目的:探讨泛素链接酶LNX1(ligand of numb-protein X 1)对肾透明细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的分子作用机制。方法:利用基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库分析LNX1 mRNA...目的:探讨泛素链接酶LNX1(ligand of numb-protein X 1)对肾透明细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的分子作用机制。方法:利用基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库分析LNX1 mRNA在肾透明细胞癌组织中的表达水平,及其与肾透明细胞癌患者预后的相关性。采用慢病毒感染的方法将携带特异性针对LNX1基因的shRNA(shLNX1)转入肾透明细胞癌细胞786-O和ACHN中;采用瞬时转染的方法将重组质粒flag-LNX1转入786-O和ACHN细胞中。分别采用CCK-8实验和细胞集落形成实验检测沉默或过表达LNX1对786-O和ACHN细胞增殖能力的影响,Transwell小室实验检测沉默或过表达LNX1对786-O和ACHN细胞侵袭和迁移能力的影响。采用生物信息学分析法筛选LNX1的下游靶基因,采用蛋白质印迹法检测沉默或过表达LNX1对T淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1(T-lymphoma invasion and metastasis-inducing protein 1,TIAM1)及其下游ERK信号通路中ERK及其磷酸化蛋白表达水平的影响。用蛋白酶体抑制剂MG132处理过表达LNX1的786-O和ACHN细胞,并且蛋白质印迹法检测TIAM1蛋白的表达水平。最后在过表达LNX1的细胞中同时转入重组载体myc-TIAM1,再用蛋白质印迹法、细胞集落形成实验和Transwell小室实验检测ERK信号通路中各蛋白的表达水平,以及同时过表达LNX1和TIAM1对786-O和ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果:肾透明细胞癌组织中LNX1 mRNA的表达水平降低(P<0.05),其表达水平与患者的生存时间呈正相关(P<0.001)。成功构建沉默LNX1基因的786-O和ACHN细胞,以及过表达LNX1的786-O和ACHN细胞。沉默LNX1基因后,786-O和ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显增强(P均<0.05);过表达LNX1后,786-O和ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显减弱(P均<0.05)。生物信息学分析发现TIAM1为LNX1的潜在靶蛋白。沉默LNX1基因后,TIAM1和磷酸化ERK(phospho-ERK,p展开更多
查阅万方数据库及Pubmed数据库2005至2017年间相关文献,中文关键词为"皮瓣缺血再灌注损伤,信号通路,凋亡,氧化应激,炎症反应,微循环,钙超载",英文关键词为"ischemia and reperfusion of skin flap,signal pathway,apopto...查阅万方数据库及Pubmed数据库2005至2017年间相关文献,中文关键词为"皮瓣缺血再灌注损伤,信号通路,凋亡,氧化应激,炎症反应,微循环,钙超载",英文关键词为"ischemia and reperfusion of skin flap,signal pathway,apoptosis,oxidative stress,inflammatory reaction,microcirculation,calcium overload",依据纳入排除标准选出35篇。最终选用36篇文献进行分析、总结皮瓣IR过程中相关的细胞信号通路。发现目前与缺血再灌注损伤的信号通路主要有:PI3K/Akt、Nrf2/Keap1-ARE、JAK/STAT、p38 MAPK/IKK/NF-κB、Toll4/NF-κB、PHD-HIF、Trx-1-ASK-MAPK、Trx-MKK4-NF-κB、FOXO-c AMP-PKA-CREB-PGC1α、ROS-ASK1-MKK4/MKK7-JNK、Wnt、c-Jun、PKC-ERKs、HIF-1α/VEGF、Akt/c-myc/VEGF等。可从IR发生、发展的一系列病理生理过程相关的信号转导通路层面出发,预防或减轻皮瓣IR,但IR是一个多因素、多信号调节的病理生理过程,仍存有许多疑问,未来对IR相关细胞信号通路更深入研究将为预防和减轻缺血再灌注提供新的靶点。展开更多
文摘目的:探讨泛素链接酶LNX1(ligand of numb-protein X 1)对肾透明细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的分子作用机制。方法:利用基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库分析LNX1 mRNA在肾透明细胞癌组织中的表达水平,及其与肾透明细胞癌患者预后的相关性。采用慢病毒感染的方法将携带特异性针对LNX1基因的shRNA(shLNX1)转入肾透明细胞癌细胞786-O和ACHN中;采用瞬时转染的方法将重组质粒flag-LNX1转入786-O和ACHN细胞中。分别采用CCK-8实验和细胞集落形成实验检测沉默或过表达LNX1对786-O和ACHN细胞增殖能力的影响,Transwell小室实验检测沉默或过表达LNX1对786-O和ACHN细胞侵袭和迁移能力的影响。采用生物信息学分析法筛选LNX1的下游靶基因,采用蛋白质印迹法检测沉默或过表达LNX1对T淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1(T-lymphoma invasion and metastasis-inducing protein 1,TIAM1)及其下游ERK信号通路中ERK及其磷酸化蛋白表达水平的影响。用蛋白酶体抑制剂MG132处理过表达LNX1的786-O和ACHN细胞,并且蛋白质印迹法检测TIAM1蛋白的表达水平。最后在过表达LNX1的细胞中同时转入重组载体myc-TIAM1,再用蛋白质印迹法、细胞集落形成实验和Transwell小室实验检测ERK信号通路中各蛋白的表达水平,以及同时过表达LNX1和TIAM1对786-O和ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果:肾透明细胞癌组织中LNX1 mRNA的表达水平降低(P<0.05),其表达水平与患者的生存时间呈正相关(P<0.001)。成功构建沉默LNX1基因的786-O和ACHN细胞,以及过表达LNX1的786-O和ACHN细胞。沉默LNX1基因后,786-O和ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显增强(P均<0.05);过表达LNX1后,786-O和ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显减弱(P均<0.05)。生物信息学分析发现TIAM1为LNX1的潜在靶蛋白。沉默LNX1基因后,TIAM1和磷酸化ERK(phospho-ERK,p
