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海藻酸钠/明胶复合水凝胶用于3D生物打印的初步研究 被引量：7
1
作者 任荣 张剑飞 +3 位作者 司家文 吴稼晟 李伟 史俊 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2017年第5期402-407,共6页
目的:利用天然高分子材料明胶、海藻酸钠的物理、生物学性能及其特殊的交联特性,构建一种可用于3D生物打印的生物墨水,并对其进行制备、表征与分析,为后期的生物打印提供材料基础。方法:根据回顾文献得到的信息,采用比例混合法制备质量... 目的:利用天然高分子材料明胶、海藻酸钠的物理、生物学性能及其特殊的交联特性,构建一种可用于3D生物打印的生物墨水,并对其进行制备、表征与分析,为后期的生物打印提供材料基础。方法:根据回顾文献得到的信息,采用比例混合法制备质量比为2∶15、2∶10的2种海藻酸钠/明胶复合水凝胶,分别进行冻干扫描电镜(SEM)微观形貌、溶胀性能、孔隙率分析,3D打印以及利用复合水凝胶进行载ATDC-5小鼠成软骨前体细胞的3D培养等实验,以确定此复合水凝胶的物理特性及生物学特性。结果:顺利构建出海藻酸/明胶复合水凝胶,并对其进行分析,发现2∶10、-20℃组凝胶比2∶15、-50℃组水凝胶拥有更多、更大的孔径。孔隙率实验结果显示,2组海藻酸钠/明胶复合水凝胶的孔隙率在60%~82%之间,均利于细胞培养。溶胀性能测试结果显示,溶胀率均在660%~740%范围,表明此种海藻酸钠/明胶复合水凝胶的亲水性较强,非常有利于细胞增殖。3D打印结果显示,利用此种复合水凝胶可以打印出预先设计的几何形状,且经二价阳离子化学交联后,能够形成具有一定机械强度的水凝胶胶体。细胞培养结果显示,ATDC-5细胞在此种复合水凝胶内培养下,7 d后仍有95%的成活率。结论:此种经明胶改性的海藻酸钠/明胶复合水凝胶具有优良的微观形貌、溶胀性能以及适合的孔隙率,并且具备3D打印能力。尤其是明胶与海藻酸钠质量比为15∶2组,因具有均匀孔径以及能够满足3D打印墨水的性能要求,可考虑作为3D生物打印的"墨水"。 展开更多
关键词 海藻酸钠 明胶 3D生物打印 墨水
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人脂肪来源干细胞与聚己内酯/壳聚糖支架的生物相容性研究 被引量：4
2
作者 周哲 吴稼晟 +6 位作者 张明 赵阳 周娟 李伟 王忠 孙康 卢慕峻 《组织工程与重建外科杂志》 2013年第3期133-136,共4页
目的观察人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,hADSCs)在聚己内酯/壳聚糖[Poly(ε-capro-lactone)/chitosan,PCL/CS]支架中的生长情况。方法取PCL/CS浸提液培养hADSCs,CCK-8法检测细胞活力,评价支架细胞毒性。hADSCs传... 目的观察人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,hADSCs)在聚己内酯/壳聚糖[Poly(ε-capro-lactone)/chitosan,PCL/CS]支架中的生长情况。方法取PCL/CS浸提液培养hADSCs,CCK-8法检测细胞活力,评价支架细胞毒性。hADSCs传代扩增后,接种到PCL/CS支架上,体外培养1周、2周,裸鼠体内培养2周,HE染色观察细胞在支架上的生长情况,免疫组化HLA-Ⅰ监测经裸鼠体内培养后复合支架上细胞的种属来源。结果 hADSCs在PCL/CS浸提液中可保持较高的增殖率,PCL/CS浸提液无细胞毒性。hADSCs终止于PCL/CS支架后,经过体外、内培养,hADSCs均能长入支架的空隙内,且体内培养比体外培养有更多的细胞长入支架。体外培养1周,已有细胞黏附生长在PCL/CS支架的边缘,体外培养2周后,部分细胞渗透到材料内部。体内培养2周后,大量细胞能渗透到材料内部,同时HLA-Ⅰ抗体检测发现,支架材料内部分细胞HLA-Ⅰ阳性表达,说明PCL/CS支架内该部分的细胞来源于hADSCs。结论 PCL/CS支架安全无毒,hADSCs能在PCL/CS支架上较好生长,该支架可用于组织工程膀胱的研究。 展开更多
关键词 人脂肪来源干细胞 聚己内酯 壳聚糖 支架 组织工程
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人脂肪来源干细胞与膀胱脱细胞基质-丝素蛋白双层支架的生物相容性研究 被引量：3
3
作者 赵阳 吴稼晟 +6 位作者 周哲 周娟 张明 李伟 王忠 孙康 卢慕峻 《组织工程与重建外科杂志》 2014年第6期309-313,共5页
目的观察人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,h ASCs)在膀胱黏膜下脱细胞基质-丝素蛋白(Bladder acellular matrix graft-silk fibroin,BAMG-SF)双层支架材料中的生长情况,分析其生物相容性。方法取h ASCs,置于BAMG-SF... 目的观察人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,h ASCs)在膀胱黏膜下脱细胞基质-丝素蛋白(Bladder acellular matrix graft-silk fibroin,BAMG-SF)双层支架材料中的生长情况,分析其生物相容性。方法取h ASCs,置于BAMG-SF浸提液中培养,CCK-8法检测其细胞活力,评价BAMG-SF支架的细胞毒性并绘制生长曲线。扫描电镜观察BAMG-SF双层支架材料的表面形貌。将h ASCs传代扩增后接种到BAMG-SF双层支架材料上,体外培养1周后,转至裸鼠皮下培养1周、2周,HE染色观察细胞在支架上的生长情况。HLA免疫荧光鉴定裸鼠皮下双层支架上细胞的种属来源。结果 h ASCs在BAMG-SF双层支架浸提液中可保持较高的增殖率,根据细胞相对增殖率与细胞毒性分级关系证实BAMG-SF双层支架浸提液无细胞毒性。由h ASCs在BAMG-SF浸提液和DMEM培养基中的生长曲线可知,BAMG-SF有利于h ASCs的生长。将h ASCs接种到BAMG-SF双层支架材料上,经过体外、内培养,h ASCs均能长入支架的空隙内,且体内培养比体外培养有更多的h ASCs细胞长入支架。HLA检测显示支架内细胞部分为h ASCs。结论新型BAMG-SF双层支架材料安全无毒,与h ASCs生物相容性好,可作为细胞载体应用于组织工程膀胱的研究。 展开更多
关键词 人脂肪来源干细胞 膀胱黏膜下脱细胞基质 丝素蛋白 双层支架材料 组织工程
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胶原海绵支架体外构建组织工程膀胱黏膜 被引量：3
4
作者 张明 徐明曦 +5 位作者 吴稼晟 李伟 孙康 王忠 周哲 卢慕峻 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第21期3855-3858,共4页
背景:组织工程膀胱黏膜层的构建在组织工程膀胱修复中占有重要的地位,但目前并没有最合理的构建方法。目的:探讨胶原海绵支架复合猪膀胱尿路上皮细胞体外构建膀胱黏膜结构的可行性。方法:刮取猪膀胱黏膜层后用酶消化方式进行猪膀胱尿路... 背景:组织工程膀胱黏膜层的构建在组织工程膀胱修复中占有重要的地位,但目前并没有最合理的构建方法。目的:探讨胶原海绵支架复合猪膀胱尿路上皮细胞体外构建膀胱黏膜结构的可行性。方法:刮取猪膀胱黏膜层后用酶消化方式进行猪膀胱尿路上皮细胞原代培养,并进行尿路上皮细胞标志物免疫荧光和RT-PCR鉴定。制备疏松多孔的胶原海绵支架材料,将第3代尿路上皮细胞接种在胶原海绵支架上,体外培养4～8d后观察尿路上皮细胞和胶原海绵材料的复合情况。结果与结论:原代培养的猪膀胱尿路上皮细胞呈"多角形"、"铺路石"样,以克隆团形式生长。免疫荧光鉴定AE1/AE3阳性,RT-RCR检测uroplakin-ⅠA、uroplakin-Ⅱ阳性。胶原海绵复合尿路上皮细胞体外培养4～8d后,细胞在胶原海绵支架上生长良好,覆盖胶原材料的表面并长入材料内部,保持了尿路上皮细胞的特性。体外培养6d时,尿路上皮细胞与胶原支架复合效果最好,同时细胞数量也最多。结果初步表明了胶原海绵复合膀胱尿路上皮细胞可以构建组织工程膀胱黏膜,且体外培养6d为最佳时间点。 展开更多
关键词 膀胱黏膜 胶原 尿路上皮细胞 组织工程 支架材料
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人脂肪来源干细胞与胶原支架共培养的实验研究 被引量：2
5
作者 徐明曦 周哲 +6 位作者 张明 吴稼晟 李伟 孙康 王忠 赵阳 卢慕峻 《组织工程与重建外科杂志》 2012年第4期189-194,共6页
目的观察评价人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,hADSCs)在胶原支架中的生长情况,为进一步体内组织修复研究提供依据。方法取人抽脂术后脂肪,经胶原酶解、过滤、离心获得hADSCs,代传代扩增后,接种到胶原支架上。细胞-... 目的观察评价人脂肪来源干细胞(Human adipose derived stem cells,hADSCs)在胶原支架中的生长情况,为进一步体内组织修复研究提供依据。方法取人抽脂术后脂肪,经胶原酶解、过滤、离心获得hADSCs,代传代扩增后,接种到胶原支架上。细胞-材料复合物分别体外培养1周、2周,裸鼠体内培养2周、4周后,HE染色观察细胞在支架上的生长情况,免疫组化HLA-Ⅰ检测经裸鼠体内培养后的复合物上的细胞的种属来源。结果原代培养的hADSCs呈"梭形"或"成纤维细胞"样,并以克隆团形式生长。免疫荧光Vimentin染色阳性。第3代hADSCs经流式细胞鉴定,CD29、CD44、CD105表达阳性,CD45、CD34表达阴性。胶原支架复合hADSCs经过体外、体内培养,hADSCs均能长入胶原支架的空隙内,且体内培养比体外培养有更多的细胞长入支架。体外培养1周,已有细胞粘附生长在胶原支架的边缘,体外培养2周后,更多的细胞渗透到材料内部。体内培养2周后,大量细胞占据材料的边缘,有部分细胞能渗透到材料内部甚至材料全层。体内培养4周后,大量细胞渗透支架全层。HLA-Ⅰ抗体检测发现,支架材料内部细胞阳性表达,说明胶原支架内部的细胞来源于hADSCs。结论胶原支架与hADSCs具有较好的相容性,可作为hADSCs的载体材料,用于组织工程缺损修复的研究。 展开更多
关键词 脂肪来源干细胞 胶原 支架 组织工程
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聚己内酯/壳聚糖与聚己内酯/聚乳酸支架与人脂肪来源干细胞的生物相容性研究 被引量：1
6
作者 姚海军 赵阳 +6 位作者 周哲 肖冬冬 张明 郑大超 何创龙 吴稼晟 王忠 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2015年第8期18-22,共5页
目的 对比人脂肪来源干细胞（Human adipose derived stem cells,hADSCs）与聚己内酯/聚乳酸（Polycaprolactone/Polylactide,PCL/PLA）和聚己内酯/壳聚糖（Polycaprolactone/chitosan,PCL/CS）复合支架的生物相容性,为进一步体内组织... 目的 对比人脂肪来源干细胞（Human adipose derived stem cells,hADSCs）与聚己内酯/聚乳酸（Polycaprolactone/Polylactide,PCL/PLA）和聚己内酯/壳聚糖（Polycaprolactone/chitosan,PCL/CS）复合支架的生物相容性,为进一步体内组织修复提供依据.方法 体外分离、培养和扩增hADSCs,分别制备PCL/PLA、PCL/CS复合支架,扫描电镜观察支架材料的表面情况.取材料浸提液培养hADSCs,CCK-8法检测细胞活力,评价支架的细胞毒性.hADSCs传代扩增后,接种到支架材料上,裸鼠皮下培养2周,HE染色观察细胞在支架上的生长情况.结果 hADSCs与成纤维细胞相似,呈“梭形”,并以集落形式生长.扫描电镜观察PCL/CS孔径在100μm左右,孔隙率为88.76％,而PCL/PLA支架孔径则在40μm左右,孔隙率为91.45％.hADSCs在PCL/CS浸提液中培养1、3、7天的相对增殖率分别为98.6％、101.6％、110.3％,而PCL/PLA组为98.1％、100.7％、108.4％,说明hADSCs在两种浸提液中均保持较高的增殖率,即两种合成支架均无细胞毒性.hADSCs复合两种支架体内培养后,HE染色后可见有大量细胞长入PCL/CS支架内部,同时免疫组化HLA-Ⅰ检测发现,支架材料内部分细胞阳性表达,说明PCL/CS支架内该部分的细胞来源于人,即hADSCs.而在PCL/PLA内部渗透进入的细胞不如PCL/CS支架组.结论 PCL/CS和PCL/PLA支架安全无毒,hADSCs在PCL/CS支架上显示更好的细胞相容性,该支架可以作为hADSCs的载体材料,用于组织工程膀胱修复的研究. 展开更多
关键词 干细胞 组织支架 组织工程 生物相容性材料
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复合生物支架胶原蛋白/壳聚糖及聚乙烯醇/丝胶在大鼠膀胱扩大手术中的应用
7
作者 何竑超 戴军 +7 位作者 吴稼晟 李伟 窦红静 陆国樑 王晓晶 刘伟 孙康 沈周俊 《组织工程与重建外科杂志》 2011年第4期202-206,共5页
目的评价复合生物材料胶原蛋白/壳聚糖及聚乙烯醇/丝胶在膀胱扩大手术中的效果及可行性。方法雌性大鼠21只随机分为3组,即膀胱扩大手术组(实验组:修补材料为胶原蛋白/壳聚糖+聚乙烯醇/丝胶);膀胱部分切除组(对照组)和非手术组(平行对照... 目的评价复合生物材料胶原蛋白/壳聚糖及聚乙烯醇/丝胶在膀胱扩大手术中的效果及可行性。方法雌性大鼠21只随机分为3组,即膀胱扩大手术组(实验组:修补材料为胶原蛋白/壳聚糖+聚乙烯醇/丝胶);膀胱部分切除组(对照组)和非手术组(平行对照组)。所有3组实验动物在术后7 d、21 d、42 d进行膀胱容量测定,并取材观察其形态学及组织学改变。结果接受膀胱扩大手术的大鼠,术后各时间点的膀胱容量均明显高于其他两组。大体检查见膀胱血管纹理清晰,修补部位与正常膀胱无明显分界,结石发生率为71.4%。镜下组织学检查发现:术后7 d时,支架外层大量炎症细胞浸润,组织结构无法分清。术后42 d时,支架内层上可见泌尿上皮呈多层排列,黏膜下层增厚明显,但平滑肌层相对稀疏且排列欠规则。结论复合生物支架胶原蛋白/壳聚糖+聚乙烯醇/丝胶能成功应用于大鼠膀胱扩大手术,但存在膀胱平滑肌层再生情况不佳、成石率较高的缺点,有待进一步研究改善。 展开更多
关键词 胶原蛋白/壳聚糖 聚乙烯醇/丝胶 组织工程 膀胱
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人永生化尿路上皮细胞系与胶原支架共培养的实验研究
8
作者 周哲 赵阳 +5 位作者 吴稼晟 张明 李伟 孙康 王忠 卢慕峻 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第20期6-9,共4页
目的观察评价人永生化尿路上皮细胞系(immortalized human bladder urothelium cell line)SVHUC-1在胶原支架中的生长情况,为进一步体内组织修复研究提供依据。方法制备疏松多孔的胶原支架材料,SV-HUC-1传代扩增后,接种在胶原支架上,体... 目的观察评价人永生化尿路上皮细胞系(immortalized human bladder urothelium cell line)SVHUC-1在胶原支架中的生长情况,为进一步体内组织修复研究提供依据。方法制备疏松多孔的胶原支架材料,SV-HUC-1传代扩增后,接种在胶原支架上,体外培养7 d后取材,观察SV-HUC-1和胶原的复合情况。结果 SV-HUC-1呈"多角形"、"铺路石"样,以克隆团形式生长。HE染色显示胶原支架上的SV-HUC-1经过体外培养7 d后即可形成沿支架表面排列的复层上皮结构,大量SV-HUC-1渗透到胶原的空隙内。扫描电镜显示细胞材料复合良好。结论 SV-HUC-1能在胶原支架上较好的生长,胶原可以作为理想的支架材料,进一步用于组织工程膀胱修复的研究。 展开更多
关键词 尿路上皮细胞 胶原 支架 组织工程
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