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胡杨、柽柳总RNA提取方法的建立 被引量:62
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作者 王玉成 薄海侠 杨传平 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期99-100,共2页
以胡杨和柽柳的叶片为材料 ,建立了一种从植物组织中快速分离总RNA的方法。该方法具有三个显著的特点 :RNA提取周期短 ,应用改进的LiCl沉淀RNA方法 ,仅需 10min即可 ;方法简单易行 ,仅需要几种常用试剂 ,操作步骤简单 ;提取的RNA杂质少 ... 以胡杨和柽柳的叶片为材料 ,建立了一种从植物组织中快速分离总RNA的方法。该方法具有三个显著的特点 :RNA提取周期短 ,应用改进的LiCl沉淀RNA方法 ,仅需 10min即可 ;方法简单易行 ,仅需要几种常用试剂 ,操作步骤简单 ;提取的RNA杂质少 ,得率高 ,并能在提取过程中较有效抑制RNA的褐化效应。RNA质量可以满足cDNA文库构建、DDRT -PCR等要求。 展开更多
关键词 胡杨 柽柳 RNA提取方法 植物组织 提取周期 褐化效应 质量 文库构建
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油茶种子cDNA文库的构建 被引量:44
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作者 胡芳名 谭晓风 +1 位作者 石明旺 乌云塔娜 《中南林学院学报》 CSCD 2004年第5期1-4,共4页
 以湘林1号和湘林4号油茶优良无性系近成熟种子为材料,采用裂解法和改良的CTAB法提取总RAN;用磁珠法分离得到纯化的mRNA;在反转录酶和其他酶的作用下合成一链cDNA和二链cDNA;经与质料载体重组和转化大肠杆菌,成功地构建了世界上第一个...  以湘林1号和湘林4号油茶优良无性系近成熟种子为材料,采用裂解法和改良的CTAB法提取总RAN;用磁珠法分离得到纯化的mRNA;在反转录酶和其他酶的作用下合成一链cDNA和二链cDNA;经与质料载体重组和转化大肠杆菌,成功地构建了世界上第一个油茶种子cDNA文库.经检测,文库存容量达106,重组率为88.21%.测序结果表明:克隆片段长度一般都大于600bp,说明构建的文库质量较高,能够满足ESTs文库构建及从文库中分离筛选重要基因等研究工作的需要,为进一步研究奠定了很好的物质和技术基础. 展开更多
关键词 林学 经济林 油茶 CDNA 文库构建
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小麦抗病基因表达谱中的文库构建与筛选方法研究 被引量:26
3
作者 骆蒙 孔秀英 +2 位作者 刘越 周荣华 贾继增 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第9期814-819,共6页
以抗白粉病品系“百农 32 17×Mardler”BC5F4为材料 ,构建了白粉病菌诱导的普通cDNA文库和抑制消减杂交(SSH)cDNA文库。分别对两文库进行了一定规模的测序 ,获得普通cDNA文库不重复ESTs 387条和SSHcDNA文库ESTs 76 0条。将获得的E... 以抗白粉病品系“百农 32 17×Mardler”BC5F4为材料 ,构建了白粉病菌诱导的普通cDNA文库和抑制消减杂交(SSH)cDNA文库。分别对两文库进行了一定规模的测序 ,获得普通cDNA文库不重复ESTs 387条和SSHcDNA文库ESTs 76 0条。将获得的ESTs与GenBank序列进行了BLASTn、BLASTx同源性分析。结果表明 :在普通文库中 ,一些参与光合作用与核糖体构成等的基因出现频率较高 ,而获得的抗病相关基因则较少。消减文库在构建方法、抗病相关基因的富集等方面具有明显的优越性 ,是目前抗病基因表达谱研究中的较好方法。利用高密度点阵膜杂交技术对两文库的筛选结果表明 ,该方法具有相对简便易操作、杂交膜可反复使用等优点 ;但也存在mRNA及同位素用量大等问题。经筛选 ,消减文库中有 5 4 1%的功能已知ESTs为抗病相关基因 。 展开更多
关键词 CDNA文库 杂交筛选 小麦 抗病基因表达谱 文库构建 筛选方法
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土壤宏基因组学技术及其应用 被引量:33
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作者 沈菊培 张丽梅 +2 位作者 郑袁明 朱永官 贺纪正 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期212-218,共7页
传统的基于培养的研究方法只能反映土壤中少数(0.1%~10%)微生物的信息,而大部分微生物目前还不能培养,因而这部分微生物资源尚难以被有效地开发利用.宏基因组学是分子生物学技术应用于环境微生物生态学研究而形成的一个新概念,主要技... 传统的基于培养的研究方法只能反映土壤中少数(0.1%~10%)微生物的信息,而大部分微生物目前还不能培养,因而这部分微生物资源尚难以被有效地开发利用.宏基因组学是分子生物学技术应用于环境微生物生态学研究而形成的一个新概念,主要技术包括土壤DNA的提取、文库的构建和目标基因克隆的筛选.它可为揭示微生物生态功能及其分子基础提供更全面的遗传信息,并已在微生物新功能基因筛选、活性物质开发和微生物多样性研究等方面取得了显著成果.本文对土壤宏基因组学技术的方法和应用作了详细介绍. 展开更多
关键词 宏基因组学 土壤DNA提取 文库构建 文库筛选 应用
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油茶种子cDNA文库构建中的问题与对策 被引量:23
5
作者 石明旺 谭晓风 +1 位作者 王义强 胡芳名 《经济林研究》 2004年第2期53-55,共3页
以湘林1号和湘林4号油茶优良无性系近成熟种子为材料,总结了构建油茶种子cDNA文库过程中存在的一些关键问题和应采取的对策,为今后油茶和其它油料植物种子的mRNA提取、构建高质量的cDNA文库及ESTs文库等提供技术参考和理论指导。
关键词 油茶种子 CDNA 文库构建 质量
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宏基因组学研究进展 被引量:24
6
作者 黄循柳 黄仕杰 +1 位作者 郭丽琼 林俊芳 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1058-1066,共9页
不可培养微生物占据微生物总数的99%以上,这己成为微生物资源开发利用的一个限制性因素。宏基因组学是通过提取某一环境中的所有微生物基因组DNA、构建基因组文库及对文库进行筛选寻找和发现新的功能基因及活性代谢产物的一种方法。它... 不可培养微生物占据微生物总数的99%以上,这己成为微生物资源开发利用的一个限制性因素。宏基因组学是通过提取某一环境中的所有微生物基因组DNA、构建基因组文库及对文库进行筛选寻找和发现新的功能基因及活性代谢产物的一种方法。它避开了微生物分离培养的过程,极大地扩展了微生物资源的利用空间,是现代基因工程一个新的发展方向和研究热点。本文主要对宏基因组的DNA提取方法、文库的构建、筛选策略的选择及近年来宏基因组学在各领域中的应用研究现状进行了综述。 展开更多
关键词 宏基因组 未培养微生物 文库构建 文库筛选
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宏基因组学的研究进展 被引量:19
7
作者 冯美琴 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第2期415-416,479,共3页
宏基因组学尝试通过免培方法获得微生物的纯培养,主要技术包括DNA的提取、文库的构建和目标基因克隆的筛选,可用于发现新基因、开发新的生物活性物质、研究群落中微生物多样性等方面。笔者对宏基因组学技术的方法和应用作了简要综述。
关键词 宏基因组学 未培养微生物 文库构建 文库筛选
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基因组细菌人工染色体文库(BAC)的构建及应用 被引量:15
8
作者 李海权 刁现民 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第1期6-11,共6页
细菌人工染色体 (BAC)是一种承载DNA大片段的克隆载体系统 ,用于人、动物和植物基因组文库构建。BAC具有插入片断大、嵌合率低、遗传稳定性好、易于操作等优点。BAC文库的构建是基因组较大的真核生物基因组学研究的重要基础 ,可用于真... 细菌人工染色体 (BAC)是一种承载DNA大片段的克隆载体系统 ,用于人、动物和植物基因组文库构建。BAC具有插入片断大、嵌合率低、遗传稳定性好、易于操作等优点。BAC文库的构建是基因组较大的真核生物基因组学研究的重要基础 ,可用于真核生物重要基因及全基因组物理作图、重要性状基因的图位克隆、基因结构及功能分析。本文主要综述了细菌人工染色体的构建与其鉴定 ,及其在物理图谱构建、图位克隆、转基因技术等研究上的应用。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 图位克隆 真核生物 植物基因组 BAC文库 文库构建 基因结构 全基因组 基因组学研究 栽体
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阴道毛滴虫cDNA文库的构建和鉴定 被引量:15
9
作者 章家新 傅玉才 +1 位作者 郑晓虹 刘红 《汕头大学医学院学报》 2003年第4期198-200,共3页
目的 :构建阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)全长cDNA表达文库 ,筛选全长目的基因 ,研究与其细胞周期相关基因的结构和功能。方法 :从Tv中提取总RNA ,用ClonTech公司的SMARTTMcDNA文库试剂盒构建其全长cDNA表达文库。结果 :所建文... 目的 :构建阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)全长cDNA表达文库 ,筛选全长目的基因 ,研究与其细胞周期相关基因的结构和功能。方法 :从Tv中提取总RNA ,用ClonTech公司的SMARTTMcDNA文库试剂盒构建其全长cDNA表达文库。结果 :所建文库的初始滴度为6 78× 10 6 pfu mL ,经一次扩增后的滴度为 1 6 8× 10 9pfu mL ,重组率 >98%。结论 :成功构建Tv全长cDNA文库 。 展开更多
关键词 阴道毛滴虫 CDNA文库 文库构建 鉴定技术
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cDNA文库的构建策略 被引量:8
10
作者 李海红 王秦秦 《昆明医学院学报》 2003年第4期22-25,34,共5页
cDNA文库在基因分离和克隆中具有重要作用 .近年来 ,随着分子生物学技术的发展 ,cDNA文库构建方法有了很大改进和提高 .
关键词 CDNA文库 基因文库 文库构建 抑制消减杂交技术 差示cDNA文库 快速扩增cDNA末端法
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稻曲病菌cDNA文库的构建 被引量:16
11
作者 张震 王教瑜 +4 位作者 杜新法 柴荣耀 毛雪琴 邱海萍 孙国昌 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期462-467,共6页
以稻曲病菌菌丝和薄壁分生孢子提取的总RNA为起始模板,利用SMART cDNA library construction kit构建稻曲病菌cDNA文库,并分析文库质量。结果显示,未扩增文库滴度9.03×10^6pfu/mL,重组率为99.5%,扩增后文库滴度达5.52×10^9pfu... 以稻曲病菌菌丝和薄壁分生孢子提取的总RNA为起始模板,利用SMART cDNA library construction kit构建稻曲病菌cDNA文库,并分析文库质量。结果显示,未扩增文库滴度9.03×10^6pfu/mL,重组率为99.5%,扩增后文库滴度达5.52×10^9pfu/mL。随机挑取10个噬菌斑转化成质粒,SfiⅠ酶切显示插入片段长度在400-2000bp之间;经测序得到10条表达序列标签(EST),GenBank数据库相似性联配结果显示6条EST具有同源序列。其中,克隆R2为乙酰胺酶同源物编码蛋白。 展开更多
关键词 稻曲病菌 CDNA文库 文库构建
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星星草cDNA文库构建和金属硫蛋白(MT-1)基因的克隆 被引量:10
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作者 刘桂丰 褚延广 +2 位作者 王玉成 侯英杰 杨传平 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期424-428,共5页
以受NaHCO3胁迫后的星星草叶片组织为材料构建了cDNA文库,文库的初始滴度为2.0×106pfu,重组率为95%,平均插入片段长度为0.8kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu·mL-1。文库克隆随机测序获得了星星草的金属硫蛋白(MT-1)基因... 以受NaHCO3胁迫后的星星草叶片组织为材料构建了cDNA文库,文库的初始滴度为2.0×106pfu,重组率为95%,平均插入片段长度为0.8kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu·mL-1。文库克隆随机测序获得了星星草的金属硫蛋白(MT-1)基因的全长cDNA序列,显示文库中含有一定量的全长基因。MT-1基因全长622bp,其中5'非翻译区57bp,3'非翻译区343bp,开放读码框长222bp,编码73个氨基酸,氨基酸序列中具有植物MT-1蛋白特有的金属响应元件(MRE)序列,MT-1蛋白的分子量为7.814kD,理论等电点为4.72。 展开更多
关键词 星星草 CDNA文库 NAHCO3胁迫 金属硫蛋白 文库构建 全长基因 克隆 全长CDNA序列 氨基酸序列 NaHCO3
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紫杆柽柳cDNA文库构建与硫氧还蛋白基因的克隆 被引量:10
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作者 王玉成 杨传平 +1 位作者 刘桂丰 姜静 《分子植物育种》 CAS CSCD 2004年第5期667-673,共7页
以NaHCO3胁迫的紫杆柽柳(Tamarix androssowii)为材料建立了cDNA文库.经检测,文库的初始滴度为5.7×105pfu,重组率为96%,插入片段的长度在0.3~3.0kb之间,平均长度为1.2kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu/ml.对文库克隆进行随... 以NaHCO3胁迫的紫杆柽柳(Tamarix androssowii)为材料建立了cDNA文库.经检测,文库的初始滴度为5.7×105pfu,重组率为96%,插入片段的长度在0.3~3.0kb之间,平均长度为1.2kb,扩增后文库的滴度为4.0×109pfu/ml.对文库克隆进行随机测序,获得了紫杆柽柳的硫氧还蛋白(Thioredoxin)基因序列.生物信息学分析表明获得的硫氧还蛋白基因全长683bp,其中5'非翻译区长56bp,3'非翻译区长204bp,开放读码框长423bp,编码140个氨基酸,蛋白的分子量为15.1kD,理论等电点为5.59,其氨基酸序列中具有硫氧还蛋白的保守活性位点'WCGPC'序列,Clustal分析表明该硫氧还蛋白与蓖麻(Ricinus communis)的硫氧还蛋白氨基酸序列同源性高,达65%.本研究构建的cDNA文库为柽柳基因克隆和系统研究柽柳抗逆分子机理奠定了基础. 展开更多
关键词 紫杆柽柳 CDNA 文库构建 硫氧还蛋白基因 基因克隆
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细菌人工染色体文库的构建及应用 被引量:10
14
作者 王晓虹 金黎明 《生物技术通讯》 CAS 2005年第6期668-671,共4页
细菌人工染色体(BAC)是第二代大片段DNA的克隆载体系统,具有容量大、嵌合率低、遗传特性稳定、转化效率高、插入片段易回收、操作简便等优点,因而被广泛应用于基因组较大的真核生物基因组研究中,并发挥着前所未有的重要作用。本文综述了... 细菌人工染色体(BAC)是第二代大片段DNA的克隆载体系统,具有容量大、嵌合率低、遗传特性稳定、转化效率高、插入片段易回收、操作简便等优点,因而被广泛应用于基因组较大的真核生物基因组研究中,并发挥着前所未有的重要作用。本文综述了BAC的发展,利用此载体构建基因组文库的程序和鉴定方法,及其在物理图谱构建、图位克隆、基因组测序、转基因技术等研究中的应用。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 文库构建 鉴定 应用
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鹿茸多肽及其生长因子制备工艺的研究进展 被引量:13
15
作者 张郑瑶 尚禹东 +3 位作者 牟凤辉 陆成伟 郑清川 周秋丽 《特产研究》 2011年第3期69-72,共4页
鹿茸是我国传统中药材,鹿茸多肽及其生长因子具有重要的生理功能。本文综述了鹿茸多肽及其生长因子的提取、分离、纯化以及文库构建表达的应用前景。
关键词 鹿茸多肽 生长因子 文库构建 重组表达
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棉花细菌人工染色体文库构建的方法优化 被引量:7
16
作者 王省芬 郑拥民 +3 位作者 张桂寅 李喜焕 LIU Chun-ji 马峙英 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2004年第3期170-174,共5页
以我国抗病、优质、丰产的棉花优良品种中棉所12号为材料,对棉花细菌人工染色体(BAC)文库构建过程中的一些关键技术,如plug的制备、DNA的部分消化、酶切片段的选择、插入片段与载体的摩尔比值、连接产物的浓缩等进行了研究,建立了构建棉... 以我国抗病、优质、丰产的棉花优良品种中棉所12号为材料,对棉花细菌人工染色体(BAC)文库构建过程中的一些关键技术,如plug的制备、DNA的部分消化、酶切片段的选择、插入片段与载体的摩尔比值、连接产物的浓缩等进行了研究,建立了构建棉花BAC文库的适宜方法体系。依照该方法初步构建了含有38000个克隆的棉花BAC文库。经检测,插入片段平均大小约为120kb,蓝斑率小于0.5%,空载率小于1%。插入片段与载体的最适摩尔比为1∶15,一次转化可以获得约2000个克隆,cfu·μl 1高达4。该方法为进一步构建中棉所12号多倍基因组的BAC文库、从而进行棉花基因组有关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 棉花细菌 人工染色体 文库构建 棉花BAC文库
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抱茎金花茶(Camellia tienii)的叶绿体基因组特征分析 被引量:9
17
作者 丁祥青 毕远洋 +5 位作者 陈佳婷 向双 练芳松 李文芳 吴丽君 邹双全 《江苏农业科学》 北大核心 2022年第23期33-40,共8页
为明确抱茎金花茶(Camellia tienii)的叶绿体全基因组序列,本研究对抱茎金花茶的叶片高通量重测序数据进行叶绿体全基因组的组装和注释分析。抱茎金花茶叶绿体全基因组长为156591 bp,是典型的四分体结构,大单拷贝区(LSC)为86172 bp、小... 为明确抱茎金花茶(Camellia tienii)的叶绿体全基因组序列,本研究对抱茎金花茶的叶片高通量重测序数据进行叶绿体全基因组的组装和注释分析。抱茎金花茶叶绿体全基因组长为156591 bp,是典型的四分体结构,大单拷贝区(LSC)为86172 bp、小单拷贝区(SSC)为18275 bp、反向重复区(IRs)为26072 bp,序列已登录GenBank(OL435568)。抱茎金花茶叶绿体基因组共预测注释134个基因,包括88个蛋白编码基因、38个tRNA基因、8个rRNA基因。叶绿体全基因组比较分析表明,抱茎金花茶结构与基因排序均保守,rps16、ycf3、ycf4-cemA、ycf15-trnL-CAA和rrn5-trnR-ACG序列可作为开发金花茶植物DNA条形码研究热点。抱茎金花茶cpDNA中共有67个SSR位点,其中单核苷酸、二核苷酸、三核苷酸、四核苷酸、六核苷酸重复数分别为48、4、1、11、2个。系统发育分析表明,抱茎金花茶在金花茶组中形成基部分支,和金花茶、显脉金花茶等互为姐妹类群,具有较近的亲缘关系。 展开更多
关键词 抱茎金花茶 叶绿体基因组 亲缘关系 文库构建 序列比对 系统发育树
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抑制差减杂交技术原理及常见操作结果分析 被引量:7
18
作者 夏启中 张明菊 张献龙 《黄冈师范学院学报》 2005年第3期30-33,共4页
抑制差减杂交(SuppressionSubtractiveHybridization,SSH)是一种高效鉴定和分离克隆差异表达基因的新技术。目前,该技术在分子生物学研究的各个领域得到了广泛的应用。本文对SSH的技术原理、差减cDNA文库构建的技术流程、常见问题分析... 抑制差减杂交(SuppressionSubtractiveHybridization,SSH)是一种高效鉴定和分离克隆差异表达基因的新技术。目前,该技术在分子生物学研究的各个领域得到了广泛的应用。本文对SSH的技术原理、差减cDNA文库构建的技术流程、常见问题分析及优缺点等作了较全面的介绍,可为研究者们提供参考。 展开更多
关键词 抑制差减杂交 技术原理 分子生物学研究 操作 差异表达基因 分离克隆 技术流程 文库构建 cDNA 问题分析 SSH 优缺点
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铁皮石斛cDNA文库的构建及分析 被引量:7
19
作者 方花 魏小勇 《生命科学研究》 CAS CSCD 2005年第3期263-266,共4页
首次报道铁皮石斛cDNA文库的构建及其分析.以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛叶片中提取总RNA,分离纯化mRNA,LD-PCR法反转录合成双链cDNA,以λTripEX2为载体,构建铁皮石斛cDNA文库.原始文库的滴度为4.3×105 pfu/mL,总克隆数为3.1... 首次报道铁皮石斛cDNA文库的构建及其分析.以Trizol一步法从4年生的铁皮石斛叶片中提取总RNA,分离纯化mRNA,LD-PCR法反转录合成双链cDNA,以λTripEX2为载体,构建铁皮石斛cDNA文库.原始文库的滴度为4.3×105 pfu/mL,总克隆数为3.1×105,重组率为97.6%,扩增后文库总滴度为6.8×109pfu/mL,对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定,结果插入片段多分布在0.5~2.0kb之间,绝大部分在1.2~1.7kb左右,文库质量鉴定结果表明,构建的铁皮石斛cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段.cDNA文库的构建为铁皮石斛药用成分相关功能基因的研究奠定了基础. 展开更多
关键词 铁皮石斛 CDNA 文库构建
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宏基因组学挖掘新型生物催化剂的研究进展 被引量:6
20
作者 王魁 汪思迪 +1 位作者 黄睿 刘玉焕 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期420-431,共12页
微生物蕴藏着大量具有工业应用潜力的生物催化剂。然而,传统培养方法只能从环境中获得不到1%的微生物。宏基因组学是通过提取某一特定环境中的所有微生物基因组DNA、构建基因组文库并对文库进行筛选,寻找和发现新的功能基因的一种方法... 微生物蕴藏着大量具有工业应用潜力的生物催化剂。然而,传统培养方法只能从环境中获得不到1%的微生物。宏基因组学是通过提取某一特定环境中的所有微生物基因组DNA、构建基因组文库并对文库进行筛选,寻找和发现新的功能基因的一种方法。它绕过了微生物分离培养过程,成为研究环境样品中不可培养微生物的有力手段。因此,从宏基因组中挖掘新型生物催化剂一直倍受生物学家的关注。以下主要对宏基因组文库的样品来源、DNA提取方法、文库的构建和筛选策略的选择这4个方面的研究状况进行了综述,列举了近年来利用宏基因组技术所获得的新型生物催化剂,并对其今后的研究方向提出了展望。 展开更多
关键词 宏基因组学 环境微生物 不可培养微生物 环境总DNA 文库构建 文库筛选
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