光标记二抗 ,洗涤 ,激光共聚扫描 ,将获得的图片用Bio discover公司的Imagene专用分析软件进行分析 ,所获数据在经过自行编写的软件 ,根据Cutoff值自动生成判断结果 .用此蛋白质微阵列系统检测了 4 0 0例阴性血清 ,确定了Cutoff值 ,检测中国药品生物制品检定研究所的HIV ,HCV和TP 3种参比品 ,并与 3种ELISA试剂盒的结果进行了比较 .蛋白质微阵列的艾滋病毒阳性和阴性符合率均为 10 0 % (2 0 / 2 0 ) ;丙型肝炎病毒阳性和阴性符合率均为 95 % (38/ 4 0 ) .梅毒螺旋体参比品阳性符合率为 10 0 % (10 / 10 ) ,阴性符合率为 10 0 % (2 0 / 2 0 ) ,蛋白质微阵列与三种ELISA试剂检测国家HIV、TP、HCV参比品 (共 15 0份血清样本 ) ,结果具有高度的符合率 . 展开更多
关键词 同时检测 血清 多种抗体 蛋白质微阵列
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β-地中海贫血基因检测膜条制备及其临床评价 被引量：11
2
作者 周枚芬 陈立炎 +3 位作者 罗小珍 尹忠华 张文 黄坚 《生物技术通讯》 CAS 2005年第2期134-137,共4页
根据GenBank报道的人β-珠蛋白序列及中国人β-地中海贫血基因特点,设计并合成30条探针用于检测在中国人中发现的17个β-地中海贫血基因突变位点,然后将探针点至醋酸纤维膜上,制成反向杂交膜条,通过检测950份标本,对其临床检测效果进行... 根据GenBank报道的人β-珠蛋白序列及中国人β-地中海贫血基因特点,设计并合成30条探针用于检测在中国人中发现的17个β-地中海贫血基因突变位点,然后将探针点至醋酸纤维膜上,制成反向杂交膜条,通过检测950份标本,对其临床检测效果进行评价。共制备了含30条寡核苷酸探针的反向杂交膜条,临床验证结果表明,以对照膜条为标准,制备膜条阳性符合率为99.76%(421/422),特异性为99.05%(523/528),总符合率为99.37%。对6份检测结果不符的标本进行测序验证,结果为TATAbox-28/Int双重杂合子(1份)、TATAbox-32杂合子(1份)、IVS-1-5杂合子(3份)、-30杂合子(1份),均为少见突变位点,与制备膜条检测结果一致;采用等位基因特异性PCR法检测5个常见β-地中海贫血基因位点(CD41/42,IVS-2-654,CD17,TATAbox-28,CD71/72),检测结果与制备膜条完全相符。结果表明,研制的β-地中海贫血基因检测反向杂交膜条敏感度高,特异性好,不仅能准确检测中国人常见的β-地中海贫血基因类型,而且还能检测少见基因突变类型。 展开更多
关键词 Β-地中海贫血 基因诊断 反向杂交膜条 制备 临床评价 基因突变类型 遗传性疾病
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蛋白芯片生产用醛基化玻片制备的条件优化及初步检定 被引量：8
3
作者 丁亚平 倪世明 +7 位作者 陈立炎 张文 曹恒杰 罗予春 周枚芬 梁好 凌志光 王升启 《生物技术通讯》 CAS 2002年第6期445-447,450,共4页
建立一种以玻片为基质的蛋白芯片制备的优化及检定方法。将经过清洗处理的玻片,用不同浓度的氨基硅烷试剂和戊二醛试剂,在不同的时间内,进行氨基化和醛基化处理,通过蛋白结合强度与处理时间及溶剂浓度的动力学相关性分析,确定最佳的优... 建立一种以玻片为基质的蛋白芯片制备的优化及检定方法。将经过清洗处理的玻片,用不同浓度的氨基硅烷试剂和戊二醛试剂,在不同的时间内,进行氨基化和醛基化处理,通过蛋白结合强度与处理时间及溶剂浓度的动力学相关性分析,确定最佳的优化条件,将不同浓度梯度的人IgG抗体结合于该玻片表面,经过洗涤、封闭,再加入Cy3荧光标记的二抗,孵育,洗涤后检测各点的荧光强度,确定其线性范围及其检测灵敏度。氨基硅烷试剂浓度为5%,作用时间为30min;戊二醛试剂浓度为2.5%,作用时间为60min时,蛋白结合强度达到饱和。蛋白芯片在2～2×4-7mg/ml浓度范围内有良好的线性,能够检测出人IgG的最低浓度为2×4-8mg/ml。 展开更多
关键词 蛋白芯片 醛基化玻片 制备 条件优化 检定 氨基硅烷 戊二醛
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丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片的制备及临床评价 被引量：7
4
作者 张文 周枚芬 +5 位作者 陈立炎 丁亚平 曹恒杰 黄坚 耿永尧 王升启 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期935-939,共5页
为了制备丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片 ,并对其临床应用价值进行评价 ,将基因工程表达的丙型肝炎病毒分片段抗原 ,点至经特殊处理的玻片上 ,制成蛋白质芯片 .收集来自三家临床单位用于临床验证的 90 5份血清标本 .分别用丙肝... 为了制备丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片 ,并对其临床应用价值进行评价 ,将基因工程表达的丙型肝炎病毒分片段抗原 ,点至经特殊处理的玻片上 ,制成蛋白质芯片 .收集来自三家临床单位用于临床验证的 90 5份血清标本 .分别用丙肝病毒分片段抗体检测蛋白质芯片、ELISA丙肝病毒抗体检测试剂进行检测 .部分样本同时采用进口RIBA抗体检测试剂进行了检测 ,分别比较蛋白质芯片法与ELISA法以及RIBA试剂的符合率 .结果表明 :a 90 5份血清标本 ,ELISA法检出阳性 2 94份 ,阴性 611份 .阳性标本用蛋白质芯片法检测 ,融合抗原 2 92份显示阳性结果、 2份阴性结果 ,根据蛋白质芯片的核心抗原 ,以及NS3 ,NS4,NS5分片段抗原综合判断确定阳性样本 2 88份阳性 ,阴性样本 2份 ,4份样本结果不确定 .ELISA法检出的 611份阴性标本用两种蛋白质芯片法检测 ,检出阴性均为 611份 .两种蛋白质芯片法与ELISA法的阳性符合率分别为 99 3 %和98 9% ,与ELISA法的阴性符合率均为 10 0 % .用RIBA试剂检测 6份ELISA法为阳性 ,蛋白质芯片法为非阳性的样本 ,结果均为非阳性 .b 2 90份经RIBA试剂确认的阳性标本 10 4份 ,单片段阳性标本 66份 ,阴性标本12 0份 ,用蛋白质芯片法检测 ,检出阳性标本 10 3份 ,单片段阳性标本 61份 ,阴性标本 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 抗体 蛋白质芯片 临床评价
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丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片质控参比品的建立及质量验证 被引量：1
5
作者 张文 周枚芬 +4 位作者 陈立炎 丁亚平 黄坚 耿永尧 王升启 《生物技术通讯》 CAS 2004年第3期248-250,共3页
建立能同时检测丙型肝炎病毒(HCV)嵌合抗体、核心抗体和NS3、NS4、NS5抗体的蛋白质芯片质控参比品,对质控合格的芯片进行质量验证。用3种HCVEIA试剂分别检测从3家医院收集的丙型肝炎病毒感染患者血清及其他非HCV感染患者血清,从3种EIA... 建立能同时检测丙型肝炎病毒(HCV)嵌合抗体、核心抗体和NS3、NS4、NS5抗体的蛋白质芯片质控参比品,对质控合格的芯片进行质量验证。用3种HCVEIA试剂分别检测从3家医院收集的丙型肝炎病毒感染患者血清及其他非HCV感染患者血清,从3种EIA试剂同时阴性或阳性的血样中挑取阳性和阴性血清,然后用RNAhybPCR试剂进行检测,从中再选取部分样本用RIBA3.0进行检测,确定HCV分片段抗体检测蛋白质芯片质控参比品。经质检合格的芯片用中国药品生物制品检定所的HCV参比品进行检定。通过490例临床标本的检测对芯片的质量进行进一步的验证。从收集的240份丙型肝炎病毒感染患者血清及其他非HCV感染患者血清筛选出30份血样(15份阳性,15份阴性)作为HCV分片段抗体检测蛋白芯片质控参比品。中国药品生物制品检定所的80份HCV参比品检定结果表明,混合抗体阳性检出率为39/40,阴性符合率为40/40,总符合率为98.7%;核心抗体阳性检出率为27/40,阴性符合率为40/40;NS3抗体阳性检出率为26/40,阴性符合率为39/40;NS4抗体阳性检出率为19/40,阴性符合率为40/40;NS5抗体阳性检出率2/40,阴性符合率为40/40。490例临床标本的检测结果表明,对于194例HCV阳性标本,蛋白质芯片混合抗体与ELISA的符合率达99.5%,分片段抗体符合率达97.4%,两种方法检测? 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 蛋白质芯片 质量验证 生物制品 抗体 检测
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