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山羊卵泡卵母细胞体外成熟的研究 被引量：29
1
作者 张涌 刘泽隆 李裕强 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 1999年第1期14-18,共5页
研究了ＦＣＳ，１７β－Ｅ２，ＦＳＨ，ＬＨ对山羊卵泡卵母细胞成熟的作用，及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明，添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ，１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２，２０～５０ｍｇ·... 研究了ＦＣＳ，１７β－Ｅ２，ＦＳＨ，ＬＨ对山羊卵泡卵母细胞成熟的作用，及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明，添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ，１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２，２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ和１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ有利于提高卵母细胞核成熟，并放出第一极体。而成熟培养２０，２４ｈ的卵母细胞成熟率显著高于培养１６ｈ（Ｐ＜０．０５），核成熟后培养３～４ｈ有利于卵母细胞质成熟，对其后的受精、卵裂及胚胎的进一步发育有重大影响。且ＴＣＭ１９９＋质量分数为１０％～１５％的ＦＣＳ＋１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２＋１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ＋２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ是卵母细胞成熟的理想培养系统。 展开更多
关键词 山羊 体外成熟 卵母细胞
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家畜胎盘生物活性物质的研究进展 被引量：18
2
作者 刘泽隆 张涌 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 1999年第1期82-87,共6页
综述了胎盘产生的几种特异性活性物质，即ＴＧＦ－β，ＣＳＦ－１，ＩＧＦ，ＰＡＧ，库尼特型蛋白酶抑制剂，ｂＣＹＰ１９及相关基因的作用时间、部位和作用机制，以及这些物质的研究前景。认为加深其研究以利于完善早期妊娠和分娩发动... 综述了胎盘产生的几种特异性活性物质，即ＴＧＦ－β，ＣＳＦ－１，ＩＧＦ，ＰＡＧ，库尼特型蛋白酶抑制剂，ｂＣＹＰ１９及相关基因的作用时间、部位和作用机制，以及这些物质的研究前景。认为加深其研究以利于完善早期妊娠和分娩发动诊断、妊娠疾病诊治、体外受精、人工输精妊娠以及人类避孕技术。 展开更多
关键词 胎盘 生物活性物质 MRNA
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牛卵泡卵母细胞体外成熟的研究 被引量：13
3
作者 刘泽隆 张涌 《西北农业大学学报》 CSCD 北大核心 1999年第2期17-20,共4页
研究了ＦＣＳ，１７β－Ｅ２，ＦＳＨ，ＬＨ对牛卵泡卵母细胞成熟的作用及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明，添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ，１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２，２０～５０ｍｇ·Ｌ－... 研究了ＦＣＳ，１７β－Ｅ２，ＦＳＨ，ＬＨ对牛卵泡卵母细胞成熟的作用及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明，添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ，１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２，２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ和１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ有利于提高卵母细胞核成熟，放出第一极体。而成熟培养２０，２４ｈ的卵母细胞成熟率显著高于培养１６ｈ（Ｐ＜０．０５），核成熟后培养３～４ｈ有利于卵母细胞质成熟，对其后的受精、卵裂及胚胎的进一步发育有重大影响。且ＴＣＭ１９９＋质量分数１０％～１５％的ＦＣＳ＋１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２＋１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ＋２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ是卵母细胞成熟的理想培养系统。 展开更多
关键词 牛 卵母细胞 体外成熟 体外授精
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高校图书馆资源使用效率测定的DEA模型分析 被引量：18
4
作者 范红霞 刘泽隆 《情报杂志》 CSSCI 北大核心 2008年第4期157-158,共2页
针对我国高校图书馆资源投入大规模增加的现状,利用DEA模型测定了样本高校图书馆的资源使用效率及其所处规模报酬阶段。结论为在12所样本高校图书馆中有8所资源投入得到充分利用,其余4所则存在不同程度的资源浪费现象;有6所高校图书馆... 针对我国高校图书馆资源投入大规模增加的现状,利用DEA模型测定了样本高校图书馆的资源使用效率及其所处规模报酬阶段。结论为在12所样本高校图书馆中有8所资源投入得到充分利用,其余4所则存在不同程度的资源浪费现象;有6所高校图书馆处于最优规模状态,其余6所则处于递增规模报酬阶段。对于存在资源浪费现象的高校图书馆,给出了其资源投入的目标值。 展开更多
关键词 高校图书馆 资源利用率 DEA
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面结构光在机检测的叶片反光抑制技术 被引量：11
5
作者 李茂月 刘泽隆 +1 位作者 赵伟翔 肖桂风 《中国光学》 EI CAS CSCD 北大核心 2022年第3期464-475,共12页
薄壁叶片在结构光检测过程中,由于其表面粗糙度较小,易产生强烈的反光现象,影响求解条纹相位主值,进而无法准确重构出三维点云。本文以加工过程中的叶片作为研究对象,提出一种对在机检测过程中的条纹图像进行图像增强处理的Retinex算法... 薄壁叶片在结构光检测过程中,由于其表面粗糙度较小,易产生强烈的反光现象,影响求解条纹相位主值,进而无法准确重构出三维点云。本文以加工过程中的叶片作为研究对象,提出一种对在机检测过程中的条纹图像进行图像增强处理的Retinex算法,恢复条纹在高反光位置的信息。首先,对薄壁叶片的反光特性进行分析,通过实验标定出最优曝光的灰度区间和理想灰度值,建立了光圈转动角度与图像平均灰度的相机响应曲线模型,调节光圈和曝光时间至最优曝光的灰度区间并以此作为检测条件。其次,基于Retinex算法处理条纹图像,通过改进的双边滤波代替常用的高斯滤波,在去除光照的同时有效保留了条纹的边缘信息。最后,对薄壁叶片进行单目结构光检测。实验结果表明,经本文算法处理后的条纹图像,通过Canny算子检测出的条纹数量最多,图像信息熵平均增长率达18.21%,解算的相位主值误差最小,利用手持式激光扫描仪检测的标准点云进行偏差分析,点云的正、负偏差分别降至0.0589 mm和-0.0590 mm,与原点云的偏差值相比分别减少了44.6%和44.1%,表面质量得到明显改善。本文提出的图像增强算法有效抑制了面结构光检测过程中的金属表面反光。 展开更多
关键词 结构光检测 金属反光 图像增强 双边滤波 薄壁叶片
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前列腺素、抑制素和促卵泡素与雄性不育 被引量：11
6
作者 刘泽隆 刘智喜 《国外兽医学（畜禽疾病）》 CSCD 1996年第4期4-7,共4页
本文综述了前列腺素、抑制素、促卵泡素的产生部位、生化性质及其异常水平对雄性生殖的影响，阐述了导致雄性不育的机理。
关键词 前列腺素 抑制素 促卵泡素 雄性不育 动物
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Ssp DnaB intein大肠杆菌中介导FVIII重链和轻链的连接 被引量：7
7
作者 朱甫祥 刘泽隆 +3 位作者 屈慧鸽 辛晓林 董洪新 刘相钦 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1101-1106,共6页
研究利用intein的蛋白质反式剪接功能在大肠杆菌中对凝血VIII因子(FVIII)重链和轻链的连接作用,将B结构域大部分缺失型FVIII(BDD-FVIII)于满足剪接所需的保守性氨基酸Ser1657前断裂为重链和轻链,分别与split mini Ssp DnaB intein的106... 研究利用intein的蛋白质反式剪接功能在大肠杆菌中对凝血VIII因子(FVIII)重链和轻链的连接作用,将B结构域大部分缺失型FVIII(BDD-FVIII)于满足剪接所需的保守性氨基酸Ser1657前断裂为重链和轻链,分别与split mini Ssp DnaB intein的106个氨基酸的N端(Int-N)和48个氨基酸的C端(Int-C)融合,构建到原核表达载体pBV220。诱导表达后SDS-PAGE分析可见预期大小的BDD-FVIII蛋白条带,Western blotting用FVIII特异性抗体证明其为剪接所产生的BDD-FVIII蛋白,表明intein可有效连接BDD-FVIII的重链和轻链。为进一步甲型血友病基因治疗研究应用intein以双腺相关病毒载体(AAV)携带FVIII基因,克服单个AAV载体的容量限制提供了依据。 展开更多
关键词 Intein.蛋白质反式剪接 凝血Ⅷ因子
原文传递
海南甘蔗生产技术效率分析 被引量：4
8
作者 范红霞 刘泽隆 过建春 《海南大学学报（自然科学版）》 CAS 2005年第1期26-31,共6页
以技术效率分析原理为基础,构造柯布-道格拉斯型随机前沿生产函数模型,并应用修正最小二乘法估计模型参数.通过该模型分析海南甘蔗生产的技术效率现状,得出海南全省和5个甘蔗主产市县在1996—2002年中每年的甘蔗生产技术效率及平均技术... 以技术效率分析原理为基础,构造柯布-道格拉斯型随机前沿生产函数模型,并应用修正最小二乘法估计模型参数.通过该模型分析海南甘蔗生产的技术效率现状,得出海南全省和5个甘蔗主产市县在1996—2002年中每年的甘蔗生产技术效率及平均技术效率,并推断海南甘蔗生产整体水平不高且存在着不稳定性和没有区域优势的现象. 展开更多
关键词 技术效率 甘蔗生产 海南 生产函数模型 道格拉斯 区域优势 模型分析 估计模型 应用 现象
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内含肽介导的氯离子通道蛋白CFTR的反式剪接 被引量：7
9
作者 朱甫祥 刘泽隆 +1 位作者 屈慧鸽 迟晓艳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期844-848,共5页
研究利用内含肽(intein)的蛋白质反式剪接功能在大肠杆菌中对囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane regulator,CFTR)的反式剪接作用.CFTR基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病囊性纤维化(cystic fibrosis,CF).将C... 研究利用内含肽(intein)的蛋白质反式剪接功能在大肠杆菌中对囊性纤维化跨膜传导调节因子(cystic fibrosis transmembrane regulator,CFTR)的反式剪接作用.CFTR基因突变导致一种常染色体隐性遗传疾病囊性纤维化(cystic fibrosis,CF).将CFTR的cDNA于剪接反应所需的保守性氨基酸残基Ser660前断裂为N端和C端,分别与split mini Ssp DnaB内含肽的106个氨基酸残基的N端和48个氨基酸残基的C端编码序列融合,构建到原核表达载体pBV220.诱导表达后SDS-PAGE可见预期大小剪接形成的CFTR蛋白条带,Western印迹用CFTR特异性抗体进一步证明为剪接所产生的CFTR蛋白,表明内含肽可有效催化CFTR的反式剪接. 展开更多
关键词 内含肽 蛋白质反式剪接 囊性纤维化跨膜传导调节因子
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平菇AD_(28)液体发酵培养的环境条件优化研究 被引量：5
10
作者 卜庆梅 王淑芳 +2 位作者 刘泽隆 刘林德 李红美 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第5期188-191,共4页
采用摇瓶培养的方法,从营养源和发酵条件两方面对平菇AD28液体发酵的环境条件进行优化筛选试验。结果表明,液体发酵培养平菇AD28最适碳源为蔗糖,氮源为酵母粉,无机盐为KH2PO4和MgSO4。较适宜的培养条件：为初始pH值6.0-7.0,500 ml摇瓶... 采用摇瓶培养的方法,从营养源和发酵条件两方面对平菇AD28液体发酵的环境条件进行优化筛选试验。结果表明,液体发酵培养平菇AD28最适碳源为蔗糖,氮源为酵母粉,无机盐为KH2PO4和MgSO4。较适宜的培养条件：为初始pH值6.0-7.0,500 ml摇瓶装液量200 ml,接种量10%,接种后静置培养24 h后振荡培养,摇床转速为180 r/min,培养温度为25℃,发酵终点以120 h为宜。 展开更多
关键词 液体发酵 平菇AD28 菌丝体 环境条件
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海南农垦2002～2003年度干胶生产影响因素实证分析 被引量：6
11
作者 范红霞 过建春 刘泽隆 《林业经济问题》 北大核心 2005年第4期209-211,252,共4页
在分析农业生产函数原理和应用基础上,选用Cobb Douglas生产函数,引入分别反映自然、技术、物质投入的10个影响海南农垦干胶产量的因素,拟合生产函数模型,并应用SPSS软件对各影响因素进行了显著性分析,得出结论为:单位面积平均开割株数... 在分析农业生产函数原理和应用基础上,选用Cobb Douglas生产函数,引入分别反映自然、技术、物质投入的10个影响海南农垦干胶产量的因素,拟合生产函数模型,并应用SPSS软件对各影响因素进行了显著性分析,得出结论为:单位面积平均开割株数,年均干含,单位面积年有机肥施用量,胶工人数对海南农垦干胶产量具有显著的正效应影响,年割刀数和单位面积年压青有显著的负效应影响,其他因素为不显著因素。分析可能造成这种结果的原因,并提出对策。 展开更多
关键词 海南农垦 干胶生产 生产函数
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我国图书馆同业影响的实证分析 被引量：6
12
作者 范红霞 刘泽隆 《图书馆工作与研究》 CSSCI 北大核心 2011年第4期13-15,共3页
同业影响分析是在DEA模型研究基础上发展起来的,在评价相对效率优先的生产单元中有广泛应用。本文以DEA模型和同业影响分析为理论基础,选取我国31个省、直辖市、自治区省级公共图书馆的投入产出数据,应用DEAP软件进行计算和分析。结果显... 同业影响分析是在DEA模型研究基础上发展起来的,在评价相对效率优先的生产单元中有广泛应用。本文以DEA模型和同业影响分析为理论基础,选取我国31个省、直辖市、自治区省级公共图书馆的投入产出数据,应用DEAP软件进行计算和分析。结果显示:有5个地区的省级公共图书馆技术有效,其余26个地区省级公共图书馆技术无效且以5个有效省级公共图书馆中的1个或多个为同业目标。 展开更多
关键词 DEA模型 同业影响 图书馆
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vWF-△Pro改善基于蛋白质剪接的双载体BDD-FⅧ基因转移 被引量：6
13
作者 朱甫祥 杨树德 +2 位作者 刘泽隆 屈慧鸽 迟晓艳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期720-726,共7页
多聚体von Willebrand因子(vWF)的功能之一是保护凝血Ⅷ因子(FⅧ)免受蛋白水解引起的快速清除.前肽缺失突变体vWF(vWF-ΔPro)不能形成多聚体,但可以结合FⅧ蛋白.为探讨vWF-ΔPro对基于蛋白质反式剪接作用介导的双载体转FⅧ基因后连接的... 多聚体von Willebrand因子(vWF)的功能之一是保护凝血Ⅷ因子(FⅧ)免受蛋白水解引起的快速清除.前肽缺失突变体vWF(vWF-ΔPro)不能形成多聚体,但可以结合FⅧ蛋白.为探讨vWF-ΔPro对基于蛋白质反式剪接作用介导的双载体转FⅧ基因后连接的FⅧ蛋白的分泌和活性的影响,将vWF-ΔPro基因和融合SspDnaB内含肽的B结构域缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)断裂基因共转染293细胞进行转基因的瞬时表达,用Western印迹检测了单独转染vWF-ΔPro基因细胞的vWF-ΔPro表达量和蛋白形式,并检测了其对FⅧ的结合力;用ELISA法观察分泌至培养上清中的剪接的BDD-FⅧ,并用Coatest法检测由其产生的生物活性.结果显示,vWF-ΔPro转基因细胞呈现二聚体蛋白表达形式,其结合FⅧ的能力与转野生型vWF基因细胞相近;vWF-ΔPro共转染细胞上清中剪接BDD-FⅧ蛋白浓度为198±21ng/mL,活性为1.78±0.18IU/mL,明显高于未转染vWF-ΔPro基因的细胞对照(91±12ng/mL和1.05±0.13IU/mL),与共转染野生型vWF基因细胞对照相近(221±19ng/mL和1.95±0.22IU/mL),表明vWF-ΔPro可显著改善内含肽剪接的BDD-FⅧ蛋白的分泌和生物活性.为vWF-ΔPro转基因的基于蛋白质剪接技术双AAV载体转BDD-FⅧ基因动物体内实验提供了依据. 展开更多
关键词 von WILLEBRAND因子 BDD-FⅧ 转基因 内含肽 蛋白质反式剪接
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我国农户精养淡水鱼成本效率的测定及其影响因素分析 被引量：5
14
作者 刘泽隆 范红霞 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第8期2204-2206,2254,共4页
在综述随机前沿成本模型及成本效率概念的产生、发展、分类、求解的基础上,选取2002年度和2003年度我国农户精养淡水鱼投入产出数据为样本,以Battese和Coelli 1995年模型为基础,构建我国农户精养淡水鱼随机前沿成本模型,并应用Frontier... 在综述随机前沿成本模型及成本效率概念的产生、发展、分类、求解的基础上,选取2002年度和2003年度我国农户精养淡水鱼投入产出数据为样本,以Battese和Coelli 1995年模型为基础,构建我国农户精养淡水鱼随机前沿成本模型,并应用Frontier4.1软件包进行参数估计及测定成本效率。结果发现:我国农户精养淡水鱼目前处于规模报酬递增的生产阶段;1 kg主产品仔畜进价、1 kg主产品精饲料费用分别对单位面积含税成本有负、正效应影响;我国农户精养淡水鱼存在着较大程度的成本浪费,且有着明显的时空差异;增加青粗饲料投喂量会加大成本浪费,期间费用和税金增加会加倍增加成本;增加精饲料费用投入则不会造成成本浪费,相反还可降低成本。 展开更多
关键词 淡水鱼 随机前沿成本模型 成本效率
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高校图书馆电子阅览室利用情况的统计分析——以鲁东大学图书馆电子阅览室为例 被引量：6
15
作者 范红霞 刘泽隆 《鲁东大学学报（哲学社会科学版）》 2007年第4期121-123,共3页
本研究针对高校图书馆电子阅览室功能和服务定位问题,选取样本数据,利用单因素方差分析确定影响读者利用电子阅览室的特征因素,并在此基础上抽取典型样本进行问卷调查,以对高校图书馆电子阅览室的利用情况进行分析研究。
关键词 电子阅览室 统计分析 问卷调查
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基于蛋白质反式剪接的双载体凝血Ⅷ因子基因转移 被引量：5
16
作者 朱甫祥 刘泽隆 +2 位作者 迟晓艳 屈慧鸽 刘相钦 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2009年第8期746-754,共9页
以intein的蛋白反式剪接为工具,研究了运用双载体的真核细胞凝血Ⅷ因子（FⅧ）基因转移,通过翻译后剪接得到完整的功能性FⅧ蛋白.将B结构域大部分缺失（Δ761~1639）的人功能性FⅧ（BDD-FⅧ）cDNA于剪接所需保守残基Ser1657前断裂为重... 以intein的蛋白反式剪接为工具,研究了运用双载体的真核细胞凝血Ⅷ因子（FⅧ）基因转移,通过翻译后剪接得到完整的功能性FⅧ蛋白.将B结构域大部分缺失（Δ761~1639）的人功能性FⅧ（BDD-FⅧ）cDNA于剪接所需保守残基Ser1657前断裂为重链和轻链,分别与106和48个氨基酸的mini Ssp DnaB intein的N端（IntN）和C端（IntC）编码序列融合,构建一对在质粒pcDNA3.1的强启动子CMV驱动下的真核表达载体.用脂质体共转染至293细胞和COS-7细胞,培养48h后,收集细胞上清,用ELISA检测培养上清中剪接形成的BDD-FⅧ蛋白水平,用Coatest法检测上清的功能性FⅧ生物活性,并用Western blot观察细胞内的BDD-FⅧ蛋白质剪接.结果显示,两种细胞培养上清中有较高水平的剪接BDD-FⅧ蛋白形成,分别达到（137±23）和（109±22）ng/mL,由细胞内和细胞外（培养上清）的剪接共同组成 并检测到培养上清中较高水平的FⅧ生物活性,分别为（1.05±0.16）和（0.79±0.23）IU/mL,包括细胞内、外剪接产物BDD-FⅧ共同形成 细胞总蛋白的Western blot进一步显示共转染后细胞内高效剪接形成的BDD-FⅧ蛋白.表明intein可用于双载体系统真核细胞FⅧ基因转移,并不完全依赖细胞内的剪接产生具有高FⅧ生物活性的BDD-FⅧ蛋白,为进一步在甲型血友病基因治疗研究中应用双腺相关病毒载体（AAV）转运FⅧ基因,克服AAV载体的容量限制提供了依据. 展开更多
关键词 INTEIN 蛋白质反式剪接 凝血Ⅷ因子 双载体基因转移
原文传递
高动态范围条纹结构光在机检测技术及应用进展 被引量：1
17
作者 刘泽隆 李茂月 +1 位作者 卢新元 张明垒 《中国光学（中英文）》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第1期1-18,共18页
条纹结构光技术是近年来发展迅速的非接触式测量方法,为机械加工在机检测提供了新的解决方案。由于加工环境光线复杂且金属零件本身具有高反光的特性,造成结构光在机检测的精度降低。将高动态范围(High Dynamic Range,HDR)技术应用于结... 条纹结构光技术是近年来发展迅速的非接触式测量方法,为机械加工在机检测提供了新的解决方案。由于加工环境光线复杂且金属零件本身具有高反光的特性,造成结构光在机检测的精度降低。将高动态范围(High Dynamic Range,HDR)技术应用于结构光检测中,可抑制高反光的影响,实现金属零件在复杂场景的测量。本文首先介绍了结构光测量原理,总结出HDR结构光在机检测面临的难点;其次,对HDR结构光技术进行了全面综述,以机械加工在机检测为背景,对基于硬件设备的HDR技术和基于条纹算法的HDR技术分别进行了归纳分析;然后,根据在机检测的条件需求,对各类技术进行总结,并比较不同方法的优缺点和在机检测的适用性;最后,结合近年来先进制造技术和精密测量的研究热点,对潜在应用进行分析,提出技术展望。 展开更多
关键词 三维测量 结构光 条纹投影 高动态范围 在机检测
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农户精养淡水鱼的随机前沿模型分析 被引量：4
18
作者 刘泽隆 范红霞 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第20期5152-5155,共4页
在综述随机前沿模型理论及应用的基础上,选取Battese和Coelli 1992、1995年模型为原型,利用我国农户精养淡水鱼投入产出数据构建我国农户精养淡水鱼随机前沿模型。结果发现,以含税成本为资金投入变量,以税金比和精饲料费用比为技术效率... 在综述随机前沿模型理论及应用的基础上,选取Battese和Coelli 1992、1995年模型为原型,利用我国农户精养淡水鱼投入产出数据构建我国农户精养淡水鱼随机前沿模型。结果发现,以含税成本为资金投入变量,以税金比和精饲料费用比为技术效率影响因素的Battese和Coelli1995年模型具有较好的估计结果。进一步应用该模型测定技术效率,并进行技术效率影响因素分析,结果发现:我国农户精养淡水鱼生产目前处于规模报酬递增阶段,资金投入对产值的贡献率远大于劳动力投入对产值的贡献率;2002和2003年我国农户精养淡水鱼平均技术效率值为83.5%,且存在着明显的时空差异;税金比对我国农户精养淡水鱼技术效率值的影响为负效应;精饲料费用比对我国农户精养淡水鱼技术效率值的影响为正效应。 展开更多
关键词 精养 淡水鱼 随机前沿模型 技术效率 农户
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内含肽介导F309SfVⅢ的连接和重链分泌的增强 被引量：5
19
作者 朱甫祥 刘泽隆 +1 位作者 屈慧鸽 迟晓艳 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期526-532,共7页
凝血因子VⅢ(coagulation factor VⅢ,fVⅢ)是一种分泌性血浆蛋白,在凝血级联反应中发挥重要作用,由fVⅢ缺陷导致的甲型血友病是一种最常见的X-联锁隐性遗传性出血性疾病,基因治疗被认为是该病的理想治疗模式,但在运用最有希望的腺辅助... 凝血因子VⅢ(coagulation factor VⅢ,fVⅢ)是一种分泌性血浆蛋白,在凝血级联反应中发挥重要作用,由fVⅢ缺陷导致的甲型血友病是一种最常见的X-联锁隐性遗传性出血性疾病,基因治疗被认为是该病的理想治疗模式,但在运用最有希望的腺辅助病毒(adeno-associated virus,AAV)载体转fVⅢ基因时受到AAV的容量限制。本文旨在利用内含肽(intein)的蛋白质反式剪接,研究双载体真核细胞转具有促分泌作用的F309S突变体全长fVⅢ(F309SfVⅢ)基因。内含肽是一种包埋在蛋白质前体中的多肽序列,其在蛋白质成熟过程中通过蛋白质剪接作用被切除。将F309SfVⅢ的cDNA于B结构域的Ser1239密码子前断裂为重链(heavy chain,HC)和轻链(light chain,LC)两部分,分别与Ssp DnaB intein编码序列融合,插入到pcDNA3.1,构建一对质粒表达载体。共转染或分别单独转染293细胞,48h后用Western blot观察细胞内转基因的表达和F309SfVⅢ的剪接,用ELISA检测培养上清中分泌的F309SfVⅢ蛋白量以及HC含量,用Coatest法检测培养上清的fVⅢ生物活性。结果显示,共转染细胞有明显的完整F309SfVⅢ蛋白条带形成,细胞培养上清中的F309SfVⅢ蛋白浓度为(71±9)ng/mL,所产生的fVⅢ生物活性为(0.38±0.09)IU/mL,从单独转染后合并培养的细胞上清仍可检测到F309SfVⅢ蛋白和fVⅢ生物活性,分别为(25±6)ng/mL和(0.12±0.05)IU/mL,说明上清中的F309SfVⅢ蛋白由分泌前、后剪接两部分共同形成。共转染细胞培养液上清中的HC含量明显高于单独转染融合内含肽和HC的细胞培养液上清[(135±10)ng/mL vs(37±7)ng/mL,P<0.01)]。以上结果提示内含肽可作为一种技术手段用于双载体系统真核细胞F309SfVⅢ基因转移,并可改善F309SfVⅢ的分泌,为体内甲型血友病基因治疗研究中应用AAV载体、克服其容量限制转F309SfVⅢ基因提供了一种解决方案。 展开更多
关键词 凝血因子VIII 分泌 内含肽 蛋白质反式剪接
原文传递
双Intein介导3片段vWF的反式剪接 被引量：3
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作者 朱甫祥 郭猛 +2 位作者 刘泽隆 屈慧鸽 迟晓艳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期157-163,共7页
von Willebrand因子(vWF)基因突变导致血管性血友病(VWD),由于其基因过大在基因治疗研究中难以为多数病毒载体携带.利用双内含肽(intein)的蛋白质反式剪接功能研究断裂成3段的vWF基因分别表达后在蛋白水平的连接,旨在为vWF基因的3载体... von Willebrand因子(vWF)基因突变导致血管性血友病(VWD),由于其基因过大在基因治疗研究中难以为多数病毒载体携带.利用双内含肽(intein)的蛋白质反式剪接功能研究断裂成3段的vWF基因分别表达后在蛋白水平的连接,旨在为vWF基因的3载体联合转移应用于VWD基因治疗研究提供依据.将vWF cDNA于满足剪接所需的保守性氨基酸Cys1099、Ser2004的密码子前断裂为3段(N、M和C),分别与splitSspDnaE intein的N端(En)、C端(Ec)和splitSspDnaB intein的N端(Bn)、C端(Bc)编码序列融合,构建到原核表达载体pET-28a(+)中的His-Tag的下游,得到3种表达载体pET-NEn、pET-EcMBn和pET-BcC.分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞,经IPTG诱导表达后,以SDS-PAGE分析融合蛋白的表达,并进一步用His-Tag的特异性抗体进行分析;亲和层析纯化分别表达的带His-Tag标签的3段蛋白,复性后体外混合进行剪接实验以观察3片段vWF的连接.结果显示,3段预期大小的融合intein的vWF蛋白均有表达,用His-Tag抗体进行的Western印迹得到进一步证实;3段纯化的蛋白混合后可见明显的剪接条带形成,与vWF的预期分子量大小一致,表明双intein通过蛋白质反式剪接可有效连接3个片段的vWF,为进一步应用蛋白质剪接技术的3重载体真核细胞转vWF基因奠定了基础. 展开更多
关键词 内含肽 蛋白质反式剪接 von WILLEBRAND因子
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