弯曲菌多重PCR检测方法的建立及其初步应用 被引量：50

1

作者 何蕊 黄金林 +3 位作者 许海燕 苏洁 潘志明 焦新安 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期5-8,共4页

以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯... 以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯曲菌检测限为10 mL或10 g模拟污染样品,最低可检测0.925 pg.μL-1空肠弯曲菌DNA和1.050 pg.μL-1结肠弯曲菌DNA。以国家标准为参照,应用该方法对180份生鲜鸡肉样品进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可克服传统生化鉴定和血清学方法的不足,为弯曲菌检测提供新的技术。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重PCR 快速检测

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扬州市区腹泻人群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况及耐药性分析 被引量：31

2

作者 许海燕 黄金林 +7 位作者 包广宇 高玉 张弓 苏洁 姜峰 潘志明 刘秀梵 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期58-62,共5页

目的了解扬州市区腹泻人群中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的感染流行和耐药性状况。方法采用多重PCR方法对扬州市区两所医院门诊部和住院部的腹泻人群进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌感染状况调查,采用琼脂扩散法测定分离株的耐药性。结果在2937... 目的了解扬州市区腹泻人群中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的感染流行和耐药性状况。方法采用多重PCR方法对扬州市区两所医院门诊部和住院部的腹泻人群进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌感染状况调查,采用琼脂扩散法测定分离株的耐药性。结果在2937份粪便样品中,142份空肠弯曲菌阳性、平均阳性率4.83%,10份结肠弯曲菌阳性、平均阳性率0.34%。不同医院间感染率差异不显著(P>0.05),门诊部感染率极显著高于住院部(P<0.01),7岁以下幼儿感染率极显著高于其它人群(P<0.01),6月-8月感染率显著高于其它月份(P<0.05)。93株空肠弯曲菌分离株对21种抗生素高度敏感的是:庆大霉素91.40%、阿齐红霉素89.25%、红霉素88.46%、阿莫西林87.10%、链霉素83.87%、头孢噻肟81.72%、卡那霉素81.72%,高度耐药的是:头孢哌酮100%、复方新诺明100%、头孢拉定97.85%、头孢克罗93.55%、环丙沙星91.40%、萘啶酸91.40%、左旋氧氟沙星88.17%、土霉素87.50%。耐药菌株耐药谱主要集中在9耐至14耐,达81.71%,两医院分离株多重耐药性无显著性差异(P>0.05),不同诊区分离菌多重耐药性存在显著性差异(P<0.05)。结论扬州市区腹泻人群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行及耐药状况呈现多样化和复杂化,研究结果为正确评价腹泻人群弯曲菌的流行状况和制定切实可行的防控措施提供了科学依据。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重PCR 腹泻 耐药性

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空肠弯曲菌多重聚合酶链反应基因鉴定及其毒力相关基因分析 被引量：24

3

作者 张茂俊 顾一心 +1 位作者 冉陆 张建中 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期377-380,共4页

目的建立空肠弯曲菌、结肠弯曲菌多重聚合酶链反应（m-PCR）鉴定方法,并对菌株毒力相关基因cadF、virB11、flaA、cdtA、cdtB、cdtC的分布进行初步分析。方法利用m-PCR的方法对经过传统生物化学方法鉴定的65株弯曲菌进行鉴定,并通过空肠... 目的建立空肠弯曲菌、结肠弯曲菌多重聚合酶链反应（m-PCR）鉴定方法,并对菌株毒力相关基因cadF、virB11、flaA、cdtA、cdtB、cdtC的分布进行初步分析。方法利用m-PCR的方法对经过传统生物化学方法鉴定的65株弯曲菌进行鉴定,并通过空肠弯曲菌特异基因hipO、结肠弯曲菌glyA基因特异片段的PCR扩增对鉴定的结果进一步验证;利用特异引物PCR方法初步分析其毒力、毒素相关基因cadF、virB11、flaA、cdtA、cdtB和cdtC的分布。结果m-PCR扩增结果发现65株不同来源的弯曲菌,42株为空肠弯曲菌,23株为结肠弯曲菌。hipO、glyA基因PCR扩增结果与m-PCR扩增结果一致。16．9%菌株PCR鉴定结果与传统的生物化学鉴定结果不一致。100%（65/ 65）菌株cadF、flaA基因阳性,并且PCR扩增片段大小一致。virB的阳性率为10．8%（7/65）,其中空肠弯曲菌阳性率11．9%（5/42）,结肠弯曲菌阳性率为8．7%（2/23）。空肠弯曲菌、结肠弯曲菌cdtA的阳性率分别为100%（42/42）和78%（18/23）;空肠弯曲菌cdtB扩增的的阳性率为97．6%（41/42）。而23株结肠弯曲菌扩增结果均为阴性;空肠弯曲菌、结肠弯曲菌cdtC的阳性率皆为100%,但PCR扩增产物大小不一致,空肠弯曲菌为555 bp,结肠弯曲菌约为465 bp。结论m-PCR的方法可以有效的对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌进行属内分型。中国菌株细胞溶涨毒素基因簇cdt基因的特征与文献报道国外菌株存在差异。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重聚合酶链反应 毒力 毒素相关基因

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江苏奶牛空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况及耐药性分析 被引量：17

4

作者 黄金林 许海燕 +5 位作者 张弓 苏洁 潘志明 姜峰 刘秀梵 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1016-1020,共5页

目的了解江苏省奶牛空肠、结肠弯曲菌流行及耐药状况。方法采用多重PCR方法对10个奶牛场的产奶牛、育成牛和饲养环境进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况调查,采用琼脂扩散法测定分离株的耐药性。结果1531份样品中,119份空肠弯曲菌阳性... 目的了解江苏省奶牛空肠、结肠弯曲菌流行及耐药状况。方法采用多重PCR方法对10个奶牛场的产奶牛、育成牛和饲养环境进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行状况调查,采用琼脂扩散法测定分离株的耐药性。结果1531份样品中,119份空肠弯曲菌阳性,平均阳性率7.77%;3份结肠弯曲菌阳性,平均阳性率0.20%;空肠弯曲菌、结肠弯曲菌阳性率最高分别为30.91%、3.57%。在三类样品中,产奶牛空肠弯曲菌、结肠弯曲菌阳性率分别为5.02%、0.32%,育成牛空肠弯曲菌阳性率为8.70%、未检出结肠弯曲菌,环境样品空肠弯曲菌、结肠弯曲菌阳性率为10.28%、0.18%。35株奶牛空肠弯曲菌分离株对8大类21种抗生素高度敏感率的是:阿莫西林100%、阿齐红霉100%、链霉素97.14%、庆大霉素94.29%、红霉素91.43%、头孢噻肟82.86%、克林霉素82.86%;高度耐药率的是:头孢哌酮100%、恩诺沙星100%、环丙沙星97.14%、复方新诺明97.14%、左旋氧氟沙星94.29%、萘啶酸94.29%、头孢拉定94.29%、诺氟沙星91.43%、头孢克罗88.57%。菌株耐药谱显示,35株分离株的耐药主要集中在9耐到12耐,占88.57%,产奶牛分离株的多重耐药性较其它分离株更严重。结论我国奶牛群中空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的流行和耐药状况呈现多样化和复杂化,研究结果为正确评价我国奶牛群弯曲菌的流行状况和制定切实可行的防控措施提供科学依据。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重PCR 流行病学分析 耐药试验

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部分省市鸡群空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的流行状况分析 被引量：19

5

作者 黄金林 许海燕 +7 位作者 郑国军 刘佩红 苏洁 姜峰 潘志明 张弓 刘秀梵 焦新安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期72-75,共4页

本研究采用多重PCR方法对我国部分省市不同品种、不同类型的鸡群进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行病学调查。结果发现,在3132份鸡肛门棉拭样品中,检测出583份空肠弯曲菌阳性样品,平均阳性率18.61%;48份结肠弯曲菌阳性,平均阳性率1.53%。... 本研究采用多重PCR方法对我国部分省市不同品种、不同类型的鸡群进行空肠弯曲菌和结肠弯曲菌流行病学调查。结果发现,在3132份鸡肛门棉拭样品中,检测出583份空肠弯曲菌阳性样品,平均阳性率18.61%;48份结肠弯曲菌阳性,平均阳性率1.53%。鸡饲养环境样品217份,6份空肠弯曲菌阳性,阳性率2.76%。不同鸡群感染率悬殊较大,空肠弯曲菌阳性率从0%～73.3%、结肠弯曲菌阳性率从0%～7.4%。30个鸡群中空肠弯曲菌阳性率为86.67%,结肠弯曲菌阳性率43.33%。本调查结果表明我国鸡群中空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的流行呈现多样化。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重PCR 流行病学分析

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肉鸡源多重耐药空肠、结肠弯曲菌的耐药分子特征 被引量：13

6

作者 胡欣洁 韩新锋 +6 位作者 朱冬梅 赖海梅 罗佩文 曾杭 周康 邹立扣 刘书亮 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期694-699,共6页

目的了解肉鸡源空肠和结肠弯曲菌的耐药谱特征,检测多重耐药菌株Ⅰ类整合子/基因盒、gyrA基因突变位点、tetO基因、23SrRNA突变位点的分子特征。方法利用PCR检测弯曲菌Ⅰ类整合子/基因盒的存在情况;利用MAMA PCR技术检测弯曲菌gyrA基因... 目的了解肉鸡源空肠和结肠弯曲菌的耐药谱特征,检测多重耐药菌株Ⅰ类整合子/基因盒、gyrA基因突变位点、tetO基因、23SrRNA突变位点的分子特征。方法利用PCR检测弯曲菌Ⅰ类整合子/基因盒的存在情况;利用MAMA PCR技术检测弯曲菌gyrA基因第257位碱基的突变情况;针对弯曲菌23SrRNA的V区2075突变位点检测突变菌株。结果多重耐药菌株占分离株的94.5%。146株多重耐药空肠和结肠弯曲菌中Ⅰ类整合子检出率为98.6%,有78株菌株检出3种基因盒,1 000bp+750bp+500bp+250bp为主要谱型,所占比例为92.3%;有131株在gyrA喹诺酮类耐药决定区发生突变,突变率为92.9%。127株四环素耐药弯曲菌tetO基因的检出率为95.3%。81株红霉素耐药菌株中,23SrRNA的V区2075处突变发生率为96.3%。结论空肠和结肠弯曲菌分离株携带aadA2耐药基因盒,与氨基糖苷类药物的耐药性相关;gyrA基因突变、tetO基因的携带以及23SrRNA突变,与弯曲菌对喹诺酮、四环素和大环内酯类耐药密切相关。 展开更多

关键词 肉鸡 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 耐药基因 整合子 基因盒

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上海市浦东新区弯曲菌流行状况及耐药性分析 被引量：10

7

作者 黄红 王闻卿 +3 位作者 傅惠琴 苏靖华 张勇琪 赵冰 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第13期1961-1963,共3页

目的了解上海市浦东新区腹泻人群中弯曲菌感染流行状况和耐药性情况,为正确评价腹泻病人中弯曲菌的流行和制定切实可行的预防措施提供依据。方法采用改良培养分离方法对2011年6月-2012年5月间浦东新区13家监测点医院感染性腹泻人群进行... 目的了解上海市浦东新区腹泻人群中弯曲菌感染流行状况和耐药性情况,为正确评价腹泻病人中弯曲菌的流行和制定切实可行的预防措施提供依据。方法采用改良培养分离方法对2011年6月-2012年5月间浦东新区13家监测点医院感染性腹泻人群进行进行弯曲菌监测。结果在2 532份标本中,共分离到弯曲菌127株,其中空肠弯曲菌106株,阳性率4.19%;结肠弯曲菌21株,阳性率0.83%;中心城区感染率高于郊区,春秋季感染显著高于夏季(χ2=12.17,P<0.01)。106株空肠弯曲菌分离株对14种抗生素高度敏感的是阿奇霉素91.04%,红霉素86.57%;高度耐药的是:头孢西丁98.51%,奈啶酸97.76%,复方新诺明96.27%,头孢呋辛92.54%,诺氟沙星91.79%。结论浦东新区腹泻病人中弯曲菌成为腹泻病原谱的主要病原,耐药性相当严重。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 腹泻 抗生素耐药

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Fla-DGGE法对食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检测和分型 被引量：10

8

作者 毕水莲 陈妙瑞 +1 位作者 张志刚 石磊 《现代食品科技》 EI CAS 2010年第10期1148-1152,共5页

本文应用鞭毛蛋白基因flaA和flaB的变性梯度凝胶电脉(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)方法对食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌进行检测和分型。采用RBB(rpeated bead beating)、CTAB和丙酮-氯仿抽提三种方法提取样品基因组... 本文应用鞭毛蛋白基因flaA和flaB的变性梯度凝胶电脉(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)方法对食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌进行检测和分型。采用RBB(rpeated bead beating)、CTAB和丙酮-氯仿抽提三种方法提取样品基因组后进行fla-DGGE检测,结果完全一致。10份生鲜鸡、鸭肉样品中有8份含有空肠弯曲菌或结肠弯曲菌,其中3份含有两种或两种以上的空肠弯曲菌或结肠弯曲菌或它们的不同型别。克隆测序后结果表明,有7份样品被同一种空肠弯曲菌所污染,其中3份样品还被同一种结肠弯曲菌所污染,1份样品被污染情况严重,检测到含有一种结肠弯曲菌和三种空肠弯曲菌。Fla-DGGE方法快速、准确、灵敏度高,可用于食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测和分型。 展开更多

关键词 Fla-DGGE 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 检测 分型

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2017-2018年山东省青岛地区畜禽源弯曲菌耐药性调查 被引量：9

9

作者 刘晓 李星 +3 位作者 翟卫帅 沈张奇 汪洋 刘德俊 《疾病监测》 CAS 2020年第1期29-33,共5页

目的调查2017—2018年山东省青岛地区畜禽源弯曲菌的流行与耐药现状。方法2017—2018年,从青岛地区的猪/鸡养殖场、屠宰场、农贸超市等场所采集畜禽泄殖腔(肛门)、盲肠、肉等样本,分离弯曲菌,对分离株进行种属鉴定和药敏试验,运用PCR方... 目的调查2017—2018年山东省青岛地区畜禽源弯曲菌的流行与耐药现状。方法2017—2018年,从青岛地区的猪/鸡养殖场、屠宰场、农贸超市等场所采集畜禽泄殖腔(肛门)、盲肠、肉等样本,分离弯曲菌,对分离株进行种属鉴定和药敏试验,运用PCR方法检测大环内酯类基因erm(B)与增强型耐药外排泵基因RE-cmeABC。结果共采集畜禽源样本730份,分离到235株(34.66%)弯曲菌,包括空肠弯曲菌131株(55.74%)、结肠弯曲菌104株(44.26%)。其中鸡源菌株147株,分离率为29.40%(147/500);鸭源菌株80株,分离率为47.06%(80/170);猪源菌株8株,分离率为13.33%(8/60)。药敏试验结果显示,结肠弯曲菌对环丙沙星、四环素、卡那霉素、红霉素、庆大霉素、克林霉素和氟苯尼考的耐药性较为严重,耐药率分别为100.00%、99.04%、96.15%、92.31%、92.31%、87.50%、53.85%。空肠弯曲菌对四环素、环丙沙星、卡那霉素和氟苯尼考的药性较为严重,耐药率分别为100.00%、98.47%、70.99%、61.83%。PCR方法检测到12株(5.11%)erm(B)基因阳性菌株,125株(53.19%)REcmeABC基因阳性菌株。结论本研究提示应持续监测青岛地区畜禽源弯曲菌的耐药现状与耐药机制,为控制耐药弯曲菌的流行提供理论基础。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 耐药性

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空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检验方法团体标准解读 被引量：9

10

作者 张茂俊 顾一心 +6 位作者 李颖 鞠长燕 周贵兰 郭云昌 遇晓杰 段永祥 张建中 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1052-1054,共3页

空肠弯曲菌和结肠弯曲菌是重要的食源性病原菌,是导致人类弯曲菌病的重要菌种。病原菌的培养、鉴定是食品污染以及人和动物感染诊断的"金标准"。中国CDC传染病预防控制所和国家食品安全风险评估中心等单位撰写了《空肠弯曲菌... 空肠弯曲菌和结肠弯曲菌是重要的食源性病原菌,是导致人类弯曲菌病的重要菌种。病原菌的培养、鉴定是食品污染以及人和动物感染诊断的"金标准"。中国CDC传染病预防控制所和国家食品安全风险评估中心等单位撰写了《空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检验方法(T/CPMA 006-2019)》团体标准。标准以"科学性、规范性、适用性和可行性"为基本原则,提出从不同种类的标本、样品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的分离培养以及鉴定的方法,用于指导和规范我国不同种类的标本以及样本中两种弯曲菌的检测过程、检测步骤和鉴定方法,提高空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的检测水平。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 分离 鉴定

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多重PCR-变性高效液相色谱检测食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌 被引量：6

11

作者 徐君怡 曹际娟 +2 位作者 郑秋月 裴轶君 于珂 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期207-212,共6页

本研究应用多重PCR反应(mPCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测方法。以编码嗜热弯曲菌属的16S rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码结肠弯曲菌的cdt基因为靶基因,选择3对引物,建立并... 本研究应用多重PCR反应(mPCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测方法。以编码嗜热弯曲菌属的16S rRNA基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码结肠弯曲菌的cdt基因为靶基因,选择3对引物,建立并优化了鉴别空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的mPCR体系,扩增产物分别为287bp、159bp和173bp。采用22株细菌验证了该mPCR具有特异性。mPCR检测的灵敏度在DNA水平上达到空肠弯曲菌10pg/μL、结肠弯曲菌1pg/μL;在人工模拟污染样品起始污染浓度为1.5个/mL时,42℃微需氧条件下培养24h即可被检出。在随机采集的172份冷冻鸡肉类样品中,检出了18份样品为空肠弯曲菌阳性,7份样品为结肠弯曲菌阳性。本研究建立的mPCR-DHPLC方法可特异、灵敏地实现对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 多重PCR 变性高效液相色谱

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空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌双重PCR鉴别检测方法的建立 被引量：7

12

作者 孙久鹤 郭东春 +5 位作者 李安 刘家森 刘春国 刘大飞 侯振中 曲连东 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期64-68,共5页

为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipO和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆... 为快速检测和鉴定空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌,本研究设计并合成了空肠弯曲杆菌马尿酸酶基因hipO和结肠弯曲杆菌cdtC基因的2对特异性引物,建立并优化了快速检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌的双重PCR方法。结果显示,双重PCR对空肠弯曲杆菌hipO基因和结肠弯曲杆菌cdtC基因的扩增产物的大小分别为653bp和313bp。PCR扩增条件最终确定为退火温度为52℃,dNTP终浓度为0.4mmol/L,hipO和cdtC基因引物的终浓度均为2 5μmol/L。该双重PCR的灵敏度可达到6.6 8×1 0-2μg/mL,对多杀性巴氏杆菌、产单核细胞李氏杆菌、产气荚膜梭菌、伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌扩增均无目的条带,说明该PCR方法具有良好的灵敏性和特异性。符合试验结果与单一PCR方法结果相同。用所建立的方法对本实验室采集的鸡肛拭子划线培养后的可疑菌落进行PCR鉴定,结果显示2株为空肠弯曲杆菌,2株为结肠弯曲杆菌。结果表明,本研究建立的双重PCR可以用于同时检测空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。 展开更多

关键词 空肠弯曲杆菌 结肠弯曲杆菌 双重PCR hipO基因 cdtC基因

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结肠弯曲菌Real-time PCR检测方法的建立 被引量：8

13

作者 乔博 许学斌 +5 位作者 顾一心 刘国栋 赵飞 何利华 张建中 张茂俊 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2012年第10期969-972,共4页

目的建立结肠弯曲菌实时PCR检测方法并评价该方法的可行性。方法BLAST与Vector NTI Suite 6.0筛选出结肠弯曲菌的特异基因ceuE作为检测靶基因,Primer 5.0和Oligo6.0设计引物和探针,优化实时PCR反应体系并评价其最低检测限、特异性、可... 目的建立结肠弯曲菌实时PCR检测方法并评价该方法的可行性。方法BLAST与Vector NTI Suite 6.0筛选出结肠弯曲菌的特异基因ceuE作为检测靶基因,Primer 5.0和Oligo6.0设计引物和探针,优化实时PCR反应体系并评价其最低检测限、特异性、可重复性。结果与结论在结肠弯曲菌的ceuE特异基因上设计引物和探针,经优化了的实时PCR反应体系最低检测限为5.62CFU,特异度为100%,变异系数为0.15%～1.30%,本研究为结肠弯曲菌的快速检测提供了一种参考方法。 展开更多

关键词 结肠弯曲菌 实时PCR ceuE

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4种弯曲菌国家标准株实验室评价及应用分析

14

作者 王海瑞 顾一心 +3 位作者 陈晓丽 周贵兰 张鑫 张茂俊 《疾病监测》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1439-1445,共7页

目的依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022),对空肠弯曲菌、结肠弯曲菌、乌普萨拉弯曲菌和红嘴鸭(海鸥)弯曲菌4个菌种标准菌株病原特征进行实验室验证,评价应用标准菌株作为参比菌株进行弯曲菌检验标准实... 目的依据《病原微生物菌(毒)种国家标准株评价技术标准》(WS/T 812—2022),对空肠弯曲菌、结肠弯曲菌、乌普萨拉弯曲菌和红嘴鸭(海鸥)弯曲菌4个菌种标准菌株病原特征进行实验室验证,评价应用标准菌株作为参比菌株进行弯曲菌检验标准实验室检测的可行性。方法通过形态观察、生化试验及细菌动力学试验等方法获得标准菌株的菌落特点、形态特征、重要生化表型特征及运动特点;通过基因组测序获得菌株基因组水平遗传特征;通过琼脂扩散法和E-test法检测标准菌株的抗生素敏感性特征;通过空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检验标准进行标准菌株作为参比菌种的应用评价。结果标准菌株空肠弯曲菌NPRC(S)01.13897、结肠弯曲菌NPRC(S)01.13898、乌普萨拉弯曲菌NPRC(S)01.13899和红嘴鸭弯曲菌NPRC(S)01.13900均符合弯曲菌对应菌种的病原特征,可以作为弯曲菌检验的参比菌株。结论本研究中的标准菌株具有相应菌种的病原特征,可作为弯曲菌检测及菌种鉴定的参比菌株。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 乌普萨拉弯曲菌 红嘴鸭弯曲菌 标准菌株 实验室评价

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动物源弯曲菌分离纯化鉴定方法优化 被引量：6

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作者 韩镌竹 杨文腰 +1 位作者 李欣南 高铎 《食品安全质量检测学报》 CAS 2020年第24期9354-9360,共7页

目的优化动物源弯曲菌分离纯化鉴定方法。方法采集新鲜样品,选择不同增菌方式获得菌悬液;通过CCDA、弯曲菌显色培养和Skirrow方法分离弯曲菌;生化分析和分子生物学鉴定弯曲菌。与国标方法相比较,评价该法的灵敏度。结果适合于鸡盲肠和... 目的优化动物源弯曲菌分离纯化鉴定方法。方法采集新鲜样品,选择不同增菌方式获得菌悬液;通过CCDA、弯曲菌显色培养和Skirrow方法分离弯曲菌;生化分析和分子生物学鉴定弯曲菌。与国标方法相比较,评价该法的灵敏度。结果适合于鸡盲肠和动物粪便中弯曲菌的分离纯化鉴定流程为CCDA选择性分离、弯曲菌显色培养基纯化、哥伦比亚血琼脂进行扩增及分子学方法鉴定。使用优化后的方法对东北地区部分鸡屠宰场盲肠样品进行分离,共采集样品200批次,分离鉴定获得空肠弯曲菌共计110株,分离率为55%。结论建立了一套动物源弯曲菌分离纯化鉴定的方法。该方法简单、能有效提高弯曲菌的分离率,解决了弯曲菌分离难,鉴定难,保存难等问题,弥补了国标中的不足,适合于普遍应用及推广。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 分离纯化 鉴定

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鸡源结肠弯曲菌耐药性分析 被引量：7

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作者 唐梦君 周倩 +8 位作者 张小燕 张静 陈大伟 顾荣 万玉 杨星星 赵敏 周生 高玉时 《动物医学进展》 北大核心 2017年第9期18-22,共5页

为了解江苏省鸡源结肠弯曲菌的流行情况和药物敏感性,对江苏省不同规模化养鸡场、农贸市场和超市的鸡泄殖腔样品和鸡肉产品进行结肠弯曲菌的分离及PCR鉴定;采用纸片扩散法测定分离株对17种抗菌药物的敏感性。结果显示,从750份样品(禽肉... 为了解江苏省鸡源结肠弯曲菌的流行情况和药物敏感性,对江苏省不同规模化养鸡场、农贸市场和超市的鸡泄殖腔样品和鸡肉产品进行结肠弯曲菌的分离及PCR鉴定;采用纸片扩散法测定分离株对17种抗菌药物的敏感性。结果显示,从750份样品(禽肉产品和泄殖腔棉拭子)中分离到81株结肠弯曲菌,分离率为10.8%。耐药性试验结果显示,80%以上菌株对头孢曲松、妥布霉素、诺氟沙星、环丙沙星、林可霉素和甲氧苄氨嘧啶耐药,其中甲氧苄氨嘧啶耐药率达99%,对美罗培南和氟苯尼考保持高度敏感。所有测试菌株出现多重耐药,优势耐药谱为LIN/CRO/CN/T/NOR/CIP。调查结果为结肠弯曲菌防控提供参考依据。 展开更多

关键词 鸡 结肠弯曲菌 耐药性 耐药谱

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鸭源弯曲菌的分离鉴定及其耐药性、毒力基因分析 被引量：7

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作者 曾杭 彭峻烽 +7 位作者 黄静 严唯玮 陈朋 周康 邹立扣 黄勇 韩新锋 刘书亮 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期15-21,共7页

目的了解鸭肉生产链中弯曲菌的污染情况及其耐药性和毒力基因分布情况。方法根据GB 4789.9-2014,从肉鸭屠宰链中分离疑似弯曲菌,采用三重PCR方法,对疑似菌株进行准确鉴定;采用微量肉汤稀释法,对弯曲菌分离菌株进行8种抗菌药物敏感性试验... 目的了解鸭肉生产链中弯曲菌的污染情况及其耐药性和毒力基因分布情况。方法根据GB 4789.9-2014,从肉鸭屠宰链中分离疑似弯曲菌,采用三重PCR方法,对疑似菌株进行准确鉴定;采用微量肉汤稀释法,对弯曲菌分离菌株进行8种抗菌药物敏感性试验,参考NARMS标准判定药敏试验结果;利用PCR检测与弯曲菌致病相关的4个毒力基因。结果根据形态特征、生化指标及PCR鉴定结果,从489份样品中,鉴定出空肠弯曲菌100株、结肠弯曲菌79株,其他弯曲菌8株,弯曲菌的总体分离率为38.24%,肉鸭屠宰前、脱毛环节、掏膛环节、屠宰后样品弯曲菌分离率分别为76.33%、5.62%、24.00%、0%;药敏试验结果表明弯曲菌对TET(95.72%)、CLI(90.91%)的耐药率较高,对AZI(63.64%)耐药率居中,对CIP(31.02%)、GEN(34.76%)、NAL(37.43%)、ERY(41.18%)、CHL(41.18%)的耐药率相对较低,所分离菌株多重耐药现象较为普遍,多重耐药率达72.19%。弯曲菌分离株对黏附相关基因cadF、鞭毛基因flaA、侵袭蛋白基因iamA、毒素调节基因cdtB的携带率分别为100%、80.75%、71.12%、94.65%。结论肉鸭屠宰过程中存在不同程度的弯曲菌污染,且其耐药情况较为严重,毒力相关基因广泛存在于弯曲菌中,应该加强卫生管理和抗菌药物使用监督。 展开更多

关键词 肉鸭屠宰链 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 耐药性 毒力基因

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北京市昌平区腹泻患者弯曲菌感染现状及其分子特征分析 被引量：3

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作者 李东迅 王维钧 +3 位作者 彭华 银安琪 舒高林 牛桓彩 《公共卫生与预防医学》 2022年第6期123-127,共5页

目的了解北京市昌平区腹泻患者弯曲菌感染现状及其分子流行特征,为该地区弯曲菌腹泻病的预防控制提供科学依据。方法收集2019年北京市昌平区某哨点医院腹泻患者粪便样本382份,进行弯曲菌、沙门菌、致泻大肠埃希菌、副溶血性弧菌检测,并... 目的了解北京市昌平区腹泻患者弯曲菌感染现状及其分子流行特征,为该地区弯曲菌腹泻病的预防控制提供科学依据。方法收集2019年北京市昌平区某哨点医院腹泻患者粪便样本382份,进行弯曲菌、沙门菌、致泻大肠埃希菌、副溶血性弧菌检测,并对分离到的空肠弯曲菌进行脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)分析。结果382份样本中,弯曲菌(58株,15.18%)检出率高于致泻大肠埃希菌(37株,9.69%)、沙门菌(24株,6.28%)和副溶血性弧菌(21株,5.50%),差异有统计学意义(χ^(2)=26.735,P=0.000)。季节分析显示:弯曲菌春季(14.71%)、夏季(18.33%)、秋季(15.00%)、冬季(10.00%)四季均有检出,但其差异无统计学意义(χ^(2)=2.197,P=0.533)。PFGE分析显示:30株空肠弯曲菌具有26种PFGE带型,相似系数为31.00%~100.00%,其PFGE带型具有多样性。结论弯曲菌检出率居于首位,四季检出,提示昌平区弯曲菌感染较严重,应引起重视,并制定相应的方针政策,防止由弯曲菌感染引起的疫情发生。 展开更多

关键词 腹泻患者 弯曲菌 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 脉冲场凝胶电泳

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龙岩市5类食品中空肠和结肠弯曲菌监测 被引量：5

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作者 袁丹茅 金建潮 刘素意 《预防医学情报杂志》 CAS 2010年第3期182-184,共3页

目的了解龙岩市部分市售食品中空肠和结肠弯曲菌的污染状况。方法在龙岩市新罗区北市场和韭菜园市场采集市售生畜禽肉类、生牛奶、生食蔬菜、鸡蛋、水产品5大类共180份食品样品。按照WHO推荐并作为《全国食品污染物监测相关实验室操作手... 目的了解龙岩市部分市售食品中空肠和结肠弯曲菌的污染状况。方法在龙岩市新罗区北市场和韭菜园市场采集市售生畜禽肉类、生牛奶、生食蔬菜、鸡蛋、水产品5大类共180份食品样品。按照WHO推荐并作为《全国食品污染物监测相关实验室操作手册(食源性致病菌部分)》的弯曲菌检验方法,用加有生长促进剂和特定配方抗生素的布氏肉汤增菌,将增菌液划线接种至弯曲菌选择性琼脂CCDA平板,挑取可疑菌落转种在哥伦比亚血琼脂平板上纯化。纯化的可疑菌落做革兰染色镜检,湿片观察动力,同时做过氧化氢酶试验、氧化酶试验、马尿酸盐水解试验、吲哚乙酸酯试验等生化鉴定。结果检测5类180份食品,检出11株弯曲菌,检出率6.1%。其中生肉中检出10株,阳性率为为11.8%;水产品中检出1株,阳性率为3.3%。个别生肉MPN值达240 cfu/100 g。11株弯曲菌对1种抗生素的耐药性为54.5%,对2种抗生素的耐药性为36.4%,对3种抗生素的耐药性为18.2%。结论龙岩市生肉、水产品存在弯曲菌的污染。应加强禽畜养殖、屠宰、运输和加工过程的卫生管理,防止交叉污染,有效地预防和控制弯曲菌感染的暴发和流行。同时做好抗生素的管理和耐药性监测。 展开更多

关键词 弯曲杆菌 空肠 弯曲杆菌 结肠 食品污染 安全管理

原文传递

应用PCR技术检测空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的研究 被引量：3

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作者 王振国 刘金华 +5 位作者 罗雁菲 蔡阳 肖成蕊 刘和平 徐宝梁 王岸英 《中国家禽》 北大核心 2005年第z1期133-135,共3页

本研究根据空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的16s rRNA基因相同保守序列来设计引物, 建立了一种PCR检测方法,该方法具有较强的特异性及灵敏性,其对空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的最低检测限度为5 CFU/mL,它无需增菌培养过程可以直接对样品进行检验,... 本研究根据空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的16s rRNA基因相同保守序列来设计引物, 建立了一种PCR检测方法,该方法具有较强的特异性及灵敏性,其对空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的最低检测限度为5 CFU/mL,它无需增菌培养过程可以直接对样品进行检验,在对鸡肉样品空肠弯曲菌及结肠弯曲菌的检测中取得了较好的效果。 展开更多

关键词 空肠弯曲菌 结肠弯曲菌 检测 PCR技术

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