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决明子营养价值分析及蛋白提取工艺研究 被引量：7
1
作者 冯潜 刘祖碧 +4 位作者 宋涛 焦林涛 陈胜华 周嘉裕 廖海 《生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期103-106,共4页
以大决明子为原材料,基于氨基酸比值系数法,对决明子的营养价值进行了分析;并以碱性缓冲液为提取剂,进行决明子蛋白提取工艺研究,探讨了缓冲液浓度及pH值、料液比、浸泡时间对蛋白提取率的影响,最后用正交试验确定大决明子蛋白的最佳提... 以大决明子为原材料,基于氨基酸比值系数法,对决明子的营养价值进行了分析;并以碱性缓冲液为提取剂,进行决明子蛋白提取工艺研究,探讨了缓冲液浓度及pH值、料液比、浸泡时间对蛋白提取率的影响,最后用正交试验确定大决明子蛋白的最佳提取工艺。结果表明决明子的营养价值高于大豆和紫花苜蓿,与南瓜接近略低于鸡蛋;提取工艺条件最佳为50 mmol/L、pH值=8.0的KH2PO4-NaOH缓冲液,料液比1 g:50 mL,浸泡提取时间12h。此条件下决明子蛋白的提取率为93.3%。 展开更多
关键词 决明子 营养价值 蛋白提取 正交试验
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决明胰蛋白酶抑制剂1活性相关残基的定点突变与抑制活性分析 被引量：2
2
作者 向缅 朱建全 +6 位作者 俞继华 李洋洋 李娟娟 刘祖碧 王万军 廖海 周嘉裕 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期15-20,共6页
决明胰蛋白酶抑制剂1(Co TI1)属于Kunitz胰蛋白酶抑制剂家族成员,通过序列比对预测Arg86、Leu84和Thr88等3个氨基酸残基可能是Co TI1发挥抑制作用的关键残基。通过定点突变的方法将Arg86、Leu84与Thr88残基分别突变为Asp残基,并考察各... 决明胰蛋白酶抑制剂1(Co TI1)属于Kunitz胰蛋白酶抑制剂家族成员,通过序列比对预测Arg86、Leu84和Thr88等3个氨基酸残基可能是Co TI1发挥抑制作用的关键残基。通过定点突变的方法将Arg86、Leu84与Thr88残基分别突变为Asp残基,并考察各突变体对胰蛋白酶及棉铃虫等鳞翅目害虫消化酶的抑制作用。与Co TI1相比,Co TI1^(R86D)、CoTI1^(T88D)与CoTI1^(L84D)突变体对胰蛋白酶的抑制活性分别下降了93%、64%与59%;对棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾等3种鳞翅目害虫消化酶的平均抑制活性分别下降了88.7%、57%与60.7%。以上结果表明Arg86、Leu84与Thr88是Co TI1发挥抑制作用的关键残基,这为Co TI1的抑制分子机制及抗虫研究提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 决明 胰蛋白酶抑制剂 定点突变
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Kunitz蛋白酶抑制剂基因的密码子偏好性分析 被引量：2
3
作者 李娟娟 黄宇 +4 位作者 刘祖碧 朱乾坤 宋涛 周嘉裕 廖海 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期39-44,共6页
目的:分析豆科植物的Kunitz蛋白酶抑制剂(KTI)基因密码子偏好性,确定最适模式植物与外源表达系统。方法:运用Codon W等程序分析密码子偏好性,并用决明KTI基因验证分析结果的可信度。通过聚类分析,确定研究KTI基因功能的最适模式植物,比... 目的:分析豆科植物的Kunitz蛋白酶抑制剂(KTI)基因密码子偏好性,确定最适模式植物与外源表达系统。方法:运用Codon W等程序分析密码子偏好性,并用决明KTI基因验证分析结果的可信度。通过聚类分析,确定研究KTI基因功能的最适模式植物,比较决明KTI基因与酵母和大肠杆菌的基因组密码子偏好性,选择最优外源表达系统。结果:KTI基因对以A或U结尾的密码子偏好性强。豆科与茄科植物聚为一簇,表明烟草是研究KTI基因功能的最适模式植物。决明KTI基因和大肠杆菌、酵母基因组对比,有较大密码子使用频率差异的各有28、24个,表明酵母是最优外源表达系统。结论:确定研究KTI基因功能的最佳模式植物是烟草,酵母是最优外源表达系统,对基因改良与育种具有指导意义。 展开更多
关键词 密码子偏好性 Kunitz型蛋白酶抑制剂 聚类分析 外源表达
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医学虚拟现实系统的分解与划分 被引量：1
4
作者 吴一风 刘祖碧 《医学信息（西安上半月）》 2004年第9期541-544,共4页
对医学虚拟现实系统进行了技术内涵的分解与应用外延的划分 ,医学虚拟现实按表现形式可以分为参数化虚拟现实和增强现实 ,按设施的使用方式又可以分为交互式视景虚拟系统和交互式沉浸虚拟系统。对系统的构成诸要素、要件及过程做了简要... 对医学虚拟现实系统进行了技术内涵的分解与应用外延的划分 ,医学虚拟现实按表现形式可以分为参数化虚拟现实和增强现实 ,按设施的使用方式又可以分为交互式视景虚拟系统和交互式沉浸虚拟系统。对系统的构成诸要素、要件及过程做了简要描述和分析。对国外虚拟医学的研究进行了分析和评价 ,涵盖了该领域的基本概念、基本理论和进展。虚拟医学系统的产生和相关理论的兴起形成了虚拟医学 ,并使虚拟医学系统化—理论系统化和软硬件系列化。 展开更多
关键词 医学虚拟现实系统 虚拟耳窥镜 视觉仿真系统 触觉仿真系统
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决明丙二酰CoA:ACP转酰基酶基因的克隆及序列分析 被引量：2
5
作者 张赶 刘祖碧 +5 位作者 李娟娟 俞继华 李洋洋 廖海 周嘉裕 谭睿 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期103-108,共6页
[目的]克隆决明丙二酰Co A:ACP转酰基酶(MCAT)基因并做序列分析。[方法]采用RACE法从c DNA中扩增出决明丙二酰Co A:ACP转酰基酶(MCAT)的CDS全长序列,推测出MCAT基因编码的氨基酸序列并进行序列分析。[结果]分析结果显示MCAT的CDS全长1 2... [目的]克隆决明丙二酰Co A:ACP转酰基酶(MCAT)基因并做序列分析。[方法]采用RACE法从c DNA中扩增出决明丙二酰Co A:ACP转酰基酶(MCAT)的CDS全长序列,推测出MCAT基因编码的氨基酸序列并进行序列分析。[结果]分析结果显示MCAT的CDS全长1 253bp,编码405个氨基酸。通过序列比对分析发现决明MCAT蛋白包含一个酰基转移酶超家族结构域,并且发现了一段高度保守的七肽模序。[结论]获得了决明MCAT的CDS全长,其编码的蛋白可能催化丙二酰Co A的转酰基反应,为决明脂肪酸的合成通路的阐明以及后期的决明脂肪酸的基因工程研究打下了坚实的基础。 展开更多
关键词 基因克隆 决明 MCAT PCR 序列分析
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决明胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其原核表达载体构建 被引量：1
6
作者 李洋洋 阿尔古丽 +8 位作者 俞继华 吴鹏飞 许维嘉 李娟娟 刘祖碧 王万军 周嘉裕 谭睿 廖海 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期409-413,共5页
[目的]克隆决明胰蛋白酶抑制剂全长cDNA序列,并构建原核表达载体。[方法]从决明种子中提取胰蛋白酶抑制剂总RNA,通过RT-PCR得到胰蛋白酶抑制剂cDNA,纯化后与PMD19-T载体连接,转化至大肠杆菌DH5α,获得了决明胰蛋白酶抑制剂基因的全长序... [目的]克隆决明胰蛋白酶抑制剂全长cDNA序列,并构建原核表达载体。[方法]从决明种子中提取胰蛋白酶抑制剂总RNA,通过RT-PCR得到胰蛋白酶抑制剂cDNA,纯化后与PMD19-T载体连接,转化至大肠杆菌DH5α,获得了决明胰蛋白酶抑制剂基因的全长序列,并将该序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)/COTI。[结果]决明胰蛋白酶抑制剂基因核苷酸长度为630bp,编码一条长度为209个氨基酸的多肽。决明胰蛋白酶抑制剂与不同植物来源的Kunitz蛋白酶抑制剂有高度的同源性,表明其属于Kunitz蛋白酶抑制剂家族成员。所获重组质粒pET-28a(+)/COTI经过双酶切鉴定,其含有目的片段,且重组质粒构建正确。[结论]克隆了决明胰蛋白酶抑制剂的全长cDNA序列,并成功构建了含有该基因的原核表达载体,这为该基因的进一步表达及功能鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 决明 胰蛋白酶抑制剂基因 克隆 原核表达载体
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决明巴豆酰辅酶A羧化酶基因的克隆、序列分析以及组织差异表达
7
作者 刘祖碧 李娟娟 +3 位作者 朱乾坤 宋涛 周嘉裕 廖海 《北方园艺》 CAS 北大核心 2015年第3期99-104,共6页
通过RACE克隆得到了决明MCCase的cDNA,利用生物信息学进行系统分析,并利用荧光定量PCR对决明MCCase进行了差异表达分析。结果表明:决明MCCase全长1 269bp,编码423个氨基酸的蛋白质,为偏酸性不稳定蛋白质,定位于线粒体或细胞质中。决明MC... 通过RACE克隆得到了决明MCCase的cDNA,利用生物信息学进行系统分析,并利用荧光定量PCR对决明MCCase进行了差异表达分析。结果表明:决明MCCase全长1 269bp,编码423个氨基酸的蛋白质,为偏酸性不稳定蛋白质,定位于线粒体或细胞质中。决明MCCase与拟南芥的MCCase同源性最高。MCCase上有一个保守的功能结构域,与乙酰CoA羧化酶显示出较高的相似性,并在该结构域内发现了4个高度保守的氨基酸基序,可能在催化过程中发挥关键作用。MCCase在不同组织中存在差异表达,在根与胚轴中显示出高表达,在其它组织中表达量低,这可能与光和糖类抑制MCCase的表达有关。 展开更多
关键词 巴豆酰辅酶A羧化酶 决明 基因克隆 生物信息学 基因表达
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唐松草小檗碱桥酶的序列分析与结构建模研究
8
作者 刘祖碧 朱乾坤 +4 位作者 李娟娟 宋涛 周嘉裕 王万军 廖海 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期42-46,共5页
目的:分析唐松草小檗碱桥酶(TfBBE)序列特征、结构和活性位点。方法:从NCBI蛋白质数据库获取TfBBE蛋白序列,通过生物信息学软件进行序列分析;通过分子建模和对接研究TfBBE的结构和活性位点。结果:TfBBE序列全长535个氨基酸;是偏酸性、... 目的:分析唐松草小檗碱桥酶(TfBBE)序列特征、结构和活性位点。方法:从NCBI蛋白质数据库获取TfBBE蛋白序列,通过生物信息学软件进行序列分析;通过分子建模和对接研究TfBBE的结构和活性位点。结果:TfBBE序列全长535个氨基酸;是偏酸性、亲水性的稳定蛋白;N末端含有18个氨基酸的信号肽;有两个功能域,分别为FAD结合域和番荔枝碱结合域。三维结构包括27个α螺旋、19个β折叠,其余为无规则卷曲。TfBBE通过FAD结合域的14个氨基酸、番荔枝碱结合域的8个氨基酸分别与FAD、番荔枝碱直接作用,从而催化番荔枝碱环化形成金黄紫堇碱。结论:获得了TfBBE的序列特征、结构和活性位点,对研究酶的催化活性以及基因改造增加小檗碱产量具有重要意义。 展开更多
关键词 小檗碱桥酶 唐松草 生物信息学 分子建模
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