摘要
采用碳酸钙沉淀法回收琼脂糖凝胶中的DNA ,达到分离纯化目的 ,回收后的DNA可用于重组、PCR等研究。首先将含有目的DNA的琼脂糖凝胶用NaI溶液融解 ,然后加入CaCl2 和NaHCO3,生成CaCO3沉淀 ,DNA与CaCO3形成复合物 ,通过离心分离出沉淀复合物 ,利用稀酸溶解沉淀 ,再用无水乙醇沉降 ,即可回收目标DNA。利用该方法回收了质粒、毛白杨和转基因羊基因组DNA ,回收率为 2 0 %～ 5 0 % ,OD2 6 0 /OD2 80 为 1 7～ 1 9,最大回收了 2 1kb片段 ,最小回收 2 5 0bp片段 ,回收后的DNA样品进行了PCR扩增和限制性内切酶反应 ,PCR可以扩增出目的片段 ,同时限制性内切酶可以将回收后的DNA切开 ,表明DNA质量良好。利用碳酸钙沉淀法可以回收琼脂糖凝胶中的DNA ,此法简单、易行 ,较为有效。
出处
《生物技术》
CAS
CSCD
2004年第2期28-29,共2页
Biotechnology
基金
国家自然科学基金资助项目 (30 2 71 0 95)
大连大学学科建设发展基金资助项目 (XFKZ0 2 0 7)
