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斯里兰卡木薯花叶病毒TVM3分离物侵染性克隆构建及鉴定
1
作者 余乃通 冼淑丽 +3 位作者 尹慧祥 赵羽涵 郑小宝 刘志昕 《广东农业科学》 CAS 2023年第8期136-142,共7页
【目的】斯里兰卡木薯花叶病毒(Sri Lankan cassava mosaic virus,SLCMV)是一种对世界木薯产业产生威胁的单链环状DNA病毒,为双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色黄花叶病毒属(Begomovirus)成员。我国木薯品种抗性不明且抗病种质资源缺乏... 【目的】斯里兰卡木薯花叶病毒(Sri Lankan cassava mosaic virus,SLCMV)是一种对世界木薯产业产生威胁的单链环状DNA病毒,为双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色黄花叶病毒属(Begomovirus)成员。我国木薯品种抗性不明且抗病种质资源缺乏,为进一步探究国内木薯种质资源抗花叶病的遗传背景以及SLCMV与宿主的互作机理,本研究开展SLCMV侵染性克隆构建及鉴定。【方法】以SLCMV(TVM3株系)为对象,将其1.10倍(mer)长的DNA-A和1.08倍(mer)的DNA-B组分分别构建到pCAMBIA1301载体,获得病毒侵染性克隆载体pCAMBIA1301-DNA-A(pDNA-A)和pCAMBIA1301-DNA-B(pDNA-B),利用GV3101农杆菌介导pDNA-A和pDNA-B共侵染本生烟和拟南芥。【结果】SLCMV侵染性克隆接种本生烟14 d后,系统叶可产生严重的花叶、扭曲等症状;而感染SLCMV的拟南芥叶片在18 d出现轻微的扭曲症状。提取感病本生烟和拟南芥植株新生叶片总DNA,PCR方法均检测到了病毒DNA-A和DNA-B组分。此外,本生烟的病毒感染率为100%,而拟南芥的病毒感染率仅为40%,两者差异显著(P<0.05)。【结论】本研究成功构建了SLCMV病毒侵染性克隆,且能侵染本生烟和拟南芥植物,其在本生烟中的病毒感染率高达96.67%;另外,该pDNA-A和pDNA-B侵染性克隆载体序列仅为病毒原基因组DNA-A和DNA-B大小的1.10倍(mer)和1.08倍(mer),且不含有重复的编码区序列,可为下一步探究国内木薯种质资源抗花叶病的遗传背景以及病毒致病机理研究提供重要基础。 展开更多
关键词 斯里兰卡木薯花叶病毒 DNA病毒 侵染性克隆 本生烟 拟南芥
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番木瓜“台农杂交2号”组织培养技术 被引量：3
2
作者 张秀春 赵平娟 +1 位作者 冼淑丽 刘志昕 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期3479-3482,共4页
以刚挂果的成龄两性株截顶后产生的侧芽为材料,对“台农杂交2号”番木瓜进行组织培养技术研究。结果表明:外植体经75%酒精、饱和香皂水和300 mg/L利福平预处理后,用75%酒精浸泡50 s、1.5%次氯酸钠10 min和0.1%升汞10 min的复合消毒程序... 以刚挂果的成龄两性株截顶后产生的侧芽为材料,对“台农杂交2号”番木瓜进行组织培养技术研究。结果表明:外植体经75%酒精、饱和香皂水和300 mg/L利福平预处理后,用75%酒精浸泡50 s、1.5%次氯酸钠10 min和0.1%升汞10 min的复合消毒程序,消毒成功率可提高至80%以上。外植体第2~5个芽位在MS+0.02 mg/L NAA+0.2 mg/L BAP培养基中光照培养4周后出芽诱率可达50%。出芽的外植体在MS+0.02 mg/L NAA+0.2 mg/L BAP+1 mg/L GA3+0.25 mg/L KT培养基中培养4~5个月进行丛生芽诱导,丛生芽诱导后再转接至MS+0.02 mg/L NAA+1 mg/L GA3+0.4 mg/L KT培养基中光照培养1~2月,可获得健壮的、形态正常的不定芽。1.5~2.0 cm的不定芽在MS+0.5 mg/L IBA培养基中暗培养一周后,再转接至1/2 MS与蛭石1:2混合的培养基中培养3周后可形成根系形态正常、发达的完整组培苗,根诱导率达90%以上。 展开更多
关键词 番木瓜“台农杂交2号” 两性株 侧芽 组织培养
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本生烟瞬时表达系统快速检测RNAi载体沉默效果
3
作者 武亚丹 张秀春 +3 位作者 冼淑丽 余乃通 王健华 刘志昕 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期4933-4939,共7页
RNA干扰(RNAi)技术是研究基因功能的一种常用方法。为快速检测RNAi载体的沉默效果,通过构建木薯eIF4E3基因的过量表达载体pAI-Ca4E3以及靶标木薯eIF4E3基因的RNAi表达载体p1300-Ca4E3,利用农杆菌注射法将表达载体在本生烟叶片中进行瞬... RNA干扰(RNAi)技术是研究基因功能的一种常用方法。为快速检测RNAi载体的沉默效果,通过构建木薯eIF4E3基因的过量表达载体pAI-Ca4E3以及靶标木薯eIF4E3基因的RNAi表达载体p1300-Ca4E3,利用农杆菌注射法将表达载体在本生烟叶片中进行瞬时表达。半定量RT-PCR检测结果显示单独注射过量表达载体pAI-Ca4E3或与表达载体pCAMBIA1300共同注射的样品,农杆菌注射后第4天、第5天和第6天都能检测到木薯eIF4E3基因的高效表达,并且二者木薯eIF4E3基因表达量基本相同,说明木薯eIF4E3基因能在本生烟中高效瞬时表达,但是过量表达载体pAI-Ca4E3与干扰载体p1300-Ca4E3共同注射的样品,农杆菌注射后第4天、第5天还是第6天后都几乎检测不到木薯eIF4E3基因的表达,说明过量表达载体表达的木薯eIF4E3基因已被干扰载体有效沉默。研究结果表明,已建立同时表达靶标基因和干扰靶标基因的干扰载体的本生烟瞬时表达系统,并结合半定量RT-PCR进行RNAi载体沉默效果检测的方法。该方法在农杆菌注射4 d后就能有效的检测RNAi载体的沉默效果,具有快捷、操作简便等特点,为RNAi技术应用于基因功能研究提供简单、快捷、有效的证据。 展开更多
关键词 本生烟 瞬时表达 干扰载体 半定量RT-PCR 沉默效果检测
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