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非典型肺炎病例标本中新型冠状病毒的分离与鉴定 被引量：100
1
作者 祝庆余 秦鄂德 +11 位作者 王翠娥 于曼 司炳银 范宝昌 常国辉 彭文明 杨保安 姜涛 李豫川 邓永强 刘洪 甘永华 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第4期106-112,共7页
目的　对非典型肺炎的病原体进行分离鉴定 ,为该病的诊断、预防和治疗提供依据。方法　采用细胞培养和乳鼠接种法 ,从非典型肺炎病例标本中分离致病病原体 ,通过电镜形态学、血清学和动物致病性观察及RT PCR扩增与部分基因序列分析 ,对... 目的　对非典型肺炎的病原体进行分离鉴定 ,为该病的诊断、预防和治疗提供依据。方法　采用细胞培养和乳鼠接种法 ,从非典型肺炎病例标本中分离致病病原体 ,通过电镜形态学、血清学和动物致病性观察及RT PCR扩增与部分基因序列分析 ,对分离的病原体进行鉴定。结果　成功地从死亡病例尸解的肺组织标本和患者鼻咽拭子标本中采用细胞培养法分离出病原体。通过电镜在病变细胞及其培养上清中观察到大量冠状病毒样颗粒。免疫荧光染色检测非典型肺炎患者血清 ,表明分离的病毒与此次流行的非典型肺炎密切相关。分离的病毒可对乳鼠致病 ,并在发病乳鼠的肺组织标本中通过电镜同样观察到冠状病毒样颗粒。从非典型肺炎病例尸解肺组织、传代发病小鼠肺组织及分离物感染的细胞培养物中 ,通过RT PCR可分别扩增出冠状病毒的cDNA片段 ,测序结果显示其核苷酸序列与已知冠状病毒的同源性在 6 0 %左右。结论　从非典型肺炎病例标本中已成功分离出一种新的冠状病毒 ,它与此次流行的非典型肺炎密切相关 。 展开更多
关键词 非典型肺炎 新型冠状病毒 分离 鉴定 病原体 序列分析
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妊娠期高血压疾病的临床流行病学分析 被引量：67
2
作者 于曼 张建华 张华 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期581-585,共5页
目的:对妊娠期高血压疾病患者进行临床流行病学调查分析,以了解近年来我院妊娠期高血压疾病的情况。方法:对我院2004年1月至2010年12月收治的523例妊娠期高血压疾病患者的基本情况、母婴并发症、分娩方式、围生儿结局、生化指标等进行... 目的:对妊娠期高血压疾病患者进行临床流行病学调查分析,以了解近年来我院妊娠期高血压疾病的情况。方法:对我院2004年1月至2010年12月收治的523例妊娠期高血压疾病患者的基本情况、母婴并发症、分娩方式、围生儿结局、生化指标等进行回顾性分析。结果:近7年来妊娠期高血压疾病的发病孕周有提前趋势(F=14.79,P<0.01),重度妊娠期高血压疾病的发生率呈上升趋势(#2=91.85,P<0.01),规律产前检查孕妇比例呈上升趋势(#2=34.93,P<0.01),乡村人口所占比例有增加趋势(#2=50.20,P<0.01),分娩方式仍以剖宫产为主(#2=37.06,P<0.01)。新生儿Apgar评分、新生儿体重随妊娠期高血压疾病病情加重有降低趋势(P<0.01)。乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、尿酸指标随病情加重有增高趋势,血钙随病情加重有降低趋势。结论:我院7年来妊娠期高血压疾病有早发、加重的趋势,但母儿不良结局无升高趋势。 展开更多
关键词 妊娠期高血压疾病 流行病学调查 不良结局
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非典型肺炎标本感染乳鼠和Vero E6细胞的病理学观察 被引量：36
3
作者 王翠娥 秦鄂德 +8 位作者 甘永华 李豫川 吴小红 曹军田 于曼 司炳银 严格 李金风 祝庆余 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期383-384,F003,共3页
为查明非典型肺炎的病原体 ,作者以死亡患者肺组织感染KM乳鼠和VeroE6细胞 ,对发病鼠的主要脏器作病理学检查 ,对出现病变的培养细胞作超微结构观察 ,对细胞培养上清液作电镜负染检查。结果发现 ,患者肺组织可致乳鼠发病死亡 ,病变主要... 为查明非典型肺炎的病原体 ,作者以死亡患者肺组织感染KM乳鼠和VeroE6细胞 ,对发病鼠的主要脏器作病理学检查 ,对出现病变的培养细胞作超微结构观察 ,对细胞培养上清液作电镜负染检查。结果发现 ,患者肺组织可致乳鼠发病死亡 ,病变主要表现在肺脏和肝脏 ,在肺组织中检出病毒。在感染的培养细胞中发现大量病毒 ,在细胞培养液中也检出病毒 ,检出的病毒大多呈球形 ,直径 90～12 0nm ,其形态和细胞内分布与冠状病毒相一致 。 展开更多
关键词 非典型肺炎 标本 感染乳鼠 VeroE6细胞 病理学观察 病原体 冠状病毒
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SARS相关病毒(BJ01株)的全序列及其比较分析 被引量：17
4
作者 秦鄂德 祝庆余 +44 位作者 于曼 范宝昌 常国辉 司炳银 杨保安 彭文明 姜涛 刘伯华 邓永强 刘洪 张雨 王翠娥 李豫川 甘永华 李晓萸 吕富双 谭刚 曹务春 杨瑞馥 汪建 李蔚 徐祖元 李彦 吴清发 林伟 陈维军 唐琳 邓亚军 韩玉军 李昌峰 雷蒙 李国庆 李文杰 吕宏 石建萍 童宗中 张峰 李松岗 刘斌 刘斯奇 董伟 王俊 黄家树 于军 杨焕明 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1127-1134,共8页
严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新发现的急性传染病。对一株已确认为SARS病原体的冠状病毒(BJ01)进行了全基因组序列测定,并与其他已知病毒进行了比较分析。该病毒基因组全长为29.725kb,含11个可读框(ORFs),由1个稳定区和1个可变区组成... 严重急性呼吸综合征(SARS)是一种新发现的急性传染病。对一株已确认为SARS病原体的冠状病毒(BJ01)进行了全基因组序列测定,并与其他已知病毒进行了比较分析。该病毒基因组全长为29.725kb,含11个可读框(ORFs),由1个稳定区和1个可变区组成,其中稳定区编码RNA依赖性RNA聚合酶,包括两个ORFs;可变区含有4个蛋白质编码序列(CDSs),分别编码病毒的4个结构蛋白(S,E,M,N蛋白)。此外,可变区还包括5个非典型的预测蛋白(PUPs)。此病毒基因的排列顺序与其他已知的冠状病毒一致。通过与已知RNA病毒的序列比对,可以确认该病毒属于冠状病毒科(Coronaviridae)。与GenBank中已知的5个SARS相关病毒全基因组序列的比较分析显示,已在30个核苷酸位置上检出序列差异,总体突变率为0.1％,其中15个变异位点在编码区,可能会导致蛋白质的氨基酸改变(异义突变)。S蛋白中已发现3处可能引起该蛋白质物化特征变化的变异,而该蛋白质可能参与病毒与宿主间的免疫反应.与病毒包膜形成相关的M蛋白中则已发现两处氨基酸变化。进化分析表明,SARS病毒可能不是来源于人类,但没有证据证明是人为制造的。为了阐明SARS相关病毒的病因学以及排除其他可能的SARS病原体的存在,仍需进行更深入的研究。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征(SARS) 冠状病毒 基因组 系统发生学 突变
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阴道放置卡孕栓与米索前列醇对宫腔镜子宫黏膜下肌瘤电切术扩张宫颈效果 被引量：23
5
作者 于曼 黄健荣 +1 位作者 梁碧秀 兰易 《中国计划生育学杂志》 2018年第12期1189-1191,共3页
目的:分析阴道放置卡孕栓与米索前列醇宫颈预处理对宫腔镜子宫黏膜下肌瘤电切术(TCRM)者宫颈扩张和手术影响。方法:对照性观察本院2015年6月—2017年6月Ⅰ型子宫黏膜下肌瘤(SMU)患者128例,根据术前宫颈预处理方法的不同,分为卡孕栓组和... 目的:分析阴道放置卡孕栓与米索前列醇宫颈预处理对宫腔镜子宫黏膜下肌瘤电切术(TCRM)者宫颈扩张和手术影响。方法:对照性观察本院2015年6月—2017年6月Ⅰ型子宫黏膜下肌瘤(SMU)患者128例,根据术前宫颈预处理方法的不同,分为卡孕栓组和米索前列醇组各64例,于术前分别给予阴道放置卡孕栓或米索前列醇行宫颈预处理。结果:宫颈扩张效果、总有效率卡孕栓组优于米索前列醇组,手术时间、术中出血量卡孕栓组低于米索前列醇组(均P<0.05);两组的药物不良反应发生无差异(P>0.05)。结论:阴道放置卡孕栓宫颈预处理有利于宫腔镜TCRM手术宫颈扩张,减少术中出血量,缩短手术时间,且操作简单快捷、安全有效。 展开更多
关键词 卡孕栓 米索前列醇 宫腔镜 子宫黏膜下肌瘤电切术
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河南新乡2008年手足口病病原分离鉴定及病毒基因组特征 被引量：19
6
作者 韩剑峰 安康 +11 位作者 刘洪 陈浩利 于曼 张勇朝 司炳银 杨再维 秦成峰 赵世方 秦鄂德 林小军 祝庆余 常国辉 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2008年第6期523-526,共4页
目的:对2008年分离自河南新乡手足口病患者粪便标本的病原进行分离鉴定及全基因组序列测定,并同相关毒株序列进行同源性比对和进化分析,以了解新分离病毒基因组序列特征及可能的传播来源。方法:将手足口病患者粪便标本接种敏感细胞进行... 目的:对2008年分离自河南新乡手足口病患者粪便标本的病原进行分离鉴定及全基因组序列测定,并同相关毒株序列进行同源性比对和进化分析,以了解新分离病毒基因组序列特征及可能的传播来源。方法:将手足口病患者粪便标本接种敏感细胞进行分离传代培养,制备抗原片进行间接免疫荧光检测,采用特异性引物进行PCR鉴定,将病毒基因组分为8个片段进行RT-PCR扩增,扩增产物纯化后进行PCR测序。通过末端重叠序列拼接成全长病毒基因组序列,利用生物信息学软件对序列进行比对分析,绘制进化树。结果:测序获得的3株EV71病毒基因组全长均为7 405 nt,VP1氨基酸序列同源性达100%。Blast分析表明F3(F8)-Henan-08毒株均与安徽阜阳2008年分离的EV71毒株同源性最高,而F4-Henan-08毒株与我国台湾省2004年分离的EV71毒株同源性最高。序列进化分析表明,新分离毒株属于C4基因亚型。结论:新分离的河南EV71毒株与安徽阜阳分离的毒株可能具有相同来源。 展开更多
关键词 手足口病 EV71病毒 基因组 序列测定 进化分析
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我国3株登革2型病毒E基因序列测定及毒力基因位点分析 被引量：17
7
作者 赵卫 胡志君 +5 位作者 杨敬 杨佩英 秦鄂德 于曼 段鸿元 欧武 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第1期9-12,共4页
目的　测定我国 3株临床症状、乳鼠神经毒力不同的登革 2型病毒流行株E基因序列并找到可能与毒力相关的基因位点。方法　运用RT -PCR法测定我国 3株登革病毒的E基因序列。结果　DEN2 - 0 4、43、44株的核苷酸及氨基酸同源性均在 95 %以... 目的　测定我国 3株临床症状、乳鼠神经毒力不同的登革 2型病毒流行株E基因序列并找到可能与毒力相关的基因位点。方法　运用RT -PCR法测定我国 3株登革病毒的E基因序列。结果　DEN2 - 0 4、43、44株的核苷酸及氨基酸同源性均在 95 %以上 ,DEN2 - 0 4与DEN2 - 43、44共有 4个氨基酸差异引起极性或电荷的变化。结论　E6 4、E2 0 展开更多
关键词 登革病毒 E基因序列 毒力基因
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新分离的冠状病毒与严重急性呼吸综合征病原关系的研究 被引量：11
8
作者 祝庆余 秦鄂德 +14 位作者 于曼 司炳银 杨保安 刘洪 吕富双 常国辉 彭文明 范宝昌 邓永强 韩伟国 石玉玲 李林海 张泮河 赵秋敏 曹务春 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期477-479,共3页
目的　确定新分离的冠状病毒与目前流行的严重急性呼吸综合征的病原关系。方法　以用细胞培养法从严重急性呼吸综合征病例标本中分离出的冠状病毒为抗原 ,通过免疫荧光染色及中和试验测定严重急性呼吸综合征患者血清中抗新分离的冠状病... 目的　确定新分离的冠状病毒与目前流行的严重急性呼吸综合征的病原关系。方法　以用细胞培养法从严重急性呼吸综合征病例标本中分离出的冠状病毒为抗原 ,通过免疫荧光染色及中和试验测定严重急性呼吸综合征患者血清中抗新分离的冠状病毒的抗体 ,分析确定新冠状病毒与严重急性呼吸综合征的病原关系。结果　在临床确诊的 1 1 3份严重急性呼吸综合征患者血清标本中 ,99份检测出有抗新冠状病毒的抗体。 1 0对双份血清检测结果显示 ,后采集的血清抗体效价均比发病初期采集的明显增高 ,最高的升高 1 2 8倍。中和试验结果证明 ,病人血清抗体能够中和新分离的冠状病毒。结论　新分离的冠状病毒与此次流行的严重急性呼吸综合征密切相关 。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 SARS 新冠状病毒 病原关系 中和试验
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孕晚期胎膜早破危险因素相关性分析 被引量：17
9
作者 于曼 杨亚君 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2019年第12期1440-1444,共5页
目的探讨孕晚期发生胎膜早破的危险因素及其与胎膜早破的相关性。方法回顾性分析2017年1月至2018年12月医院收治的350例孕晚期孕妇的临床资料,根据孕妇有无发生胎膜早破分为观察组和对照组。对比两组可能导致胎膜早破相关因素的差异,并... 目的探讨孕晚期发生胎膜早破的危险因素及其与胎膜早破的相关性。方法回顾性分析2017年1月至2018年12月医院收治的350例孕晚期孕妇的临床资料,根据孕妇有无发生胎膜早破分为观察组和对照组。对比两组可能导致胎膜早破相关因素的差异,并采用多因素Logistic回归分析法明确影响胎膜早破的相关因素,重点探讨GBS、支原体、衣原体感染与胎膜早破的关系。结果350例孕妇胎膜早破发生率为14.86%(52/350)0观察组与对照组年龄、主动或被动吸烟、产次、人工流产史、妊娠期高血压、妊娠期糖尿病、胎位横位/臀位和子宫肌瘤患者构成比差异均无统计学意义(均P>0.05)o观察组多胎妊娠、产检V5次、巨大儿、羊水过多、头盆不称、GES感染、解腺支原体感染和沙眼衣原体感染患者构成比均高于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)o经Logistic回归分析均是导致胎膜早破的危险因素(均PV0.05)。结论导致胎膜早破的危险因素较多,其中孕晚期生殖道GES、支原体和衣原体感染与胎膜早破关系紧密,临床应采取针对性防治措施,以降低胎膜早破发生风险,改善妊娠结局。 展开更多
关键词 孕晚期 E族溶血性链球菌 支原体 衣原体 胎膜早破
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SARS病毒抗体间接免疫荧光检测方法的建立 被引量：12
10
作者 司炳银 杨保安 +8 位作者 于曼 刘洪 吕富双 韩伟国 张雨 石玉玲 李林海 秦鄂德 祝庆余 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期699-700,共2页
目的　建立快速检测严重急性呼吸综合征 (SARS)患者血清中特异抗体的间接免疫荧光方法 ,为SARS的临床确诊提供参考依据。方法　用本实验室新分离的SARS冠状病毒BJ0 1和GZ0 1株感染Vero E6细胞 ,待 2 5 %细胞出现病变时 ,用胰蛋白酶消化... 目的　建立快速检测严重急性呼吸综合征 (SARS)患者血清中特异抗体的间接免疫荧光方法 ,为SARS的临床确诊提供参考依据。方法　用本实验室新分离的SARS冠状病毒BJ0 1和GZ0 1株感染Vero E6细胞 ,待 2 5 %细胞出现病变时 ,用胰蛋白酶消化细胞后以 2× 10 7/ml浓度 4 0 μl的细胞滴到 10孔镀膜的玻片上 ,CO2 温箱培养 4h后丙酮固定。利用制备的抗原片通过间接免疫荧光检测了从北京和广州地区采集的 15 4例临床诊断为SARS的患者和 14例非SARS呼吸系统疾病和 10 0份健康人血清。结果　成功地建立了检测SARS冠状病毒抗体的间接免疫荧光染色方法 ,并对 15 4例临床诊断为SARS的患者的血清标本进行检测 ;SARS冠状病毒抗体阳性 14 2例 ,阳性率为 92 3% ,而 14例非SARS呼吸系统疾病患者和 10 0名健康人血清检测均为阴性。结论　本方法具有良好的特异性和灵敏度 。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征 冠状病毒 间接免疫荧光
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扩增我国登革2型病毒全长cDNA分子的技术方法融合PCR方法 被引量：10
11
作者 范宝昌 赵卫 +4 位作者 胡志君 于曼 陈水平 杨佩英 秦鄂德 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2001年第2期137-139,共3页
目的 :建立扩增登革 2型病毒基因组全长cDNA的融合PCR法 ,为深入探讨病毒基因组的结构与功能提供有效的技术途径。方法 :根据我国登革 2型病毒D2 4 3株序列设计引物 ,首先采用长链RT PCR技术扩增病毒基因组 5′及 3′半分子 ,然后以半... 目的 :建立扩增登革 2型病毒基因组全长cDNA的融合PCR法 ,为深入探讨病毒基因组的结构与功能提供有效的技术途径。方法 :根据我国登革 2型病毒D2 4 3株序列设计引物 ,首先采用长链RT PCR技术扩增病毒基因组 5′及 3′半分子 ,然后以半分子采用融合PCR法将两个半分子构建成全长cDNA分子。为进一步证实所构建全长cDNA分子的特异性 ,再以融合PCR产物为模板扩增 5′非编码区序列 ,与pGEM T载体连接 ,在 377A型自动测序仪进行序列分析。结果 :通过对逆转录反应及PCR扩增条件的优化 ,建立了制备大片段cDNA及构建全长cDNA分子的融合PCR方法。扩增的我国登革 2型病毒的 5′及 3′半分子的长度均为 5kb左右 ,采用融合PCR方法制备的全长cDNA长约 11kb ,与预期大小一致 ,非编码区测序结果表明扩增产物为D2 4 3所特有。结论 展开更多
关键词 登革热病毒 全长CDNA 长链逆转录PCR 融合PCR
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重要呼吸道病毒病原的多重RT-PCR检测 被引量：10
12
作者 赵海龙 姜涛 +5 位作者 陈水平 赵慧 李晓峰 秦成峰 于曼 秦鄂德 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期890-892,共3页
目的建立一种可同时快速检测引起人呼吸道感染的重要病毒病原的检测方法。方法通过对PCR反应条件的优化,建立同时检测甲型流感病毒(IA)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SARS冠状病毒(SARS-CoV)的多重RT-PCR方法。结果该法可同时或分别扩增IA258b... 目的建立一种可同时快速检测引起人呼吸道感染的重要病毒病原的检测方法。方法通过对PCR反应条件的优化,建立同时检测甲型流感病毒(IA)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SARS冠状病毒(SARS-CoV)的多重RT-PCR方法。结果该法可同时或分别扩增IA258bp、RSV348bp和SARS-CoV438bp的基因片段。检测的敏感性分别为101.7TCID50/ml、10TCID50/ml和101·5TCID50/ml。采用相同的反应体系和条件,分别对其他7种呼吸道病毒(包括乙型流感病毒,副流感病毒2型,柯萨奇病毒B3和B5血清型及腺病毒2、3和7血清型)进行扩增,均未检测出扩增产物。结论此种多重RT-PCR法可在6h内完成,适用于三种重要呼吸道病毒的快速甄别。 展开更多
关键词 多重RT-PCR 流感病毒A型 呼吸道合胞病毒 SARS病毒
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应用通用引物聚合酶链反应技术检测不同型别的登革病毒 被引量：9
13
作者 秦鄂德 杨佩英 +3 位作者 于曼 徐品芳 司炳银 阎国珍 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1995年第1期56-58,共3页
利用特异抗体吸附的登革病毒，经含ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的裂解缓冲液处理，释放出基因组ＲＮＡ，在同一管中进行逆转录聚合酶链扩增反应。采用这种方法利用保守性引物可检测出登革１型、２型和４型病毒参考株及我国海南岛登革２型病... 利用特异抗体吸附的登革病毒，经含ＴｒｉｔｏｎＸ－１００的裂解缓冲液处理，释放出基因组ＲＮＡ，在同一管中进行逆转录聚合酶链扩增反应。采用这种方法利用保守性引物可检测出登革１型、２型和４型病毒参考株及我国海南岛登革２型病毒分离株的基因组序列，扩增产物约为５５０ｂｐ。用３２Ｐ－标记的分子克隆的登革２型病毒基因探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析证实了扩增产物的特异性。利用这种技术还可从感染后２４ｈ的Ｃ６／３６细胞培养上清中检测出登革病毒基因组序列。而明显的细胞病变作用（ＣＰＥ）在感染后９６ｈ才可观察到。 展开更多
关键词 登革热病毒 聚合酶链反应 微生物学检验
全文增补中
基于微服务架构的ETC数据层平台的设计与实现 被引量：12
14
作者 于曼 黄凯 张翔 《计算机应用与软件》 北大核心 2021年第7期29-34,105,共7页
为了解决ETC系统应用庞大难以快速响应客户需求等问题,提出基于微服务架构理念、C++框架技术的ETC数据层平台。应用C++框架的动态库形式封装微服务,实现微服务的依赖注入控制反转;应用负载均衡、redis集群和服务分化等技术,提高框架的... 为了解决ETC系统应用庞大难以快速响应客户需求等问题,提出基于微服务架构理念、C++框架技术的ETC数据层平台。应用C++框架的动态库形式封装微服务,实现微服务的依赖注入控制反转;应用负载均衡、redis集群和服务分化等技术,提高框架的可用性和可伸缩性。该平台满足了ETC系统轻量级、松耦合、高扩展的目标,实现了平台全自动独立部署和热更新的运营维护,大大提升了ETC系统代码的复用性和兼容性,提高响应速率,并有效应对取消省间收费站和ETC业务扩展等新的国家政策。 展开更多
关键词 微服务 热更新 高扩展 松耦合 数据层平台
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感染细胞中SARS相关病毒的形态学观察 被引量：7
15
作者 王翠娥 李豫川 +7 位作者 吴小红 曹军田 严格 李金凤 司炳银 于曼 秦鄂德 祝庆余 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期209-211,共3页
目的 用电子显微镜观察严重急性呼吸综合征(SARS)患者标本感染细胞,为SARS病原体的分离鉴定提供形态学资料。方法 以北京和广州地区SARS病例尸检肺组织和鼻咽拭子标本感染Vero E6细胞,通过对培养上清液和病变细胞超薄切片观察,了解病毒... 目的 用电子显微镜观察严重急性呼吸综合征(SARS)患者标本感染细胞,为SARS病原体的分离鉴定提供形态学资料。方法 以北京和广州地区SARS病例尸检肺组织和鼻咽拭子标本感染Vero E6细胞,通过对培养上清液和病变细胞超薄切片观察,了解病毒的大小、形态、在感染细胞中的分布和装配情况,初步判定病毒的分类。结果 在3价标本感染的细胞培养液和病变细胞中均查见病毒,病毒颗粒多呈圆形或椭圆形,大小80～120nm,外周有冠状排列的纤突。在广州肺组织标本感染的细胞中还查见大量的短杆状和少量肾形、不规则形的病毒颗粒,大小100～200nm×60～90nm,其他标本感染细胞中这种形态的病毒颗粒较少见。切片中见病毒主要分布在细胞质的内质网池、高尔基体、空泡、包涵体内和细胞外,呈空心和实心两种形式。包涵体内病毒颗粒排列紧密,其大小、形态不一。病毒以胞饮或膜融合形式进入细胞,以出芽方式增殖。结论 电镜查见SARS病例标本中分离出典型的圆形或椭圆形的冠状病毒,与文献报道的SARS相关新型冠状病毒相符。同时我们也发现了另一种以短杆状为主,偶见梨形、肾形、多形性的病毒颗粒,它们在SARS研究中的意义有待进一步探讨。 展开更多
关键词 感染细胞 SARS 形态学 观察 非典型肺炎
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重症急性呼吸综合征病例尸解肺组织中新型冠状病毒部分聚合酶基因的序列测定 被引量：7
16
作者 秦鄂德 祝庆余 +9 位作者 彭文明 姜涛 范宝昌 常国辉 于曼 司炳银 刘伯华 邓永强 刘洪 张雨 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第2期81-83,共3页
目的 :从患者尸解肺组织中直接扩增冠状病毒部分聚合酶基因序列 ,为重症急性呼吸综合征 (非典型肺炎 )的病原确认提供依据。方法 :采用RT_PCR方法 ,从非典型肺炎病例标本中进行冠状病毒聚合酶基因的扩增与序列测定。采用ClustalX1.8软... 目的 :从患者尸解肺组织中直接扩增冠状病毒部分聚合酶基因序列 ,为重症急性呼吸综合征 (非典型肺炎 )的病原确认提供依据。方法 :采用RT_PCR方法 ,从非典型肺炎病例标本中进行冠状病毒聚合酶基因的扩增与序列测定。采用ClustalX1.8软件进行系统发生树分析。结果与结论 :从非典型肺炎病例尸解肺组织、传代发病小鼠肺组织及分离物感染的细胞培养物中 ,可分别扩增出冠状病毒的DNA片段。测序结果显示其核苷酸序列与目前已知冠状病毒的同源性在 6 0 %左右 。 展开更多
关键词 重症急性呼吸综合征 非典型肺炎 尸体解剖 冠状病毒 聚合酶 基因序列
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我国两株登革2型病毒基因组的全序列分析 被引量：7
17
作者 胡志君 杨敬 +4 位作者 赵卫 杨佩英 范宝昌 秦鄂德 于曼 《中国病毒学》 CSCD 2002年第1期17-21,共5页
本研究对我国两株登革２型病毒Ｄ２－４３株、Ｄ２－０４株的基因组进　行　了全序列测定，在此基础上对这两株引起不同临床症状及鼠神经毒力的登革病毒的基因组序　列进行了比较分析，结果表明Ｄ２－４３株与Ｄ２－０４株基因组全长约... 本研究对我国两株登革２型病毒Ｄ２－４３株、Ｄ２－０４株的基因组进　行　了全序列测定，在此基础上对这两株引起不同临床症状及鼠神经毒力的登革病毒的基因组序　列进行了比较分析，结果表明Ｄ２－４３株与Ｄ２－０４株基因组全长约为１０　７２３ｎｔ，核苷酸序列的同源性为９５．１％，氨基酸序列的同源性为９７．６％，　不存在特别的高变区。这两株序列中共有８３个核苷酸的变化导致了氨基酸的变化，其中２１个　差异氨基酸可引起所在位点电荷或极性的变化，位于登革病毒粒子表面的Ｅ糖蛋白第１２６位氨　基酸由Ｇｌｕ　（Ｄ２－０４株）→Ｌｙｓ（Ｄ２－４３株）的变化对其抗原性有影响，可能引起了病毒对鼠神　经　毒力的改变。对结构糖蛋白Ｅ基因的聚类分析表明Ｄ２－４３株与新几内亚株、台湾８７株及菲律　宾　８３株亲缘关系较近，Ｄ２－０４株与牙买加株及巴西９０年分离株的亲缘关系较近，表明我国存　在不同起源的登革２型病毒感染。 展开更多
关键词 登革病毒 基因组 全序列分析 D2-43株 D2-04株
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新分离登革2型病毒福建株基因组全序列的测定 被引量：8
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作者 耿丽卿 秦鄂德 +5 位作者 赵卫 胡志君 苑锡同 于曼 李晓萸 杨佩英 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期330-333,共4页
目的　对新近分离的导致 1999年福建省登革热流行的登革 2型病毒FJ 10株进行基因组全序列测定及系统发生树分析。方法　利用RT PCR和 5′、3′RACE法扩增FJ 10株cDNA ,并进行克隆测序。利用DNASTAR软件的Clustal方法绘制系统发生树。结... 目的　对新近分离的导致 1999年福建省登革热流行的登革 2型病毒FJ 10株进行基因组全序列测定及系统发生树分析。方法　利用RT PCR和 5′、3′RACE法扩增FJ 10株cDNA ,并进行克隆测序。利用DNASTAR软件的Clustal方法绘制系统发生树。结果　FJ 10株基因组全长 10 72 3个核苷酸 ,有 1个单一开放读码框架 (ORF ,第 97～ 10 2 6 9nt) ,编码 3391个氨基酸 ,5′和 3′非编码区长度分别为 96和 45 4个核苷酸。通过与标准株NGC株和我国其他地区分离株DEN2 0 4、43、44株比较 ,核苷酸同源性分别为 94.0 %、92 .8%、93.9%和 93.9% ,氨基酸同源性分别为 97.9%、97.2 %、97.7%和97.9%。以 47株登革 2型病毒E/NS1连接区 2 40个核苷酸序列进行系统发生树分析 ,福建株与印度尼西亚和斯里兰卡分离株亲缘关系较近 ,同属于第Ⅳ基因型。结论　FJ 10株基因组全序列一级结构与其他登革 2型病毒类似 ,其基因型不同于我国其他地区分离株DEN2 0 4、43和 44株。 展开更多
关键词 登革病毒 全序列测定 系统发生树 基因型
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siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用 被引量：9
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作者 赵慧 陈水平 +9 位作者 段鸿元 邓永强 姜涛 赵卓 于曼 康晓平 杨保安 李晓萸 秦成峰 秦鄂德 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期397-402,共6页
为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的... 为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用.结果表明,针对Pol基因的siRNA(psOe)在Vero细胞中可阻断BJ0 1株SARS病毒RNA的复制及其蛋白的表达.该结果为深入阐明SARS冠状病毒的致病机理及探讨SARS病毒防治新途径奠定了基础. 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 RNAi siRNA
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西尼罗病毒的RT-PCR检测与鉴定 被引量：7
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作者 邓永强 姜涛 +3 位作者 范宝昌 于曼 祝庆余 秦鄂德 《微生物学免疫学进展》 2004年第4期31-35,共5页
建立西尼罗病毒敏感、特异、快速的RTPCR检测方法用于实验室诊断和流行病学监测。采用一步RTPCR和套式PCR法对西尼罗病毒感染的乳鼠脑和细胞培养上清进行扩增,并对扩增产物进行序列测定。两种方法均可分别从两种组织中扩增出与预期大小... 建立西尼罗病毒敏感、特异、快速的RTPCR检测方法用于实验室诊断和流行病学监测。采用一步RTPCR和套式PCR法对西尼罗病毒感染的乳鼠脑和细胞培养上清进行扩增,并对扩增产物进行序列测定。两种方法均可分别从两种组织中扩增出与预期大小相一致的片段,套式PCR法比一步RTPCR法更为敏感,该扩增片段与西尼罗病毒埃及Eg101株相应序列的同源性为99%。 展开更多
关键词 西尼罗病毒 RT-PCR一步法 套式PCR
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