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杜梨叶绿体基因组密码子偏好性分析 被引量:32
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作者 辛雅萱 董章宏 +3 位作者 瞿绍宏 刘成 叶鹏 辛培尧 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期51-59,共9页
为了明确杜梨叶绿体基因组密码子的使用偏性,以杜梨叶绿体基因组中的37条蛋白质编码序列为研究对象,利用Codon W 1.4.2和在线软件CUSP等对其密码子进行了中性绘图分析、ENC-plot和PR2-plot分析。结果表明:(1)杜梨叶绿体基因组密码子不... 为了明确杜梨叶绿体基因组密码子的使用偏性,以杜梨叶绿体基因组中的37条蛋白质编码序列为研究对象,利用Codon W 1.4.2和在线软件CUSP等对其密码子进行了中性绘图分析、ENC-plot和PR2-plot分析。结果表明:(1)杜梨叶绿体基因组密码子不同位置GC碱基含量为:GC(148.45%)>GC2(40.76%)>GC(328.66%),说明密码子末位碱基偏好以A/U结尾;(2)有效密码子数(ENC)取值范围是33.13~52.73,表明密码子偏性较弱;(3)相对同义密码子(RSCU)分析表明,其值>1的密码子有30个,其中以A、U结尾的有29个;(4)GC3和GC12无显著相关,相关系数和回归系数分别为-0.1434和0.2072;ENC-plot中大部分基因分布于曲线周围和下方,ENC比值分布在-0.05~0.05区间的有14个,说明密码子偏性主要受选择的影响;PR2-plot分析中,T的使用频率高于A,G的使用频率高于C,说明密码子偏性受多重因素影响;(5)最终筛选出UUU、UAA、AUU等18个密码子为最优密码子,多以A或U结尾。综上所述,杜梨叶绿体基因组密码子的使用主要受选择影响,研究结果可为杜梨乃至梨属植物叶绿体基因组学的研究提供理论依据。 展开更多
关键词 杜梨 叶绿体基因组 密码子偏好性 最优密码子
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杜梨菌根苗几种培育方法的试验 被引量:19
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作者 刘润进 高秋莲 +2 位作者 生兆江 韩殿一 姜德峰 《莱阳农学院学报》 1990年第4期298-300,共3页
以萌芽期和4叶期杜梨实生苗接种VA菌根,用不同方法培育梨树菌根苗。结果表明,营养钵砂培较简便、快速,而且成本低;黑塑管半水培和苗床土培成本高和优质菌根苗产量少,且二者培育周期长。苗木菌根化后能显著促进植株生长(如株高、叶面积等... 以萌芽期和4叶期杜梨实生苗接种VA菌根,用不同方法培育梨树菌根苗。结果表明,营养钵砂培较简便、快速,而且成本低;黑塑管半水培和苗床土培成本高和优质菌根苗产量少,且二者培育周期长。苗木菌根化后能显著促进植株生长(如株高、叶面积等)并可在大田干旱条件下提高苗木的移栽成活率。 展开更多
关键词 杜梨 VA菌根 育苗法
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PEG预处理对老化杜梨种子活力的影响 被引量:20
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作者 王飞 丁勤 杨峰 《种子》 CSCD 北大核心 1999年第4期20-22,共3页
将经过48h,96h,144h,192h老化处理的杜梨种子,经过低温沙藏后晾干,用20%的PEG处理,时间分别为6,12,18小时,经培养后测定其生理生化指标及活力,结果表明,PEG处理可以提高各老化种子的活力,表现在渗漏减少,有害物质减少,SO... 将经过48h,96h,144h,192h老化处理的杜梨种子,经过低温沙藏后晾干,用20%的PEG处理,时间分别为6,12,18小时,经培养后测定其生理生化指标及活力,结果表明,PEG处理可以提高各老化种子的活力,表现在渗漏减少,有害物质减少,SOD活性提高。 展开更多
关键词 种子活力 聚乙二醇 杜梨 种子 人工老化
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杜梨组培生根过程中多胺、内源激素及相关氧化酶活性的变化 被引量:19
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作者 闫帅 张少瑜 +5 位作者 徐锴 袁继存 李晓光 周江涛 程存刚 赵德英 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期318-326,共9页
【目的】探究杜梨组培苗生根诱导过程中内源激素、多胺类物质及相关氧化酶活性变化的生理响应机制。【方法】以长势相近的杜梨继代苗为试材,筛选优化了生根培养基配方,分别在生根诱导0、3、7、10、15 d后,测定分析了基部茎段多胺类物质... 【目的】探究杜梨组培苗生根诱导过程中内源激素、多胺类物质及相关氧化酶活性变化的生理响应机制。【方法】以长势相近的杜梨继代苗为试材,筛选优化了生根培养基配方,分别在生根诱导0、3、7、10、15 d后,测定分析了基部茎段多胺类物质、内源激素含量及关联酶活性。【结果】(1)激素配比2.0 mg·L^(-1)IAA+0.5 mg·L^(-1)IBA的生根效果良好,IAA和IBA两种激素共同诱导杜梨生根效果要优于单一激素处理;(2)在生根诱导0~15 d内,精胺(Spm)和亚精胺(Spd)含量呈现下降→升高→下降→升高的变化趋势,腐胺(Put)含量则呈现出下降→上升的变化趋势;内源激素IAA、ABA含量均呈现先下降后升高的趋势,最低值出现在第7天,GA含量也呈现先下降后上升的变化趋势,最低值出现在第3天,ZR含量呈现出下降→升高→下降的变化趋势;两种关联酶IAAO和PPO酶活性均呈现增高→降低→增高的趋势(;3)Spd与IAA、ABA、IAA/ABA IAA/ZR及IAAO酶活性均存在极显著正相关关系(p <0.01),IAA与Spd、GA、ABA及IAA/ABA、IAA/ZR、PPO酶活性在α=0.01水平达到极显著正相关。【结论】杜梨较适宜的生根培养基为:1/2MS+2.0 mg·L^(-1)IAA+0.5 mg·L^(-1)IBA+7.5 g·L^(-1)琼脂+25.0 g·L^(-1)蔗糖;IAA/ABA、IAA/ZR比值增大更有利于杜梨不定根的发生;多胺类物质中Spd含量与杜梨不定根发生紧密相关;生根诱导后期,GA含量增加对杜梨不定根发生并无明显的抑制作用。 展开更多
关键词 杜梨 组织培养 多胺 内源激素 关联酶 相关性
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杜梨叶绿体基因组分析 被引量:19
5
作者 李泳潭 张军 +3 位作者 黄亚丽 范建敏 张益文 左力辉 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1021-1032,共12页
利用高通量测序平台对杜梨(Pyrus betulaefolia)进行测序,并对其叶绿体全基因组序列的结构特征进行分析。结果表明,杜梨叶绿体基因组与大多数高等植物一样,具有典型的环状双链四分体结构。其叶绿体基因组大小为160 058 bp,共检测到61个... 利用高通量测序平台对杜梨(Pyrus betulaefolia)进行测序,并对其叶绿体全基因组序列的结构特征进行分析。结果表明,杜梨叶绿体基因组与大多数高等植物一样,具有典型的环状双链四分体结构。其叶绿体基因组大小为160 058 bp,共检测到61个SSR位点(58个单核苷酸重复和3个二核苷酸重复)和56个RNA编辑位点,这些RNA编辑位点均引起了氨基酸的变化。与砂梨(Pyruspyrifolia)、川梨(Pyrus pashia)和桃叶梨(Pyrus spinosa)的叶绿体基因组比较,其基因种类和数量都比较保守,表明了梨属植物进化的缓慢性。在4个梨属植物中共检测到351个SNP和217个InDel。 展开更多
关键词 杜梨 叶绿体基因组 CP-SSR
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外源生长素对杜梨组培不定芽生根及相关氧化酶的影响 被引量:17
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作者 罗嘉亮 李凡 +1 位作者 郝瑞杰 李六林 《经济林研究》 北大核心 2020年第1期125-132,共8页
【目的】为了解生长素诱导杜梨不定根发生效应,明确不定根诱导过程与氧化酶活性间的关系,从而为杜梨等难生根植物的生根研究提供理论指导和技术借鉴。【方法】以连续继代培养的杜梨不定芽为材料,调查了不同种类(NAA、IBA和IAA)和浓度(0.... 【目的】为了解生长素诱导杜梨不定根发生效应,明确不定根诱导过程与氧化酶活性间的关系,从而为杜梨等难生根植物的生根研究提供理论指导和技术借鉴。【方法】以连续继代培养的杜梨不定芽为材料,调查了不同种类(NAA、IBA和IAA)和浓度(0.1、0.5、1.0、2.0 mg·L^(-1))的生长素对不定芽生根的影响情况,分别在生根诱导0、4、8、12、16 d后观察不定根发育的内外组织形态,测定并分析相关酶活性的变化情况。【结果】外源生长素均能促进不定芽不定根的发生,在相同种类的生长素处理下,浓度分别为0.1和2.0 mg·L^(-1)处理的各项生根指标均显著低于浓度分别为0.5和1.0 mg·L^(-1)处理的。以NAA诱导产生的愈伤组织较大且松软易脱落,不利于其后期的移栽成活;以IBA处理的生根率显著高于NAA和IAA处理的,其中以浓度为0.5 mg·L^(-1)的IBA处理的各项生根指标均最优。对其组织形态的观察结果表明,杜梨不定根发生类型属于诱生根原基,经IBA处理4 d后,其茎基部表皮颜色变红,内部根原基发生于韧皮部和维管束形成层交界处,诱导8 d后茎段外部出现了愈伤组织且组织内部根原基已形成,诱导12 d后不定根突破表皮向外生长。在杜梨不定芽生根过程中,SOD和PPO活性在诱导的0~4 d内均快速上升,在诱导的4~12 d内均下降,而在诱导的12~16 d内均呈现缓慢上升的变化趋势;IAAO活性总体呈现先下降后上升的趋势,且每个时期的活性均显著高于对照组;POD活性呈现出上升→下降→上升→下降的变化趋势,2个峰值分别出现在诱导4 和12 d之时。【结论】0.5 mg·L^(-1)的IBA可有效促进连续继代培养的杜梨不定芽的生根,其不定根的形成过程与氧化酶有密切的关系。 展开更多
关键词 杜梨 不定根 生长素 氧化酶
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杜梨组培苗两步生根技术体系优化 被引量:14
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作者 赵亚楠 张懿 +4 位作者 谭旭 王胜男 姜峰 李天忠 朱元娣 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期105-112,共8页
为解决杜梨组培苗生根率低和移栽成活率低的问题,本研究以杜梨组培苗为试材,通过不定根诱导、不定根生长培养和试管苗驯化移栽环节,筛选出最适杜梨组培苗生长的培养基配方和炼苗方式。结果表明:1)健壮组培苗在添加了1.0mg/L吲哚乙酸(IAA... 为解决杜梨组培苗生根率低和移栽成活率低的问题,本研究以杜梨组培苗为试材,通过不定根诱导、不定根生长培养和试管苗驯化移栽环节,筛选出最适杜梨组培苗生长的培养基配方和炼苗方式。结果表明:1)健壮组培苗在添加了1.0mg/L吲哚乙酸(IAA)和1.0mg/L萘乙酸(NAA)的NN_(69)(Nitsch&Nitsch Medium)培养基中暗培养7d后进行不定根诱导,再转接至无生长素类物质的相同培养基中光照培养,组培苗生根率达96%;2)生根组培苗闭瓶炼苗和水培炼苗3周后移栽,成活率均达90%以上。综上所述,前期"高浓度生长素和黑暗培养"和后期"无激素和光照培养"的"两步生根法"适宜杜梨组培苗的生根诱导。杜梨组培苗生根技术的优化,为杜梨无性系砧木的商业化生产提供了技术支持。 展开更多
关键词 杜梨 梨砧木 组织培养 不定根诱导 瓶内驯化
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AM真菌对盐碱胁迫下杜梨幼苗生长与生理代谢的影响 被引量:14
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作者 姜磊 李焕勇 +4 位作者 张芹 张会龙 乔艳辉 张华新 杨秀艳 《南京林业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期152-160,共9页
【目的】探究接种丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhizal fungi,AMF)对盐碱胁迫下杜梨幼苗生长与生理代谢及耐盐碱能力的影响,为杜梨菌根苗在盐碱地上植被构建中的应用提供理论依据。【方法】采用双因素试验设计,以1年生杜梨实生苗为材料... 【目的】探究接种丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhizal fungi,AMF)对盐碱胁迫下杜梨幼苗生长与生理代谢及耐盐碱能力的影响,为杜梨菌根苗在盐碱地上植被构建中的应用提供理论依据。【方法】采用双因素试验设计,以1年生杜梨实生苗为材料,将幼苗分为AMF(摩西管柄囊霉,Funneliformis mosseae)接种和未接种两组,以Na2CO3同时进行盐碱处理(浓度梯度为0、100、200和300 mmol/L),并测定其生长与生理性状。【结果】接种AMF提高了盐碱胁迫下杜梨幼苗的株高生长量(△H)以及生物量积累,与未接种幼苗相比,接种组幼苗的△H和生物量在盐碱胁迫下降低的幅度显著减小。丛枝菌根在一定程度上降低了Na^+在杜梨根和叶的积累,在3个Na2CO3浓度处理下,接种组幼苗根中Na^+的含量分别比未接种组低10.8%、21.6%和19.4%,从而提高了接种组幼苗根和叶中K^+/Na^+、Ca^2+/Na^+、Mg^2+/Na^+的比值以维持较好的离子平衡状态。接种AMF可以提高盐碱胁迫下杜梨幼苗叶的叶绿素含量,降低脯氨酸和丙二醛在叶中的积累,表明接种AMF可以减轻盐碱胁迫对杜梨造成的离子毒害与过氧化伤害。【结论】AMF直接影响盐碱胁迫下杜梨幼苗生理代谢,提高其光合色素含量,维持其体内离子相对平衡,减少活性氧伤害,从而提高了杜梨幼苗的耐盐碱能力,促进其在盐碱胁迫下的生长。 展开更多
关键词 盐碱胁迫 杜梨 丛枝菌根真菌 离子平衡 耐盐碱
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生长调节剂和青霉素对杜梨种子萌发和下胚轴生长的影响(简报) 被引量:12
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作者 马锋旺 张桂艳 池方 《植物生理学通讯》 CSCD 1995年第2期110-112,共3页
适当浓度的BA、GA、乙烯利和青霉素处理均可显著促进杜梨休眠种子的萌发,效果大小依次为BA、GA、青霉素、乙烯利。BA抑制下肢轴的加长生长而促进加粗生长。GA促进下胚轴的加长生长。适当浓度的乙烯利和青霉素对下肢轴加长生长和加粗生... 适当浓度的BA、GA、乙烯利和青霉素处理均可显著促进杜梨休眠种子的萌发,效果大小依次为BA、GA、青霉素、乙烯利。BA抑制下肢轴的加长生长而促进加粗生长。GA促进下胚轴的加长生长。适当浓度的乙烯利和青霉素对下肢轴加长生长和加粗生长均具促进作用。 展开更多
关键词 杜梨 种子 生长调节剂 青霉素 下胚轴生长 发芽
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丛枝菌根真菌对盐碱胁迫下杜梨幼苗生长和生理特性的影响 被引量:12
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作者 龚远博 胡吉怀 +2 位作者 胡丁猛 许景伟 王延平 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1320-1329,共10页
采用盆栽实验,设置梯度盐碱环境(0、1.5、3.0、4.5、6.0、7.5 g·kg^(-1)),接种根内根孢囊霉(Rhizophagus intraradices,Ri),对比分析杜梨幼苗苗高生长、叶片光合气体交换参数和叶绿素荧光参数及抗逆生理指标的变化,探讨在混合盐碱... 采用盆栽实验,设置梯度盐碱环境(0、1.5、3.0、4.5、6.0、7.5 g·kg^(-1)),接种根内根孢囊霉(Rhizophagus intraradices,Ri),对比分析杜梨幼苗苗高生长、叶片光合气体交换参数和叶绿素荧光参数及抗逆生理指标的变化,探讨在混合盐碱胁迫下接种菌根真菌对杜梨幼苗生长和抗逆性的影响,为盐碱地杜梨菌根化栽培提供理论依据。结果表明:(1)根内根孢囊霉能够与杜梨根系形成良好的共生,但在盐碱浓度6.0和7.5 g·kg^(-1)时侵染率分别下降为47.98%和32.97%。(2)盐碱胁迫条件下,接种Ri显著提高了杜梨苗高生长量和生物量,同时显著提高了杜梨叶片光合色素的含量和净光合速率;尤其在高盐碱程度(6.0 g·kg^(-1)、7.5 g·kg^(-1))下显著提高了气孔导度和胞间二氧化碳含量,有利于光化学淬灭系数提高和非光化学淬灭系数的降低,促进实际光化学效率提升。(3)接种Ri显著降低了杜梨幼苗叶片细胞膜透性和丙二醛的含量,显著增强了超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性,并提高了可溶性糖和可溶性蛋白含量。研究发现,接种根内根孢囊霉能显著增强杜梨在盐碱胁迫下的抗氧化酶活性和渗透调解能力,有效提升其生长量和光合效能,缓解盐碱胁迫对杜梨造成的损伤;实施杜梨幼苗菌根化可有效提升苗木在盐碱地的生长和抗逆性能,有利于其在盐碱地综合治理中发挥更大作用。 展开更多
关键词 杜梨 丛枝菌根真菌 盐碱胁迫 光合特性 生理特性
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杜梨CBL1和CBL7基因对非生物逆境的响应 被引量:11
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作者 韩金龙 李慧 +2 位作者 丛郁 常有宏 蔺经 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期529-535,共7页
【目的】克隆2个杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白(Calcineurin B-like protein,CBL)基因,并对其序列特征、表达特点及抗逆功能进行比较研究。【方法】采用电子克隆、RT-PCR和长片段PCR克隆了PbCBL1和PbCBL7的cDNA和DNA序列,利用生物信息学方... 【目的】克隆2个杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白(Calcineurin B-like protein,CBL)基因,并对其序列特征、表达特点及抗逆功能进行比较研究。【方法】采用电子克隆、RT-PCR和长片段PCR克隆了PbCBL1和PbCBL7的cDNA和DNA序列,利用生物信息学方法进行序列分析,半定量RT-PCR检测它们的表达特点,原核表达初步比较研究上述2个基因的抗逆功能。【结果】杜梨PbCBL1 cDNA编码区为642 bp,编码213个氨基酸,对应基因组DNA序列长2 969 bp;PbCBL7 cDNA编码区为639 bp,编码212个氨基酸,对应基因组DNA序列长1 788 bp;PbCBL1和PbCBL7均由8个外显子和7个内含子组成。PbCBL1和PbCBL7编码的多肽均具有植物类钙调磷酸酶B亚基蛋白结合Ca2+所必需的4个EF手型结构和1个典型的植物钙调磷酸酶A亚基结合位点。未经处理的杜梨幼苗(对照)根和叶中PbCBL1和PbCBL7的表达非常微弱,NaCl、PEG6000、甘露醇和ABA处理后,它们在根和叶中的表达均上调,且PbCBL1在叶片中的表达量显著增加。2个CBL基因分别转入大肠杆菌BL21(DE3)后,均能够明显减轻NaCl、甘露醇和PEG6000对菌株的生长抑制,而转PbCBL1菌株的抗逆效果较为明显。【结论】PbCBL1和PbCBL7基因具备植物CBLs基因家族的固有特征,对盐碱、干旱、渗透胁迫和ABA处理均存在转录响应,上述基因的转入能够提高大肠杆菌BL21(DE3)对盐胁迫和渗透胁迫的耐受能力,转PbCBL1菌株的抗逆功能强于转PbCBL7菌株。 展开更多
关键词 杜梨 CBL基因 序列特征 表达特点 功能比较
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杜梨叶片中氨基酸及矿质元素含量的测定 被引量:11
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作者 赵小亮 邓芳 +1 位作者 王金磊 龙淑梅 《塔里木大学学报》 2007年第2期57-59,共3页
采用氨基酸分析仪测定了杜梨叶片中18种氨基酸,原子吸收分光光度法测定了12种矿质元素。分析结果表明,杜梨叶片氨基酸含量丰富,含有人体必需的8种必需氨基酸,氨基酸总量达到了11.68%;微量元素铜、锰、铁等的含量丰富,分别达到了7.847μ... 采用氨基酸分析仪测定了杜梨叶片中18种氨基酸,原子吸收分光光度法测定了12种矿质元素。分析结果表明,杜梨叶片氨基酸含量丰富,含有人体必需的8种必需氨基酸,氨基酸总量达到了11.68%;微量元素铜、锰、铁等的含量丰富,分别达到了7.847μg/g、33.97μg/g、375.17μg/g。 展开更多
关键词 杜梨 叶片 氨基酸 矿质元素
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杜梨对盐碱胁迫的生理响应及耐盐碱性评价 被引量:10
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作者 霍宏亮 王超 +7 位作者 杨祥 曹玉芬 田路明 董星光 张莹 齐丹 徐家玉 刘超 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期480-492,共13页
为探究不同杜梨资源对盐碱胁迫的生理响应及筛选耐盐碱资源,以甘肃、山西、辽宁等地收集的17份杜梨资源3000余株幼苗为试验材料,采用中性盐和碱性盐混合胁迫处理,测定盐碱抗性相关的生理指标,基于主成分分析法、热图及聚类分析法和抗逆... 为探究不同杜梨资源对盐碱胁迫的生理响应及筛选耐盐碱资源,以甘肃、山西、辽宁等地收集的17份杜梨资源3000余株幼苗为试验材料,采用中性盐和碱性盐混合胁迫处理,测定盐碱抗性相关的生理指标,基于主成分分析法、热图及聚类分析法和抗逆系数法进行抗性评价。研究发现,抗性强的资源抗氧化酶活性和脯氨酸含量在受到胁迫后显著上升,300 mmol/L盐碱胁迫下超氧化物歧化酶活性显著上升的资源为河底杜梨3和平陆杜梨1,分别上升了75.04%、70.04%;过氧化物酶活性上升显著的资源为甘肃杜梨1和河底杜梨1,分别上升了1136.11%、742.86%;过氧化氢酶活性显著上升的资源为甘肃杜梨15、甘肃杜梨4,分别上升了344.58%、343.42%,脯氨酸含量显著上升的资源为平陆杜梨2、河底杜梨1、河底杜梨3,丙二醛含量上升较多的资源为甘肃杜梨16、甘肃杜梨13、甘肃杜梨1。除甘肃杜梨13在低浓度(100 mmol/L)盐碱胁迫即出现明显盐害现象外,其他杜梨资源均在300 mmol/L浓度处理下才开始出现不同程度的盐害;利用不同方法进行耐盐碱性分析结果存在一定的差异,其中基于主成分分析法发现河底杜梨1、河底杜梨3、平陆杜梨1、甘肃杜梨15、山西杜梨1耐盐碱性强;基于热图和聚类分析发现甘肃杜梨4、甘肃杜梨15、平陆杜梨1、河底杜梨1和河底杜梨3具有较强的耐盐碱性;而利用抗逆系数法分析耐盐碱性较强的资源为甘肃杜梨1、河底杜梨1、甘肃杜梨16、甘肃杜梨4、甘肃杜梨15。综合3种方法的分析结果,河底杜梨1和甘肃杜梨15属于高抗盐碱类型,而甘肃杜梨13则为盐碱敏感型资源。 展开更多
关键词 杜梨 盐碱胁迫 生理响应 综合评价
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杜梨PbNHX1基因的克隆、表达分析及功能验证 被引量:10
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作者 刘威 李慧 +2 位作者 蔺经 杨青松 常有宏 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期137-146,共10页
【目的】克隆1个杜梨Na^+/H^+逆向转运蛋白基因PbNHX1,并对其序列特征、表达特点及功能进行研究。【方法】采用RT-PCR和PCR克隆PbNHX1的c DNA和DNA序列,利用生物信息学方法进行序列分析,定量PCR检测其在非生物胁迫下转录水平变化,酵母... 【目的】克隆1个杜梨Na^+/H^+逆向转运蛋白基因PbNHX1,并对其序列特征、表达特点及功能进行研究。【方法】采用RT-PCR和PCR克隆PbNHX1的c DNA和DNA序列,利用生物信息学方法进行序列分析,定量PCR检测其在非生物胁迫下转录水平变化,酵母互补试验检测PbNHX1基因的离子转运能力。【结果】杜梨PbNHX1基因c DNA编码区长1 704 bp,对应基因组DNA序列长3 594 bp,由13个外显子和12个内含子组成,编码蛋白含567个氨基酸。系统进化树显示,PbNHX1位于液泡膜型Na^+/H^+逆向转运蛋白分支上,与杨树液泡膜型Na^+/H^+逆向转运蛋白Pt NHX1.3基因亲缘关系较近。正常生长条件下,PbNHX1在杜梨叶片中表达量高于根。施加200 mmol·L-1Na Cl、10%(φ)PEG6000或100μmol·L-1ABA后,PbNHX1在叶片中的转录水平持续上升;其在根中的表达量先升后降,表达高峰依次出现在处理后6、3和6 h。PbNHX1的转入可恢复Na Cl、KCl和潮霉素B对nhx1缺失酵母菌株AXT3的生长抑制,转基因酵母细胞中Na^+和K^+含量显著增加。【结论】PbNHX1具有植物NHXs基因家族的固有特征,对盐碱、渗透胁迫和ABA处理均存在转录响应,转入该基因能够提高酵母nhx1缺失突变体AXT3对盐胁迫的耐受能力,部分恢复其对阳离子的转运功能,从而促进Na^+、K^+积累。 展开更多
关键词 杜梨 PbNHX1基因 序列特征 表达特点 酵母互补
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盐胁迫条件下杜梨叶片差异表达基因qRT-PCR内参基因筛选 被引量:9
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作者 张秋悦 刘昌来 +2 位作者 于晓晶 杨甲定 封超年 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1557-1570,共14页
为了准确评价盐胁迫下杜梨(Pyrus betulaefolia Bunge.)目标基因表达量,筛选q RT-PCR适用内参基因。利用杜梨的全基因组注释信息和转录组测序数据,选择Actin2(Chr15.g01351)、EF1α-1(Chr3.g19898)、EF1α-2(Chr4.g38173)、EF2(Chr5.g06... 为了准确评价盐胁迫下杜梨(Pyrus betulaefolia Bunge.)目标基因表达量,筛选q RT-PCR适用内参基因。利用杜梨的全基因组注释信息和转录组测序数据,选择Actin2(Chr15.g01351)、EF1α-1(Chr3.g19898)、EF1α-2(Chr4.g38173)、EF2(Chr5.g06899)、GAPDH-1(Chr16.g30426)、GAPDH-2(Chr13.g23532)、TUBB(Chr5.g06472)、UBQ(Chr4.g40121)等8个候选基因,设计Actin2、EF1α-1、EF1α-2A、EF1α-2B、EF2、GAPDH-1、GAPDH-2、TUBB-A、TUBB-B、UBQE等10对qRT-PCR引物。首先对10对引物的扩增效率进行了测定,再以200 mmol·L^(-1)的NaCl溶液对两个杜梨家系(盐城和连云港)幼苗进行0、24、48、72 h盐胁迫处理。提取叶片的总RNA,反转录合成cDNA,使用10对引物进行q RT-PCR扩增,根据扩增产物使用delta Ct、BestKeeper、geNorm和NormFinder等4种评价内参基因稳定性的方法,对10对引物扩增产物的稳定性进行分析,并使用RefFinder软件对4种评价方法进行综合分析,以确定最稳定内参基因及其引物。利用筛选出的2对最优内参基因引物对(TUBB-A和GAPDH-1)对1个可能参与杜梨盐胁迫响应的HKT基因(Chr16.g29024)的表达情况进行分析,8个候选内参基因的FPKM值(Fragments PerKilobase Million)都大于30,不同盐处理时间下的FPKM变异系数为0.087~0.260;10对荧光定量PCR引物的扩增效率在91.82%~112.99%之间,其中引物对TUBB-A和GAPDH-1的扩增效率最接近于100%;稳定性分析显示10对引物扩增产物的稳定性排序为GΑPDH-1、TUBB-Α、EF1α-1、TUBB-B、EF1α-2Α、EF2、UBQE、GΑPDH-2、Αctin2、EF1α-2B;不同引物对(TUBB-Α、TUBB-B和EF1α-2Α、EF1α-2B)对同一基因的扩增产物的稳定性存在明显差异;利用TUBB-A和GAPDH-1分析HKT基因的表达趋势没有差别。说明基因GΑPDH和TUBB适于作为杜梨盐胁迫下进行荧光定量PCR的内参基因,对应的GAPDH-1、TUBB-A引物对的扩增效果最好。 展开更多
关键词 杜梨 内参基因 实时荧光定量PCR分析 基因表达稳定性
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应用正交设计对组培杜梨快速繁殖的研究 被引量:9
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作者 李丹丹 王忆 +3 位作者 韩振海 许雪峰 孔瑾 李天忠 《北方园艺》 CAS 北大核心 2009年第1期47-48,共2页
以杜梨试管苗为材料,应用正交试验法研究不同植物激素及其配比对试管苗生长与增殖生长的影响。结果表明:适合杜梨试管苗生长阶段的培养基为MS培养基+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.1 mg/L;适合杜梨增殖生长的培养基为MS培养基+6-BA 1.... 以杜梨试管苗为材料,应用正交试验法研究不同植物激素及其配比对试管苗生长与增殖生长的影响。结果表明:适合杜梨试管苗生长阶段的培养基为MS培养基+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.1 mg/L+GA30.1 mg/L;适合杜梨增殖生长的培养基为MS培养基+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.6 mg/L+GA30.6 mg/L。 展开更多
关键词 杜梨 组织培养 激素
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杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白PbCBL10基因的克隆和表达特性研究 被引量:9
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作者 李慧 丛郁 +2 位作者 常有宏 蔺经 盛宝龙 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期550-556,共7页
【目的】为了探明杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CalcineurinB—likeprotein,CBL)基因的序列特征和表达特点,【方法】以杜梨幼苗为试材,运用同源克隆和半定量RT—PCR对PbCBLIO基因进行克隆和表达分析。【结果】结果表明.PbCBLIO基因... 【目的】为了探明杜梨类钙调磷酸酶B亚基蛋白(CalcineurinB—likeprotein,CBL)基因的序列特征和表达特点,【方法】以杜梨幼苗为试材,运用同源克隆和半定量RT—PCR对PbCBLIO基因进行克隆和表达分析。【结果】结果表明.PbCBLIO基因编码区cDNA长度为801bp,编码的多肽由266个氨基酸组成。该多肽预测的等电点为4.56,估计的相对分子质量为30.45ku。其对应基因组DNA序列长1983bp,包括9个外显子和8个内含子。通过PSORT进行亚细胞定位分析发现PbCBLl0蛋白位于质膜上的几率最大。PbCBLIO基因编码的多肽具有4个钙离子结合域EF手形结构和1个钙调磷酸酶A亚基结合位点。PbCBLl0与番茄S1CBLIO(NP_001239045)和拟南芥AtCBLl0(NP_195026)蛋白间的同源性较高,分别为82%和77%,并与AtCBL10亲缘关系最近。PbCBL10基因在杜梨幼苗根、茎和叶片中均为诱导型表达,50~200mmol·L^(-1)CaCl2、20μmol·L^(-1)ABA、100mmol·L^(-1)NaCl、10%(w/v)PEG6000或180mmol·L^(-1)甘露醇处理后其表达量明显上调。【结论】PbCBLIO基因具备植物CBL基因家族的固有特征,能够响应胞内钙浓度变化,对ABA、盐碱、干旱和渗透胁迫均存在转录响应。 展开更多
关键词 杜梨 类钙调磷酸酶B亚基蛋白 基因克隆 表达特性
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杜梨2个MYB转录因子基因的克隆及序列分析 被引量:9
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作者 冉昆 王少敏 +3 位作者 董放 魏树伟 张勇 王宏伟 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第S1期52-58,共7页
【目的】克隆杜梨(Pyrus betulifolia Bunge)MYB家族的2个基因(Pb3RMYB和Pb4RMYB),分析其序列特征,为研究其调控的分子机制奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术克隆杜梨Pb3RMYB和Pb4RMYB的c DNA序列全长;利用BLAST和ORF Finder对核... 【目的】克隆杜梨(Pyrus betulifolia Bunge)MYB家族的2个基因(Pb3RMYB和Pb4RMYB),分析其序列特征,为研究其调控的分子机制奠定基础。【方法】利用RT-PCR和RACE技术克隆杜梨Pb3RMYB和Pb4RMYB的c DNA序列全长;利用BLAST和ORF Finder对核酸序列进行分析,利用CDD、Prot Param、TMHMM、Signal P、Plant-m Ploc、SPOMA、DANMAN、MEGA6等软件对氨基酸序列进行分析。【结果】克隆得到Pb3RMYB和Pb4RMYB基因全长,Gen Bank登录号分别为KX272614和KX272615。2者均含有MYB保守结构域,二级结构均以无规则卷曲、α-螺旋、延伸链和β-折叠为主,亚细胞定位分析表明2者均定位于细胞核中。其中,Pb3RMYB属于3R-MYB亚家族,全长2 355 bp,ORF长1 710bp,编码569个氨基酸,蛋白分子质量约为62 077.3 Da,等电点为7.08;BLAST分析表明Pb3RMYB与已报道的其他物种3RMYB具有较高的相似度。Pb4RMYB属于4R-MYB亚家族,全长3 625 bp,ORF长2 913 bp,编码970个氨基酸,蛋白分子质量约为109 600.6 Da,等电点为7.41。【结论】获得了2个杜梨MYB基因Pb3RMYB和Pb4RMYB,分别属于3RMYB和4R-MYB亚家族。 展开更多
关键词 杜梨 MYB转录因子 基因克隆 序列分析
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甲基磺酸乙酯诱变杜梨种子突变的鉴定与分析 被引量:8
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作者 慎家辉 秦安 +2 位作者 李甲明 刘伦 吴俊 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期892-897,共6页
为了获得杜梨Pyrus betulifolia突变体,以杜梨种子为试材,分别使用不同体积分数甲基磺酸乙酯(EMS)[0(ck),0.1%,0.2%,0.3%,0.4%,0.5%,0.6%,0.7%,0.8%,0.9%]对层积后的种子进行诱变处理。然后,统计了种子发芽率,使用相关序列扩增多态性(SR... 为了获得杜梨Pyrus betulifolia突变体,以杜梨种子为试材,分别使用不同体积分数甲基磺酸乙酯(EMS)[0(ck),0.1%,0.2%,0.3%,0.4%,0.5%,0.6%,0.7%,0.8%,0.9%]对层积后的种子进行诱变处理。然后,统计了种子发芽率,使用相关序列扩增多态性(SRAP)标记鉴定遗传变异位点,测量幼苗田间株高和节间长度。试验结果表明:杜梨种子发芽的半致死剂量为0.3%EMS处理。结合SRAP标记鉴定和表型数据分析,筛选出最适宜的EMS处理体积分数为0.4%,变异率为37.3%;同时,使用SPSS软件对表型数据分析显示,处理组的杜梨苗株高极显著低于对照组(P=0.01)。研究结果为快速获得杜梨突变体提供了理论基础和依据。 展开更多
关键词 园艺学 杜梨 甲基磺酸乙酯(EMS) 种子 相关序列扩增多态性(SRAP)标记 突变
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核黄素对盐胁迫下杜梨叶片抗氧化系统的影响 被引量:8
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作者 韩金龙 李慧 +2 位作者 蔺经 杨青松 常有宏 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期893-898,共6页
为探讨外源核黄素对盐胁迫下杜梨叶片抗氧化系统的影响,以梨砧木杜梨幼苗为供试材料,在水培条件下,研究了外源施加不同浓度核黄素对200 mmol/L Na Cl胁迫下其叶片抗氧化酶活性、活性氧产生、膜质过氧化和抗氧化物质含量的影响。结果显示... 为探讨外源核黄素对盐胁迫下杜梨叶片抗氧化系统的影响,以梨砧木杜梨幼苗为供试材料,在水培条件下,研究了外源施加不同浓度核黄素对200 mmol/L Na Cl胁迫下其叶片抗氧化酶活性、活性氧产生、膜质过氧化和抗氧化物质含量的影响。结果显示:Na Cl胁迫3 d后,杜梨叶片中超氧化物歧化酶(SOD)活性减弱,过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性增强,抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)和抗坏血酸(As A)合成下降,活性氧(O2·-、H2O2)和丙二醛(MDA)大量积累。施加外源核黄素能增强Na Cl胁迫下杜梨叶片中SOD、POD、CAT、GR、GSH-Px和APX的活性,提高GSH和As A的含量,减少O2·-和H2O2的产生,降低脂质过氧化程度,有效缓解盐胁迫对杜梨叶片的过氧化伤害,其中以10μmol/L浓度的核黄素处理效果最为显著。 展开更多
关键词 杜梨 核黄素 盐胁迫 过氧化作用 抗氧化酶
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